Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

תא כותרת Encapsulation על ידי טיפות

Published: October 1, 2007 doi: 10.3791/316
Automatic Translation
1,2, 1,2, 1,2, 3, 1,2,4
1Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's, Harvard Medical School, 2Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's Hospital, 3Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 4Harvard-MIT Division of Health Sciences and Technology, Massachusetts Institute of Technology; Center for Biomedical Engineering, Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital

Summary

Protocol

NIH3T3 תאים הכנה:

א תאים לניתוק

  1. Trypsinize תאים, ואז לדלל 1:01 עם התקשורת התא, ולהעביר מבקבוקון T75 כדי צינור פלקון 15 מ"ל
  2. ספין למטה תאים לתוך גלולה ידי centrifuging, לשאוב supernatant ולשטוף תאים עם DPBS
  3. ספין למטה תאים לתוך גלולה שוב, לשאוב supernatant
  4. תאים Resuspend בתקשורת
  5. קביעת צפיפות התאים עם hemocytometer (~ 200 X 10 4 תאים / מ"ל לכל בקבוק T75)
  6. תא פתרון צנטריפוגה, לשאוב supernatant ו resuspend בסכום המתאים של מדיה עבור ריכוזים שונים בתא

ב פליטה נייד

  1. וורטקס תאים לפני השימוש לניתוק
  2. העברת 200 μL של פתרון התא לתוך מזרק
  3. הגדרת מצב המתאים על הדופק גנרטור
    1. עבור טיפות יחיד ולהוציא ו טיפות מרובות (התפרצויות), להגדיר גנרטור הדופק למצב "א Bur"
    2. עבור פליטה אגל רציפה, קבע גנרטור הדופק למצב "נורמה"
  4. שינוי הגדרות אות
    1. סט ברמה גבוהה מתח נמוך התפוקה ברמה: HIL ל V 5 ו LOL ל V 0 וודא "לים" דולקת
    2. קביעת אות כמו דופק מרובע
    3. שינוי משך הזמן שסתום סולנואיד פתוח פליטה אגל ידי שינוי הערך עבור "ויד" או שינוי מחזור ("חובה")
    4. שינוי התדירות של פליטה ידי שינוי הערך עבור "PER"
    5. שינוי מספר טיפות נפלט בפרץ ידי שינוי הערך עבור "Bur"
  5. תא פתרון הוצא על מצע מוכן דימות באמצעות מיקרוסקופ

ג מכתים

  1. להמציא פתרון לצבוע עם 0.5 μL calcein-AM ו 2 μL homodimer ethidium לכל מ"ל של DPBS
  2. המצע מוכן לטבול בתמיסה צבע
  3. אפשר המדגם כדי לדגור במשך 10 דקות ב 37 מעלות צלזיוס לפני הדמיה

ניסוי אימות

  1. ביום מיקרוסקופ Eclipse Nikon U TE-2000 פלורסנט
    1. ספוט תוכנה מתקדמים (Diagnostics, Inc)
    2. חי / מת Assay

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Fluorescent Microscope Nikon Instruments Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank Coleman Powermate CT5 Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators Marsh Bellofram
Pulse Generator HP8112A Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage Newmark Systems With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3 Cell-line fibroblasts
Trypsin 0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS Buffer
T75 Tissue culture flasks
Plastic conical tubes 15 ml, for tissue culture

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Tags

ביולוגיה של התא גיליון 8 הנדסת רקמות מיקרופלואידיקה פליטה הדמיה bioengineering
תא כותרת Encapsulation על ידי טיפות
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O.,… More

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter