Summary
תאים הרוצח טבעי הם אוכלוסייה קטנה של לימפוציטים. כאן אנו מראים כיצד לבודד תאים אלה מהדם האנושי על ידי סלקציה שלילית, באמצעות ערכת מן StemCell טכנולוגיות. התאים המתקבלים הם קיימא ללא פגע על ידי נוגדנים, ולכן מוכן לשמש במשך מספר הליכים.
Abstract
טבעיים (NK) תאים הרוצח גדולים לימפוציטים ציטוטוקסיים פרטנית ששייכים למערכת החיסון המולדת לשחק תפקידים מרכזיים בלחימה נגד סרטן וזיהומים, אך גם הם מעורבים בשלבים המוקדמים של ההריון דחייה. תאים אלה נמצאים דם היקפיים, שממנו הם יכולים להיות מבודדים. תאים יכולים להיות מבודדים באמצעות מבחר חיובי או שלילי. עבור סלקציה חיובית אנו משתמשים נוגדנים להפנות סמן משטח הנוכחית רק על תאים של עניין ואילו סלקציה שלילית אנו משתמשים קוקטיילים של נוגדנים ממוקד סמנים על פני ההווה כל התאים אך בתאים של עניין. טכניקה זו האחרונה מציגה את היתרון של השארת תאים הריבית ללא נוגדנים, ובכך להפחית את הסיכון של הפעלת התא differenciation לא רצויות או. בפרוטוקול-video זה אנו מדגימים כיצד להפריד תאים NK מהדם האנושי על ידי סלקציה שלילית, באמצעות ערכת RosetteSep מ StemCell טכנולוגיות. ההליך כרוך בהשגת דם היקפיים האנושי (בבדיקה מוסדי לוח אושר פרוטוקול להגן על בבני אדם) ואת לערבב אותו עם קוקטייל של נוגדנים אשר נקלטות על ידי סמנים נעדר על תאים NK, אבל ההווה על כל התאים האחרים mononuclear נוכח היקפי הדם (למשל, לימפוציטים מסוג T, מונוציטים ...). נוגדנים הנמצאים קוקטייל הם מצומדות כדי נוגדנים להפנות glycophorin אריתרוציטים על. כל התאים הלא רצויים כדוריות דם אדומות ולכן יהיה להיות לכוד בתוך מתחמי. תערובת של קוקטייל דם נוגדן הוא מדולל אז, overlayed על שיפוע Histopaque ו centrifuged. בתאי NK (> 80% טהור) ניתן לאסוף בממשק שבין Histopaque לבין פלזמה מדולל. קוקטיילים דומים זמינים העשרה של אוכלוסיות תאים אחרים, כמו האדם לימפוציטים מסוג T.
Protocol
פרוטוקול מפורט נכלל עם כל קוקטייל בידוד רוזט ספטמבר זמינה באופן מקוון באתר StemCell טכנולוגיות 1.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
תאים בודדים באמצעות טכניקה זו ניתן להפריד נוספת לתוך אוכלוסיות שונות באמצעות אחרים הפרדה ערכות התא.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Rosette Sep cocktail for human NK cells | Reagent | Stem Cell Technologies | 15065 | |
| PBS, steile, 1x | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 14040-058 | |
| Fetal calf serum (FCS, FBS) | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 16140-071 | |
| Histopaque-1077 | Reagent | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure. | ||||
References
- Procedures and instruction manuals. , http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx Forthcoming.
