Summary
Protocol
NIH3T3细胞的准备:
A.弹出细胞
- Trypsinize细胞与细胞媒体,然后稀释1:1,从T75烧瓶中转移到一个15毫升的猎鹰管
- 分拆成颗粒细胞,离心,吸出上清液,用DPBS细胞
- 成颗粒细胞再次离心,吸上清
- 在媒体的悬浮细胞
- 确定细胞密度与血球(〜200 × 10 4细胞/ mL的容量瓶中每T75)
- 离心细胞液,吸出上清液,并悬浮在适量的媒体不同的细胞浓度
B.细胞弹射
- 弹射前使用的涡细胞
- 转移到注射器200μL细胞液
- 设置适当的模式脉冲发生器
- 弹出的单液滴和多个水滴(连发),设置脉冲发生器的“E BUR”模式
- 对于连续液滴抛射,至“NORM”模式设置脉冲发生器
- 变化的信号设置
- 设置高和低电平输出电压:5 V和LOL为0 V,并确保“林先生”LED是上的HIL
- 设置为一个方形脉冲信号
- 变化的时间液滴弹射电磁阀打开,改变为“妇女参与发展”的价值或改变占空比(“责任”)
- 改变改变“市盈率”价值弹射频率
- 更改价值水滴喷出一阵改变“BUR”
- 到准备基板上弹出电池解决方案与显微镜成像
C.染色
- 染料溶液与0.5μL,钙黄绿素- AM和2μL,乙锭每DPBS毫升二聚体
- 在染料溶液浸入准备基板
- 允许样品孵育10分钟,在37 °成像彗星之前
实验验证
- 在尼康的Eclipse TE - 2000 U荧光显微镜
- 现货先进的软件(诊断公司)
- 活/死含量
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
Fluorescent Microscope | Nikon Instruments | Eclipse TE-2000 U | ||
Solenoid valve cell ejector | Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current | |||
5-Gallon Portable air tank | Coleman | Powermate CT5 | Pressurized air: 30 PSI | |
Pressure regulators | Marsh Bellofram | |||
Pulse Generator | HP8112A | Actuation frequency generation: 50 MHz | ||
XYZ-stage | Newmark Systems | With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution | ||
NIH 3T3 | Cell-line | fibroblasts | ||
Trypsin | 0.05% solution | |||
NIH 3T3 cell medium | ||||
DPBS | Buffer | |||
T75 | Tissue culture flasks | |||
Plastic conical tubes | 15 ml, for tissue culture |