Summary
Este artigo descreve um protocolo para a indução de estresse psicológico nos participantes, o que permite aos pesquisadores para medir psicológicos, fisiológicos e respostas neuroendócrina ao estresse dentro de participantes individuais ou entre grupos.
Abstract
Este artigo demonstra um protocolo de estresse psicológico para uso em um ambiente de laboratório. Protocolos que permitem aos pesquisadores estudar os caminhos biológicos da resposta ao estresse na saúde e na doença são fundamentais para o progresso da pesquisa em stress e ansiedade. 1 Embora numerosos protocolos existem para induzir resposta ao estresse em laboratório, negligência muitos para fornecer um contexto naturalista ou incorporar aspectos de estresse social e psicológico. De protocolos de estresse psicológico, meta-análise sugere que a Trier Stress Test Social (TSST) é o protocolo mais útil e apropriado padronizados para estudos de reatividade ao estresse hormonal. 2 Na descrição original do TSST, os pesquisadores buscaram projetar e avaliar um procedimento capaz de induzir uma resposta de estresse confiável na maioria dos voluntários saudáveis. 3 Estes pesquisadores encontraram elevações da freqüência cardíaca, pressão arterial e estresse endócrino várias markers em resposta à TSST (um estressor psicológico) em comparação com uma injeção de soro fisiológico (um estressor físico). 3 Embora o TSST foi modificado para atender às necessidades de vários grupos de pesquisa, que geralmente consiste de um período de espera no momento da chegada, o discurso de antecipação preparação desempenho da fala, e verbal aritmética períodos de desempenho, seguido por um ou mais períodos de recuperação. A TSST exija dos participantes a preparar e proferir um discurso, e verbalmente responder a um problema aritmético desafiador na presença de um público socialmente avaliativo. 3 Avaliação Social e incontrolabilidade foram identificados como os principais componentes de indução de estresse pela TSST. 4 Em uso há mais de uma década, o objetivo do TSST é sistematicamente induzir uma resposta ao estresse, a fim de medir as diferenças na ansiedade, reatividade e ativação do eixo hipotálamo-pituitária-adrenal (HPA) ou simpático-adrenal-medular eixo (SAM) durante a tarefa 1. Researcdela geralmente avaliar as mudanças na auto-relatados ansiedade, medidas fisiológicas (por exemplo, freqüência cardíaca), e / ou índices neuroendócrino (por exemplo, o cortisol, o hormônio do estresse) em resposta à TSST. Muitos investigadores têm adotado de amostragem salivares para marcadores de estresse, como cortisol e alfa-amilase (um marcador da ativação do sistema nervoso autônomo) como uma alternativa para coleta de sangue para reduzir o estresse de confusão de sangue coleta de técnicas. Além das mudanças experimentadas por um indivíduo completar o TSST, os pesquisadores podem comparar as alterações entre os diferentes grupos de tratamento (por exemplo clínico versus amostras de controlo saudáveis) ou a eficácia de intervenções para reduzir o stress 1.
Protocol
1. Estabelecer
- Toda a investigação deve ser aprovado pelo Comitê Institucional apropriado ou comitê de revisão sujeitos humanos antes da coleta de dados.
- Idealmente, dois quartos devem estar disponíveis para realizar o TSST. Um quarto confortável de espera deve estar disponível para os participantes antes do início da TSST e durante períodos de recuperação. A sala de entrevista em separado deve ser usado durante a preparação da fala, fala e desempenho porções de matemática do TSST introduzir novidade e uncontrolability.
- Organizar a sala de entrevista para que o participante estará enfrentando entrevistadores confederado e vídeo posição ou equipamento de gravação de áudio no campo visual do participante. Jalecos de laboratório deve estar disponível para os entrevistadores para usar durante o TSST para aumentar o stress durante o TSST. Instruir os entrevistadores para manter contato visual com os participantes e abster-se de expressões faciais emocionais durante o TSST.
- Considerar cuidadosamente ªe questão de pesquisa (s) ao selecionar as medições dependentes. Diretrizes para a análise e publicação de várias medidas de resposta ao estresse são fornecidos por várias fontes (diretrizes para a publicação e análise das medidas psicofisiológicas são fornecidos pela Sociedade de Pesquisa Psicofisiológica: http://www.sprweb.org/journal/index. diretrizes cfm # ) 5. Consulta desses recursos durante o projeto de experimentos é recomendado.
