CD4 + Tリンパ球キャプチャHIVのための使い捨てマイクロ流体チップを用いた

Summary

Protocol

1. 抗CD4 ⁺ biotinlayted表面とマイクロ流体チャネルを準備します。
2. シリンジポンプとマイクロ流体チャネルに5ml /分でサンプルの血液10mlを注入する。
3. PBSで20分間20ml /分で血を洗い流す。
4. 15分間5ul/minで希釈FACS溶解溶液を（PBSで原液から10％に希釈）を注入。
5. 15分間インキュベートする。
6. 20分間5ml /分で一次CD3 ⁺抗体溶液を（PBSで原液から10％に希釈）を注入。
7. 2時間インキュベートします。
8. 15分間を5 ml / minでPBSでチャンネルを洗い流す。
9. 同時に20分間、5ml /分で20％AF488 CD4 ⁺抗体、0.2％DAPI原液、および10％の二次CD3 ⁺抗体を注入する。
10. 20分間インキュベートする。
11. 15分間を5 ml / minでPBSでチャンネルを洗い流す。
12. 蛍光顕微鏡下で細胞を数える。
    1. ホワイト（光） - 黒と白：セルとほこり
    2. UV（DAPI） - 青：セルのみ
    3. ブルー（CD4 ^+） -緑：T -リンパ球と単球
    4. グリーン（CD3 ^+） -赤：T -リンパ球のみ

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
PDMS microchannel				Fabricated by SU-8 mold
Blood				Donated blood from normal human subject. Mass General Hospital, 10 X high density WBC or Brigham and Women’s Hospital.
PBS	Buffer	Invitrogen	14190	1x Dulbecco’s Phosphated Buffered Saline.
FACS lysing solution		BD Biosciences	349202	Diluted to 10% from stock solution with PBS.
Anti-CD4+ biotinlayted Ab		Beckman Coulter Inc.	IM0704	Surface prepared with Anti-CD4+ biotinlayted Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS/BSA after mixing with 0.2mg stock and 1ml deionized water.
goat anti-hCD3delta	pAB	Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-1128	Diluted to 10% from stock solution with PBS
rabbit anti-goat IgG PE		Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-3755	Secondary Ab fro anti-CD3 Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS
anti-human CD4+		BD Biosciences	557695	Alexa Fluor 488 labeled, diluted to 20% from stock solution with PBS.
DAPI		Invitrogen	D1306	4’,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride solution, diluted to 0.2% from stock solution with PBS.