Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

CD4 + T-lymfocyten Capture Met behulp van een Wegwerp Microfluïdische Chip voor HIV

Published: October 1, 2007 doi: 10.3791/315

Summary

Protocol

  1. Bereid microfluïdische kanaal met anti-CD4 + biotinlayted oppervlak.
  2. Injecteer 10 ml van het monster bloed op 5 ml / min in de microfluïdische kanaal met injectiepomp.
  3. Spoel het bloed van 20 ml / min voor 20 min met PBS.
  4. Injecteer verdunde FACS lyseren oplossing (verdund tot 10% uit voorraad oplossing met PBS) op 5ul/min gedurende 15 minuten.
  5. Incubeer gedurende 15 minuten.
  6. Injecteer primair CD3 + antilichaam-oplossing (verdund tot 10% uit voorraad oplossing met PBS) op 5 ml / min voor 20 minuten.
  7. Incubeer 2 uur.
  8. Spoel kanaal met PBS bij 5 ml / min gedurende 15 minuten.
  9. Injecteer 20% AF488 CD4 + antilichaam, 0,2% DAPI stockoplossing, en 10% secundair CD3 + antilichaam op 5 ml / min gedurende 20 minuten op hetzelfde moment.
  10. Incubeer gedurende 20 minuten.
  11. Spoel het kanaal met PBS bij 5 ml / min gedurende 15 minuten.
  12. Count cellen onder fluorescentiemicroscoop:
    1. White (optisch) - Zwart-wit: cel-en stof
    2. UV (DAPI) - Blauw: cel slechts
    3. Blauw (CD4 +) - Groen: T-lymfocyten en monocyten
    4. Groen (CD3 +) - Rood: T-lymfocyten alleen

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
PDMS microchannel Fabricated by SU-8 mold
Blood Donated blood from normal human subject. Mass General Hospital, 10 X high density WBC or Brigham and Women’s Hospital.
PBS Buffer Invitrogen 14190 1x Dulbecco’s Phosphated Buffered Saline.
FACS lysing solution BD Biosciences 349202 Diluted to 10% from stock solution with PBS.
Anti-CD4+ biotinlayted Ab Beckman Coulter Inc. IM0704 Surface prepared with Anti-CD4+ biotinlayted Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS/BSA after mixing with 0.2mg stock and 1ml deionized water.
goat anti-hCD3delta pAB Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-1128 Diluted to 10% from stock solution with PBS
rabbit anti-goat IgG PE Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-3755 Secondary Ab fro anti-CD3 Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS
anti-human CD4+ BD Biosciences 557695 Alexa Fluor 488 labeled, diluted to 20% from stock solution with PBS.
DAPI Invitrogen D1306 4’,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride solution, diluted to 0.2% from stock solution with PBS.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Tags

Cellular Biology microfluïdische bloed diagnostiek biotechnologie HIV Translationeel Onderzoek
CD4 + T-lymfocyten Capture Met behulp van een Wegwerp Microfluïdische Chip voor HIV
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U.More

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter