Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

CD4 + T-лимфоцитов Захват Использование одноразовых микрофлюидный чип на ВИЧ

doi: 10.3791/315 Published: October 1, 2007

Summary

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here
  1. Подготовка микрожидкостных каналов с анти-CD4 + biotinlayted поверхности.
  2. Inject 10 мл образца крови в 5 мл / мин в микрожидкостных канал с шприцевой насос.
  3. Промойте крови на 20 мл / мин в течение 20 мин с PBS.
  4. Inject разбавленный FACS лизирующего раствора (разбавляют до 10% от исходного раствора с PBS) в 5ul/min течение 15 мин.
  5. Инкубировать 15 мин.
  6. Inject первичной CD3 + раствор антител (разбавляют до 10% от исходного раствора с PBS) в 5 мл / мин в течение 20 мин.
  7. Инкубируйте в течение 2 часов.
  8. Промойте канал PBS в 5 мл / мин в течение 15 мин.
  9. Inject 20% AF488 CD4 + антитела, 0,2% DAPI маточного раствора, а 10% вторичных антител CD3 + в 5 мл / мин в течение 20 мин, в то же время.
  10. Инкубируйте в течение 20 мин.
  11. Промойте канал PBS в 5 мл / мин в течение 15 мин.
  12. Граф клетки под флуоресцентным микроскопом:
    1. Белый (оптический) - Черно-белый: клетки и пыли
    2. УФ (DAPI) - Синий: только клеток
    3. Синий (CD4 +) - Зеленый: Т-лимфоцитов и моноцитов
    4. Зеленый (CD3 +) - Красный: Т-лимфоцитов только

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
PDMS microchannel Fabricated by SU-8 mold
Blood Donated blood from normal human subject. Mass General Hospital, 10 X high density WBC or Brigham and Women’s Hospital.
PBS Buffer Invitrogen 14190 1x Dulbecco’s Phosphated Buffered Saline.
FACS lysing solution BD Biosciences 349202 Diluted to 10% from stock solution with PBS.
Anti-CD4+ biotinlayted Ab Beckman Coulter Inc. IM0704 Surface prepared with Anti-CD4+ biotinlayted Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS/BSA after mixing with 0.2mg stock and 1ml deionized water.
goat anti-hCD3delta pAB Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-1128 Diluted to 10% from stock solution with PBS
rabbit anti-goat IgG PE Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-3755 Secondary Ab fro anti-CD3 Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS
anti-human CD4+ BD Biosciences 557695 Alexa Fluor 488 labeled, diluted to 20% from stock solution with PBS.
DAPI Invitrogen D1306 4’,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride solution, diluted to 0.2% from stock solution with PBS.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

CD4 + T-лимфоцитов Захват Использование одноразовых микрофлюидный чип на ВИЧ
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).More

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter