Biology

शीर्षक बूंदों द्वारा सेल इनकैप्सुलेशन

Published: October 1, 2007 doi: 10.3791/316

Sangjun Moon^1,2, Pei-Ann Lin^1,2, Hasan Onur Keles^1,2, Seung-Schick Yoo³, Utkan Demirci^1,2,4

¹Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's, Harvard Medical School, ²Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's Hospital, ³Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, ⁴Harvard-MIT Division of Health Sciences and Technology, Massachusetts Institute of Technology; Center for Biomedical Engineering, Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital

Summary

Protocol

NIH3T3 कोशिकाओं की तैयारी:

इंजेक्शन के लिए ए कक्ष

कोशिकाओं, तो पतला सेल मीडिया के साथ 1:1, और एक T75 कुप्पी से एक 15 एमएल फाल्कन ट्यूब करने के लिए स्थानांतरण Trypsinize
नीचे centrifuging द्वारा एक गोली में कोशिकाओं, स्पिन सतह पर तैरनेवाला aspirate और DPBS के साथ कोशिकाओं को धो
नीचे एक गोली में कोशिकाओं फिर स्पिन, और aspirate सतह पर तैरनेवाला
मीडिया में Resuspend कोशिकाओं
Hemocytometer (~ 200 ⁴ X 10 कोशिकाओं / एमएल प्रति T75 फ्लास्क) के साथ सेल घनत्व निर्धारित
अपकेंद्रित्र सेल समाधान aspirate सतह पर तैरनेवाला, और सेल सांद्रता varying के लिए मीडिया की उचित मात्रा में में resuspend

बी सेल इंजेक्शन

इंजेक्शन के लिए उपयोग करने से पहले भंवर कोशिकाओं
सिरिंज में सेल के समाधान के 200 μL स्थानांतरण
पल्स जनरेटर पर उचित मोड सेट करें
1. बाहर खदेड़ना एकल बूंदों और एकाधिक बूंदों के लिए (फटना), "ई. बर" मोड के लिए पल्स जनरेटर सेट
2. सतत छोटी बूंद इंजेक्शन के लिए, "आदर्श मोड" पल्स जनरेटर सेट
संकेत सेटिंग्स बदलें
1. 5 वी 0 वी और यह सुनिश्चित कर लें योग्य "लिम" एलईडी पर है एचआइएल: उच्च स्तर और निम्न स्तर के निर्गम वोल्टेज सेट
2. एक वर्ग नाड़ी के रूप में संकेत सेट
3. Solenoid वाल्व "wid" के लिए मान बदलने या कर्तव्य चक्र को बदलने से छोटी बूंद इंजेक्शन के लिए खुला है समय की राशि बदलो ("शुल्क")
4. "प्रति" के लिए मूल्य बदलकर इंजेक्शन की आवृत्ति बदलें
5. "बर" के लिए मूल्य बदलकर एक फट में निकली बूंदों की संख्या बदलें
खुर्दबीन के साथ इमेजिंग के लिए तैयार सब्सट्रेट निकालें सेल समाधान

सी. धुंधला

0.5 μL calcein AM और 2 DPBS के एमएल प्रति μL ethidium homodimer के साथ डाई समाधान करें
डाई समाधान में विसर्जित कर तैयार सब्सट्रेट
नमूना 10 मिनट के लिए 37 सेते करने की अनुमति दें ° सी इमेजिंग पहले

प्रयोग मान्यता

एक Nikon ग्रहण ते-2000 यू प्रतिदीप्त माइक्रोस्कोप
1. स्पॉट उन्नत सॉफ्टवेयर (निदान इंक)
2. लाइव / मृत परख

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Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
Fluorescent Microscope		Nikon Instruments	Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector				Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank		Coleman	Powermate CT5	Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators		Marsh Bellofram
Pulse Generator			HP8112A	Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage		Newmark Systems		With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3	Cell-line			fibroblasts
Trypsin				0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS	Buffer
T75				Tissue culture flasks
Plastic conical tubes				15 ml, for tissue culture