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Biology

CD4 + Tリンパ球キャプチャHIVのための使い捨てマイクロ流体チップを用いた

doi: 10.3791/315 Published: October 1, 2007

Summary

Protocol

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  1. 抗CD4 + biotinlayted表面とマイクロ流体チャネルを準備します。
  2. シリンジポンプとマイクロ流体チャネルに5ml /分でサンプルの血液10mlを注入する。
  3. PBSで20分間20ml /分で血を洗い流す。
  4. 15分間5ul/minで希釈FACS溶解溶液を(PBSで原液から10%に希釈)を注入。
  5. 15分間インキュベートする。
  6. 20分間5ml /分で一次CD3 +抗体溶液を(PBSで原液から10%に希釈)を注入。
  7. 2時間インキュベートします。
  8. 15分間を5 ml / minでPBSでチャンネルを洗い流す。
  9. 同時に20分間、5ml /分で20%AF488 CD4 +抗体、0.2%DAPI原液、および10%の二次CD3 +抗体を注入する。
  10. 20分間インキュベートする。
  11. 15分間を5 ml / minでPBSでチャンネルを洗い流す。
  12. 蛍光顕微鏡下で細胞を数える。
    1. ホワイト(光) - 黒と白:セルとほこり
    2. UV(DAPI) - 青:セルのみ
    3. ブルー(CD4 +) -緑:T -リンパ球と単球
    4. グリーン(CD3 +) -赤:T -リンパ球のみ

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
PDMS microchannel Fabricated by SU-8 mold
Blood Donated blood from normal human subject. Mass General Hospital, 10 X high density WBC or Brigham and Women’s Hospital.
PBS Buffer Invitrogen 14190 1x Dulbecco’s Phosphated Buffered Saline.
FACS lysing solution BD Biosciences 349202 Diluted to 10% from stock solution with PBS.
Anti-CD4+ biotinlayted Ab Beckman Coulter Inc. IM0704 Surface prepared with Anti-CD4+ biotinlayted Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS/BSA after mixing with 0.2mg stock and 1ml deionized water.
goat anti-hCD3delta pAB Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-1128 Diluted to 10% from stock solution with PBS
rabbit anti-goat IgG PE Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-3755 Secondary Ab fro anti-CD3 Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS
anti-human CD4+ BD Biosciences 557695 Alexa Fluor 488 labeled, diluted to 20% from stock solution with PBS.
DAPI Invitrogen D1306 4’,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride solution, diluted to 0.2% from stock solution with PBS.

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Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).More

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).

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