- Configurar todo o equipamento necessário para gravar respostas fisiológicas, psicológicas ou endócrino ao TSST. Este equipamento pode incluir (mas não limitado a) eletrodos e equipamentos eletrônicos e / ou software para registrar a freqüência cardíaca, a reatividade cardiovascular, condutância da pele ou resposta, piscar de olhos, contração muscular / tom, freqüência respiratória; papel e lápis ou versões eletrônicas de instrumentos psicológicos, como a de Ansiedade Traço Estado Inventory; 6 tubos e materiais de outra coleção de sangue, urina ou saliva de amostras;. ou equipamento de gravação de vídeo Para esta demonstração, iremos utilizar três eletrocardiograma (ECG) eletrodos para medir a frequência cardíaca durante o TSST, e administração repetida da Inventário de Ansiedade Traço Estado para medir a resposta psicológica antes e depois do estressor. Iremos utilizar um sistema de gravação básico projetado para medir as respostas fisiológicas (Biopac sistema MP36) para registrar a freqüência cardíaca.
- Se as amostras de sangue (em vez de saliva) serão coletados durante o experimento, os esforços para minimizar a dor e angústia durante a coleta deve ser feita. Procedimentos de coleta de sangue pode apresentar estresse físico ou psicológico adicional, a resposta de confusão para o TSST.
- Quando o participante chega, acolhê-los para o laboratório. Obter o consentimento informado ea sede do participante confortavelmente.
- Coletar informações demográficas, informações de triagem ou adicional chegada medidas que são exigidos por sua experiência. Verifique se o participante não tenha consumido alimentos ou bebidas (excepto água) na última hora se coletar medições de cortisol. Um curto período de jejum é recomendado se você estará coletando amostras de saliva para análise. Mudanças no pH associadas com alimentos ácidos ou bebida ou contaminação visível pode interferir com a medição precisa de marcadores salivares. Screening toxicológico de urina pode ser necessária se as medidas de interesse podem ser contaminados por medicação ou outros metabolitos. Informações sobre os fatores que podem afetar a resposta ao estresse (por exemplo, medicamentos, doenças do sono, os recentes eventos estressantes, fobia social) também devem ser considerados quando os participantes de triagem.
2. Medidas pré-stress
- Instruir o participante que esperar confortavelmente por 45 minutos na sala de espera. Você pode optar por fornecer o participante com material de leitura, como revistas contendo emocionalmente neutro conteúdo, ou outra atividade emocionalmente neutro durante este período.
- Após o período de 45 minutos de espera, administrar o Inventário de Ansiedade Traço Estado para avaliar pré-stress ansiedade. 6 Alternativamente, outros instrumentos que são projetados para avaliar as mudanças de estado em stress, ansiedade ou relaxamento pode ser administrado (por exemplo, escala visual analógica).
- Coletar uma "pré-stress" amostra de saliva. Instruir o participante para enxaguar a boca com água. Dar ao participante uma seção 5-10 cm de canudo e um ambiente limpo, descartável 2,0 ml frasco de polipropileno. Instruir o participante a se inclinar sua cabeça para a frente para permitir que a saliva piscina no assoalho da boca, em seguida, passar a saliva através do canudo para dentro do frasco. Coletar cerca de 1,5-2,0 ml de saliva do participante. Alternativamente, a saliva pode ser coletada por meio pavio dental absorvente (ou material semelhante) e instruir o participante para mastigar ou saturar o material com saliva. Se posvel, sair da sala para fornecer o participante com privacidade. Rotular e armazenar todas as amostras de saliva a -20 ° C o mais rapidamente possível.
- Registro de 5 minutos de pré-stress medições fisiológicas.
3. A TSST
- Se você estará usando uma sala de entrevista separada (para aumentar os efeitos do estresse do TSST), levar o participante a partir da sala de espera para a sala de entrevista.
- Para começar o período de preparação TSST discurso, leia o seguinte script para o participante: "Esta é a parte de preparação discurso da tarefa, você está a preparar mentalmente um discurso de cinco minutos descrevendo por que você seria um bom candidato para o seu trabalho ideal. Seu discurso será gravado e revisado por um painel de juízes treinados para falar em público. Você tem 10 minutos para preparar e seu tempo começa agora. "
- Registar medições fisiológicas durante o período de preparação de 10 minutos de fala. Definir um temporizador digital para 10 minutos e sair da sala. Após 10 minutos, volte para a sala vestindo um jaleco. Leia o seguinte script para o participante: "Esta é a parte da fala da tarefa que você está para fazer um discurso descrevendo por que você seria um bom candidato para o seu trabalho ideal Você deve falar para todo o período de tempo de cinco minutos... o seu tempo começa agora. " A câmera de vídeo prop deve ser ativado agora, para aumentar a avaliação / desempenho stress.
- Registar medições fisiológicas durante o período de execução de 5 minutos de fala. Se o participante pára de falar durante o discurso, permitir que ele ou ela para permanecer em silêncio durante 20 segundos. Se ele ou ela não volta a falar, avisar o participante para continuar falando, instruindo-os: "Você ainda tem tempo restante."
- No final do período de desempenho de 5 minutos de fala, leia o seguinte script para o participante: "Durante a parte de matemática últimos cinco minutos desta tarefa, você será solicitado para seqüencialmente subtrair o número 13 de 1022 Você vai verbal.ly relatório suas respostas em voz alta, e ser solicitado a partir de 1022 começar de novo, se um erro é cometido. . Seu tempo começa agora "Se o participante comete um erro, levá-los com:" Isso está incorreto, por favor, começar de novo a partir de 1022 "Defina um temporizador digital para 5 minutos..
- Registar medições fisiológicas durante o período de execução de 5 minutos de matemática.
- No final do período de desempenho de matemática do TSST, recolher um "stress pós-" amostra de saliva.
- Administrar o estresse pós-State Trait Anxiety Inventory.
4. Stress pós-Medidas de Recuperação
- Participantes para a sala de espera originais. Durante o período de recuperação em primeiro lugar, instruir o participante que esperar confortavelmente por 20 minutos. Definir um timer digital por 20 minutos e sair da sala.
- Voltar para a sala de espera após 20 minutos e recolher uma "recuperação uma" amostra de saliva.
- Durante o período de recuperação segundo, instruir o participante para novamente esperar confortavelmente por 20 minutos. Definir um timer digital por 20 minutos e sair da sala.
- Voltar para a sala de espera após 20 minutos e recolher uma "recuperação 2" amostra de saliva.
- Instruir o participante para completar a "recuperação" State Trait Anxiety Inventory.
- Debrief participante do quanto à verdadeira natureza do experimento. Informar o participante que seu desempenho não foi gravado e que nenhuma análise de seu discurso ou desempenho de matemática será realizada. Explicar ao participante que as tarefas com que foram apresentados foram excessivamente difícil e não refletir sobre a aptidão do participante ou habilidade.
5. Análise de Dados
- Para analisar medidas psicológicas, a pontuação de cada Estado Inventário de Ansiedade Traço do stress pré-, pós-stress e pontos de tempo de recuperação 6.
- Para analisar medidas fisiológicas, computar uma pontuação taxa média coração para cada um dos cinco minutos "stress pré", "preparação discurso", "performance discurso" e "math "períodos do TSST. Alternativamente, calcular escores médios para cada minuto do TSST ou freqüência cardíaca medida em momentos distintos durante o TSST.
- Para analisar medidas neuroendócrinas, amostras salivares ensaio para a concentração de hormônio usando kits EIA comercialmente disponíveis.
6 Opcional:. Adicionais Cortisol salivar Information Protocol Assay (reproduzido de Salimetrics salivares de cortisol inserir kit de ensaio)
- Trazer todos os reagentes do kit salivares ensaio à temperatura ambiente.
- Prepare o tampão de lavagem de acordo com instruções do kit.
- Determine layout de placa e 25 mL de pipeta de normas e controles nos poços apropriados em duplicata.
- Amostras de saliva descongelar vortex e centrifugar a 1500 XG (RPM @ 3.000) por 15 minutos.
- Pipetar 25 mL de líquido claro a partir de amostras centrifugadas nos poços apropriados na placa (em duplicado).
- Prepare enzima conjugada e pipetar 200 mL em todos os poços. Mix placa durante 5 minutos a 500 rpm e incubar por mais 55 minutos.
- Lavar e secar a placa de 4 vezes com tampão de lavagem.
- Adicionar 200 mL de solução tetrametilbenzidina (TMB) em cada poço usando uma pipeta multicanal.
- Misture a placa durante 5 minutos a 500 rpm e incubar no escuro por mais 25 minutos.
- Adicionar 50 mL de solução de paragem a cada poço e misture por 3 minutos a 500 rpm para parar as reações.
- Limpe a parte inferior prato limpo e ler a placa em um leitor de placas a 450 nm dentro de 10 minutos da adição da solução stop.
- Para calcular a concentração de cortisol, calcular a densidade óptica média para todos os poços duplicados. Subtraia a média de densidade óptica dos poços ligação não específica a partir da densidade óptica média do zero, controle, padrão e poços de amostra.
- Calcular o percentual ligado (B / Bo) para cada padrão, controle e amostra, dividindo a densidade óptica média desses poços (B) pelo averdensidade óptica idade dos poços zero (Bo). Determinar a concentração dos controles e amostras por interpolação usando um software capaz de logística.
7. Resultados representativos:
Os dados representativos apresentados aqui é compilado a partir de uma revisão da literatura e dois estudos que foram realizados em nosso laboratório durante a tarde com os participantes adultos saudáveis do sexo masculino. Estes dados destinam-se a cerca de representar os resultados que podem ser encontrados usando o protocolo apresentado neste artigo.
Este protocolo TSST (Figura 1) induz aumento da auto-relato de ansiedade (medida pelo Inventário de Ansiedade Traço Estado; Figura 2), freqüência cardíaca (Figura 3), e as concentrações de cortisol salivar (Figura 4). O protocolo experimental ilustrada na Figura 1 se destina a fornecer um exemplo de como várias medições podem ser feitas durante uma sessão de coleta de dados com o TSST. O momento da MEDIÇÃOts ea inclusão de medidas diferentes serão ditadas pela questão de pesquisa específica. Se estiver usando uma intervenção que se destina a reduzir a ansiedade e / ou resposta ao estresse, aumenta embotados ou atenuados nestas medidas estão previstas.
Figura 1. Protocolo experimental Nota: Trier Stress Test Social (TSST); Inventário de Ansiedade Traço Estado (IDATE), 5 minutos de período de estresse pré (PS); período de estresse de 10 minutos preventiva (preparação vocal) (AS); período de 5 minutos de fala. (S); 5 minutos de período de Matemática (M).
Figura 2. Escores de ansiedade deputado estadual. Nota: pontuação de Ansiedade Estado calculado a partir de 20 Iten medir estado de ansiedade de Estado do inventário de Ansiedade Traço (IDATE) Representante pontuações refletem os dados coletados em nosso laboratório e publicados na literatura..
Figura 3. Taxa de dados representativos do coração Nota:.. A freqüência cardíaca em batimentos por minuto (BPM) Representante valores refletem os dados coletados em nosso laboratório e publicados na literatura.
Figura 4. Dados representativos cortisol salivar Nota:.. Os valores de concentração de cortisol na UL / DL Representante refletem os dados coletados em nosso laboratório e publicados na literatura.
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Discussion
Neste artigo, demonstramos como conduzir o Trier Stress Test Sociais em voluntários saudáveis. O TSST é um estressor de laboratório padronizadas social que induz aumento robusto e confiável no psicológico, medidas fisiológicas e neuroendócrinas. O TSST é uma alternativa útil a estressores físicos, tais no teste de pressão a frio ou caminhada na esteira, e reproduz o stress mais naturalista psicológico de desempenho na presença de um público de avaliação.
Muitos aspectos do TSST pode ser modificado para atender às necessidades de vários programas de investigação. Os pontos de medição do tempo demonstrado neste artigo representam um mínimo de amostragem. Muitas experiências podem exigir pontos de amostragem adicionais e medidas para melhor captar mudanças em resposta ao estresse. O comprimento do discurso, de antecipação e períodos de matemática (geralmente variando de 5-10 minutos), a inclusão ou omissão de período de recuperação (s), ea composiçãoda audiência de avaliação durante o discurso e performances de matemática (que variam de uma câmera de vídeo a um painel de avaliadores) pode ser modificado. A TSST pode ser administrada a grupos, bem como indivíduos. 7 medidas adicionais de HPA ou SAM-eixo de ativação, a atividade do sistema nervoso simpático e parassimpático, ou psicológico auto-relato de estresse podem ser incluídos para avaliar a resposta ao TSST. Por exemplo, alguns grupos de pesquisa pode ser útil para medir a variabilidade da freqüência cardíaca, resposta electrodermal, pressão arterial, sobressalto ou resposta piscar de olhos, ou alterações na temperatura do corpo em resposta à TSST. Para uma revisão das medidas comumente utilizadas para avaliar a atividade do sistema nervoso autônomo, consulte Mendes, 2009. 7 Recentemente, alguns grupos de pesquisa também começaram a investigar as mudanças na resposta imunológica à TSST 8. Muitas opções para avaliar a resposta psicológica ao TSST são também está disponível (por exemplo, o Perfil dos Estados de Humor, visual analoescalas gue, ou do tipo Likert avaliações de stress, ansiedade ou relaxamento).
Diferenças na resposta individual ao TSST são uma preocupação importante quando se usa esse protocolo. Em amostras de adultos saudáveis, o TSST tem sido relatada a aumentar os níveis de cortisol salivar 02:58 dobra em aproximadamente 70-80% dos participantes, no entanto as respostas variam muito entre os indivíduos. Pesquisadores têm documentado uma efeitos da idade, um gênero, 9, 10 nascimento peso, 11 estilo de resiliência / fixação, 12, 13 abuso na infância, 14 educação, 15 traços de personalidade, 16 de uso da nicotina / álcool / cafeína 1 ou uso de medicamentos (particularmente sedativos, ansiolíticos ou à base de hormônios contraceptivos), 17, 18 cognitiva terapia comportamental, 19 de meditação da compaixão, 8 e a presença da música 20 em resposta TSST em populações saudáveis. Recentemente, pesquisadores têm sugerido medidas que são tomadas antes de um período de espera antes da TSST são importantes e podem revelar informações sobre reatividade ao estresse individual. 21 Para uma discussão mais aprofundada das diferenças individuais na avaliação dos hormônios salivares, ea visão geral da utilização da avaliação hormonal salivares em neurociência social , ver Schultheiss & Stanton, 2009. 22 Para uma apresentação mais detalhada das diferenças individuais no desempenho TSST, ver Kudielka et al., 2009. 23
Além das diferenças individuais, o cortisol está sujeito a flutuações circadiano, com níveis elevados no período da manhã, em seguida, diminuindo ao longo do dia. Se as alterações cortisol será usado como uma medida em resposta à TSST, é importante para coletar amostras em pontos de tempo consistente para análise exacta e para evitar confusão TSST mudanças induzidas pelo cortisol com a resposta do cortisol que ocorre ao despertar pela manhã.
> ent "Embora muitos relatórios têm-se centrado sobre como usar o TSST para estudar resposta ao estresse em populações saudáveis e adultos, este protocolo é adequado para uso em populações clínica e tem sido adaptado para uso com crianças. protocolo 24 Isto pode contribuir para a compreensão importante sobre o papel de vários caminhos biológicos envolvidos em distúrbios relacionados ao estresse ou variabilidade do desenvolvimento da resposta ao estresse.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Não há conflitos de interesse declarados.
Acknowledgments
Obrigado a Jessica Ottmar para sugestões e contribuições para o protocolo de dados representativa. Um agradecimento especial a Sabrina Blackledge, Kohoutek Lauren e Shelton Kerisa para demonstrar esse protocolo.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Name of the equipment/Supply | Company | Catalogue number | |
| BSL Psychophysiology System, Mac OSIncluding MP36 Data Acquisition Unit and three lead electrocardiogram electrodes | Biopac Systems, Inc. | BSLPSY-M | |
| State Trait Anxiety Inventory | Mind Garden, Inc. | STAID-B | |
| Salivary Cortisol Enzyme Immuno Assay Kit | Salimetrics | 1-3002 | |
| 2.0 ml polypropylene vials | Fisher Scientific | 05 40B 146 | |
| BioRad Microplate Reader, Model 680, with Microplate Manager software | Bio-Rad | Plate Reader: 168 1000Software: 1706800 |
References
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