Summary
Intravitreal injektion är en allmänt använd teknik Visual Sciences forskning för okulär sjukdomar eller som direkt tillämpning av lokal behandling. Denna video visar ett protokoll för intravitreal injektion med en 1 ml spruta med glaspipett. Nyttiga tips om att undvika massiv blödning och linsen skador ges.
Abstract
Intravitreal injektion är en allmänt använd teknik Visual Sciences forskning. Den kan användas för att fastställa djurmodeller med okulär sjukdomar eller som direkt tillämpning av lokal behandling. Denna video presenterar hur man använder enkla och billiga verktyg för att avsluta intravitreala injektionsproceduren. Användning av en 1 ml spruta, i stället för en hemilton spruta, används. Praktiska tips för hur man gör lämpliga injektionsnålar med glas pipetter med perfekt tips och hur man enkelt ansluta sprutnålen med glaspipett tätt tillsammans, är givna.
Att genomföra en bra intravitreal injektion, finns det tre aspekter att beaktas: 1) injektionsställe bör inte störa näthinnan struktur, 2) blödning bör undvikas för att minska risken för infektion, 3) objektiv bör vara orörd för att undvika traumatisk katarakt. I korthet är den viktigaste punkten för att minska avbrott i den normala okulära struktur. För att undvika avbrott i näthinnan var överlägsna nasala regionen råtta ögat valt. Dessutom var punktering punkt nålen på par plana, vilket var ca 1,5 mm från limbus regionen råttan ögat. En liten mängd glaskroppen är försiktigt pressas ut genom punktering hålet för att minska det intraokulära trycket före injektionen. Med 45 ° injektionen vinkel, är det mindre sannolikt att orsaka traumatisk katarakt hos råtta ögat och därmed undvika komplikationer och inflytande från linsformade faktorer. I denna operation, det fanns ingen skära i bindhinnan och ögonmusklerna, ingen blödning. Med snabba och mindre skador, kan en framgångsrik intravitreal injektion göras på några minuter.
Injektionen som beskrivs i detta protokoll är specifikt för intravitreal injektion. Däremot kan metoder och material som presenteras här även användas för andra injektion förfaranden inom drug delivery till hjärnan, ryggmärgen eller andra organ i små däggdjur.
Protocol
- Förbered glaspipetter använda pipetter avdragare, ansluta den till en 1 ml spruta, och försegla samband med parafilm. Dra 2 ml lösning i spetsen av pipetter och gör dig redo för injektion.
- Bedöva råttan genom intraperitonealt injektion av ketamin (80mg/kg) och xylazin (8mg/kg) (volym uppgick vid 2:1).
- Applicera en droppe 0,5% alcaine för råtta ögon som lokalbedövningsmedel innan intravitreal injektion.
- Placera råttan och exponera den överlägsna nasala regionen i ögat.
- Använd en 30 gauge nål för att punktera den överlägsna nasal sklera i nivå med det nominella Plana. Undvik att röra vid ögonmusklerna och fartyg.
- Ge ögat bollen milda tryck för att bli av med en liten mängd glaskroppen genom punktering hålet från den bakre kammaren.
- Sätt spetsen på glaspipett genom punktera hål i 45 ° vinkel genom sklera i glaskropp. Injicera 2 ml lösning i den bakre kammaren och hålla på plats i ungefär ett par sekunder, sedan försiktigt bort nålen. Undvik att röra linsen och intraokulära fartyg.
- Efter intravitreal injektion, applicera ögondroppar Tobrex salva på råttan ögat för att förhindra infektion.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bra intravitreal injektion är användbar för att upprätta djurmodell liksom direkta intraokulära behandling. Först bör injektionsstället stör inte näthinnan struktur. För det andra, blödning bör undvikas för att minska risken för infektion. Tredje lins bör orörd för att undvika traumatisk katarakt. Viktigast är att minska avbrott i den normala okulära struktur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Djuren hanteras enligt protokollet för användning av djur i forskningen godkänts av kommittén om användning av levande djur i undervisning och forskning (CULATR) vid University of Hong Kong och Föreningen för forskning i Vision och Ögon Uttalanden till användning av djur i ögondroppar och Vision Research.
Acknowledgments
Studiet av glaukom i detta laboratorium stöds av National Glaukom forskning från American Health Assistant Foundation.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Operating Microscope | Olympus Corporation | OME | |
| Glass Pipettes | World Precision Instruments, Inc. | ||
| Pipette Puller | David Kopf Instruments | ||
| 1ml syringes | single use | ||
| 30G needles | single use | ||
| Ketamine | Aldasan | anesthetic | |
| Xylazine | Aldasan | anesthetic | |
| Alcaine | Alcon | 0.5% proparacaine hydrochloride | |
| Tobrex | Alcon | ointment, 3% tobramyxin. |
References
- Chiu, K., Lam, T. T., Ying Ku, W. W., Caprioli, J., Kwong Kwong, J. M. Calpain and N-methyl-d-aspartate (NMDA)-induced excitotoxicity in rat retinas. Brain Research. 1046, 207-215 (2005).
- Fisher, D., Pavlidis, M., Thanos, S. Cataractogenic lens injury prevents traumatic ganglion cell death and promotes axonal regeneration both in vivo and in culture. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41, 3943-3954 (2000).
- Ji, J. -Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. -W., Hugon, J., So, K. -F. CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).
- Lam, T. T., Abler, A. S., Kwong, J. M. K., Tso, M. O. M. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)-Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).
