Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

CD4 + T-lymfocyten Capture Met behulp van een Wegwerp Microfluïdische Chip voor HIV

doi: 10.3791/315 Published: October 1, 2007

Summary

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here
  1. Bereid microfluïdische kanaal met anti-CD4 + biotinlayted oppervlak.
  2. Injecteer 10 ml van het monster bloed op 5 ml / min in de microfluïdische kanaal met injectiepomp.
  3. Spoel het bloed van 20 ml / min voor 20 min met PBS.
  4. Injecteer verdunde FACS lyseren oplossing (verdund tot 10% uit voorraad oplossing met PBS) op 5ul/min gedurende 15 minuten.
  5. Incubeer gedurende 15 minuten.
  6. Injecteer primair CD3 + antilichaam-oplossing (verdund tot 10% uit voorraad oplossing met PBS) op 5 ml / min voor 20 minuten.
  7. Incubeer 2 uur.
  8. Spoel kanaal met PBS bij 5 ml / min gedurende 15 minuten.
  9. Injecteer 20% AF488 CD4 + antilichaam, 0,2% DAPI stockoplossing, en 10% secundair CD3 + antilichaam op 5 ml / min gedurende 20 minuten op hetzelfde moment.
  10. Incubeer gedurende 20 minuten.
  11. Spoel het kanaal met PBS bij 5 ml / min gedurende 15 minuten.
  12. Count cellen onder fluorescentiemicroscoop:
    1. White (optisch) - Zwart-wit: cel-en stof
    2. UV (DAPI) - Blauw: cel slechts
    3. Blauw (CD4 +) - Groen: T-lymfocyten en monocyten
    4. Groen (CD3 +) - Rood: T-lymfocyten alleen

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
PDMS microchannel Fabricated by SU-8 mold
Blood Donated blood from normal human subject. Mass General Hospital, 10 X high density WBC or Brigham and Women’s Hospital.
PBS Buffer Invitrogen 14190 1x Dulbecco’s Phosphated Buffered Saline.
FACS lysing solution BD Biosciences 349202 Diluted to 10% from stock solution with PBS.
Anti-CD4+ biotinlayted Ab Beckman Coulter Inc. IM0704 Surface prepared with Anti-CD4+ biotinlayted Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS/BSA after mixing with 0.2mg stock and 1ml deionized water.
goat anti-hCD3delta pAB Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-1128 Diluted to 10% from stock solution with PBS
rabbit anti-goat IgG PE Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-3755 Secondary Ab fro anti-CD3 Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS
anti-human CD4+ BD Biosciences 557695 Alexa Fluor 488 labeled, diluted to 20% from stock solution with PBS.
DAPI Invitrogen D1306 4’,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride solution, diluted to 0.2% from stock solution with PBS.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

CD4 + T-lymfocyten Capture Met behulp van een Wegwerp Microfluïdische Chip voor HIV
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).More

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter