Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Organotypic Slice kulturer av embryonale Ventral midthjernen: Et system for å Study dopaminerge neuronal Development In vitro Published: January 31, 2012 doi: 10.3791/3350

Summary

En metode for å generere organotypic skiver fra E12.5 murine embryonale midthjernen er beskrevet. Den organotypic slice kulturer kan brukes til å observere atferden til dopaminerge nevroner eller andre ventrale midthjernen nerveceller.

Abstract

Musen er en utmerket modell organisme for å studere pattedyr hjernens utvikling på grunn av overflod av molekylære og genetiske data. Imidlertid er utvikler mus hjernen ikke egnet for enkel manipulering og bildebehandling in vivo siden musen embryoet er utilgjengelige og ugjennomsiktig. Organotypic slice kulturer av embryonale hjerner er derfor mye brukt til å studere murine hjernens utvikling in vitro. Ex-vivo manipulasjon eller bruk av transgene mus tillater modifisering av genuttrykk, slik at subpopulasjoner av nevroner eller gliaceller kan merkes med fluorescerende proteiner. Oppførselen til merkede cellene kan deretter observert ved hjelp av time-lapse imaging. Time-lapse fotografering har vært spesielt vellykket for å studere celle atferd som ligger til grunn for utviklingen av cerebral cortex ved sene embryonale stadier 1-2. Embryonale organotypic skive kultur systemene i hjernen regioner utenfor forebrain er mindre godt etablertHed. Derfor er det vell av time-lapse imaging data som beskriver neuronal celle migrasjon begrenset til forebrain 3,4. Det er fremdeles ikke kjent, om prinsippene oppdaget for dorsal hjernen sanne for ventrale hjernen områder. I den ventrale hjernen, er nevroner organisert i neuronal klynger snarere enn lag og de har ofte gjennomgå kompliserte migratory baner for å nå sin endelige posisjon. Den ventrale midthjernen er ikke bare en god modell system for ventral hjernens utvikling, men inneholder også neuronal populasjoner som dopaminerge nevroner som er relevante i sykdom prosesser. Mens funksjon og degenerasjon av dopaminerge nevroner har vært undersøkt i stor detalj i den voksne og aldrende hjerne, er lite kjent om atferden til disse nevronene under deres differensiering og migrasjon fase fem. Vi beskriver her generering av skive kulturer fra embryonale dag (E) 12.5 mus ventral midthjernen. Disse slice kulttiltak er potensielt egnet for overvåking av dopaminerge nevroner utvikling over flere dager in vitro. Vi markerer den kritiske trinn i generering hjernen skiver på disse tidlige stadiene av embryoutvikling og diskutere de vilkår som er nødvendige for å opprettholde normal utvikling av dopaminerge nevroner in vitro. Vi presenterer også resultatene fra tid lapse avbildning eksperimenter. I disse forsøkene ble ventral midthjernen forløpere (inkludert dopaminerge forløpere) og deres etterkommere merkes på en mosaikk måte ved hjelp av en Cre / loxP basert induserbar skjebne kartsystem 6.

Protocol

Deler av denne protokollen er endret fra Daza et al., 2007 7.

1. Forberedelser

  1. Kan være forberedt på en dag i forveien
    1. Forbered 1X Krebs buffer (1,5 L): 126 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 1.2 mM NaH 2 PO 4: H 2 O, 1.2 mM MgCl 2, 2,5 mM CaCl 2, 11 mM glukose, 25 mM NaHCO 3, justere pH til 7,4. Filter sterilisere (0,22 mikrometer porestørrelse) og oppbevar ved 4 ° C.
    2. Klargjør kultur medium (20 mL): 5 ml HBSS, 9 mL DMEM høy glukose, 850 mL av 30% glukose, 5 mL hest serum (25%). Tilsett 200 mL 100X Penicllin / Streptomycin. Oppbevares ved 4 ° C.
  2. Klargjør før du starter disseksjon
    1. Forbered 100 ml 4% lavt smeltepunkt agarose (LMP agarose) i 1X-Krebs buffer: mikrobølgeovn løsningen inntil agarose er fullstendig oppløst, og plasser deretter agarose i et 45 ° C vannbad.
    2. Fyll opp vibratome buffer skuffen med iskald 1X Krebs buffer og starte kjøleelement (holde ved 4 ° C). Fix et barberblad i bladet carrier og sette opp det vibratome området med en skalpell, en fin pensel og en mini perforert skje for å plukke opp skiver. Forbered sterile petriskåler (35 x 10 mm) med 1x Krebs buffer for å samle skiver. Hold på is.
    3. Set-up disseksjon område med sterile petriskåler (100 x 15 mm) for disseksjon og mindre sterile petriskåler (35 x 10 mm) for embedding, liten saks, to fin pinsett (Dumont 5), en mini perforert skje, et glass Pasteur pipette brann polert med en runde lukket tupp og 1 L 1X Krebs buffer på is. Tørk alle disseksjon verktøy med 70% etanol.
    4. Legg kultur medium til brønnene til en seks-brønns plate (1,5 ml / brønn) og plasser den i en 37 ° C inkubator.
    5. Forbered en seks-brønns plate med 1,5 ml / brønn sterile 1X Krebs buffer og 15 mL Penicilin / Streptomycin (100X) / brønn. Under sterile forhold, sted Millicell Cell Culture inn i brønnene. Plasser de seks-brønns plate ved siden av vibratome slik at hjernen skiver kan overføres på filteret membraner umiddelbart etter snitting.

2. Disseksjon og innebygging av embryonale hjerner

  1. Anesthetize en gravid kvinne musen med isofluran og oppofrelse musen ved cervikal forvridning (embryo bør være på scenen E12.5). Dissekere ut livmoren av musen ved å trekke opp livmoren med tang. Bruk andre pinsett til å skille mesometrium vekk fra livmor. Plasser livmor i iskaldt 1X Krebs buffer. Bruk en fin pinsett for å skille den muskulære veggen av livmor, Reichert er membranen og visceral plommesekken fra embryo. Fjern embryoene fra livmor. Plasser dissekerte embryo i en egen petriskål med sterile 1X Krebs buffer.
  2. Dissekere hjernen under et stereomikroskop. Å dissekere hjernen, først kutte hodet av embryoet. Fix hodetved piercing fin pinsett gjennom hodet (eye nivå). Bruk en annen pinsett for å forsiktig fjerne huden og hodeskallen. Bruk pinsett til å forsiktig løfte hjernen ut og overføre den til en petriskål med sterile 1X Krebs buffer. Det er svært viktig at integriteten til hele hjernen opprettholdes under disseksjon, fordi skader på hjernevevet vil skape problemer (for eksempel vev shredding) under snitting på vibratome.
  3. Vask hjernen en gang i 4% lavt smeltepunkt (LMP) agarose. Embedde 2-3 hjerner gangen i frisk 4% LMP agarose. Plasser innebygging retter på is så jevn som mulig. Bruk et Pasteur pipette med en brann-polert rund tupp for å løfte hjernen til bunnen av agarose er størknet. Hjernen skal bosette seg i en flat posisjon horisontal til bunnen av agarose blokken.
  4. Etter at agarose har helt stivnet (etter ca 3 min), trimme agarose som omgir hjernen og lim den agarose blokken på prøveskinneav vibratome. Når liming blokkene, sørg for at den ventrale siden av hjernen er parallell til plattformen, siden hjernen bør kuttes i en horisontal seksjon plan.

3. Vibratome seksjonering

  1. Bruk et barberblad for snitting. For å få intakt skiver er det svært viktig å opprettholde temperaturen ved 4 ° C under seksjonering.
  2. Seksjon 300 mikrometer tykke horisontale skiver med en frekvens på 50 Hz, blad amplitude på 1,1 mm og en hastighet på 25 mm / sek.
  3. Bruk fin pensel å presse skive i en mini perforert skje for å samle hjernen skiver og overføre dem til en tallerken med steril iskald 1X Krebs buffer. Velg skive som inneholder ventral midthjernen vev (se figur 1). I en E12.5 mus hjernen er det bare én 300 mikrometer horisontal skive som inneholder ventral midthjernen vev inkludert dopaminerge nevroner.

Fire. Slice kultur

Steps 04.02 til 04.05 skal utføres under sterile forhold.

  1. Overfør hjernen skiver på en Millicell cellekultur membran sette inn i en seks-brønns plate med 1x Krebs buffer (se punkt 1.2.5). For å overføre slice bruke mini perforerte skjeen (Fine Science Tools) og en fin pensel. Opptil 3 skiver kan plasseres på en membran.
  2. Transfer membranen med stykket til de seks-brønns plate med kultur medium (se punkt 1.2.5). Toppen av membranen bør ikke bli dekket av medium. Hjernen slice mottar medium nedenfra og luft ovenfra.
  3. Plasser de seks-brønns plate i en kuvøse med 5% CO 2 ved 37 ° C. Det er svært viktig at skivene er plassert i inkubatoren innen 2 timer etter første trinn av disseksjon. En mer utvidet forberedelse tid kan føre til dårlig overlevelse av skiver.
  4. Slices kan opprettholdes in vitro opp til 3 dager. Endring 50% av kulturen medium på 2. dag.

  1. La skivene igjen i inkubatoren i 4-5 timer før time-lapse imaging.
  2. For time-lapse imaging, holder skivene på membranen sette inn og overføre sette inn en 35 mm Ibidi μ-parabolen (bunnen av tallerken består av materiale med høy optisk kvalitet).
  3. Tilsett 1 mL av kultur medium pluss 1,5 mL askorbinsyre (200 mm) til parabolen. Askorbinsyre beskytter skiver mot fototoksisitet.
  4. Inkuber skiver i en miljømessig kammer ved 37 ° C med 5% CO2 i løpet av time-lapse imaging.

Seks. Representant Resultater

Figur 1 illustrerer utarbeidelsen av organotypic skive kulturer fra E12.5 mus hjernen. Figur 2 viser horisontal organotypic skiver (akutt og etter flere dager i kultur) fått skjema E12.5 mus hjernen. Til sammenligning frosset hjernen seksjoner ved tilsvarende utviklingsstadiervises. Midthjernen dopaminerge nevroner er visualisert med immunhistokjemi for tyrosin hydroksylase (TH). Midthjernen dopaminerge nevroner prosjektet til mål i forebrain. Disse prognosene begynner å danne på E12.5 og utvide mot forebrain løpet av de påfølgende dagene. Vi anser utvikling av forebrain projeksjoner som en god indikasjon for normal utvikling av dopaminerge nevroner i kultur. I det horisontale skiver midthjernen dopaminerge nevroner forlenge prognosene mot sin rette forebrain målområdet. Etter 3 DIV (dager in vitro) eller når forebrain innsatsområder er skadet, avvikende prognoser utvide mot dorsal midthjernen. Eksempler på koronale skiver av E12.5 midthjernen er vist i figur 3. Dopaminerge nevroner visualisert med farging for TH utvide avvikende fremført til dorsal midthjernen. Figur 4 viser en analyse av proliferating, nekrotiske og apoptotiske celler i organotypic skive kulturer. BrdU immunostaining å visualisere prolifererende celler viser at cellene sprer henhold kultur forhold etter 1. DIV. Spredning reduseres etter 4 DIV. Etter 3 DIV, mange celler i ventrale midthjernen gjennomgå nekrose (propidium iodide flekker) og apotosis (farging for kløyvde caspase-3). Figur 5 viser trekkende stier YFP-merket nevroner overvåket i en tid-lapse bildebehandling eksperiment i en akutt skive .

Figur 1
Figur 1. Skjematisk illustrerer utarbeidelsen av organotypic skive kulturer. 300 mikrometer horisontale hjernen skiver er utarbeidet av seksjonering en E12.5 hjernen ved hjelp av en vibratome. (A) Skjematisk sagittal visning av en E12.5 mus hjernen. Nivåer av delene er angitt. Området inneholder dopaminerge nevroner er avbildet i rosa, er projeksjoner angitt i blått. (B) Skjematisk av de tre skiver som kan fås fra dorsal til ventral og that inneholder både forebrain (Fb) og midthjernen (Mb). Merk at kun én skive inneholder dopaminerge nevroner (slice b). Det riktige slice kan identifiseres basert på plasseringen av ventriklene og kontinuiteten i midthjernen og forebrain vev (piler, sammenligne seksjon b med § a og c). Området inneholder dopaminerge nevroner er angitt i rosa, er området inneholder dopaminerge utgangsstoffer avbildet i grønn, blå piler indikerer utvikle prognoser. (C) skive inneholder dopaminerge nevroner er dyrket på membran inserts. Forkortelser: vMb, ventral midthjernen, DMB, dorsal midthjernen, Hyp, hypothalamus, Hb, hindbrain.

Figur 2
Figur 2. Framskrivinger av midthjernen dopaminerge nevroner i organotypic slice kulturer er avhengig av integritet forebrain. Immunhistokjemi for tyrosin hydroksylase (TH) å merke dopaminerge nevroner. (A) Akutt skive (0 DIV)viser normal plassering av dopaminerge nevroner i ventrale midthjernen. Den hvite pilspissen angir området som er vist i høyere forstørrelse i minibildet. Fremført til forebrain har ennå ikke utviklet. Etter en DIV, fremført til forebrain begynne å danne. Projeksjoner går inn i forebrain på 2-3 DIV. Hvit pilspisser indikerer plasseringen av cellen organer som vises i høyere forstørrelse i innfellinger (hvit ramme). Gule piler markere normal anslagene i intakte skiver vist i høyere forstørrelse i innfellinger (gul ramme). Aberrant prognoser utvikles i skiver med skadet forebrain. Røde piler indikerer avvikende fremført til dorsal midthjernen vist i høyere forstørrelse i innfellinger (rød ramme). Skade er angitt med rød stjerne. Etter 3 DIV, de fleste skiver (n = 5 / 7) hadde avvikende projeksjoner mot dorsal midthjernen. (B) TH farging på horisontale frossen hjernen seksjoner på ulike utviklingsstadier å vise utviklingenav dopaminerge projeksjoner in vivo. Hvit pilspisser indikerer plasseringen av cellen organer som vises i høyere forstørrelse i innfellinger (hvit ramme). Gule piler markere plasseringen av anslagene vist i høyere forstørrelse i innfellinger (gul ramme). Nivået av den frosne seksjonene ble valgt til tett matche nivået på organotypic skive kulturer. Merk at en enkelt frossen seksjoner (12 mikrometer) ikke representerer hele organotypic slice (300 mikrometer). Derfor var prognosene vist på E13.5 og E14.5 observert på seksjoner 120 mikrometer mer ventral enn den delen som inneholder cellen organer (gule stjerner).

Figur 3
Figur 3. Midthjernen koronale slice kulturer flekket for tyrosin hydroksylase (TH) som en markør for dopaminerge nevroner. (AC) Slices etter 1, 2 eller 3. DIV. Dopaminerge nevroner utvikle avvikende prognoser mot dorsal midthjernen (red piler). Pilspisser viser plasseringen av dopaminerge celler organer.

Figur 4
Figur 4. Celleproliferasjon og celleviabilitet i midthjernen organotypic skive kulturer. (A) prolifererende celler ble merket ved tilsetning av BrdU (50 ng / ml, Sigma) til kultur medium for 18 h. Slices ble senere immunostained for BrdU. Etter en DIV, er BrdU merket celler lokalisert i ventrikulære sonene (røde piler). Etter 4 DIV, prolifererende celler er mer spredt og et distinkt ventrikulære sone er ikke lenger opprettholdes. (B) Nekrotisk celler ble merket med tilsetning av propidium iodide (1μg/μL, Sigma) til kultur medium for 2 timer og visualisert av fluorescens mikroskopi. Etter en DIV, er ventrale midthjernen (vMb) ikke nekrotisk, men mange propidium iodide merkede celler kan sees i dorsale midthjernen og forebrain. Etter 3 DIV cellen levedyktighet nedgang i ventrale midbrai. Scale bar: 500 mikrometer (C) Immunostaing for kløyvde caspase-3 for å visualisere apoptotiske celler. På 1 eller 2 DIV, bare få dopaminerge nevroner (TH) er apoptotiske. Etter 3 DIV, dopaminerge nevroner begynner å gjennomgå apoptose. Paneler i midten og til høyre er høyere forstørrelser av eske området i venstre panel. Jo høyere forstørrelse Bildene er maksimal intensitet projeksjoner av z-stabler av 14-16 rammer. Bildene ble tatt hver 0,5 mikrometer med en Zeiss Apotome set-up.

Figur 5
Figur 5. Migratory rute YFP-merket nevroner i en akutt skive. (A) Horisontal skive brukes for tidsinnstilte avbildning av YFP-merket nevroner. Stykket ble inkubert i 5 timer før bildebehandling. Celler ble merket med en induserbar Cre / loxP system seks. Hysj CreER mus 8 og ROSA loxP-STOP-loxP-EYFP reporter mus 9 vire brukt. Rekombinasjon av ROSA reporter allel (og EYFP uttrykk) er indusert i celler som uttrykker CreER (Hysj-uttrykke celler), men bare ved administrering av Tamoxifen (Sigma). I dette eksempelet var Tamoxifen (3 mg/40 g kroppsvekt) gis til gravide mus ved E8.5. Dette eksperimentelle oppsett resultater primært i merking av forløpere for dopaminerge nevroner og deres etterkommere i ventrale midthjernen 10,11. Scale bar: 500 mikrometer. (B) Tracing den vandrende ruten for YFP-merket nevroner i en akutt skive. Time-lapse bilder av YFP-merket skjebne kartlagt nevronene ble kjøpt hvert 30 min for en total tid på 5 timer 30 min på en Zeiss Axio-Observer mikroskop (objektiv EF PlnN 10x / 0,3). Skiver ble inkubert i en miljømessig kammer (inkubator XLS1 Pecon) ved 37 ° C og leveres med 5% CO 2 i løpet av imaging. Utgangsposisjonen av cellene er markert med røde piler; migrasjon stillinger er markert med røde stjerner.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Den organotypic slice kulturen metoden presentert her gir et system for den kortsiktige in vitro analyse av utviklingen dopaminerge nevroner og deres vandrende og projeksjon ruter i den embryonale ventrale midthjernen. Vi fant at det finnes en rekke kritiske trinn i protokollen som bør nøye ivaretatt for å få skiver som tillater normal utvikling av ventral midthjernen dopaminerge nevroner. Den mest kritiske trinnet er disseksjon av embryonale hjernen, som må være både rask og presis. I motsetning til generasjonen av voksen hjerne skiver, er det avgjørende § hjernen på en vibratome utstyrt med et kjølesystem og å bruke en lav frekvens kombinert med høy hastighet for å få intakte skiver E12.5 hjerner. Til slutt, observerte vi at skivene må være seksjonert i horisontalplanet slik at i tillegg til de ventrale midthjernen de forebrain målområder av dopaminerge anslagene er med i stykket.Vi har også lagt merke til at forebrain må være intakt i disse skivene for at normal dopaminerge projeksjoner å utvikle. I koronale skiver, de forebrain målområder av dopaminerge nevroner er fraværende og nervecellene danner avvikende fremført til dorsal midthjernen.

Vi viser at skivene innhentet følgende protokoll vår kan opprettholdes in vitro for opp til 3 dager og at dopaminerge nevroner opprettholde sin normale posisjon og forebrain prognoser. Videre er proliferative kapasitet ventrikulære sone forløperne opprettholdes gjennom hele stykket. Men etter mer enn 3 dager i kultur, minsker levedyktighet skiver dramatisk. Følgelig kan slice kulturer hentet fra E12.5 hjerner brukes for å vurdere tidlig trinn i dopaminerge neuronal migrasjon og differensiering, men de kan ikke brukes for langsiktig eksperimenter. For å vurdere senere stadier av midthjernen utvikling, generering av skiver fra litt older embryo kan være et alternativ.

Vi viser videre at organotypic skive kulturer kan brukes for time-lapse avbildning av ventral midthjernen forløpere og deres etterkommere, som var merket in vivo ved hjelp av en genetisk skjebne kartlegging tilnærming. Siden merking metoden presentert her kun merker celle organer, har vi brukt skivene til å spore neuronal migrasjon. Imidlertid kan forskjellige reporter linjer som også etiketten aksonal projeksjoner være nyttig å overvåke aksonal utvekst av ventral midthjernen nerveceller in vitro 12.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Vi har ingenting å avsløre.

Acknowledgments

Vi takker Martine Emond og Isabel Brachmann for deres hjelp i å etablere organotypic skive kultur systemet og Wolfgang Hübner og Liviu Gabriel Bodea for kritisk lesing av manuskriptet. Vi ønsker å takke Frank Costantini for R26 reporter mus og Cliff Tabin for Hysj CreER mus. Denne studien ble finansiert av en forskningspris fra departementet for vitenskap og forskning i Nordrhein-Westfalen (Programm zur Förderung der Rückkehr des wissenschaftlichen Spitzennachwuchses aus dem Ausland).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Table of specific reagents and equipment
DMEM Sigma-Aldrich D6429
Glucose 30% Sigma-Aldrich G7528-250
Horse Serum Invitrogen 26050-088
DMEM (4,5g/L Glc., with L-Gln, Na Pyr, NaHCO3) Sigma-Aldrich D6429-500
Penicillin/Streptomycin 100x Sigma-Aldrich P4333-20
L-ascorbic acid Sigma-Aldrich A4403 prepare 200mM stock and store at -20°C
UltraPure LMP agarose Invitrogen 15517-022
Millicel inserts EMD Millipore PICMORG50
μ-dish 35 mm, low Ibidi 80136
Vibratome Microm International HM 650V
Razor Blade Plano GmbH 121-6
Histoacryl glue BRAU9381104 Braun Aesculap
Perforated Spoon Dia diameter 15 mm Fine Science Tools 10370 -18
Forceps 5 Dumoxel Fine Science Tools 11252 - 30
Antibodies used for immunostainings:
Rabbit anti-tyrosine hydroxylase EMD Millipore AB152 Dilution 1:500
Mouse anti-tyrosine hydroxylase EMD Millipore MAB318 Dilution 1:500
Mouse anti-BrdU BD Biosciences 555627 Dilution 1:200
Rabbit anti-cleaved caspase 3 Cell Signaling Technology 9661 Dilution 1:200
Donkey anti-rabbit IgG-Alexa 488 Invitrogen A21206 Dilution 1:500
Donkey anti-mouse IgG-Cy3 Jackson ImmunoResearch 715-165-150 Dilution 1:200

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Noctor, S. C., Martinez-Cerdeno, V., Ivic, L., Kriegstein, A. R. Cortical neurons arise in symmetric and asymmetric division zones and migrate through specific phases. Nat. Neurosci. 7 (2), 136-136 (2004).
  2. Martini, F. J. Biased selection of leading process branches mediates chemotaxis during tangential neuronal migration. Development. 136 (1), 41-41 (2009).
  3. Marin, O., Valiente, M., Ge, X., Tsai, L. H. Guiding neuronal cell migrations. Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2 (2), a001834-a001834 (2010).
  4. Ayala, R., Shu, T., Tsai, L. H. Trekking across the brain: the journey of neuronal migration. Cell. 128 (1), 29-29 (2007).
  5. Smidt, M. P., Burbach, J. P. How to make a mesodiencephalic dopaminergic neuron. Nat. Rev. Neurosci. 8 (1), 21-21 (2007).
  6. Legue, E., Joyner, A. L. Genetic fate mapping using site-specific recombinases. Methods. Enzymol. 477, 153-153 (2010).
  7. Daza, R. A., Englund, C., Hevner, R. F. Organotypic slice culture of embryonic brain tissue. CSH Protoc. , (2007).
  8. Harfe, B. D. Evidence for an expansion-based temporal Shh gradient in specifying vertebrate digit identities. Cell. 118 (4), 517-517 (2004).
  9. Srinivas, S. Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus. BMC Dev. Biol. 1, 4-4 (2001).
  10. Joksimovic, M. Spatiotemporally separable Shh domains in the midbrain define distinct dopaminergic progenitor pools. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106 (45), 19185-19185 (2009).
  11. Blaess, S. Temporal-spatial changes in Sonic Hedgehog expression and signaling reveal different potentials of ventral mesencephalic progenitors to populate distinct ventral midbrain nuclei. Neural. Dev. 6 (1), 29-29 (2011).
  12. Hippenmeyer, S. A developmental switch in the response of DRG neurons to ETS transcription factor signaling. PLoS Biol. 3 (5), e159-e159 (2005).

Tags

Nevrovitenskap utviklingsbiologi organotypic skive kultur midthjernen mus time-lapse imaging neuroner
Organotypic Slice kulturer av embryonale Ventral midthjernen: Et system for å Study dopaminerge neuronal Development<em> In vitro</em
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Bodea, G. O., Blaess, S. Organotypic More

Bodea, G. O., Blaess, S. Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro. J. Vis. Exp. (59), e3350, doi:10.3791/3350 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video
Waiting X
Simple Hit Counter