Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

CD4 + T - اللمفاويات التقاط باستخدام رقاقة ميكروفلويديك المتاح لفيروس نقص المناعة البشرية

doi: 10.3791/315 Published: October 1, 2007

Summary

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here
  1. تعد قناة ميكروفلويديك مع سطح CD4 + المضادة للbiotinlayted.
  2. ضخ 10 مليلتر من الدم في العينة 5 مل / دقيقة في قناة ميكروفلويديك مع ضخ حقنة.
  3. اخراج الدم في 20 مل / دقيقة لمدة 20 دقيقة مع برنامج تلفزيوني.
  4. حقن محلول مخفف FACS lysing (مخفف إلى 10 ٪ من الأسهم مع حل PBS) في 5ul/min لمدة 15 دقيقة.
  5. احتضان لمدة 15 دقيقة.
  6. حقن CD3 الابتدائي + الحل الأضداد (مخفف إلى 10 ٪ من الأسهم مع حل PBS) في 5 مل / دقيقة لمدة 20 دقيقة.
  7. احتضان لمدة 2 ساعة.
  8. طرد قناة مع برنامج تلفزيوني في 5 مل / دقيقة لمدة 15 دقيقة.
  9. ضخ 20 ٪ AF488 CD4 + الأضداد ، و 0.2 ٪ محلول المخزون دابي ، و 10 ٪ CD3 الثانوية في الضد + 5 مل / دقيقة لمدة 20 دقيقة في نفس الوقت.
  10. احتضان لمدة 20 دقيقة.
  11. طرد قناة مع برنامج تلفزيوني في 5 مل / دقيقة لمدة 15 دقيقة.
  12. عدد الخلايا تحت المجهر الفلورسنت :
    1. أبيض (بصري) -- الأسود والأبيض : خلية والغبار
    2. الأشعة فوق البنفسجية (دابي) -- أزرق : الخلية فقط
    3. الأزرق (CD4 +) -- الأخضر : T - اللمفاويات والوحيدات
    4. الأخضر (CD3 +) -- الأحمر : T - اللمفاويات فقط

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
PDMS microchannel Fabricated by SU-8 mold
Blood Donated blood from normal human subject. Mass General Hospital, 10 X high density WBC or Brigham and Women’s Hospital.
PBS Buffer Invitrogen 14190 1x Dulbecco’s Phosphated Buffered Saline.
FACS lysing solution BD Biosciences 349202 Diluted to 10% from stock solution with PBS.
Anti-CD4+ biotinlayted Ab Beckman Coulter Inc. IM0704 Surface prepared with Anti-CD4+ biotinlayted Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS/BSA after mixing with 0.2mg stock and 1ml deionized water.
goat anti-hCD3delta pAB Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-1128 Diluted to 10% from stock solution with PBS
rabbit anti-goat IgG PE Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-3755 Secondary Ab fro anti-CD3 Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS
anti-human CD4+ BD Biosciences 557695 Alexa Fluor 488 labeled, diluted to 20% from stock solution with PBS.
DAPI Invitrogen D1306 4’,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride solution, diluted to 0.2% from stock solution with PBS.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

CD4 + T - اللمفاويات التقاط باستخدام رقاقة ميكروفلويديك المتاح لفيروس نقص المناعة البشرية
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).More

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter