Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Bioengineering
Click here for the English version

Bioengineering

نظم الدورية الثقافة خلية خلية للثقافة الإنسان : خلايا الأرومة الغاذية الإنسان نموذجا

Published: January 18, 2012 doi: 10.3791/3367
Automatic Translation
*1, *1,2, 3, 1, 1
1Department of Microbiology and Immunology, Tulane University Medical School, 2Physician/Scientist Program, Tulane University Medical School, 3Department of Molecular and Cellular Biology, Baylor College of Medicine
* These authors contributed equally

Summary

التقليدية ، واثنين من خلية ثقافة تقنيات الأبعاد غالبا ما تؤدي إلى تغيير الخصائص فيما يتعلق علامات التمايز ، السيتوكينات وعوامل النمو. ثلاثي الأبعاد ثقافة خلية في نظام خلية ثقافة الدورية (المراكز المناخية الإقليمية) استعادت التعبير عن كثير من هذه العوامل كما هو موضح هنا مع خط الأرومة الغاذية extravillous الخلية.

Protocol

1. الكولاجين الخرزة التحضير

  1. قبل EVTs التحميل لمدة 3 - D خلية ثقافة ، ويحتاج المرء لتحضير حبات microcarrier Cytodex - 3 :
    1. تزن خارج القدر المناسب من Cytodex - 3 حبات المطلوبة لهذه التجربة. ويتم تكييف هذا البروتوكول للسفينة 10ML المراكز المناخية الإقليمية ، والتي هي بحاجة 0.05g من الخرز. لسفينة 50ml المراكز المناخية الإقليمية ، وفقا لمقياس. في أنبوب 50mL autoclavable المخروطية ، مزيج من 250 ملغ Cytodex - 3 حبات مع الفوسفات Dulbecco 12mL مخزنة الحل (DPBS). وهذا المبلغ غير كاف بالنسبة للسفن المراكز المناخية الإقليمية 5.
  2. ضمان وجود كمية كافية في أنبوب مخروطي الشكل ، وهذه العملية ستؤدي في الأوتوكلاف التبخر. قبعة فضفاضة الأنبوب والأوتوكلاف لمدة 10 دقيقة في 110 درجة مئوية.
  3. إزالة أنبوب مخروطي الشكل عند الانتهاء من دورة الأوتوكلاف والسماح للحل Cytodex - 3 حبة لتبرد.
  4. بعد أنبوب مخروطي الشكل ويتم تبريده الى درجة حرارة الغرفة ، واستخدام تقنية معقمة لتحقيق الحجم الكلي ل12.5mL 1X به موانئ دبيBS.
  5. قبعة وتخزين أعد Cytodex - 3 حبات في درجة حرارة الغرفة. السماح للالخرز على استعداد لتنتفخ وتبرد لدرجة حرارة الغرفة قبل استخدامها. سيتم إعداد أعلاه Cytodex - 3 حبات توفير خمس سفن 10ML المراكز المناخية الإقليمية. وقد لاحظنا أن التخزين الموسعة Cytodex - 3 حبات في درجة حرارة الغرفة سوف تؤدي إلى تراجع الأداء ، كما سيؤدي إلى زعزعة الاستقرار الكولاجين بعد شهر واحد تقريبا. Cytodex - 3 حبات يتراوح حجمها 133-215 ميكرون.

2. إعداد وسائل الاعلام

  1. تحضير 1L من المراكز المناخية الإقليمية الأمثل GTSF - 2 وسائل الاعلام (مقتبس من 22) ، الذي يتكون من 40 ٪ MEM ألفا ، بالإضافة إلى ملاحق و 60 ٪ L - 15 ليبوفيتز وسائل الاعلام (مقتبس من 22). أولا ، إعداد 400mL في إجمالي حجم ألفا MEM تستكمل مع :
    21.2mM بيكربونات الصوديوم
    0.06 ٪ ببتون
    0.7mM الفركتوز
    1.4mM الجالاكتوز
    5.6mM الجلوكوز
    1 ٪ HEPES
    1 ٪ L - الجلوتامين
    0.5 ٪ ITS
    10 ٪ FBS

  2. لإعداد محلول المخزون من ITS ، تذوب في 5mL العقيمة O 2 H يحمض أعدها إضافة حمض الخليك الجليدي (حوالي 0.05mL). دوامة حل ، اتبع مع الماء المعقم 45mL.
  3. تزن ما يكفي من L - 15 ليبوفيتش لمسحوق 600ml المتوسط ​​عن طريق إذابة الأنسجة في الثقافة O. الصف 2 H
  4. جلب المتوسطة الحجم الكلي للثقافة الخلية ل1L مع المتوسط ​​L - 15 ليبوفيتز. فلتر تعقيم وتخزين عند 4 في الظلام درجة مئوية. إضافة 1 ٪ البنسلين ، الستربتوميسين فردي لكل قسامة من الوسيلة المستخدمة.
  5. وقد تم العديد من وسائل الاعلام الصيغ الأخرى من وسائل الاعلام - 2 GTSF اختبرت بنجاح في المراكز المناخية الإقليمية. يجب المختبرات الفردية التي تقرر لنفسها المتوسط ​​هو الأمثل ليتم تنفيذ التجربة.

3. الخلايا والحضانة الخرزة

  1. نشر EVTs لconfluency 80 ٪ ~ ، ويعرض للتريبسين العد باستخدام الممارسات المقبولة ثقافة الخلية.
  2. تعليق 1x10 6 EVTs في 4mL الدافئةاد وسائل الإعلام.
  3. المزيج بلطف على استعداد Cytodex - 3 حبات. باستخدام تقنيات معقمة ، إزالة 2.5mL من الخرز إعدادها باستخدام تلميح واسعة ، 10ML ماصة المصلية ونقل إلى أنبوب مخروطي 15mL غير المستخدمة. علما أنه قد تكون هناك خسارة صغيرة من الخرز والتي يعلقونها على ماصة.
  4. السماح لل- 3 حبات Cytodex لتسوية في الجزء السفلي من الأنبوب. بعد الترسيب ، واستخدام pipettor لإزالة الطبقة العليا من دون إزعاج DPBS حبات Cytodex - 3.
  5. مزيج 1x10 6 EVTs أعدت في وسائل الإعلام مع حبات Cytodex - 3 المعدة.
  6. احتضان الخليط خلية حبة في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. المزيج بلطف دوريا. احتضان لمزيد من 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية و 5 ٪ CO 2. المزيج بلطف دوريا.

4. تحميل RWV

  1. في مجلس الوزراء تدفق الصفحي ، إزالة المراكز المناخية الإقليمية 10ML من التعبئة والتغليف ووضعه في العقيمة ، لوحة الثقافة 6 - جيدا لتحقيق الاستقرار. الرجوع إلى الشكل (1) رسم تخطيطي لتسمية المنسق المقيمCS.
  2. إزالة سدادة كبيرة من الميناء.
  3. جعل إجمالي حجم الخليط خلية حبة لاحتضان 10ML تحسنت مع وسائل الاعلام.
  4. تحميل خلية / حبة الخليط في المراكز المناخية الإقليمية ، من خلال ميناء كبير. وينبغي إمالة المراكز المناخية الإقليمية في زاوية 45 درجة (كبير يصل الميناء) عند تحميل للمساعدة في إزالة فقاعات الهواء المحتملة. منع تراكم الضغط الايجابي عن طريق ملء السفن ببطء ولكن بثبات.
  5. استبدال سدادة في ميناء كبير.
  6. إزالة بيستونز من 3 مل الحقن والمحاقن مكان فارغ على المنافذ الصغيرة. إضافة 1 - 3mL من وسائل الإعلام إلى كل حقنة. فتح ببطء الصمامات اثنين. استبدال المحاقن بيستونز على المحاقن بلطف. إضافة وسائط من الحقنة حتى تتم إزالة كافة الفقاعات من داخل الغرفة.
  7. التقط المراكز المناخية الإقليمية والاستفادة من الجانب بلطف حين تناوب في أمامك للتحقق من الفقاعات. إذا كان هناك أي فقاعات ، ويجب اخراجهم من الغرفة ، وفقاعات الهواء سوف تتداخل مع تشكيل سالمجاميع و الخلايا وإدخال قوى القص. إزالة الفقاعات من خلال تناوب المراكز المناخية الإقليمية حتى فقاعات تحت ميناء صغير. ثم ادفع برفق لأسفل على حقنة في الجانب المقابل لإجبار فقاعات في الميناء والخروج من القاعة.
  8. إغلاق ميناء واحد من الجانبين. ادفع برفق لأسفل على مكبس الحقنة أخرى لإدخال كمية صغيرة من الضغط الإيجابي في السفينة ، والذي يمنع من تشكيل فقاعات. إغلاق صمام الثانية.
  9. تحميل المراكز المناخية الإقليمية على الدوار. بدء الدوران في 19rpm في 37 درجة مئوية حاضنة 2 CO.

5. تغيير وسائل الإعلام

  1. تغيير وسائل الاعلام كل يوم على مدى الأيام الثلاثة الأولى ، ثم بعد ذلك كل يوم.
  2. إيقاف الدوار وإزالة المراكز المناخية الإقليمية. سحب المكابس لخلق بعض الشفط ، إزالة المحاقن من كل ميناء صغير ووضع المراكز المناخية الإقليمية على زاوية بحيث الخرز تسوية المقابل من ميناء كبير.
  3. بعد الخرز وقد استقر كل شيء ، فتح أحد الصمامات الصغيرة والسماح لوسائل الإعلام في التدفق من المراكز المناخية الإقليمية وداخل حاوية النفايات. إزالة 2 / 3 من وسائل الإعلام بهذه الطريقة. يجب التأكد من عدم إزعاج الخرز وعدم تجاهل أي المجاميع.
  4. إغلاق صمام الصغيرة وفتح ميناء كبير. إضافة وسائل الإعلام مرة أخرى إلى المراكز المناخية الإقليمية من خلال ميناء كبير. استبدال سدادة في ميناء كبير.
  5. كرر الخطوات من 4،6-4،9.
  6. كما المجاميع الزيادة في الحجم ، وتحتاج إلى زيادة سرعة دوران للاحتفاظ بها في تعليق العمل في جميع الأوقات ، من الناحية المثالية في نمط الدورة الدموية الصغيرة في السرعة المثلى. عموما ، وزيادة السرعة بين 0،3-0،7 بعد كل دورة في الدقيقة التغذية مرة واحدة في المجاميع تبدأ في النمو بشكل ملحوظ.

6. نشر جمع خلايا

  1. إزالة المراكز المناخية الإقليمية من الدوار. إزالة المحاقن من كل ميناء صغير ووضع المراكز المناخية الإقليمية على زاوية بحيث يمكن تسوية الخرز العكس من ميناء كبير.
  2. بعد الخرز وقد استقر كل شيء ، فتح أحد الصمامات الصغيرة والسماح لوسائل الإعلام لتتدفقمن المراكز المناخية الإقليمية وداخل حاوية النفايات. إزالة 1 / 3 من وسائل الإعلام بهذه الطريقة.
  3. إغلاق صمام الصغيرة وفتح ميناء كبير. بلطف دوامة السفينة لتفريق التجمعات مرة أخرى إلى الحل. الخليط السائل في أنبوب فارغ 50ml العقيمة المخروطية. السماح للمجاميع التي جمعت لتستقر في أنبوب مخروطي طاف به قبل أن يغسل جيدا وعاء الثقافة لتحقيق أقصى قدر من الانتعاش من الركام. ويمكن استخدام المجاميع عن المقايسات المصب على الفور ، مثل التدفق الخلوي ، المقايسات الغزو المناعي وغيرها.

7. ممثل النتائج

ويظهر مثال EVT تشبه الخلايا (خلية SGHPL - 4 الأرومة الغاذية خط) التي تزرع في المراكز المناخية الإقليمية على Cytodex - 3 حبات في الشكل 2. خط خلية EVT مثل يعرض توقعات بتمديد بعيدا عن الكتلة الرئيسية ، وربط على كتل المجاورة. مغطاة بالكامل العديد من الخرز مع خلايا التكاثر. إزالة مرة واحدة من المراكز المناخية الإقليمية وجيش التحرير الشعبى الصينىتيد على المصفوفة خارج الخلية ، وEVT مثل 3 - D غزو الخلايا المزروعة بقوة و / أو ترحيل (الشكل 3). RT - PCR البيانات تؤكد على التعبير زيادة MMPs ينظر في المجاميع 3 - D بدلا من الثقافة التقليدية monolayers الخلية (الشكل 4). ومن المثير للاهتمام ، هي أيضا upregulated الجينات لا ترتبط مع الغزو في المراكز المناخية الإقليمية (الجدول 1) و قد تساعد في تحديد مجالات مثل تفاعلات المناعية مع trophoblasts غزو الخلايا.

الشكل 1
الشكل 1. تصوير أفلام كارتون لنظام خلية الثقافة الدوارة (المراكز المناخية الإقليمية).

الشكل 2
الشكل 2. المرحلة مجهرية على النقيض من إجمالي النمو ممثل بعد 5 أيام في المراكز المناخية الإقليمية. تشير الأسهم إلى غزو الخلايا و* يدل على حبات microcarrier Cytodex - 3.

كانت جزءا لا يتجزأ من الرقم 3. المجاميع المراكز المناخية الإقليمية يزرع في المواد الهلامية الليفين. ولوحظ من خلال غزو الجل الليفين في أقرب وقت (أ) تضمين بعد الليفين 24 ساعة و (ب) واصلت خلال 48 ساعة. تشير الأسهم الخلايا الغازية ويدل على Cytodex * 3 حبات microcarrier (بتصرف ، بإذن من المرجع 7).

الشكل 4
نشر الرقم 4. zymogram الجيلاتين المقارن المونولاير والمراكز المناخية الإقليمية SGHPL - 4 - EVT مثل الخلايا. ويفرز أشكالا المؤيدة ونشطة من MMP - 2 و MMP - 9 من الأرومة الغاذية المراكز المناخية الإقليمية الخلايا المزروعة (بتصرف ، بإذن من المرجع 7).

الجدول 1
الجدول 1. ملخص النتائج ميكروأري من خلايا - 4 SGHPL نمت في المراكز المناخية الإقليمية (بتصرف ، بإذن من المرجع 7).

  1. يشير الجينات التي كانت أقل من الحد من الكشف في monolayers.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

ثقافة تقنية المعروضة هنا يقدم المحققون مع الخلايا EVT مثل الغازية للغاية. وقد تم الآن من المسلم به أن فقدان التمايز يحدث في monolayers بسبب تثبيط الاستجابات الخلوية لمنبهات الكيميائية والجزيئية في ثلاثة أبعاد (سطوح الخلايا القمي ، القاعدية ، والجانبية) 10،13. هذا الأسلوب يعكس خصائص سجلته في الرحم على غزو الخلايا EVT. كما الإجراء يحاكي الثقافة التقليدية حركية الأنسجة الوقت أحادي الطبقة ، ولكنها توفر الخلايا مع الفرق التعبير ، قد تكون استخدمت المقايسات نسبية. قد يكون حصادها مجموعات الخلايا لاستخدامها في التجارب في أي وقت. يمكن أن تستخدم على أنها يمكن أن تستخدم مجموعات أو تدهور الكولاجين لعزل الخلايا كما تعليق خلية واحدة. ويمكن الاستعاضة عن حبات Cytodex - 3 microcarrier مع السقالات او الخرز microcarrier المغلفة مع مصفوفات خارج الخلية الأخرى (موبينيل) التي قد تكون أكثر ملاءمة للمصالح الفردية مختبرات محددة. Alternatively ، وهناك العديد من منصات الثقافة 3 - D التي قد تكون أكثر ملاءمة لظروف معينة الخلية نوع الثقافة ، مثل إدراج خلية ثقافة والدوار قوارير 10،23. وتجدر الإشارة إلى أن حركية الثقافة يمكن أن تكون مختلفة في ظل هذه الظروف ، وينبغي أن تنشأ بشكل فردي. قد تكون حركية الثقافة اختبار بسهولة عن طريق إزالة عينات من المراكز المناخية الإقليمية على فترات منتظمة وتحليل للتعبير عن علامات مميزة التمايز ، والانتشار ، وبقاء 15. قد الانتشار الأمثل وحركية تمايز يمكن التأكد من خلال مقارنة النتائج على مر الزمن والتقنيات التقليدية ضد المونولاير زراعة الأنسجة. باستخدام الخلايا SGHPL - 4 كمثال ، أزيلت المجاميع اليومية وملطخة Ki67 (لتحديد الانتشار) وcaspase 3 (لتحديد الخلايا) ، وعلامات محددة لمصالح فردية مختبرات "قد يتم تبادلها بسهولة. ويمكن تطبيق هذه التقنية الموصوفة هنا لدراسة الشرايين الحلزونيةإعادة عرض ، وغرس الضحلة ، والاستجابات المناعية للخلايا الأم trophoblasts الغازية.

كما نشرت سابقا ، ويمكن أيضا هذه الثقافة الخلية 3 - D يمكن استخدام نموذج لمجموعة متنوعة من خطوط الخلايا الأخرى 17،14-21. في كل حال ، فإن فائدة نموذج لابد من اختباره من قبل مجموعة متنوعة من علامات التمايز معروفة. مثل أي خلية في المختبر نموذج الثقافة ، 3 - D الخلية الثقافات reductionistic بطبيعتها. لا يوجد نموذج وثقافة واحدة تقدم كافة التفاصيل الميكانيكية ، ولكن عندما يقترن النتائج المنشورة من الموديلات الأخرى ، 3 - D الثقافات تصبح نموذجا بديلا إضافية قيمة لتحسين فهمنا لمرض الآليات ذات الصلة ، والتي قد تنطوي على إمكانات هائلة للتنمية من المنتجات الجديدة والإجراءات المتبعة في التشخيص والوقاية والعلاج من الأمراض المعدية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ليس لدينا شيء في الكشف عنها.

Acknowledgments

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية الأميركية للصحة منح HD051998 # المعاهد الوطنية للصحة / معاهد الصحة القومية (لCAM).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Cytodex microcarrier beads Sigma-Aldrich C3275
Rotating Cell Culture System (RCCS) Synthecon RCCS-D Includes rotor base, power supply, 4 disposable RCCS units
RCCS Disposable Units Synthecon Contact Synthecon
3ml Luer-Lock tip syringe BD Biosciences 309585
10ml wide-tip serological pipette BD Biosciences 357504
MEM Alpha Invitrogen 12561-072
Leibovitz’s L-15 medium, powder Invitrogen 41300-039
H2O, Endotoxin free Fisher Scientific MT-25-055-CM
Sodium Bicarbonate Sigma-Aldrich S-7795
Peptone Fisher Scientific BP1420-100
Fructose Sigma-Aldrich F3510-100
Galactose Sigma-Aldrich G5388-100
Glucose Sigma-Aldrich G7528-250
HEPES Invitrogen 15630-080
L-Glutamine Invitrogen 25030
Insulin-Transferrin-Sodium Selenite (ITS) Sigma-Aldrich I1884
FBS Invitrogen 10437
Penicillin-Streptomycin Invitrogen 15140

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Knofler, M. Critical growth factors and signalling pathways controlling human trophoblast invasion. Int. J. Dev. Biol. 54, 269-269 (2010).
  2. Cartwright, J. E. Remodelling at the maternal-fetal interface: relevance to human pregnancy disorders. Reproduction. 140, 803-803 (2010).
  3. Harris, L. K. IFPA Gabor Than Award lecture: Transformation of the spiral arteries in human pregnancy: key events in the remodelling timeline. Placenta. 32, Suppl 2. S154-S154 (2011).
  4. Whitley, G. S., Cartwright, J. E. Trophoblast-mediated spiral artery remodelling: a role for apoptosis. J. Anat. 215, 21-21 (2009).
  5. Apps, R. Genome-wide expression profile of first trimester villous and extravillous human trophoblast cells. Placenta. 32, 33-33 (2011).
  6. Bilban, M. Trophoblast invasion: assessment of cellular models using gene expression signatures. Placenta. 31, 989-989 (2010).
  7. LaMarca, H. L. Three-dimensional growth of extravillous cytotrophoblasts promotes differentiation and invasion. Placenta. 26, 709-709 (2005).
  8. Jovanovic, M., Stefanoska, I., Radojcic, L., Vicovac, L. Interleukin-8 (CXCL8) stimulates trophoblast cell migration and invasion by increasing levels of matrix metalloproteinase (MMP)2 and MMP9 and integrins alpha5 and beta1. Reproduction. 139, 789-789 (2010).
  9. Husslein, H. Expression, regulation and functional characterization of matrix metalloproteinase-3 of human trophoblast. Placenta. 30, 284-284 (2009).
  10. Barrila, J. Organotypic 3D cell culture models: using the rotating wall vessel to study host-pathogen interactions. Nat. Rev. Microbiol. 8, 791-791 (2010).
  11. Hammond, T. G., Hammond, J. M. Optimized suspension culture: the rotating-wall vessel. Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 281, 12-12 (2001).
  12. Unsworth, B. R., Lelkes, P. I. Growing tissues in microgravity. Nat. Med. 4, 901-901 (1998).
  13. Schmeichel, K. L., Bissell, M. J. Modeling tissue-specific signaling and organ function in three dimensions. J. Cell. Sci. 116, 2377-2377 (2003).
  14. Bentrup, H. önerzu, K, Three-dimensional organotypic models of human colonic epithelium to study the early stages of enteric salmonellosis. Microbes. Infect. 8, 1813-1813 (2006).
  15. Carterson, A. J. A549 lung epithelial cells grown as three-dimensional aggregates: alternative tissue culture model for Pseudomonas aeruginosa pathogenesis. Infect. Immun. 73, 1129-1129 (2005).
  16. Myers, T. A. Closing the phenotypic gap between transformed neuronal cell lines in culture and untransformed neurons. J. Neurosci. Methods. 174, 31-31 (2008).
  17. Hjelm, B. E. Development and characterization of a three-dimensional organotypic human vaginal epithelial cell model. Biol. Reprod. 82, 617-617 (2010).
  18. Straub, T. M. In vitro cell culture infectivity assay for human noroviruses. Emerg. Infect. Dis. 13, 396-396 (2007).
  19. Nickerson, C. A. Three-dimensional tissue assemblies: novel models for the study of Salmonella enterica serovar Typhimurium pathogenesis. Infect. Immun. 69, 7106-7106 (2001).
  20. Carvalho, H. M., Teel, L. D., Goping, G., O'Brien, A. D. A three-dimensional tissue culture model for the study of attach and efface lesion formation by enteropathogenic and enterohaemorrhagic Escherichia coli. Cell. Microbiol. 7, 1771-1771 (2005).
  21. Sainz, B., TenCate, V., Uprichard, S. L. Three-dimensional Huh7 cell culture system for the study of Hepatitis C virus infection. Virol. J. 6, 103-103 (2009).
  22. Lelkes, P. I., Ramos, E., Nikolaychik, V. V., Wankowski, D. M., Unsworth, B. R., Goodwin, T. J. GTSF-2: a new, versatile cell culture medium for diverse normal and transformed mammalian cells. In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim. 33, 344-344 (1997).
  23. Lelkes, P. I., Ramos, E., Nikolaychik, V. V., Wankowski, D. M., Unsworth, B. R., Goodwin, T. J. GTSF-2: a new, versatile cell culture medium for diverse normal and transformed mammalian cells. In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim. 33, 344-344 (1997).
  24. GE Healthcare. Microcarrier Cell Culture - Principles and Methods. Handbooks. , Available from: http://www.gelifesciences.com/aptrix/upp01077.nsf/Content/service_and_support~documents_and_downloads~handbooks (2005).

Tags

الهندسة الحيوية ، العدد 59 ، trophoblasts Extravillous ، الأرومة الغاذية الخلوية ، والغزو ، مصفوفة الفلزي ، 3 D - خلية الثقافة والمراكز المناخية الإقليمية ، ECM ، microcarriers
نظم الدورية الثقافة خلية خلية للثقافة الإنسان : خلايا الأرومة الغاذية الإنسان نموذجا
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Zwezdaryk, K. J., Warner, J. A.,… More

Zwezdaryk, K. J., Warner, J. A., Machado, H. L., Morris, C. A., Höner zu Bentrup, K. Rotating Cell Culture Systems for Human Cell Culture: Human Trophoblast Cells as a Model. J. Vis. Exp. (59), e3367, doi:10.3791/3367 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter