Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Titel Cell Inkapsling av Droppar

doi: 10.3791/316 Published: October 1, 2007

Summary

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

NIH3T3 celler förberedelser:

A. celler för Utmatning

  1. Trypsinize celler, sedan späd 1:1 med cell-media, och överföring från en T75 kolven till en 15 ml Falcon rör
  2. Spinn ner celler till en pellet genom centrifugering, aspirera supernatanten och tvätta cellerna med DPBS
  3. Spinn ner celler till en pellet igen, och aspirera supernatanten
  4. Resuspendera cellerna i media
  5. Bestäm celltäthet med hemocytometer (~ 200 x 10 4 celler / ml per T75 kolv)
  6. Centrifugera cell lösning, aspirera supernatanten och återsuspendera i lämplig mängd av media för olika cell koncentrationer

B. Cell utmatning

  1. Vortex celler innan du använder för utmatning
  2. Överföring 200 mikroliter av cell-lösning i sprutan
  3. Ställ in lämpligt läge på pulsgenerator
    1. För mata ut enstaka droppar och flera droppar (spricker), som pulsgenerator till "E. BUR"-läge
    2. För kontinuerlig droppe utkast, som pulsgenerator till "NORM"-läge
  4. Ändra signalen inställningar
    1. Ställ hög nivå och låg nivå utspänning: HIL till 5 V och LOL till 0 V och se till att "LIM" LED är på
    2. Ställ in signalen som en fyrkantig puls
    3. Ändra tid magnetventilen är öppen för droppsmitta utskjutning genom att ändra värdet för "WID" eller ändra intermittens ("plikt")
    4. Ändra frekvensen för utkast genom att ändra värdet för "Per"
    5. Ändra antalet droppar utkastade i en explosion genom att ändra värdet för "BUR"
  5. Mata cell lösningen på förberett substrat för avbildning med mikroskop

C. Färgning

  1. Fyll färglösningen med 0,5 mikroliter kalcein-AM och 2 mikroliter Ethidium homodimer per mL DPBS
  2. Sänk förberett substrat i färglösningen
  3. Låt prov inkubera i 10 minuter vid 37 ° C innan bildbehandling

Experiment Validering

  1. På en Nikon Eclipse TE-2000 U fluorescerande mikroskop
    1. Spot avancerad programvara (Diagnostics, Inc.)
    2. Live / Dead-analys

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Fluorescent Microscope Nikon Instruments Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank Coleman Powermate CT5 Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators Marsh Bellofram
Pulse Generator HP8112A Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage Newmark Systems With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3 Cell-line fibroblasts
Trypsin 0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS Buffer
T75 Tissue culture flasks
Plastic conical tubes 15 ml, for tissue culture

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Titel Cell Inkapsling av Droppar
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).More

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter