Summary
Doğal katil hücreler, lenfosit küçük bir nüfus. Burada StemCell Teknolojileri kit kullanarak, bu hücrelerin insan kanı negatif seleksiyon tarafından nasıl izole etmek göstermektedir. Elde edilen hücreler, bu nedenle bir takım prosedürler için kullanılacak hazır antikorlar tarafından uygulanabilir ve bakir, ve.
Abstract
Doğal öldürücü (NK) hücreleri doğuştan gelen bağışıklık sistemine ait olup, kanser ve enfeksiyonlara karşı mücadelede önemli bir rol oynamak, büyük granüllü sitotoksik lenfositler, ancak, gebelik ve transplant reddini erken aşamalarında da sorumlu tutulmaktadır. Bu hücreler izole edilebilir olan periferik kan, mevcut. Hücreler, pozitif veya negatif seçim kullanılarak izole edilebilir. Olumlu seçimi için biz sadece tüm hücreleri ama ilgi hücreler mevcut yüzey belirteçleri hedefleyen antikor kokteylleri kullanan negatif seçimi için ise ilgi hücreleri mevcut bir yüzey işaretleyici yönelik antikorlar kullanır. Bu son teknik, böylece istenmeyen hücre aktivasyonu ya da farklılaşma riskini azaltarak, hücrelerin antikor serbest ilgi bırakarak avantajı sunuyor. Bu video protokol StemCell teknolojileri RosetteSep kiti kullanılarak, negatif seleksiyon tarafından nasıl insan kanı NK hücreleri ayrı göstermektedir. Bu prosedür, insan periferik kan (insan denekler korumak için bir kurumsal inceleme kurulu tarafından onaylanmış protokol altında) elde ve NK hücreleri yok belirteçlerinin bağlamak antikorların bir kokteyl ile karıştırma, ancak, periferik diğer tüm mononükleer hücreler içerir kan (örneğin, T lenfositleri, monositler ...). Kokteyl bulunan antikorlar, A üzerinde eritrosit glycophorin yönelik antikorlar konjuge. Bu nedenle, tüm istenmeyen hücre ve kırmızı kan hücrelerinin kompleksleri kalmış olacak. Kan ve antikor kokteyli karışımı, daha sonra seyreltilmiş Histopaque degrade üzerine yerleştirilmiştir ve santrifüj edilir. NK hücreleri (>% 80 saf) Histopaque ve seyreltilmiş plazma arasındaki arayüz toplanabilir. Benzer kokteyller, insan T lenfositleri gibi diğer hücre popülasyonlarının, zenginleştirilmesi için kullanılabilir.
Protocol
Her Rozet Eylül izolasyon kokteyl ile birlikte ayrıntılı bir protokol ve StemCell teknolojileri 1 online olarak mevcuttur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu tekniği kullanarak izole hücreler diğer hücre ayırma kitleri kullanılarak farklı popülasyonlar daha ayrılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Rosette Sep cocktail for human NK cells | Reagent | Stem Cell Technologies | 15065 | |
| PBS, steile, 1x | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 14040-058 | |
| Fetal calf serum (FCS, FBS) | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 16140-071 | |
| Histopaque-1077 | Reagent | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure. | ||||
References
- Procedures and instruction manuals. , http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx Forthcoming.
