MRI-מודרך שיבוש של מחסום דם מוח באמצעות אולטרסאונד ממוקד Transcranial מודל עכברים

Summary

Microbubble בתיווך הפרעה אולטרסאונד ממוקד של מחסום דם מוח (BBB) ​​היא טכניקה מבטיחה למסירה פולשני התרופה ממוקדת במוח

Abstract

ממוקד (FUS) אולטרסאונד שיבוש מחסום דם מוח (BBB) ​​היא טכניקה לחקור יותר ויותר עבור עקיפת ^1-5 BBB. BBB מהווה מכשול משמעותי טיפולים התרופות של הפרעות במוח כפי שהיא מגבילה את מעבר מולקולות בין בכלי הדם לרקמת המוח מולקולות פחות מ דה כ 500 בגודל ^6. FUS הפרעה הנגרמת BBB (BBBD) הוא זמני והפיך ⁴ ויש לו יתרון על פני כימי אמצעי גרימת BBBD ידי להיות מקומית מאוד. FUS המושרה BBBD מספק אמצעי לחקור את ההשפעות של מגוון רחב של סוכני טיפולית על המוח, אשר לא היה אחרת להיות תוצר לרקמות בריכוז מספיק. בעוד מגוון רחב של פרמטרים אולטרסאונד הוכיחו מצליחים לשבש BBB ^2,5,7, ישנם צעדים קריטיים מספר הליך ניסיוני על מנת להבטיח שיבוש מוצלח עם מיקוד מדויק. זה protocקווי המתאר ol איך להשיג MRI מונחי FUS המושרה BBBD במודל של עכברים, עם דגש על הכנת החיה ביקורתית צעדים לטיפול microbubble הניסוי.

Protocol

1. אולטראסאונד ו-MRI ההתקנה

MRI תואם בשלושה צירים מערכת אולטרה סאונד ממוקד נעשה שימוש במחקר זה (FUS מכשירים, Inc, טורונטו, אונטריו, קנדה). שני מתמרים אולטרסאונד שונות נעשה שימוש: בתוך הבית נבנה 551.5 כדורית ממוקד kHz מתמר (רדיוס עקמומיות = 60 מ"מ, קוטר חיצוני = 75 מ"מ, קוטר פנימי = 20 מ"מ), ו 1.503 MHz, 8-במגזר מערך משולב עם PZT hydrophone (Imasonic בע"מ, Voray-sur-L'Orgnon, צרפת) מונעים ככל מתמר אחת אלמנט כדורית ממוקד (FN = 0.8, צמצם = 10 ס"מ). MRI תואם PVDF מקלט ⁸ שימש להקליט פליטת אקוסטיות כאשר מתמר 551.5 kHz היה בשימוש. אם ציוד אחר המשמש, להלן הצעתי:

1. בחר מתמר מתאים, אולטרסאונד מכויל בתדירות מרכז MHz 0.25 MHz טווח -1.5 ו-F-מספר (רדיוס עקמומיות / צמצם) של 1 או פחות.
2. מניחים Fi אמבט מיםlled עם מים חמים, degassed דה מיונן, על המיטה של ​​1.5 T או T-MRI 3. אמבט מים צריך צלחת העליונה אשר יכול להכיל את בעלי החיים. הר מתמר אולטראסאונד במיכל על הבמה MRI בשלושה צירים תואם מיקום או מערכת ^9, מול פני המים.
3. הפעל את כבל מתמר לציוד נהיגה אולטרסאונד דרך לוח חדירה.
4. צור נהיגה מתמר אותות באמצעות מחולל פונקציה מגבר כוח. השתמש במעגל התאמה חיצונית כדי לצמצם את החשמל לידי ביטוי.
5. לדעת אורך המוקד מתמר, מקם את המוקד מתמר על פני השטח מים sonicate פני המים כדי ליצור מעיין מים גלויים. צעדים 1.6 ו 1.7 מתארים כיצד לרשום את המיקוד באמצעות מזרקת המים שנוצר. שיטה מדויקת יותר לאיתור המוקד, הכוללת sonicating חום סופג ג'ל והדמיה העלאת הטמפרטורה וכתוצאה מכך במוקד עם MRI, ניתן למצוא ^{9 <}/ Sup>.
6. לסמן את המיקום של המוקד באמצעות סמן שיוצגו על תמונות MR. ניתן לעשות זאת באמצעות צלחת עם חור במרכז, כי ימלא מים כאשר הניח על המוקד. בור מלא מים יהיה גלוי על MRI ותספק קואורדינטות המוקד בשני מישורים, תוך תיאום בכיוון צירית של מתמר ניתן לקבוע מעל פני המים.
7. באמצעות רצף 3-מטוס Localizer, התמונה סמן מוקד ולהקליט את מיקום המוקד במערכת קואורדינטות MRI.
8. כדי לפקח על פליטת אקוסטיים, הר ⁸ MR תואם hydrophone המשמש כגלאי cavitation פסיבית (PCD) באמבט מים כלפי המוקד מתמר, או להשתמש מתמר עם hydrophone משולבת.
9. הפעל את הכבלים PCD לכרטיס היקף כי הוא מהיר מספיק כדי לתפוס את פרצי עד 10 מילישניות ב PRFs עד 2 הרץ (למשל ATS460, AlazarTech, Pointe-קלייר, קוויבק, קנדה). הכבלים חייבות להיות מבוססות על פןהכל Total לוח או RF המגן כדי למזער את הרעש.

2. בעלי חיים הכנה

1. להרדים את בעלי החיים באמצעות גז isofluorane. מאז isofluorane יש השפעה על הפרעה BBB ^10, החיות יש לקחת את הגז 10 דקות לפני תחילת הניסוי. עינית במקום משחת סיכה בכל עין בתחילת הרדמה כדי להגן על הקרנית מפני התייבשות או פציעה אחרת.
2. באמצעות מכונת גילוח לגלח את הפרווה מהחלק העליון של הראש והצוואר של בעל החיים, ולאחר מכן להסיר את הפרווה הנותרים באמצעות קרם מקריח (למשל נאיר, כנסיית דווייט & Co, פרינסטון, ניו ג'רזי, ארה"ב) ולשטוף את הקרקפת עם סבון עדין מים.
3. מכינים את הזנב עם שיחים בבטאדין העור ואחריו רחצה bridine. בצע wipedown הסופי עם אלכוהול כדי להמחיש את הווריד הזנב.
4. הכנס קטטר 22 מד עם שסתום 3 כיווני לווריד הזנב לשטוף בתערובת הפרין / מלוחים (33 U / ml), כדי למנוע היווצרות קריש דםב קטטר.
5. לספק הרדמה בזריקות (40-50 מ"ג / ק"ג קטמין, 10 מ"ג / ק"ג xylazine) באמצעות זריקה תוך שרירית, ולהסיר את החיה מ isofluorane.
6. מניחים את פרקדן חיים הרדים במערכת מיקום אולטרסאונד עם הראש לפנות waterbath דרך חור בצלחת העליונה (תמונה 1). כמות קטנה של ג 'ל אולטרסאונד להחיל אולי לחלק העליון של ראשו של בעל החיים כדי למזער את הסיכוי airbubbles הלכודים.
7. קלטת הרגליים למערכת מיצוב. ראש ניתן לקיים במקום גם באמצעות סרגל ביס, אם ניתן, או קלטת ממוקם היטב על פני הסנטר.
8. כסה את בעל החיים במגבת במחזור שמיכה מים כדי לשמור אותו חם.

3. היעד הנבחר

1. לרכישת המחקר צירית T _2-T משוקלל _{1-משוקלל} תמונות MR של המוח. אם אתה משתמש 1.5 T-MRI ומסור ראש בגודל RF-לקבל פני סליל, מתאים SCהפרמטרים עשוי להיות:
   
   T ₂ משוקלל: FSE, TE = 60 מילישניות, TR = 2000 ms
   T ₁ משוקלל: FSE, TE = 10 מילישניות, ר = 500 ms

2. בחר את היעד מ T _{2-משוקלל} סריקות, הימנעות החדרים ואת קו האמצע במוח, ובחירת עומק אמצע המוח.
3. העבר את המוקד מתמר למיקום היעד.

4. Microbubble הכנה

Microbubbles Definity (Lantheus הדמיה רפואית, מסצ'וסטס, ארה"ב) נמצאים בשימוש על ידי מספר קבוצות של FUS בתיווך microbubble המושרה BBBD ^2,5,7. במינונים המתאימים לסוגים microbubble אחרים ניתן למצוא בספרות ^11,12.

1. הפעל את microbubbles Definity ולאט לאט להכין נפח קטן לתוך המזרק 1 מ"ל באמצעות מחט 18-מד.
2. הסרה של אוויר לכוד בין המזרק בעדינות על ידי נעה הבוכנה קדימה ואחורה. אין להקיש על המזרק כמו זה יכול לשבור את הבועות.
3. לדלל את Definity ב רגיל מי מלח ביחס של 10:01 כדי מלוחים Definty ידי הזרקת לאט נפח הנדרש Definity לתוך המזרק של תמיסת מלח. אם הלידה עירוי משמש, Definity יכול להיות מדולל עוד יותר, כדי 50:1 או 100:1.
4. להפוך בעדינות את המזרק ביסודיות לערבב Definity ו מלוחים עד ההופעה אפילו מושג. היפוך עדין של מזרק מיד לפני ההזרקה יכול להיות גם הכרחי אם הבועות החלו לצוף מתוך ההשעיה.
5. חשב את נפח המנה הדרושה על 0.02 מ"ל / ק"ג של Definity, או 0.2 מ"ל / ק"ג של פתרון (בדילול 10:01).

5. אולטראסאונד משלוח

1. להגדיר את הפרמטרים sonication, באמצעות מחזור נמוך חובה התפרצויות, לא sonications גל רציף. הפרמטרים sonication המתאים MHz 0.5 הם MPa 0.23 בלחץ באתרו, 10 התפרצויות מילי ב 1 הרץ PRF, 2 דק '. sonication סה"כ זמן. ב 1.5 MHz המתאים לחצים באתרו ליפול סביב 0.45-0.5 מגפ"ס.

_content "> לחצי המתאים תדרים שונים ניתן לאמוד באמצעות מדד מכני של 0.46 ^13.

2. בדוק את ראשו של בעל החיים הוא עדיין יחד למים.
3. להזריק את microbubbles לאט לתוך קטטר לווריד הזנב לשטוף עם מי מלח 0.5 מ"ל נורמלי. בגין sonication בד בבד עם תחילת ההזרקה.

6. הערכת ה-MRI של תוצאות הטיפול

1. בעקבות sonication, מזריקים חומר ניגוד MRI (למשל 0.2 מ"ל / ק"ג Omniscan, GE Healthcare) באמצעות קטטר לווריד הזנב ואחריו סומק 0.5 מ"ל תמיסת מלח.
2. בצע T _{1-משוקלל} הדמיה עד לשיא לעומת זאת עבר. אתרי sonication אשר היו משובשים בהצלחה תציג שיפור גדול יותר מאשר הרקמה הסובבת.
3. בצע T _{2-משוקלל} הדמיה כדי לבדוק אם הבצקת. האות גבוה באתרי sonication מעיד על בצקת.

7. נציגתוצאות

בניגוד סוכני ה-MRI יכול להיות מועברת בהצלחה דרך BBB באמצעות אולטרסאונד ממוקד במחזור microbubbles. תרשים 2 מציג מראש טיפוסי ופוסט FUS T _1-W תמונות. איור 2B מראה בניגוד משופרת (CE) T _1-W תמונה עם פתחים מוקד ברורים ארבעה מקומות sonicated. מקומות 1 ו 2 sonication להראות שיפור מזהיר במיוחד. ב Fig.3 במקומות 1 ו -2 ניתן לראות להתכתב עם T _2-W האות גבוה, המעיד על בצקת.

היקף T _2-W בצקת לפעמים יכול להיות קל יותר לדמיין את פרוסות sagittal. איור 4 מראה CE-T _1-W ו-T-W ₂ פרוסות sagittal דרך sonication מקומות 1 ו 3. בצקת גלוי במקום 1, אבל לא במיקום 3.

ניתוח ספקטרלי של אקוסטיים פליטת הנתונים המתועדים (necatrix תמונה 5) עשוי להראות פליטת הרמוניים ו / או תת / אולטרה פליטות הרמוניים כאשר cavitation יציבה היא התרחשות. הרמוןICS יכול גם לנבוע רקמות שאינם linearities, בעוד פליטת Sub ו ultraharmonic יכול להתרחש רק כתוצאה מפעילות בועה ^14. בלחצים גבוהים יותר פליטות פס רחב המעידים cavitation אינרציה עלול גם להתגלות. אולם אלה קושרו עם כמויות גדולות יותר של תאים אדומים extravasations דם microdamage מאשר sonications ללא cavitation אינרציה ^11.

השימוש גבוהים יותר תדרים תוצאות sonication ב פתחים יותר נקודתיים עקב גודל קטן יותר במקום מיקוד. איור 6 מראה כי תדירות גבוהה יותר יכול לשמש כדי ליצור אזורים קטנים יותר של הפתח. דבר זה מאפשר בדיקה של אפקטים באמצע המוח עם גולגולת כמעט תופעות פחות.

באיור 1. התקנה ניסיונית.

איור 2. מראש (משמאל) ואחרי (מימין) טיפול T _1-W תמונות של המוח עכברוש מראה שיפור בארבעה אתרים sonication.

איור 3. קדם (משמאל) ואחרי (מימין) טיפול T _2-W תמונות של המוח עכברוש (בעלי חיים כמו Fig.2) מראה T _2-W בצקת במקומות sonication 1 ו 2.

איור 4. טיפול פוסט sagittal T _1-W (משמאל) ו-T _2-w (מימין) תמונות במוח החולדה כמו תאנים. 2 ו 3. הפתיחה במקום 1 (משמאל) בקורלציה עם T _2-W בצקת (מימין). מיקום 3 מראה בצקת הפתיחה (משמאל), אך לא T _2-W.
איור 5. ספקטרום תדרים מנתונים שנתפסו במהלך התפרצות אחת MS 10 על 551.5 kHz. התדירות הבסיסית (ו _0), כמו גם הרמוניות (2 ו ₀₎ ותת / ultraharmonics (0.5 F _0, 1.5 ו ₀₎ גלויים.

איור 6. הודעה טיפול CE-T _1-W צירית (משמאל) sagittal (מימין) תמונות במוח חולדה sonicated בארבעה מקומות על 1.503 MHz. פתחים BBB בתדירות זו נראים להיות מקומי יותר.

Discussion

הכנת החיות microbubbles הם ההיבטים הקריטיים ביותר של הליך זה. השיער על הראש של החיה יש להסיר לחלוטין כדי למנוע הפחתת קרן אולטרסאונד. BBB יכול להשתבש תחת הרדמה isofluorane, לעומת זאת, הוא הופך להיות קשה יותר כדי להשיג פתיחת עקבי.

את microbubbles צריך תמיד להיות מטופלים בזהירות מד קטן, מחטים בקוטר גדול יש להשתמש בעת עריכת, על מנת שלא לשבור אותם. באופן דומה, קטטר מד הקטן ביותר אשר ניתן להשתמש בהם באופן סביר ברוח הזנב צריך להיות מועסק (22 מד מומלץ). אם קטטר קטן יותר נדרש כדי להשיג את המיקום הנכון ברוח אז הטיפול הנוסף יש לנקוט במהלך הזרקת microbubble. הזריקות microbubble תמיד צריך להיעשות לאט.

מצב sonications פרץ צריך תמיד להיות מועסק. אם sonications גל רציף משמשים microbubbles את לא לחדש אל הכלים במוקד מתמר ו BBBD לא יושג. אם CE-T _1-W תמונות שלאחר הטיפול לא מראים הפרעה, הטיפול ניתן לחזור על בדיקת כי מפלס המים עקף את כל כך בראש חיות הוא במים שאין בועות אוויר שנלכדו על פני העור .

תדרים גבוהים יותר מספקים לוקליזציה טוב יותר במודלים של בעלי חיים קטנים אך דורשים גבוה יותר לחצים באתרו לגרום הפתיחה. כמו כן, חשוב לקחת בחשבון הפסדים עקב הגולגולת גבוה בלחץ גבוה ויש בחשבון באמידת הלחצים באתרה. על העברת 0.5 MHz דרך הגולגולת עכברוש הוא כ 73% ^8, אך יורד ל כ 50% ¹⁵ ב 1.5 MHz. הנחתה ניתן להניח להיות 5 Np מ ^-1 MHz ^-1 ברקמת המוח ^4. תדירות גבוהה יותר מתאימים יותר לעבודה במודלים של בעלי חיים קטנים, אבל הם פחות רלוונטי מבחינה קלינית.

אוהל "> גישה מונחה MRI מספק יתרונות על פני אולטרסאונד מונחה טכניקות בכך שהוא מאפשר מיקוד מדויק מאוד, כמו גם התוצאה הערכת הטיפול מיד לאחר הטיפול.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Small Animal Focused Ultrasound System	FUS Instruments, Inc.	RK-100
Definity	Lantheus Medical Imaging
Omniscan	GE Healthcare