Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

CD4 + T-Lenfosit Yakalama HIV için Disposable mikroakışkan Chip

doi: 10.3791/315 Published: October 1, 2007

Summary

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here
  1. Mikroakışkan kanal anti-CD4 + biotinlayted yüzey hazırlayın.
  2. 5 ml / dk 10 ml numune kan şırınga pompası ile mikroakışkan kanal içine enjekte edilir.
  3. PBS ile 20 dakika için 20 ml / dak kan yıkayın.
  4. 15 dakika için 5ul/min seyreltilmiş FACS parçalama solüsyonu (PBS ile stok solüsyonu% 10 sulandırılmış) enjekte edilir.
  5. 15 dakika boyunca inkübe.
  6. 5 ml / dk 20 dk birincil CD3 + antikor solüsyonu (PBS ile stok solüsyonu% 10 sulandırılmış) enjekte edilir.
  7. 2 saat süreyle inkübe edin.
  8. 5 ml / dk 15 dk PBS ile kanal yıkayın.
  9. 5 ml / dk, aynı zamanda 20 dakika boyunca% 20 AF488 CD4 + antikor,% 0.2 DAPI stok solüsyonu,% 10 ikincil CD3 + antikor enjekte edilir.
  10. 20 dakika boyunca inkübe.
  11. 5 ml / dk 15 dk kanalı PBS ile yıkayın.
  12. Floresan mikroskop altında hücrelerin sayısı:
    1. Beyaz (optik) - Siyah ve beyaz: hücre ve toz
    2. Yalnızca UV (DAPI) - Mavi: hücre
    3. Blue (CD4 +) - Yeşil: T-lenfosit ve monosit
    4. Sadece Yeşil (CD3 +) - Kırmızı: T-lenfosit

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
PDMS microchannel Fabricated by SU-8 mold
Blood Donated blood from normal human subject. Mass General Hospital, 10 X high density WBC or Brigham and Women’s Hospital.
PBS Buffer Invitrogen 14190 1x Dulbecco’s Phosphated Buffered Saline.
FACS lysing solution BD Biosciences 349202 Diluted to 10% from stock solution with PBS.
Anti-CD4+ biotinlayted Ab Beckman Coulter Inc. IM0704 Surface prepared with Anti-CD4+ biotinlayted Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS/BSA after mixing with 0.2mg stock and 1ml deionized water.
goat anti-hCD3delta pAB Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-1128 Diluted to 10% from stock solution with PBS
rabbit anti-goat IgG PE Santa Cruz Biotechnology, Inc. sc-3755 Secondary Ab fro anti-CD3 Ab, diluted to 10% from stock solution with PBS
anti-human CD4+ BD Biosciences 557695 Alexa Fluor 488 labeled, diluted to 20% from stock solution with PBS.
DAPI Invitrogen D1306 4’,6-dianidino-2-phenylindole, dihydrochloride solution, diluted to 0.2% from stock solution with PBS.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

CD4 + T-Lenfosit Yakalama HIV için Disposable mikroakışkan Chip
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).More

Moon, S. J., Lin, R., Demirci, U. CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV. J. Vis. Exp. (8), e315, doi:10.3791/315 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter