Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Название сотовый Инкапсуляция воздушно-капельным путем

doi: 10.3791/316 Published: October 1, 2007

Summary

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

NIH3T3 клетки подготовки:

А. Клетки для выброса

  1. Trypsinize клетки, затем разбавить 1:1 с ячейки СМИ, и переход от T75 колбу на 15 мл трубки Сокол
  2. Спином вниз клеток в гранулах центрифугированием, супернатант аспирацию и промыть клетки с DPBS
  3. Спином вниз клеток в гранулах снова, и аспирата супернатант
  4. Ресуспендируют клеток в СМИ
  5. Определить плотность клеток с гемоцитометра (~ 200 X 10 4 клеток / мл в колбе T75)
  6. Решение Центрифуга клетки, аспирацию супернатант, и ресуспендируют в соответствующую сумму средств массовой информации для различной концентрации клетка

Б. сотовый выброса

  1. Vortex клетки, прежде чем использовать для выброса
  2. Передача 200 мкл клеточного раствора в шприце
  3. Установить соответствующий режим генератора импульсов
    1. Для извлечения одной капли и несколько капель (очередей), установить генератор импульсов, чтобы "Е. БУР" режиме
    2. Для непрерывного выброса капли, установить генератор импульсов, чтобы "НОРМА" режиме
  4. Изменение параметров сигнала
    1. Установить высокий уровень и низкий уровень выходного напряжения: HIL до 5 В и LOL 0 В и убедитесь, что "LIM" светодиод
    2. Установить сигнал как прямоугольный импульс
    3. Изменение количества времени электромагнитный клапан открыт для выброса капли, изменив значение для "WID" или изменение рабочего цикла («Долг»)
    4. Изменение частоты выброса, изменив значение для "ЗА"
    5. Изменение количество капель, выброшенных в порыве, изменив значение для "БУР"
  5. Извлечь решение ячейки на подготовленное основание для работы с изображениями с микроскопом

С. Окрашивание

  1. Макияж раствор красителя с 0,5 мкл кальцеин-AM и 2 мкл гомодимера этидия на мл DPBS
  2. Погрузите подготовленное основание в раствор красителя
  3. Разрешить образец для инкубации в течение 10 минут при 37 ° С до визуализации

Эксперимент Проверка

  1. На Nikon Eclipse TE-2000 U Флуоресцентный микроскоп
    1. Пятно передовое программное обеспечение (Diagnostics, Inc)
    2. Live / Мертвые Пробирной

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Fluorescent Microscope Nikon Instruments Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank Coleman Powermate CT5 Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators Marsh Bellofram
Pulse Generator HP8112A Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage Newmark Systems With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3 Cell-line fibroblasts
Trypsin 0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS Buffer
T75 Tissue culture flasks
Plastic conical tubes 15 ml, for tissue culture

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Название сотовый Инкапсуляция воздушно-капельным путем
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).More

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter