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Biology

Titolo Incapsulamento cella di goccioline

doi: 10.3791/316 Published: October 1, 2007

Summary

Protocol

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NIH3T3 cellule preparazione:

Le cellule A. espulsione

  1. Trypsinize cellule, poi diluire 1:1 con mezzi di comunicazione cellulare, e il trasferimento da un pallone T75 ad un tubo da 15 ml Falcon
  2. Spin le cellule in una pallina da centrifugazione, aspirare il surnatante e lavare le cellule con DPBS
  3. Spin le cellule in una pallina di nuovo e aspirare il surnatante
  4. Risospendere le cellule in mezzi di comunicazione
  5. Determinare la densità delle cellule con emocitometro (~ 200 x 10 4 cellule / ml per T75 fiasco)
  6. Cellula soluzione centrifuga, aspirare il surnatante e risospendere in giusta quantità di supporti per la variazione delle concentrazioni di cellule

B. cella di espulsione

  1. Cellule vortice prima di utilizzare per l'espulsione
  2. Trasferire 200 ul di soluzione di cella in siringa
  3. Impostare la modalità appropriata sul generatore di impulsi
    1. Per espellere gocce singole e multiple gocce (treni), insieme al generatore di impulsi "E. BUR" modalità
    2. Per l'espulsione delle gocce continuo, generatore di impulsi impostato in modalità "NORM"
  4. Modificare le impostazioni del segnale
    1. Impostare il livello alto e basso livello di tensione di uscita: HIL a 5 V e LOL a 0 V e assicurarsi che il "LIM" LED è acceso
    2. Impostare il segnale come un impulso quadrato
    3. Modificare la quantità di tempo la valvola solenoide è aperta per l'espulsione delle gocce, modificando il valore di "WID" o cambiando duty cycle ("dovere")
    4. Modificare la frequenza di espulsione, modificando il valore di "PER"
    5. Modificare il numero di goccioline espulse in uno scoppio, modificando il valore di "BUR"
  5. Cellula soluzione di espulsione su substrato preparato per l'imaging con microscopio

C. colorazione

  1. Portare soluzione colorante con 0,5 microlitri calceina-AM e 2 omodimero microlitri di etidio per ml di DPBS
  2. Immergere substrato preparato in soluzione colorante
  3. Lasciare campione ad incubare per 10 minuti a 37 ° C prima di imaging

Esperimento di convalida

  1. Su una Nikon Eclipse TE-2000 Microscopio U fluorescente
    1. Spot software avanzato (Diagnostics, Inc.)
    2. Live / Dead Assay

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Fluorescent Microscope Nikon Instruments Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank Coleman Powermate CT5 Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators Marsh Bellofram
Pulse Generator HP8112A Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage Newmark Systems With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3 Cell-line fibroblasts
Trypsin 0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS Buffer
T75 Tissue culture flasks
Plastic conical tubes 15 ml, for tissue culture

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Titolo Incapsulamento cella di goccioline
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Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).More

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).

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