Titel Cell Encapsulation door Droplets

Summary

Protocol

NIH3T3 cellen voorbereiding:

A. Cellen voor Ejection

1. Trypsinize cellen, dan verdunnen 1:1 met cel-media, en de transfer van een T75 kolf met een 15 ml Falcon buis
2. Spin down cellen in een pellet door centrifugeren, aspireren supernatant en wassen cellen met DPBS
3. Spin down cellen in een pellet weer, en zuig supernatans
4. Resuspendeer cellen in de media
5. Bepaal celdichtheid met hemocytometer (~ 200 X 10 ⁴ cellen / ml per fles T75)
6. Centrifuge cel oplossing, aspireren supernatant, en resuspendeer in de juiste hoeveelheid media voor uiteenlopende celconcentraties

B. Cel uitwerpen

1. Vortex cellen voordat u voor het uitwerpen
2. Overdracht 200 pi van de cel oplossing in de spuit
3. Zet juiste modus op pulsgenerator
   1. Voor het uitwerpen van een enkele druppels en meerdere druppels (uitbarstingen), ingesteld pulsgenerator "E. BUR"-modus
   2. Voor continue druppel uitwerpen, stelt pulsgenerator op "NORM"-modus
4. Veranderen signaal instellingen
   1. Stel hoog niveau en laag niveau uitgangsspanning: HIL tot 5 V en LOL op 0 V en zorg ervoor dat de "LIM" LED is op
   2. Stel signaal als een vierkant puls
   3. Wijzig de hoeveelheid tijd die de magneetklep staat open voor druppel het uitwerpen door het veranderen van de waarde voor "WID" of veranderen duty cycle ("DUTY")
   4. Verander de frequentie van de uitwerpen door het veranderen van de waarde voor "PER"
   5. Wijzig het aantal druppels uitgestoten in een uitbarsting door het veranderen van de waarde voor "BUR"
5. Eject cel oplossing op voorbereide ondergrond voor beeldvorming met een microscoop

C. kleuring

1. Make-up dye-oplossing met 0,5 pi calceïne-AM en 2 pl ethidium homodimeer per ml DPBS
2. Dompel bereid substraat in kleurstofoplossing
3. Laat monster gedurende 10 minuten incuberen bij 37 ° C voor imaging

Experiment Validatie

1. Op een Nikon Eclipse TE-2000 U fluorescentiemicroscoop
   1. Spot geavanceerde software (Diagnostics, Inc)
   2. Live / Dead Assay

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
Fluorescent Microscope		Nikon Instruments	Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector				Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank		Coleman	Powermate CT5	Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators		Marsh Bellofram
Pulse Generator			HP8112A	Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage		Newmark Systems		With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3	Cell-line			fibroblasts
Trypsin				0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS	Buffer
T75				Tissue culture flasks
Plastic conical tubes				15 ml, for tissue culture