Summary
En
Abstract
Den isolerade mikrokärlsbildning Preparatet är ett ex vivo preparat som gör det möjligt för granskning av de olika bidragen från faktorer som styr fartyget diameter, och därmed perfusion motståndet 1-5. Detta är ett klassiskt experimentell beredning som var i stor utsträckning, inledningsvis beskrivs av Uchida et al. 15 flera decennier sedan. Detta inledande beskrivningen till grund för de tekniker som omfattande ändrades och förbättras, främst i laboratoriet av Dr Brian Duling vid University of Virginia 6-8, och vi presenterar en aktuell strategi på följande sidor. Detta preparat kommer särskilt hänvisa till gracilis arteriole i en råtta som mikrokärlsbildning val, men den grundläggande preparatet kan lätt tillämpas på fartyg isolerade från nästan alla andra vävnader eller organ mellan arter 9-13. Mekaniska (dvs. dimensionell) förändringar i den isolerade mikrokärl kan lätt utvärderassom svar på ett brett utbud av fysiologiska (t.ex. hypoxi, intravaskulär tryck eller skjuvning) eller farmakologiska utmaningar, och kan ge insikt i mekanistiska faktorer omfattar integrerade svar i en intakt, även om ex vivo, vävnad. Betydelsen av denna metod är att den möjliggör enkel manipulering av de faktorer på den integrerade regleringen av mikrokärlsbildning diameter, samtidigt som den tillåter kontroll av många av de bidrag från andra källor, inklusive intravaskulär tryck (myogena), autonom innervation, hemodynamisk ( t.ex. skjuvspänning) endoteliala beroende eller oberoende stimuli, hormonella och parenkyma influenser, för att ge en ofullständig lista. Under lämpliga experimentella förhållanden och med lämpliga mål kan detta tjäna som en fördel jämfört med in vivo eller in situ vävnad / organ preparat, som inte lätt låter för enkel kontroll av bredare systemiska variabler.
MaJor begränsning av denna beredning är i huvudsak en följd av dess styrkor. Per definition är beteendet hos dessa fartyg som studeras under förhållanden där många av de viktigaste bidragsgivarna till regleringen av kärlmotståndet har tagits bort, bland annat neurala, humorala, metabolisk, etc. Som sådan är utredaren uppmanas att undvika över- tolkning och extrapolering av de uppgifter som samlas in använder detta preparat. Den andra signifikanta område av betydelse med hänsyn till denna beredning är att den kan vara mycket lätt att skada cellulära komponenter såsom endotelbeklädnaden eller den vaskulära glatta muskulaturen, kan sådan att inställbar källa för fel introduceras. Det rekommenderas starkt att den enskilde forskaren använder lämpliga mätningar för att säkerställa kvaliteten på beredningen, både i början av experimentet och med jämna mellanrum under hela ett protokoll.
Protocol
1. Före experimentet
- Innan experimentet dag, glas kapillärrör av lämpliga dimensioner för stationen dras in mikropipetter (antingen en horisontell eller vertikal avdragare kan användas). Spetsen diameter kan lätt justeras beroende på fartyget isoleras, även om vi i allmänhet använder en diameter på mellan 50-150 nm. Dessa böjs sedan till lämplig konfiguration för mikrokärlsbildning stationen följande uppvärmning över en butan låga. Mikropipettspetsar är fysiskt bryts den ungefärliga diametern (med fina tång) för mikrokärlsbildning i fråga och kan jord eller polerade till rätt konformationer, som behövs för den specifika tillämpningen. För en omfattande och enastående recension om dessa förfaranden, läsaren hänvisas till Davis et al. 16. Två mikropipetter placeras sedan i motsats till de pipetthållare för mikrokärl kammaren. Dessa måste vara orienterad så att spetsarnabefinner sig i samma vertikala och horisontella planet i kärlet kammaren.
Det mikrokärlsbildning Kammaren används i detta manuskript (figur 1 och 2) är en som är specialbyggd av Mr David Eick vid Institutionen för fysiologi vid Medical College of Wisconsin ( http://www.phys.mcw.edu/ och www . eicktech.com ). Men flera andra konfigurationer av mikrokärlsbildning kammaren är lätt kommersiellt tillgängliga, med de som utvecklats av levande system Instrumentation ( http://www.livingsys.com/ ) och IonOptix ( http://www.ionoptix.com/ ) är mycket vanligt. Med användning av dessa andra system, kan det vara nödvändigt att utnyttja ett inverterat mikroskop snarare än en konventionell upprätt en, även om detta beror på det specifika experimentet och utrustning. Användningen av inverterade mikroskop skulle vara att föredra för experimentell protokollOLS som kräver fluorescerande eller konfokal avbildning. - Förbered en fysiologisk saltlösning (PSS, som beskrivs nedan) och se till att pH-värdet är satt till lämpliga nivåer för de specifika experimentella betingelser (7,38-7,42 är typiskt och faller inom fysiologiska intervall). PSS lösning kan framställas i förväg och kylda men måste kontrolleras vid den lämpliga temperaturen för pH före användning. PSS kan innehålla albumin om försöksledaren eller särskilda protokoll kräver det, även om detta är inte allmänt obligatoriskt.
- De digitala video bromsok används för att mäta kärldiameter ska kalibreras med hjälp av en hemocytometer eller mikroskop objektmikrometern. För noggrann kalibrering är det viktigt att mikrometer placeras i samma plan som inflödes / utflöde mikropipetter i kärlet kammaren.
- Tie loopar för att fästa mikrokärlsbildning till pipetterna bör förberedas och vara lätt åtkomliga för senare användning. Dessa kan lätt framställas 8-0 eller mindre oftalmisk sRAMTIDA. Den enda slips slingan kan beredas i förväg och förvaras i en täckt petriskål på en liten remsa av omvänd tejp kring en objektglas tills det behövs (detta kommer att hålla dem från att försvinna). (Figur 3).
2. Day of the Experiment
- All stödja utrustning bör vara påslagen och kontrolleras för korrekt funktion. Detta inkluderar anti-vibration/floating bordet och det cirkulerande uppvärmt vattenbad (ställ för att ge lämplig temperatur i kärlet badet - ofta 37 ° C), alla givare tryck och fartyget kammaren avloppspumpen (Figur 1A och 1B). Slå på ekvilibreringen gaserna i kärlet kammaren och i perfusatet och superfusate reservoarerna.
- Fyll alla reservoarer, rör och kammare med PSS lösningen. Perfusatet som leder till inflödet pipetten skall fyllas helt för att undvika förekomst av luftbubblor i denna linje som kan lossa och skada det vascular endotel (Figur 1C). Vid behov, använd en spruta för att försiktigt trycka PSS hela vägen igenom pipetten för att säkerställa att det är helt full och utan blockering som kan hindra perfusat flöde. Inflödet trycket bör hållas inom rimliga gränser för att undvika att skada tryckgivarna.
3. Mikrokärl Skörd
- Efter bedövande av djuret från vilket mikrokärlsbildning ska fattas bör fartyget i fråga isoleras enligt de förfaranden som är mest lämpliga för kärlsystemet som skall studeras. I vissa fall kan detta kräver avlägsnande av organ själv (t.ex. cerebrala eller koronar mikrokärl), medan i andra kan fartyg tas bort direkt från bedövade djur (t.ex. muskler). Ett exempel på orienteringen av kärlet i gracilismuskeln presenteras i Figur 4. Uppskatta fartygets längd in vivo före avlägsnandet med förCEPS eller små ok. Före avlägsnande av fartyg från djuret / orgel, kan det vara till stor hjälp för att utföra en sista kontroll för att försäkra sig om att fartyget kammaren är klar och fungerar (inklusive alla tie slingor på plats).
- Ta bort fartyget från djuret / orgel av att ta tag i utsidan av fartyget i ena änden med fina pincett och skär längs fartygets tills den är gratis, tar mycket försiktig för att undvika rycka eller dra på fartyget. När befriade omedelbart placera den i en 1,7 ml centrifugrör fyllda med PSS men inte släppa fartyget. Detta är att komma ihåg den orientering, kommer sådan att perfusatet riktning i badet vara identisk med blodflödet riktning i djuret.
4. Kanylering av fartyget
- Placera kärlet i den fyllda badet och kanylera proximala änden på inflödet pipett. Detta kan bäst åstadkommas med en blygsam perfusionshastighet genom kanylen (~ 50 mm Hg tryck) ochett par av fin pincett för att hålla varje sida av den proximala kärllumen vägg (dvs. en pincett i varje hand). I vårt laboratorium använder vi fina pincett från fina Science Tools ( http://www.finescience.com/Home.aspx ), även om något lämpligt konstruerade pincett fungerar effektivt. Sätt fartyget på kanylen tips och föra fartyget på spetsen till den punkt där två slips slingor kan säkra fartyget.
- Höj inflödet trycket till ~ 75 mmHg för att ytterligare blåsa upp fartyget och underlätta kanylering på den distala pipettspetsen. Flöde genom kärlet bör ses som en störning i superfusate reservoaren vid den distala utflöde av kärlet (under mikroskop). Kanylera den bortre änden av fartyget på utflödet pipetten och fäst den med två slips slingor (dessa sista slingor måste finnas på plats före kanyleringen, Figur 5).
- Justera kanylen förrän i XYZ koordinater som Needed tills det är minimal distorsion i kärlet och kärlet approximerar in vivo längd. Höja inflödet tryck tills den approximerar den procentandel av det genomsnittliga arteriella trycket normalt upplevs av att kärlsegmentet (vårt laboratorium utnyttjar 80% av det genomsnittliga arteriella trycket för de stora motstånd arterioler i gracilismuskeln 8).
- Placera en liten bubblande sten leverera lämpliga gasblandningen i badet och plats plastfolie eller ett glas lock över kammaren för att undvika stänk mikroskopet linsen. Vi använder en bubblande sten som är allmänt tillgänglig på alla djur / akvarium lagrar och är ungefär 1 cm i diameter, även om en mindre storlek kommer att arbeta effektivt också. Närvaron av den bubblande stenen försäkrar lämplig gas tillgänglighet för fartyget vid alla tidpunkter och kommer att sträcka sig fartyget lönsamhet. Denna sten tas bort under alla mätperioder (eller luftflödet genom stenen tillfälligt avbrytas) för att förhindra en snedvridning avbild. Frigöra klämman på utflödet pipett och tillåta flöde genom kärlet under 30 minuter. Periodiskt, bör flödet skall klämmas vid utflödet slangen för att bestämma om kärlet utvecklas vilande tonen. Alla fartyg måste kontrolleras tryck läckor på denna punkt. Läckor kommer att vara uppenbart genom att en känd tryck i kärlet (vi vanligen använda 100-120 mmHg) och fastspänning av utflöde, följt av inflödet, linjer. Om det intraluminala trycket är stabil, det inte finns några urskiljbara läckor. Men om trycket börjar falla, är en betydande läckage närvarande och måste stängas. Läckor på antingen inflödet eller pipetter utflöde normalt kan åtgärdas genom att lägga till en extra slinga bunden runt fartyget på pipetten. Alternativt, om ett fartyg har en liten sidogren som tillåter läckan kommer detta försvåra för fartygets att innehålla trycket effektivt och kan införa ytterligare en källa för fel. Om denna läcka identifieras, kan den normalt knytas av wed en enda slinga av 10-0 oftalmisk sutur. Alternativt är en enkel sträng retades 6-0 sutur för att göra tien slingan också mycket effektiva. Om läckan inte kan identifieras eller inte kan på ett effektivt sätt bunden av (t.ex. finns det ingen trunk till sidogren och helt enkelt ett hål i kärlväggen), kan detta resultera i en förtida uppsägning av försöket och användning av en vara alternativ fartyg nödvändigt (detta är i allmänhet identisk kärlet i det andra benet - eller kontralaterala sidan om nödvändigt - för djuret).
Fartyget bör ha rätt att jämvikt under inga flöde i minst 30 minuter. Alla experiment utförs under några flöde. När fartyget har utvecklats tillfredsställande tonen och reagerar införandet kriterierna för försöket i fråga, är fartyget redo för efterföljande studie.
Dessa inklusionskriterier kan variera beroende på den specifika experimentella protokollet och undersökare. I vårt laboratorium, UT vi rutinmässigtilize följande:- Aktiv ton> 30% (beräknat som AD / D max x 100, där AD är ökningen arteriolär innervägg diameter från de värden som under jämvikt trycket som svar på exponering för Ca 2 +-free PSS och D max är den maximala Diametern mäts vid jämviktningen trycket i Ca2 +-fri PSS).
- Myogena aktivering (underhåll av, eller helst en minskning, arteriolär diameter med ökat intraluminala tryck) som ett index för en livskraftig vaskulär glatt muskulatur lager.
- En livskraftig endotelbeklädnaden, vilket framgår av en rask dilator svar på acetylkolin (10 -6 M i badet).
- Ytterligare inklusionskriterier kan läggas att passa den specifika experimentella protokoll som behövs, bland annat kärlsamman svar adrenerga agonister såsom fenylefrin (10 -7 M), dilatorn reaktioner på andra stimuli som adenosin (10 -5 2 i jämvikt gas).
- Följande avsnitt är ett exempel på en "mock experiment". Alla nödvändiga lösningar framställdes som lämpligt, med uppmärksamhet på hänsyn till spädningsfaktorn av PSS i kärlet kammaren. Som ett exempel, för en del av vår utrustning, är volymen av kärlet kammaren 20 ml. Som sådan, 20 | il av en 10 ~ 2 m resultat stamlösning i en effektiv koncentration av 10 -5 M i kärlet kammaren badet. Efter avlägsnande kärlet, kanylering ekvilibrering och validering såsom beskrivits ovan, är det experiment redo att börja. Specifika exempel behandling randomisering och effektivitet är experiment specifika och skulle konsumera överdrivet utrymme för denna insats. Som sådan, vilka inte ingår i detalj.
De inledande kontroll svar bestäms. Ett exempel fysiologisk stimulans som myogena aktivering (tryck-inducerad sammandragning), intralumenala prEssure slumpmässigt förändras över det önskade området, och fartyg får en lämplig tidsperiod att svara (i detta fall skulle vi tillåter en 5-7 minuter). För ett exempel farmakologisk retning såsom utmaning med acetylkolin är läkemedlet tillsätts till den bakre från förrådslösningar i en slumpmässig ordning. I det här fallet, skulle vi brukar använda ett intervall från 10 -9 till 10 -5 M i badet, med wash-out definieras som ett återställande av jämvikt diameter. Som acetylkolin är en snabb verkande medel kan maximala dilatorn svar lätt uppnås på bara några sekunder. Andra medel (såsom peptider) kan ta mycket längre tid för att framkalla ett maximalt svar och detta mycket beaktas, liksom den tidsperiod det tar för effektiv sköljning. När kontroll svar har samlats in, kan specifika åtgärder införas i systemet, bland annat inkubering av kärlet med receptoragonister / antagonister, agenter som agerar på specifika jonkanaler, anstiftanförändrade intraluminala tryck, skillnader i ekvilibreringstider gaser eller farmakologiska ämnen inriktade på specifika enzymatiska system, för att nämna några av de vanligaste insatserna.
Efter en lämplig tid för ingripande för att vara effektiv (vilket ska testas på lämpligt sätt), kan en senare omgång av datainsamling påbörjas. Beroende på den specifika experimentella protokollet kan följande åtgärder vidtas på fartyget eller den första kan avlägsnas (antingen genom washout - när så är möjligt - eller enkel borttagning av den fysiologiska utmaning). När fartyget har återgått till sitt jämvikt tillstånd (som bör verifieras), kan följande åtgärder tillämpas vid behov med ytterligare insamlade data. Denna allmänna förfarande skulle fortsätta tills uppsägning av försöket eller tills kvaliteten på fartyget preparatet understiger tidigare fastställda tröskelvärdet kriterier (t.ex. svar på en agonist eller förmågan att utveckla tillräckligt aktivt ton). Vid denna punkt är experimentet antingen ingås, eller utredaren kan vilja samla in data som är oberoende av reaktiviteten hos den isolerade fartyget (t.ex. mekanik i kärlväggen som kan utföras med samma förfarande myogena aktivering, bara med ett kärl som saknar alla aktiva tonen 14). - Regelbunden rengöring av hela utrustningen är väsentlig för avlägsnande av salt uppbyggd och förhindrande av tillväxten av oönskade biologiska enheter. I slutet av varje experiment dag, åtminstone är alla linjer och kammare helt spolas av PSS med rikliga mängder destillerat eller avjoniserat vatten och får torka ordentligt. Efter 2-3 dagars användning, är en tvätt med etanol var lika bra och utrustningen får torka fullständigt. I slutet av varje vecka konsekvent användning är alla linjer och kammare fylld med 0,1 M saltsyra, får "inkubera" för 30 minuter och sedan sköljas i rikligt med vatten enligt ovan. Slutligen, vidänden av 2-3 veckors efterföljande användning, är alla delar av slangen ersättas med nya och kammaren och reservoarerna rengörs med 1,0 M HCl följt av en omfattande sköljning med destillerat / avjoniserat vatten. Om någon missfärgning av slang eller visuell upprättande av en tillväxt i slangen eller någon del av kammaren / reservoarer, ersätts antingen eller rengöras på lämpligt sätt. Med regelbunden rengöring och allmänt underhåll, kan utrustningen pågå en mycket lång tid. Vid skrivande stund vårt fartyg kammare är alla i sin 8: e eller 9: e år av rutinmässig användning och vi har haft någon betydande svårigheter med dem.
5. Representativa resultat
Figur 1A. Denna siffra visar grundinställningen mikrokärlsbildning station. A = TV för visning av fartyget, b = digitala skjutmått, C = spruta för att trycka superfusate thrgrundlig inflöde pipett efter behov, D = hydrostatiska kolonnen för att ändra perfusatet inflödestryck, E = mikroskop, F = mikrokärl kammaren, G = superfusate reservoar, H = tryckövervakare (multipel kan tillsättas efter behov); I = mikrokärl kammaren avtappningspumpen för superfusate, J = jämvikt gasblandning tanken, K = avfall som finns (för superfusate), L = cirkulerande vatten värmare, M = anti-vibration/floating bord.
Figur 1B. Denna siffra visar en närmare bild av mikrokärlsbildning kammarens setup. I denna figur, E = mikroskop, F = mikrokärlsbildning kammaren, H = tryckvakt (Vi visar bara en för enkelhetens skull, kan flera läggas till olika platser vid behov), I = mikrokärlsbildning kammaren avloppspumpen, N = slang ansluten till början av perfusatet inflödet pipetten (en fortsättning på "D" i figur 1 A); O = slang fäst perfusatet utflödet pipetten.
Figur 1C. Denna siffra visar det närmaste utsikt över mikrokärlsbildning kammaren. I denna figur, N = perfusatet linje (dvs slangen fäst direkt till perfusatet inflöde pipett); O = slang som är fäst direkt till perfusatet utflödet pipetten, P = de horisontella och vertikala läge kontroller för inflödet pipetten, Q = den superfusate dränera för vattenbad (ansluten till "I" i figurerna 1A och 1B), R = inflödet för vattenbadet som kommer från behållaren (ansluten till "G" i figur 1 A).
Figur 2. Denna figur visar en schematisk representation av flödet av fluider och gaser i systemet. I denna figur A = PSS superfusate linjen tillströmning, B = PSS perfusat linje till inflöde pipett, C = PSS superfusate avloppet från bad till avfallsbehållare, D = PSS perfusat utflöde från utflödet pipett, E = uppvärmt vatten matas in i kammaren jackan, F = uppvärmt vatten ut från kammaren jacka.
. Figur 3 Denna siffra visar individen slips loopar gjord oftalmisk sutur (betraktas genom ett dissektionsmikroskop med 10x okular och en 4.5x justerbar zoom förstoring, panel A) som används i vår beredning och lagring av flera slips slingor från 8 till 0 och 10-0 sutur på omvänd tejp runt ett objektglas som lagras i en övertäckt petriskål (för att undvika att förlora dem, Panel B).
Figur 4. Denna siffra ger en bild (betraktas genom en standard dissektionsmikroskop) av gracilismuskeln motståndet arteriole före kirurgisk isolering och borttagning för att möjliggöra korrekt rumslig orientering.
Figur 5. Denna siffra ger en representativ bild av en kanylerad mikrokärlsbildning. Panel A visar hela längden av kärlet, med både inflödet (A) och utflöde (B) pipetter samt öglor tie (C) visas. Panel B visar en bild vid hög förstoring, vilket tydligt visar bestämningen av arteriolär innerdiameter med digitala passare (i detta fall är diametern 112 ^ m).
Figur 6. Denna siffra visar representativa bilder av en kanylerad mikrokärlsbildning efter jämvikt. Den övre bilden är ett fartyg under kontroll, ostimulerad förhållandena på jämvikt tryck är mitt bild av samma fartyg efter dilatation att utmana med acetylkolin (10 -6 M i badet), och den nedre bilden är det fartygets efter constriction att utmana med fenylefrin (10 -7 M i badet).
. Figur 7 Denna figur sammanfattar svaren hos en isolerad mikrokärl som svar på stimulering med: hypoxi (panel A, en minskning i perfusatet och superfusate PO 2 i vårt system från ~ 135 mm Hg till ~ 40 mm Hg), ökande koncentrationer av acetylkolin (panel B), förändringar i intravaskulär tryck under kontrollbetingelser och efter inkubering av kärlet med en kalcium-fri PSS (panel C).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Protokollet presenteras beskriver isolering, avlägsnande och dubbel kanylering av en skelettmuskel mikrokärl, även om detta allmänna tekniken kan lätt appliceras på de flesta vävnader. För den aktuella manuskriptet, har termen "arteriole" använts av författarna för att beskriva ett motstånd fartyg på mellan 70-120 nm i diameter under vila aktivt ton, vilket också är en viktig bidragsgivare till regleringen av perfusion motstånd mot ett organ eller vävnad.
Med vissa modifieringar, kan detta system vara försedd med flera program för den specifika undersökaren och lätt tillåter inkorporering av ytterligare tekniker för att tillhandahålla mer ingående experiment (t.ex., användning av transmembran-elektroder för bestämning av membranpotential 17). Ett kritiskt steg i den grundläggande beredningen alltid säkerställer att in-och utflöde pipetter som används för att kanylera kärlet väl är matchade, förbli klar och tillåtaflöde och tryck att upprätthållas i en enkelt sätt. När pipetterna blir igensatta med minut bitar av skräp, kan det vara nödvändigt att bryta av mycket små bitar av spetsarna för att återställa flödet. Om utredaren är noggrann, kan pipetter återanvändas flera gånger tills de når en punkt där de antingen inte kan unclogged eller diameter tillräckligt stor för att kanylering av fartyget blir extremt svårt. Men med behärskning av detta kirurgiska och experimentell förberedelser, noggrann uppmärksamhet på detaljer, och de lämpliga ändringar för att passa särskilda villkor och krav, kan utredarna värdera lätt vägar som bestämmer vaskulär reaktivitet som svar på en myriad av fysiologiska och farmakologiska utmaningar. Detta preparat kommer också att utredaren att utföra grundläggande analyser förändringar kärlväggen mekanik under förhållanden för ingen aktiv tonen 14. Detta är verkligen en mycket kraftfull och anpassningsbar teknik och det är något somlätt kan användas för applikationer som spänner över rad detaljerade mekanistiska studier till hög kapacitet visningar av mer grundläggande svar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Inga intressekonflikter deklareras.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes av American Heart Association (EIA 0740129N) och NIH T32 HL90610.
References
- Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome. Microcirculation. , 1-18 (2009).
- Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).
- Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).
- Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth. Microcirculation. 15, 151-161 (2008).
- Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).
- Dacey, R. G., Duling, B. R. A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).
- Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2. Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).
- Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).
- LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles. J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).
- Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).
- Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).
- Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia. Microcirculation. 15, 621-631 (2008).
- Baumbach, G. L., Hadju, M. A. Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats. Hypertension. 21, 816-826 (1993).
- Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs. Circ. Res. 4, 525-536 (1967).
- Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).
- Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin. Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).
