Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

القولون والمستقيم سطح الخلية السرطانية باستخدام بروتين التنميط ميكروأري جسم والمتعدد الإسفار

Published: September 25, 2011 doi: 10.3791/3322
Automatic Translation
1, 1, 2, 3, 4, 1
1School of Molecular Bioscience, University of Sydney, 2Department of Surgery, Royal Prince Alfred Hospital, 3Department of Anatomical Pathology, Department of Anatomical Pathology, 4Department of Medicine, Concord Repatriation General Hospital

ERRATUM NOTICE

Summary

صفنا إجراء لتفصيل سرطان القولون والمستقيم (CRC) لإنتاج خلايا واحدة قابلة للحياة ، والتي استولت بعد ذلك على الضد ميكروأرس مخصصة الاعتراف المستضدات السطحية (CRC DotScan ميكروأري). ويمكن لمحة عن المجموعات الفرعية من السكان من الخلايا منضمة إلى مضاعفة من قبل ميكروأري مضان باستخدام الاجسام المضادة الموسومة مع الأصباغ الفلورية.

Protocol

الشكل 1
تدفق العمل الرقم 1. لإعداد تعليق الخلايا الحية من عينة جراحية من اتفاقية حقوق الطفل.

1. عينة سريرية التفكيك

وقد تم جمع عينات من كل من مستشفى رويال الامير ألفريد (Camperdown ، نيو ساوث ويلز ، أستراليا) ، ومستشفى كونكورد العودة إلى الوطن (كونكورد الغربية ، نيو ساوث ويلز ، أستراليا) مع الموافقة المسبقة بموجب البروتوكول رقم X08 - 164.

  1. جمع سرطان القولون والمستقيم الطازجة (CRC) أو عينات غدي ، والغشاء المخاطي المعوي العادي لا يقل عن 10 سم من الورم. عينات من متجر في هانك المتوازنة الملح الحل الحموضة 7.3 (HBSS) في 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى 12 ساعة بعد بتر.
  2. اتباع قواعد السلامة لمسببات الأمراض البشرية ، ومعالجة كافة العينات السريرية في سلامة البيولوجية مجلس الوزراء من الدرجة الثانية. تشريح عينات إلى مكعبات 2 مم في طبق بتري باستخدام اثنين شفرات المشرط.
  3. احتضان الورم والأنسجة الطبيعية في أنابيب إيبندورف منفصلة مع خلط أحيانا لطيف لمدة 60 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع حجم مساو من المتوسط ​​1640 RPMI تحتوي على 2 ٪ (V / V) كولاجيناز نوع 4 (رثينجتون ، يكوود بولاية نيوجيرسي ، الولايات المتحدة) و 0.1 ٪ (W / V) وأنا من ديوكسي ريبونيوكلياز pancrease البقري (الدناز الأول ؛ سيغما الدريخ).
  4. قوة شبه هضم الأنسجة من خلال مصفاة سلكية غرامة باستخدام المكبس من الحقنة 10 مل ، من خلال غسل الخلايا مع HBSS.
  5. تمرير الناتجة تعليق الخلية من خلال 200 ميكرون و 50 ميكرون مرشحات Filcon دينار بحريني (العلوم البيولوجية) لإزالة الركام الخلية. تتم إزالة معظم الركام الحمض النووي ، والمخاط والخلايا في هذه السلسلة من الفلترة.
  6. تعليق الطرد المركزي في 400 خلية XG عند 20 درجة لمدة 5 دقائق.
  7. خلية الكريات Resuspend في الحرارة المعطل FCS sulphoxide تحتوي على ثنائي ميثيل 10 ٪ (DMSO) ، وتجميد ببطء في cryovials وتخزينها في -80 درجة. عملية تجميد يميل للحد من مخاط في العينة وlyses خلايا الدم الحمراء.

2. إعداد نموذج لالتقاط الخلية

  1. ذوبان الجليد من العينات بسرعة في حمام المياه 37 درجة و الخلايا resuspend في 10 مل من HBSS لغسل خارج DMSO.
  2. تعليق الطرد المركزي في الخلية 410 XG عند 20 درجة لمدة 5 دقائق.
  3. صب وطاف وresuspend الكرية الخلية في 500 ميليلتر من HBSS.
  4. علاج العينة بنسبة 0.1 ٪ (W / V) الدناز الأول لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  5. 10 ميكرولتر مزيج من كل تعليق الخلية مع حجم مساو من التريبان الأزرق وتحميل 10 ميكرولتر من الخليط في عدادة الكريات. باستخدام مجهر الضوء عند 100 مرات التكبير ، عد خلايا قابلة للحياة ، والتي تظهر واضحة بسبب الاستبعاد التريبان الأزرق ، في حين أن الخلايا الميتة بتناول صبغة. مطلوب كحد أدنى 4 × 10 6 خلايا قابلة للحياة لالتقاط الخلايا على ميكروأري.
  6. بعد العلاج الدناز ، resuspend تعليق خلية في 10 مل HBSS والطرد المركزي في 410 XG عند 20 درجة لمدة 5 دقائق.
  7. صب في supernatants وكريات الخلية resuspend RPMI في 1640 إلى وحدة تخزين النهائي من 200 ميكرولتر.

3. القبض على خلية جسم [ميكروأري

  1. يبلل [ميكروأري] DotScan بواسطة غمس في المقطع النيتروسليلوز الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) لحوالي 20 ثانية. يمسح بعناية حواف الزجاج من ميكروأري مع Kimwipes مطوية ، وتجنب لمس الجزء النيتروسليلوز.
  2. يضاف الماء إلى علبة حضانة ميكروأري لتوفير غرفة رطبة. ضع ميكروأري في الغرفة وماصة للتعليق خلية في RPMI 1640 على القسم النيتروسليلوز رطبة. ماصة قطرات في كل ركن من أركان النيتروسليلوز لضمان انتشار حتى من الخلايا.
  3. لاحتضان ميكروأرس في 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. تفريخ الخلايا يسمح لتسوية وتأتي في اتصال مع الأضداد على ميكروأري. وسوف يتم القبض على الخلايا معربا عن المستضدات السطحية المقابلة لأنهم الأضداد على الأرض.
  4. بعد مرور فترة الحضانة ، وتراجع في ميكروأرس بلطف ورأسيا إلى ثلاثة أحواض تحتوي على ما لا يقل عن 15 مل PBS ليغسل خلايا غير منضم (20 ثانية لكل غسل).
  5. إعداد 3.7 ٪ (ث / ت) الفورمالديهايد في برنامج تلفزيوني لإصلاح الخلايا والأجسام المضادة التي عبر الارتباط. ماصة بلطف حوالي 1 مل لتغطية قسم من ميكروأري النيتروسليلوز. احتضان لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  6. تراجع ميكروأرس المقبل الى 3 تغييرات في برنامج تلفزيوني (15 مل ، 30 ثانية لكل منهما) لغسل الفورمالدهايد الزائد.
  7. مسح الحواف والخلفي من شريحة زجاجية مع Kimwipes وتفحص ميكروأري استخدام الماسح الضوئي في حين DotScan ، المقطع النيتروسليلوز رطبة. المسح الضوئي ويوفر نمط التعبير مستضد للسكان الخلية المختلطة الخلايا لجنة حقوق الطفل على سبيل المثال ، الكريات البيضاء وخلايا انسجة أخرى من الورم.

4. مضان مضاعفة

  1. إزالة ميكروأري من الماسح الضوئي وتطبيق 200 ميكرولتر من حجب العازلة (2 ٪ وزن / حجم جيش صرب البوسنة ، و 2 ٪ للحرارة الإنسان المعطل AB المصل ، برنامج تلفزيوني ، ودرجة الحموضة 7.3). احتضان ذلك في علبة ميكروأري في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة.
  2. إعداد multiplexing الحل في أنبوب إيبندورف مغطاة رقائق الألومنيوم : 20 ميكرولتر فيكوإيريترين مكافحة - CD3 (بيكمان كولتر ، Gladesville ، نيو ساوث ويلز ، أستراليا ، # IM12824 ؛ 1/7.5 التخفيف النهائي) ، و 10 ميكرولتر اليكسا فلور - 647 المضادة للEpCAM (Biolegend ، سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية ؛ 15/01 تمييع) ، و 2 ميكرولتر من الحرارة المعطل المصل AB الإنسان (سيغما الدريخ ، كاسل هيل ، نيو ساوث ويلز ، أستراليا) و 118 ميكرولتر من العازلة حظر.
  3. تصريف الفائض عازلة تمنع من وميكروأري ماصة الحل مضاعفة على المقطع النيتروسليلوز ، ونشر موحد. احتضان لمدة 30 دقيقة في الظلام في درجة حرارة الغرفة.
  4. يغمس ميكروأري رأسيا إلى ثلاثة أحواض من 15 برنامج تلفزيوني جديد مل ؛ (30 ق لكل منهما).
  5. السماح للميكروأرس الجافة في الظلام وتخزينها في 4 درجات مئوية في خانة الشريحة. ويمكن تخزين ميكروأري في الظلام لمدة تصل إلى 3 أشهر دون فقدان مضان.
  6. مسح ميكروأري الجافة باستخدام الماسح الضوئي FLA اعصار 9000 (GE للرعاية الصحية ، Rydalmere ، نيو ساوث ويلز ، أستراليا) لقرار لتعيين 50 (532 نانومتر ليزر ، 580 BP30 الانبعاثات لتصفية شركات القطاع العام. الليزر 633 نانومتر و 670 BP30 الانبعاثات لتصفية اليكسا 647). يتم تفحص ميكروأرس مع الجانب النيتروسليلوز أسفل على زجاج الماسحة الضوئية صينية.
  7. حفظ الصور كملفات TIFF الفلورسنت ، واستخدام الصور Photoshop لتعيين حجم 17 × 25 سم ، والقرار إلى 72 بكسل / سم. استيراد الصورة في برامج التحليل DotScan لتحليل كثافة من النقاط.
  8. وDotReader يلتقط صورة رقمية للنمط نقطة الربط الكمي وكثافة ملزم خلية في جسم كل نقطة على نطاق greyness 8 بت (1-256 U). وكان طرح في بعض الأحيان السيطرة isotype غير محددة وملزمة من قيم ملزمة للأضداد الغلوبولين المناعي مع isotypes المقابلة. تم تطبيع كثافة مضان نقطة لكل ميكروأري ضد ألمع النقطة التي وضعت في كثافة 100 ٪. إشارة / بقعة وسجلت القوة في ملف xml (البيانات الأولية) أو تمثيل ك مخطط شريطي في ملف. pdf (التقرير النهائي)
  9. أجريت ميكروأري heatsmaps المجموعات الهرمية وباستخدام MultiExperiment عارض (إلكترون فولت) الإصدار 4.4 من حزمة برمجيات TM4 ميكروأري ( http://www.tm4.org/mev.html ). تم تنفيذ المجموعات الهرمية على خلفية البيانات المعدلة باستخدام إلكترون فولت مع تحليل الربط الكامل. كان يستخدم لقياس المسافة الإقليدية التشابه. تم استخدام طالبة في الذيل 2 - T - اختبار مع الفرق متساوية لتحديد الدلالة الإحصائية للنتائج.

5. ممثل النتائج :

وينبغي أن ينتج عن ميكروأري DotScan تظهر أنماط الخلية متسقة الربط بين صفائف مكررة. محاذاة نقطة قوية ملزمة (CD44/CD29) تمكن الشبكة إلى وضعها فوق منطقة الصفيف. ويبين الشكل 2 مثالا على التقاط الخلية الأمثل والمتعدد. ويبين الشكل 3 بعض المشاكل المشتركة التي تواجه أثناء التقاط الخليوي ، والحلول الممكنة.

ويمكن قياس نتائج الخلية ميكروأري ملزمة من خلال قياس كثافة نقطة وأعرب على نطاق وgreyness تتراوح بين 1 إلى 256. ويبين الشكل 4 بيانات رقمية لجنة حقوق الطفل من 58 عينات الجراحية ، ملطخة الضد - 647 EpCAM اليكسا ، بوصفها heatmap مع المجموعات الهرمية. على الرغم من أن عدد العينات غير محدودة ، ومراكز التأهيل المجتمعي للمرحلة نفسها تميل إلى التجمع في نفس المجموعة.

الشكل 2
الشكل 2. نمط الخلية السرطانية السريرية الملزمة للسرطان القولون والمستقيم (استراليا عيادة - الباثولوجية التدريج ، ACP المرحلة B1). (أ) مفتاح الضد يظهر DotScan مواقع الأجسام المضادة للنصف الأيسر من ميكروأري مكررة (المذكورة). القسم العلوي يحتوي على الأجسام المضادة الأصلي 82 من ميكروأري DotScan اللوكيميا. العثور على مبلغ إضافي 40 الأضداد ، المطابقة لمستضدات سطح محددة إلى أن يصل التنظيم في الأدب ، كما أضيفت ميكروأري 'الفضائية' إلى لجنة حقوق الطفل. يتكون القسم السفلي من أجسام تحكم isotype (ب) من الخلايا الضوئية صورة ملزما للجنة حقوق الطفل ميكروأري. (ج) صورة مضان CD3 تظهر الخلايا التائية. (د) صورة مضان EpCAM تظهر الخلايا لجنة حقوق الطفل.

الشكل 3
الشكل 3. أمثلة للنتائج DotScan الفقراء والحلول الممكنة. (أ) خلية قليلة ملزمة ؛ الحل : تأكد على الأقل 4x106 هي خلايا قابلة للحياة على مجموعة (ب) Isotype خلية مراقبة الملزمة وغير الملزمة محددة ؛ الحل : إضافة للحرارة الإنسان المعطل لعينة مصل AB قبل الحضانة على ميكروأري للحد من isotype السيطرة ملزمة. في بعض الأحيان ، وهو مبلغ صغير من المنظمات غير محددة وملزمة من الخلايا إلى النيتروسليلوز يحدث مع اتفاقية حقوق الطفل وعينات لا يؤثر بشكل كبير على النتائج. (ج) النتروسليلوز تجفيف خلال الحضانة ؛ الحل : تأكد من عينة يغطي القسم النيتروسليلوز كله والمحتضنة ميكروأري على سطح مستو. (د) التحف خلفية عالية ؛ الحل : التأكد منيتم غسلها جيدا ميكروأري حضانة التالية.

الشكل 4
الشكل 4. DotScan برمجيات تحليل الرسوم البيانية ولدت شريط يمثل كثافة الخلية ملزم على نطاق greyness تتراوح بين 1 إلى 256. الأرقام على محور الرجوع إلى مستضدات CD. الاختصارات الأخرى TCR ، تي مستقبلات الخلية ؛ κ ، λ ضوء المناعي ، وسلاسل ، سيج ، المناعي السطح ؛ DCC ، حذف البروتين في سرطان القولون والمستقيم ؛ EGFR ، البشرة مستقبلات عامل النمو ؛ FAP ، البروتين الليفية التنشيط ؛ HLA - A ، B ، HLA - C DR ، الكريات البيض البشرية DR مستضدات و A ، B ، C على التوالي ؛ ميكا ، MHC الصف الأول سلسلة متصلة من البروتين A ؛ MMP - 14 ، مصفوفة metallopeptidase 14 ؛ PIGR ، مستقبلات المناعي البوليمرية ؛ TSP - 1 ، thrombospondin - 1 ؛ Mabthera ، البشرية : مكافحة CD20. انقر هنا لعرض صورة أكبر .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

في هذا الفيديو ، ونظهر كيف يمكن استخدام الأجسام المضادة ميكروأري DotScan بطريقة بسيطة نصف الكمية ، لدراسة ملامح سطح المستضد للسكان خلية من أنسجة لجنة حقوق الطفل.

الحصول على تعليق خلية واحدة قابلة للحياة من الأنسجة أمر حاسم لنجاح التجربة ، لأن الطاقة التي تعتمد على العمليات (مثلا ، متوجا مستضد و / أو تشكيل أقدام كاذبة) ويبدو أن هناك حاجة للربط الثابت من خلايا جسم بأكمله إلى نقطة خلال الحضانة ، بينما يتم غسلها في وقت لاحق خارج الخلايا الميتة. كان يعمل في البداية اكتب 1 كولاجيناز disaggregation8 للأنسجة ، ولكن استعيض عن كولاجيناز (4) التي أقل ضررا لأغشية الخلايا ، كما أنه يحتوي على عدد أقل من الملوثات البروتيني. لم هذا التغيير لن يؤثر على محصول الخلية ، صلاحية أو أنماط ملزمة. انخفاض المخاط من بعض الأورام وعينات الخلايا والسيطرة العائد تدخلت مع التقاط الخلية. تم تصغير هذه الحساسية من المخاط قبل تخزين تعليق خلية موزعة في 10 ٪ DMSO / FCS في -80 درجة مئوية ، ويفترض نظرا للتغيرات في خصائص مخاط بعد تجميد والذوبان 9. في وقت لاحق ، تم تخزين جميع العينات المجمدة في 10 ٪ DMSO / FCS بعد تصنيفها وكانت إذابة بسرعة لإنتاج معلقات خلية قابلة للحياة ، مع أنماط ملزمة متناسقة. حذفت العينات مع بقاء <50 ٪ أو إظهار ملزمة الفقراء على محاذاة / التدبير المنزلي نقاط (CD44/CD29) من التحليل.

وكان علامة بارزة لجنة حقوق الطفل واستنساخ CD15s الضد قليلة أظهرت تقارب عندما خفضت منضمة إلى النيتروسليلوز ربما يرجع ذلك إلى تغيير في التشكل ، على سبيل المثال ، فإن القليل جدا أو لا ملزمة الخلية. ينبغي الاستعاضة عن الأجسام المضادة التي أظهرت نتائج سلبية على الدوام مع الحيوانات المستنسخة ورم هجين مختلفة. وكان سبب آخر ممكن من النشاط لبعض الفقراء إلى تدخل الأجسام المضادة ملزمة ألبومين المصل البقري (BSA). وينبغي استخدام جيش صرب البوسنة خالية من الأجسام المضادة على ميكروأري حيثما أمكن ذلك.

على الرغم من أن هناك حاجة كبيرة للمريض الأفواج التحليل الاحصائي للبيانات ميكروأري ، المجموعات الهرمية للنتائجنا (58 عينات سريرية) كانت مشجعة. وينبغي تطبيع البيانات باستخدام الأساليب التي وصفها يانغ 10 تقديم دلالة إحصائية محسنة.

في حين أن الأجسام المضادة ميكروأري DotScan تمكن من تحديد أنماط جديدة من التعبير عن مستضدات CD المعروفة ، فإنه يكون أكثر فعالية عندما يستخدم جنبا الى جنب مع تقنيات اكتشاف البروتين ، مثل هلام إستشراد 2 الأبعاد وLC - MS - iTRAQ ، لتحديد البروتينات الرواية وفيرة تفاضلي . رواية البروتينات مثل هذه العلامات المحتملة ، ويمكن أن تضاف الأضداد المقابلة للمجموعة ، والتحقق من صحتها مع عينات سريرية لجنة حقوق الطفل.

استخدام الأجسام المضادة fluorescently المسمى لملف الفرعي مجموعات من الخلايا والقبض توفر منصة قوية لتحليل DotScan المختلطة السكان من الخلايا.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

نشكر العاملين في مختبرات علم الأمراض التشريحية لألفريد الملكي الأمير المستشفيات والعودة إلى الوطن كونكورد لجمع عينات جديدة من اتفاقية حقوق الطفل والغشاء المخاطي في الأمعاء طبيعية. وقد تم تمويل العمل من قبل معهد السرطان نيو ساوث ويلز برنامج المنح بالحركة.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hanks’ balanced salt solution Sigma-Aldrich H6136-10X1L Buffered with 25 mM Hepes (Sigma #H3375)
Airpure biological safety cabinet class II Westinghouse 1687-2340/612
Surgical blades Livingstone 090609 Pack of 100
RPMI 1640 with 2 mM Hepes Sigma-Aldrich R4130-10X1L
Collagenase type 4 Worthington Biochemical 4188
Deoxyribonuclease 1 Sigma-Aldrich DN25-1G
Terumo Syringe (10 mL) Terumo Medical Corp. SS+10L Box of 100
Filcon filter (200 μm) BD Biosciences 340615
Filcon filter (50 μm) Filcon filter (50 µm) Filcon filter (50 µm) Filcon filter (50 µm) 340603
Fetal calf serum GIBCO, by Life Technologies 10099-141
Centrifuge 5810 R Eppendorf 7017
Dimethyl sulphoxide Sigma-Aldrich D2650
Trypan blue Sigma-Aldrich T8154
Hemocymeter Technocolor Neubar Hirschmann not available
Light microscope Nikon Instruments Nikon TMS
Cyrovial tubes Greiner Bio-One 121278
Cryo freezing contrainer Nalge Nunc international 5100-0001
DotScan antibody microarray kit Medsaic not available
DotScan microarray wash tray Medsaic not available
KimWipes Kimberly-Clark Corporation 4103
Formaldehyde 37% Sigma-Aldrich F1635-500ML
DotReaderTM Medsaic not available
Bovine serum albumin Sigma-Aldrich A9418-10G
Heat-inactivated AB serum 2% Invitrogen 34005100
Phyc–rythrin-conjugated CD3 Beckman Coulter Inc. ET386
AlexaFluor647-conjugated EpCAM BioLegend 324212
Typhoon FLA 9000 GE Healthcare 28-9558-08 532 nm laser, 580 BP30 emission filter for PE. 633 nm laser and 670 BP30 emission filter for Alexa647
MultiExperiment Viewer v4.4 TM4 Microarray Software Suite Open – source software (Ref 11)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Steinert, R., Buschmann, T., vander Linden, M., Fels, L. M., Lippert, H., Reymond, M. A. The role of proteomics in the diagnosis and outcome prediction in colorectal cancer. Technol. Cancer. Res. Treat. 1, 297 (2002).
  2. Eifel, P., Axelson, J. A., Costa, J., Crowley, J., Curran, W. J., Deshler, A., Fulton, S., Hendricks, C. B., Kemeny, M., Kornblith, A. B., Louis, T. A., Markman, M., Mayer, R., Roter, D. National Institutes of Health Consensus Development Conference Statement: adjuvant therapy for breast cancer. J. Natl. Canc. Inst. 93, 979 (2001).
  3. Swerdlow, S. H., Campo, E., Harris, H. L., Jaffe, E. S., Pileri, S. A., Stein, H., Thiele, J., Vardiman, J. W. WHO classification of tumour of haematopoietic and lymphoid tissues. IARC WHO Classification of Tumours. 2, Fourth, (2008).
  4. Xiao, G. G., Recker, R. R., Deng, H. W. Recent advances in proteomics and cancer biomarker discovery. Clin. Med. Oncol. , (2008).
  5. Belov, L., Mulligan, S. P., Barber, N., Woolfson, A., Scott, M., Stoner, K., Chrisp, J. S., Sewell, W. A., Bradstock, K. F., Bandall, L., Pascovici, D. S., Thomas, M., Erber, W., Huang, P., et al. Analysis of human leukaemias and lymphomas using extensive immunophenotypes from an antibody microarray. Br. J. Haematol. 135, 184 (2006).
  6. Belov, L., Huang, P., Barber, N., Mulligan, S. P., Christopherson, R. I. Identification of repertories of surface antigens on leukemias using an antibody microarray. Proteomics. 3, 2147 (2003).
  7. Zhou, J., Belov, L., Huang, P. Y., Shin, J., Solomon, M. J., Chapuis, P. H., Bokey, L., Chan, C., Clarke, C., Clarke, S. J., Christopherson, R. I. Surface antigen profiling of colorectal cancer using antibody microarrays with fluorescence multiplexing. J. Immunol. Methods. 355 (1-2), 40-51 (2010).
  8. Ellmark, P., Belov, L., Huang, P., Lee, C. S., Solomon, M. J., Morgan, D. K., Christopherson, R. I. Multiplex detection of surface molecules on colorectal cancers. Proteomics. 6, 1791 (2006).
  9. Pearson, J. P., Allen, A., Hutton, D. A. Rheology of mucin. Methods Mol. Biol. 125, 99 (2000).
  10. Yang, Y. H., Dudoit, S., Luu, P., Lin, D. M., Peng, V., Ngai, J., Speed, T. P. Normalization for cDNA microarray data: a robust composite method addressing single and multiple slide systematic variation. Nucleic Acids Res. 30, 15 (2002).
  11. Al Saeed,, et al. TMA: A free, open-source system for microarray data management and analysis. BioTechniques. 34, 374-378 (2003).

Tags

علم المناعة ، العدد 55 ، وسرطان القولون والمستقيم ، الكريات البيض ، [ميكروأري] ، مضان مضاعفة مستضدات CD ،

Erratum

Formal Correction: Erratum: Colorectal Cancer Cell Surface Protein Profiling Using an Antibody Microarray and Fluorescence Multiplexing
Posted by JoVE Editors on 07/03/2015. Citeable Link.

The author's email has been corrected in the publication of Colorectal Cancer Cell Surface Protein Profiling Using an Antibody Microarray and Fluorescence Multiplexing. There was an error with the author, Jerry Zhou's, email. The author's email has been updated to:

j.zhou@uws.edu.au

from:

jzho7551@mail.usyd.edu.au

القولون والمستقيم سطح الخلية السرطانية باستخدام بروتين التنميط ميكروأري جسم والمتعدد الإسفار
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Zhou, J., Belov, L., Solomon, M. J., … More

Zhou, J., Belov, L., Solomon, M. J., Chan, C., Clarke, S. J., Christopherson, R. I. Colorectal Cancer Cell Surface Protein Profiling Using an Antibody Microarray and Fluorescence Multiplexing. J. Vis. Exp. (55), e3322, doi:10.3791/3322 (2011).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter