Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Droplets tarafından Başlığı Hücre Kapsülleme

Published: October 1, 2007 doi: 10.3791/316
Automatic Translation
1,2, 1,2, 1,2, 3, 1,2,4
1Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's, Harvard Medical School, 2Bio-Acoustic-MEMS Laboratory in Medicine (BAMM), HST-Center for Bioengineering, Brigham and Women's Hospital, 3Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, 4Harvard-MIT Division of Health Sciences and Technology, Massachusetts Institute of Technology; Center for Biomedical Engineering, Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital

Summary

Protocol

NIH3T3 hücrelerinin hazırlanması:

Ejeksiyon için A. Hücreler

  1. Sonra da hücre, hücre medya ile seyreltilmiş 1:1, ve T75 balonuna 15 ml Falcon tüp transfer Trypsinize
  2. Santrifüj edilerek pelet hücreleri aşağı Spin süpernatant aspirat ve hücreleri DPBS ile yıkayın
  3. Pelet içine hücreleri tekrar aşağı çevirin ve süpernatant aspirat
  4. Medyada yeniden süspanse hücreleri
  5. Hemasitometre (~ 200 X 10 4 T75 şişesi başına hücre / ml) ile hücre yoğunluğunu
  6. Santrifüj hücre çözümü, supernatant aspirat, medya uygun miktarda ve değişik hücre konsantrasyonları için tekrar süspansiyon

B. Hücre ejeksiyon

  1. Çıkarılmaya kullanmadan önce Vortex hücreleri
  2. Enjektöre hücre çözümü 200 mcL transfer
  3. Darbe jeneratörü uygun modu ayarlama
    1. Çıkarırken, tek damlacıkları ve çoklu damlacıkları (patlamaları), "E. BUR" modunda darbe jeneratör
    2. Sürekli damlacık ejeksiyon için, "NORM" moduna darbe jeneratör
  4. Sinyali ayarları değiştirin
    1. 5 V ve LOL 0 V ve emin olun "LIM" LED HIL: yüksek seviye ve düşük seviye çıkış voltajı ayarla
    2. Sinyal kare dalga olarak ayarlayın
    3. Solenoid valf "WID" değerini değiştirerek veya görev döngüsü değişen açık damlacık ejeksiyon zaman miktarını değiştirme ("HİZMET")
    4. "BAŞINA" değerini değiştirerek ejeksiyon frekans değiştir
    5. "BUR" değerini değiştirerek bir patlama çıkarılır damlacıkların sayısını değiştirme
  5. Mikroskobu ile görüntüleme için hazırlanmış yüzey üzerine Çıkar hücre çözümü

C. Boyama

  1. 0.5 mcL Calcein-AM ve DPBS ml başına 2 mcL ethidium homodimer boya çözüm Makyaj
  2. Boya çözüm daldırın hazırlanan substrat
  3. İzin örnek 37 az 10 dakika süreyle inkübe ° C görüntüleme önce

Deney Doğrulama

  1. Nikon Eclipse TE-2000 U Floresan Mikroskobu
    1. Spot gelişmiş yazılım (Diagnostics, Inc.)
    2. Ölü / Canlı Testi

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Fluorescent Microscope Nikon Instruments Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank Coleman Powermate CT5 Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators Marsh Bellofram
Pulse Generator HP8112A Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage Newmark Systems With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3 Cell-line fibroblasts
Trypsin 0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS Buffer
T75 Tissue culture flasks
Plastic conical tubes 15 ml, for tissue culture

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Tags

Hücresel Biyoloji Sayı 8 doku mühendisliği Mikroakiskan ejeksiyon görüntüleme biyomühendislik
Droplets tarafından Başlığı Hücre Kapsülleme
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O.,… More

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter