Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

CD4 + T-lymfocyter ta med en engångs Mikroflödessystem Chip för HIV

Published: October 1, 2007 doi: 10.3791/315

Summary

Protocol

  1. Förbered mikroflödessystem kanal med anti-CD4 + biotinlayted yta.
  2. Injicera 10 ml prov blod vid 5 ml / min i mikroflödessystem kanal med sprutpump.
  3. Spola ut blodet på 20 ml / min i 20 minuter med PBS.
  4. Injicera utspädd FACS Lyseringslösning (utspätt till 10% från stamlösningen med PBS) i 5ul/min i 15 min.
  5. Inkubera i 15 minuter.
  6. Injicera primära CD3 + antikropp lösning (utspädd till 10% från stamlösningen med PBS) vid 5 ml / min i 20 min.
  7. Inkubera i 2 timmar.
  8. Spola ut kanal med PBS vid 5 ml / min i 15 min.
  9. Injicera 20% AF488 CD4 + antikropp, 0,2% DAPI stamlösning, och 10% sekundär CD3 + antikroppar vid 5 ml / min i 20 minuter på samma gång.
  10. Inkubera i 20 min.
  11. Spola kanalen med PBS vid 5 ml / min i 15 min.
  12. Räkna celler i fluorescerande mikroskop:
    1. Vit (optisk) - Svart och vit: Cell-och damm
    2. UV (DAPI) - Blå: cell bara
    3. Blå (CD4 +) - Grön: T-lymfocyter och monocyter
    4. Grön (CD3 +) - Röd: T-lymfocyter bara

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
PDMS microchannel Fabricated by SU-8 mold
Blood Donated blood from normal human subject. Mass General Hospital, 10 X high density WBC or Brigham and Women’s Hospital.
PBS Buffer Invitrogen 14190 1x Dulbecco’s Phosphated Buffered Saline.
FACS lysing solution BD Biosciences 349202 Diluted to 10% from stock solution with PBS.
Anti-CD4+ biotinlayted Ab Beckman Coulter Inc. IM0704 Surface prepared with Anti-CD4+ biotinlayted Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS/BSA after mixing with 0.2mg stock and 1ml deionized water.
goat anti-hCD3delta pAB Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-1128 Diluted to 10% from stock solution with PBS
rabbit anti-goat IgG PE Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-3755 Secondary Ab fro anti-CD3 Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS
anti-human CD4+ BD Biosciences 557695 Alexa Fluor 488 labeled, diluted to 20% from stock solution with PBS.
DAPI Invitrogen D1306 4’,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride solution, diluted to 0.2% from stock solution with PBS.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Tags

Cellbiologi Nummer 8 mikroflödessystem blod diagnostik bioteknik HIV translationell forskning
CD4 + T-lymfocyter ta med en engångs Mikroflödessystem Chip för HIV
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U.More

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter