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Immunology and Infection

La leishmaniose cutanée dans la peau dorsale de Hamsters: un modèle utile pour le dépistage des drogues antileishmanienne

doi: 10.3791/3533 Published: April 21, 2012

Summary

Optimisation du modèle hamster expérimental pour la leishmaniose cutanée par injection intradermique de

Abstract

Traditionnellement, les hamsters sont expérimentalement inoculés dans le museau ou la patte. Toutefois, dans ces sites un ulcère n'est pas toujours lieu, la mesure de la taille des lésions est une procédure difficile et les animaux montrent des difficultés à manger, respirer et bouger à cause de la lésion. Afin d'optimiser le modèle du hamster pour la leishmaniose cutanée, jeune mâle adulte et femelle hamsters dorés (Mesocricetus auratus) ont été injectés par voie intradermique à la peau du dos avec 1 à 1,5 x l0 7 promastigotes de Leishmania et la progression des lésions subséquentes ont été évaluées pour un maximum de 16 semaines après l'infection. Le hamster doré a été choisi parce qu'il est considéré comme le modèle bio-suffisante pour évaluer les médicaments contre la Leishmania car ils sont sensibles à l'infection par différentes espèces. Infection cutanée des résultats hamsters dans les lésions chroniques, mais contrôlée, et une évolution clinique avec des signes semblables à ceux observés chez l'homme. Par conséquent, la mise en place of la mesure de l'infection par mesure de la taille de la lésion selon l'une matière de indurations et les ulcères est réalisable. Cette approche a prouvé sa polyvalence et une gestion facile lors de l'inoculation, le suivi et la caractérisation des lésions typiques (ulcères), l'application de traitements par le biais de différentes manières et l'obtention d'échantillons cliniques après différents traitements. En utilisant cette méthode, la qualité de la vie animale en ce qui concerne la locomotion, la recherche de nourriture et d'eau, des activités ludiques et sociaux est également préservé.

Protocol

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1. L'infection des hamsters

1. Animaux

Consanguines féminins et masculins hamsters dorés (Mesocricetus auratus), 6-8 semaines, pesant 140-160 g sont utilisés. Ils sont logés à l'animalerie, sous température contrôlée d'hébergement, des rongeurs nourris avec des aliments secs et la norme prévue à l'eau ad libitum. Toutes les procédures impliquant des animaux sont approuvés par le Comité institutionnel d'éthique pour l'utilisation des animaux d'expérimentation. Avant l'infection expérimentale avec des parasites Leishmania dermotropes animaux sont sexés, marqués et pondérés selon des procédures standardisées. Pour le sexage, les animaux sont inspectés pour traits distinctifs tels que la visualisation de la ligne mammaire et le court distance ano-génitale chez les femmes, ou la visualisation des testicules et une plus grande distance entre l'anus et le prépuce chez les hommes. Ensuite, les animaux sont marqués par le perçage des oreilles ou par une zone de coloration de la peau avec un tampon imbibédans de l'acide picrique. Pour la perforation oreille, après le nettoyage avec de l'alcool à 70% de l'oreille est percée à l'aide d'un poinçon d'oreille pour les rongeurs. Une région avec des vaisseaux sanguins doivent être évités. Une sédation ou une anesthésie avec un mélange de kétamine 09h01 (50 mg / kg) et Xilacine (20 mg / kg) par voie intrapéritonéale dans un volume de 260-25-300μl G aiguille est recommandée. Enfin, les animaux sont pesés en les plaçant dans un piège ou une boîte qui est conditionnée par une balance de précision.

2. Parasites

Promastigotes de Leishmania dermotropes, tels que L. amazonensis, sont cultivées dans biphasique Novy-MacNeal-Nicolle milieu de culture (NNN) à 26 ° C. Promastigotes métacycliques de phase (fixe) (5 jours) sont utilisés pour infecter les hamsters. En bref, les parasites sont récoltées, lavées deux fois en utilisant un tampon phosphate salin (PBS), comptés et ajusté à 1 x 10 7 (pour les hommes) ou 1,5 x 10 7 (pour les femmes) parasites dans 0,1 ml de PBS pour inoculer mâle ou femelle, respectivementCependant, la taille des inoculums peuvent varier selon l'espèce de Leishmania (procédure qui n'est pas montré dans la vidéo).

3. L'infection expérimentale

Une zone de peau est rasée avant l'inoculation. En bref, les animaux anesthésiés sont placés en position couchée et l'aide de ciseaux, le poil est enlevé deux pouces de la base de la queue. Après le nettoyage de la zone rasée avec une solution saline stérile de l'inoculum parasite est injecté par voie intradermique jusqu'à une papule est formé.

4. Suivi clinique

Les animaux sont surveillés tous les 7 jours à 4 - 6 semaines après l'inoculation pour la comparution de la lésion. Peu de temps, les animaux sont immobilisés dans un piège et la surface de la peau inoculée est palpé. Puis, la zone de durcissement de l'ulcère formé est délimitée et la largeur et la longueur de l'ulcère sont mesurées avec un compas numérique.

2. Traitement des Hamsters

1. Admitration des composés

Le programme de traitement commence lorsque les animaux ont développé des lésions ulcérées (4-6 semaines après l'inoculation). Animaux sont réparties en groupes de 5-6 animaux pour chaque composé à tester. Composés peuvent être administrés par voie topique, orale, intramusculaire ou intralésionnelle. Avant l'application de médicaments, les hamsters sont anesthésiés et la surface de la lésion est nettoyée à l'aide de solution saline ou PBS. Lorsque le composé est appliqué par voie topique ou intralésionnelle, les hamsters sont immobilisés dans des pièges qui permettent d'exposer la zone à traiter tout, lorsque le composé est administré par voie orale ou par voie intramusculaire les hamsters sont solidement fixés par la base du cou. a) l'application topique: le composé est appliqué sur la lésion et, après quelques minutes l'animal est ramené à la cage. b) Pour l'injection intramusculaire, le médicament est injecté (maximum de 200 pi) à travers les muscles semi-membraneux semitendinous ou des membres postérieurs. c) Pour orale admitration, le médicament est fourni à l'animal (200 maximale pi) à travers un 14G sonde oro-gastriques connectés à une seringue de 1 ml. d) pour l'injection intralésionnelle le médicament (100 maximale pi) est progressivement injecté à la base de l'ulcère en utilisant une aiguille de calibre 26G avec le biseau placé vers le bas. Toute la zone de la lésion est recouverte par la rotation de l'aiguille. Les traitements sont administrés quotidiennement pendant 10-20 jours, selon le schéma défini thérapeutique.

2. Suivi clinique

Parce que dans ce modèle expérimental de l'efficacité de nouveaux composés antileishmanienne est déterminé en fonction de la guérison et la cicatrisation des lésions après traitement, une surveillance clinique de chaque animal est effectué chaque semaine à la fin de l'application du composé et jusqu'à trois mois après. Au cours de la surveillance, du type de lésion est décrite et l'induration et surface de l'ulcère sont mesurées avec un pied à coulisse numérique. La présence de lésions dans les différentes régions à til site d'inoculation ainsi que l'apparition de récidives de la lésion est également décrite et enregistrée. Toutes les deux semaines, les animaux sont pesés et les lésions sont représentés. Les animaux sont observés quotidiennement afin de suivre: une apparence) physique (cheveux, la coordination, la température, les yeux, la position des oreilles, toilettage, la défécation, la présence du liquide d'ascite, de l'agitation et la déshydratation) et b) le comportement (éveillé, alerte, curieux, attentifs , reste avec le groupe, se réjouit de la nourriture et la boisson, et difficile à attraper). Le site d'application du composé est également observé la présence de l'hyperémie, l'inflammation, et le retrait mordant et les cheveux.

Les hamsters sont aussi saigné à 45 jours après la fin du traitement afin de déterminer les valeurs hématologiques et sérologiques qui pourraient être associés à la toxicité des composés (voir ci-dessous).

L'efficacité de chaque traitement est évaluée en comparant les tailles des lésions avant et après les traitements, en utilisant le suivi de partition système: guéri (la guérison de la zone de 100% et la disparition complète de la lésion); amélioration clinique (réduction de la taille de la lésion chez> 50% de la superficie); échec clinique (augmentation de la taille de la lésion); rechute sur de lésion après la guérison). A la fin de l'étude, les animaux sont sacrifiés par inhalation de l'anesthésie précédente CO2. Après la mort, les échantillons requis pour l'analyse parasitologique, histologique et sérologique sont prises.

3. Examens parasitologiques

La présence de Leishmania dans les échantillons provenant de la peau (lésion ou cicatrice), le foie, la rate et les reins est déterminée directement par l'examen de frottis colorés au Giemsa 1 et l'examen histopathologique de ces tissus (voir ci-dessous).

La charge parasitaire dans le site de la lésion est estimée par la méthode de dilution limite en fonction de Titus et ses collègues (1985) 2. En bref, un petit morceau du tissu est remOved de chaque animal, pesés et homogénéisés dans une solution de PBS froid en utilisant un piston de la seringue. La suspension obtenue est centrifugée à 600g pendant 10 min à 4 ° C. Par la suite, les surnageants sont éliminés et les culots sont remis en suspension dans du milieu RPMI 1640 supplémenté avec des antibiotiques 1% et 10% de sérum de veau foetal. Un l cents la suspension sont transférés à chacun des 96 puits à la plaque de microtitrage contenant superposée milieu NNN avec 50 pl moyen de Schneider et maintenu à 26 ° C. Le nombre de parasites viables dans chaque échantillon est déterminée à partir de la plus haute dilution à laquelle promastigotes a pu être détectée par un examen sous un microscope inversé à chaque semaine pendant un mois.

4. L'examen histopathologique de la lésion de la peau (ou de la cicatrice) et d'autres tissus

Une troisième pièce de la biopsie prise à partir de la peau, du foie et des reins est fixé à 10% de formol et incluses dans la paraffine. Spécimen de la rate et le cœur pourrait aussi être processed. Cinq sections micron des tissus fixes ont été colorées avec haemotoxilin-éosine et examinés sous un microscope optique à l'aide 200X, 400X ou 1000X immersion dans l'huile d'étudier l'architecture micro, les caractéristiques de l'infiltrat cellulaire, et la présence ou l'absence de parasites. Photomicrographies sont prises et des images numériques capturées.

5. Évaluation de la toxicité du traitement

L'activité toxique du composé est basé sur la condition physique et le comportement des animaux selon les paramètres surveillés au cours de la clinique de suivi (voir ci-dessus). La toxicité est également déterminée en fonction de paramètres hématologiques et métaboliques des échantillons de sang et des changements histopathologiques observés dans les coupes de tissus colorés avec haemotoxilin-éosine comme décrit ci-dessus.

Des échantillons de sang sont prises à partir du cœur, de préférence le ventricule. Pour de test hématologique, le sang est transféré dans des tubes EDTA anticoagulés et traitées conformémentding de normaliser les protocoles pour la numération formule sanguine complète. Pour les tests sérologiques, le sang est transféré à 1,5 flacons Eppendorf et centrifugé pour obtenir le sérum pour l'analyse métabolique des niveaux de créatinine, d'ALT et BUN mesurée à l'aide Kodak Ektachemdry chimie 3.

6. L'analyse des données

Les données provenant d'animaux traités et non traités sont comparés à l'aide du test ANOVA. La signification est fixé à p <0,05.

3. Les résultats représentatifs

Résumé

Le modèle du hamster de la leishmaniose cutanée a été amélioré avec l'objectif d'utiliser ce modèle dans le dépistage efficacité du médicament. Le développement des lésions et des paramètres parasitologiques ont été étudiés lors de l'infection primaire dans la peau cutanée de hamsters. Consanguines féminins et masculins hamsters dorés (Mesocricetus auratus), 6-8 semaines, ont été injectés par voie intradermique avec 1 x 10 7 (pour les hommes) ou 1,5 x 10 7 (pour les femmes) métacycliques (phase stationnaire) promastigotes de L. amazonensis. Nodules est apparu 20 - 35 jours pi, avec des ulcères qui se forment après 4-6 semaines pi Après l'infection a été établi, l'efficacité de l'antimoine pentavalent (SBV) à deux doses a été évaluée. Les hamsters ont été randomisés en trois groupes de 5 animaux chacun et traitées avec antimoniate de méglumine à 80 ou 120 mg SbV / kg par jour pendant 10 jours par voie intramusculaire. Le troisième groupe a été traité par voie intramusculaire avec du PBS à celle du placebo. Un groupe de trois animaux n'ont pas été traités et utilisés comme contrôle négatif. La réponse à chaque traitement a été suivi 3 mois après la fin de la période de traitement.

1. L'évolution clinique après L. l'infection amazonensis du hamster doré (Mesocricetus auratus)

Les hamsters infectés dans la peau du dos constamment développer une ulcération cliniquement évidente de l'épiderme à 4-6 semaines après l'infection. Les lésions commencent par de petits nodules et les ulcères se terminantcette augmentation de la taille en fonction du temps post-infection et d'atteindre ce qui était considéré une taille optimale pour l'évaluation de l'effet de médicaments expérimentaux par le quatrième sixième semaine post-infection (18,99 à 54,7 mm 2 à 4 semaines et 35,55 à 92,71 mm 2 à 6 semaines) (figures 1, 2). Les lésions par la suite maintenu un ulcère évident pour un maximum de 20 semaines post-infection, au moment où les expériences ont été résiliés (Figure 1).

L'infection par L. amazonensis n'affecte pas le poids du corps des hamsters qui a varié de 104,9 à 124,69 gr et 129,71 à 134,02 gr chez les hamsters sains et infectés, respectivement (p> 0,05, Anova). Les animaux ont gagné une moyenne de 25,58 ± 5,98% du poids corporel pendant l'étude. Les valeurs sériques de la créatinine et de l'alanine amino-transférase paramètres (ALT) et hémogramme étaient similaires aux valeurs de référence dans sains et Leishmania hamsters infectés. Only l'urée pain d'azote (BUN) niveau a été augmenté dans 60% des animaux infectés.

L'analyse histopathologique des lésions chez les hamsters infectés avec L. amazonensis ont montré des différences liées à ces animaux non infectés. En général, les biopsies cutanées de hamsters sains ne montrent pas de réaction inflammatoire ou de toute altération histologique (figure 3a), tandis que ceux qui sont infectés avec L. amazonensis développer une dermatite granulomateuse et la présence abondante de macrophages infiltrant le derme (figure 3b). L'analyse histopathologique des tissus provenant de hamsters infectés par L. amazonensis et traitée avec antimoniate de méglumine à des doses de 80 et 120 mg SbV / kg / jour pendant 10 jours ont montré des changements associés au processus de l'infection similaires à ceux observés dans le groupe témoin (non traitée infectée et). En général, des échantillons de peau de hamsters ont montré un niveau faible des plasmocytes (20%) et PMN (80%) des cellules accompagné modéréeinfiltration de lymphocytes (80%), et une légère (20%) ou sévère (80%) d'infiltration des macrophages (tableau 2). Ces observations correspondent à un diagnostic de la dermatite granulomateuse, un événement inflammatoire qui compromet le derme et le muscle sous-jacent. Il s'agit de la lésion principale associée à l'infection, qui est compatible avec la manifestation de la leishmaniose cutanée sévère chez tous les animaux dans l'étude. Cette association a été statistiquement corrélé lorsque le. Chi-carré de Pearson, qui a abouti à p <0,05 Échantillons de rein de 60-100% des animaux ont montré une hyperplasie modérée dans le cortex rénal et glomérules accompagnés par une légère atrophie des reins dans 75% des animaux. Ces observations sont compatibles avec la membrane glomerulonefritis proliférative, un diagnostic qui a été précédemment associé à l'infection par l'infection par d'autres espèces de Leishmania. Association statistique était grande avec un chi-carré de Pearson p <0,05. Les foies de 40-100% d'unimals dans tous les groupes ont montré de légères modifications vacuolaires dans les hépatocytes, qui peuvent être associés à des processus physiologiques tels que l'accumulation de glycogène hépatocytaire. D'autres anomalies des tissus du foie telles que la dégénérescence graisseuse, la fibrose, et la congestion correspondent au processus de l'infection. D'autres observations telles que les changements vacuolaires dans les hépatocytes, les cardiomegalies, la présence d'inclusions éosinophiles intracytoplasmiques de, ainsi que la vacuolisation de cellules dans les tubes rénaux ne sont pas statistiquement associée (p> 0,05) à un effet toxique du composé testé et sont susceptibles en raison d'un processus physiologique chez les hamsters.

2. L'efficacité thérapeutique de l'antimoniate de méglumine dans le modèle du hamster

Le phénotype clinique de hamsters infectés à différents moments après le traitement est résumée dans le tableau 1. Le traitement avec l'antimoniate de méglumine par voie intramusculaire à une dose de 120 mg SbV / kg / jour pendant 10 jours était de poidsrégression induisant très efficace complète de la L. lésions amazonensis chez tous les animaux (Figure 4). Le pourcentage de guérison était de 100% dans le 2 et 8 semaines après la période de traitement. Cependant, après trois mois de la rechute de la lésion a été observée dans 20% des hamsters. Lorsque l'antimoniate de méglumine a été administré à 80 mg de poids corporel SbV / kg, la guérison complète a été observée seulement dans 3 animaux. Dans les deux autres animaux de la lésion a diminué de 33,9 et de 69,0%, respectivement (figure 5). Après trois mois, L. amazonensis resté présent dans la peau de tous les animaux traités avec l'antimoniate de méglumine à la dose de 80 mg SbV / kg / jour et un seul des animaux traités avec 120 mg SbV / kg / jour d'antimoniate de méglumine. Une dose curative de 120 mg par voie intramusculaire SbV / kg / jour pendant 10 jours a été déterminée.

En utilisant le test de dilution limite, le nombre estimé des parasites a montré une réduction significative pour le groupe traité avec megantimoniate lumine en comparaison négative (non traitée) de contrôle et le véhicule (placebo) groupe traité (p <0,001). Les parasites viables (0,4 à 1,6 parasites par mg de tissus de la peau) ont été détectés dans le site de la lésion des animaux non traités et ceux traités avec du PBS. Les parasites ont été isolés que dans les animaux qui n'ont pas répondu au traitement avec l'antimoniate de méglumine: un animal traité avec 120 mg / kg / jour (figure 5b) et deux hamsters traités avec 80 mg / kg / jour (Figure 5c). Aucune différence n'a été observée dans la charge parasitaire des hamsters qui ne guérissent pas après avoir reçu méglumine antimonite en comparaison à ces animaux non traités ou traités avec du PBS.

Dans l'histopathologie des biopsies de la peau chez des hamsters traités avec l'antimoniate de méglumine intramusculaire à 120 mg SbV / kg / jour pas de parasites sont observés; les macrophages et les lymphocytes infiltrant quelques le derme sont vu (figure 6a, 6b). Au contraire, lorsque les hamsters nousêtes traité avec l'antimoniate de méglumine à 80 mg SbV / kg / jour, la dermatite granulomateuse avec présence abondante de macrophages infiltrant le derme est largement observée (figure 6c, 6d).

3. Toxicité

En utilisant le même schéma thérapeutique pour l'étude d'efficacité, la toxicité de l'antimoniate de méglumine à 80 et 120 mg de poids corporel SbV / kg a été évaluée. L'état de santé général et le poids corporel ont été suivis jusqu'à 3 mois après le dosage dernière. Le traitement par n'affectait pas le poids du corps des hamsters qui a varié de 104,9 à 124,69 gr et 129,71 à 134,02 gr chez les hamsters sains et infectés, respectivement. Les animaux ont gagné une moyenne de 27,59 ± 4,22% du poids corporel au cours du traitement et de 28,74 ± 2,26% au cours du suivi (p> 0,05, Anova). Perte de poids n'a pas été observé dans n'importe quel groupe de traitement (données non présentées). Les valeurs sériques de la créatinine et de l'alanine amino-transférase paramètres (ALT) et hémogrammeétaient similaires aux valeurs de référence non traités et à l'antimoniate de méglumine hamsters traités. Seul le pain d'urée d'azote (BUN) niveau a été augmenté dans 20% des animaux traités.

L'analyse histopathologique des tissus provenant de hamsters infectés par L. amazonensis et traitée avec antimoniate de méglumine à des doses de 80 et 120 mg SbV / kg / jour pendant 10 jours n'ont montré aucun changement associés à une toxicité médicamenteuse.

Tableau une
un tampon phosphate salin, Jours b après le traitement.
Tableau 1. Phénotype clinique de L. amazonensis hamsters infectés expérimentalement après le traitement avec l'antimoniate de méglumine.

L'efficacité de chaque traitement a été évaluée en comparant les tailles des lésions avant et après les traitements, en utilisant le système de notation suivant: guérison (guérison de la zone de 100% et la disparition complète de la lésion); Amélioration clinique (réduction de la taille de la lésion chez> 50% de la superficie); échec clinique (augmentation de la taille de la lésion); rechute (réactivation de la lésion après la guérison).

Tableau 2
A: signe absent; NA: ne s'applique pas; m: doux; M: modérée; S: sévère; PMN: polynucléaires neutrophiles; NSL: Pas de lésion significative; GDM: dermatomyosite granulomateuse; DPI: la dermatite pyogranulomateuse. 1. Lymphangiectasie; 2. Minérale comme matériau.
Tableau 2. Histopathologie de la peau des hamsters infectés expérimentalement avec L. amazonensis et traitée avec antimoniate de méglumine.

Figure 1
Cours Figure 1. Du développement des lésions cutanées après l'infection chez les hamsters inoculés par voie intradermique avec 1 à 1,5 x 10 7 L. amazonensis métacyclique (stationa ry phase) promastigotes pendant 20 semaines. Axe des ordonnées représente la surface de l'ulcère en mm.

Figure 2
Figure 2. L'histoire Photographyic de développement de la lésion ulcéreuse dans la peau du dos d'un hamster doré après l'inoculation intradermique de 10 x 10 7 à 2 semaines (a), 4 semaines (b) et 6 semaines (c).

Figure 3
Figure 3 biopsie de peau à partir de (a) de hamster infecté et non traité:. Pas de réaction inflammatoire ni altération significative histologique est observée; (b) infecté et non traité hamster: la dermatite granulomateuse avec présence de cellules géantes multinucléées (flèche ainsi astérisque) et les parasites abondantes (noir flèches) et les macrophages (flèches blanches) infiltrant le derme. Hématoxyline-éosine 400x tache.

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L'histoire la figure 4. Photographie de la réponse clinique des hamsters infectés avec L. amazonensis et traitée avec l'antimoniate de méglumine intramusculaire à 120 mg SbV / kg / jour pendant 10 jours. Les photos montrent l'apparition de la lésion avant traitement (a), à la fin du traitement (jour 10) (b), et au cours du suivi: 30 jours (c), 60 (d) et 90 (e) après traitement.

Figure 5
Figure 5. Efficacité de la antimoniate de méglumine dans le traitement de la leishmaniose cutanée chez les hamsters. Hamsters dorés ont été infectés avec L. amazonensis dans la peau du dos. Après 6 semaines de l'infection, n'ont pas été traités (a) par voie intramusculaire ou traitées pendant dix jours avec du PBS seul (b), l'antimoniate de méglumine 120 mg SbV / kg / jour (c) ou 80 mg SbV / kg / jour (d). Les graphiques montrent le pourcentage de diminution de la taille de la lésion à la fin du traitement (jour 0), et aux jours 15, 30,60 et 90 de suivi après la fin du traitement. p <0,001 pour les 120 ou 80 mg SbV / kg / jour de traitement par rapport à véhicule et non.

Figure 6
Figure 6. Biopsie cutanée chez des hamsters infectés et traités par voie intramusculaire megumine antinmoniate à 120 mg SbV / kg / jour (a, b) et 80 mg SbV / kg / jour (c, d). Présence des macrophages et des lymphocytes infiltrant rares dans le derme. Pas de parasites sont observés. Hématoxyline-éosine tache 200x (a), 1000x (c) une dermatite granulomateuse avec présence abondante de macrophages infiltrant le derme en profondeur (c);. Macrophages spumeux avec des parasites phagocytés. Hématoxyline-éosine tache 200x (b), 1000x (d).

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Discussion

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La leishmaniose cutanée est endémique dans les régions tropicales et néotropicales. Il est souvent désigné comme un groupe de maladies à cause du spectre de manifestations cliniques variées, qui vont de petits nodules cutanés à la destruction du tissu brut muqueuse. La plupart des médicaments disponibles sont coûteux, nécessitent des traitements longs et sont de plus en plus inefficaces, ce qui nécessite la découverte de nouveaux médicaments.

Le modèle de souris est largement utilisé, mais présente certains inconvénients. Ainsi, par exemple, sur la base de la lésion qui s'est développé après l'injection intradermique de promastigotes de Leishmania dermotropes, les souris peuvent être divisés en trois groupes: un très sensibles à l'infection persistante caractérisée par une lésion ulcéreuse expansion comme on le voit chez des souris BALB / c et souris DBA / 2, DBA / 3, un groupe relativement résistant où les lésions peuvent résoudre dans les 8 semaines comme on le voit dans l'ABC / H, C3H/He et A / J et un groupe très résistant dans lequel aucune lésion réelle Typical de la leishmaniose cutanée se développe à l'injection comme on le voit dans NZB et C57BL / 6 souris 4. En contraste avec le modèle murin de la leishmaniose cutanée où le cours de la maladie varie considérablement entre les divers courants souches de souris consanguines et des espèces de Leishmania, le hamster doré, Mesocricetus auratus est considéré comme le bio-suffisante modèle pour évaluer les médicaments contre les espèces de Leishmania comme ils sont sensibles à l'infection par différentes espèces de Leishmania. 5,6,7,8,9,10,11,12,13,14. L'inoculation de métacycliques (phase stationnaire) promastigotes de tout de l'espèce Leishmania dermotrope est capable de causer des lésions cutanées entre un et deux mois après l'inoculation. Les lésions deviennent évidents 20 jours pi sous forme de papules qui ont évolué à des nodules et, plus tard, à des ulcères. Selon le site d'inoculation (pe museau, foodpad, l'oreille ou la queue de base) le hamster affiche une évolution de la maladie prévisible après l'infection expérimentale, la plupart des eélectronique en temps caractérisé par le développement d'une lésion chronique locale ulcéreuse similaires à ceux observés dans les êtres humains atteints de leishmaniose cutanée. Toutefois, comme chez les humains, des lésions variait de la taille en fonction du statut immunitaire de chaque individu et, par conséquent, dans certains hamsters une tentative de résoudre la lésion et, par conséquent la réduction de la taille de la lésion peut être vu.

Bien que cet article décrit l'infection expérimentale dans la peau dorsale de hamsters en utilisant des promastigotes de L. amazonesis, ce modèle est également possible pour d'autres espèces de Leishmania dermotropes, en changeant seulement la taille de l'inoculum. En résumé, l'approche de l'injection intradermique de promastigotes à la peau du dos démontre que les caractéristiques cliniques et pathologiques de la leishmaniose cutanée induites dans la peau du dos de hamsters sont remarquablement similaires à la maladie humaine. En outre, le suivi clinique des ulcères après le traitement avec des composés spécifiques ou dtapis est facilitée dans ce modèle de CL induite dans la peau dorsale. L'évolution des lésions est facilement déterminé en comparant la taille de la lésion obtenues avant et après le traitement. La réponse clinique en termes de guérison est facile à suivre en fonction de la ré-épithélialisation (comme on le voit dans la figure 4). Nous concluons que l'infection expérimentale dans la peau dorsale de hamsters avec des espèces de Leishmania représente un modèle utile pour valider le potentiel de composés qui sont des candidats pour les médicaments antileishmanienne.

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Disclosures

Pas de conflits d'intérêt déclarés.

Acknowledgments

Cette étude a été financée par des subventions de recherche Le Comité pour l'Université d'Antioquia (CODI), L'Institut colombien pour le développement de la science et la technologie - COLCIENCIAS et le Centre pour le développement de produits contre les maladies tropicales - CIDEPRO.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Ketamine Reagent Holliday –Scott S.A
Xilacine Reagent Synthesis
PBS Reagent GIBCO, by Life Technologies 14190-136
Digital caliper Equipment Fisher Scientific 15-077-958
Giemsa Reagent Sigma-Aldrich GS1L-1L
Formalin Reagent Nova lab 11273
Paraffin Reagent Pechiney Plastic Packaging PM-996
Haemotoxilin Reagent Nova lab 10870103
Eosin Nova lab 10870203
Kodak Ektachem dry chemistry Equipment Kodak Ektachem DT-60
meglumine antimoniate Reagent Aventis
Microscopy Equipment Nikon Instruments YS2-T

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References

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La leishmaniose cutanée dans la peau dorsale de Hamsters: un modèle utile pour le dépistage des drogues antileishmanienne
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Robledo, S. M., Carrillo, L. M., Daza, A., Restrepo, A. M., Muñoz, D. L., Tobón, J., Murillo, J. D., López, A., Ríos, C., Mesa, C. V., Upegui, Y. A., Valencia-Tobón, A., Mondragón-Shem, K., RodrÍguez, B., Vélez, I. D. Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs. J. Vis. Exp. (62), e3533, doi:10.3791/3533 (2012).More

Robledo, S. M., Carrillo, L. M., Daza, A., Restrepo, A. M., Muñoz, D. L., Tobón, J., Murillo, J. D., López, A., Ríos, C., Mesa, C. V., Upegui, Y. A., Valencia-Tobón, A., Mondragón-Shem, K., RodrÍguez, B., Vélez, I. D. Cutaneous Leishmaniasis in the Dorsal Skin of Hamsters: a Useful Model for the Screening of Antileishmanial Drugs. J. Vis. Exp. (62), e3533, doi:10.3791/3533 (2012).

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