Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

דיסקציה של Utricle עכבר מבוגר adenovirus בתיווך זיהום המשנה תאים

doi: 10.3791/3734 Published: March 28, 2012

ERRATUM NOTICE

Summary

תאים שיער Mechanosensory הם תאים הקולטן של האוזן הפנימית. ביותר המאופיין

Abstract

אובדן שמיעה והפרעות מאזן נגרמות בדרך כלל עקב מותם של תאים שיער mechanosensory, שהם תאים הקולטן של האוזן הפנימית. מכיוון שאין קו התא באופן משביע רצון מייצג תאים שיער יונקים, מחקר על תאים שיער מסתמך על תרבויות איברים ראשוניים. ביותר המאופיין במערכת מודל במבחנה של בוגרים לתאי שיער יונקים מנצל תרבויות איברים של utricles מעכברים בוגרים (איור 1) 1-6. Utricle הוא איבר שיווי המשקל, ואת בתאי השיער של utricle דומים במבנה והן בתפקוד לתאי שיער באיבר השמיעה, האיבר של קורטי. עכבר מבוגר הכנה utricle מהווה האפיתל חושית בוגרת לימודי של אותות מולקולריים המווסתים את הישרדות, הומאוסטזיס, ומוות של תאים אלה.

יונקים תאים שיער שבלול הם מובחנים סופני ואינם מחדש כאשר הם הולכים לאיבוד. שאינם לאמאחוליות malian, שמיעה או מוות שיווי המשקל תא השיער מלווה התחדשות חזקים אשר משחזר השמיעה ושיווי המשקל פונקציות 7, 8. התא התחדשות שיער מתווך על ידי גליה דמויי תאים תומכים, אשר קשר עם משטחים basolateral של תאים שיער ב האפיתל חושי 9, 10. תאים תומכים גם הם מתווכים חשובים של הישרדות שיער התא ומוות 11. פיתחנו לאחרונה טכניקה זיהום לתמוך תאים בתרבית באמצעות utricles adenovirus. באמצעות סוג adenovirus 5 (dE1/E3) כדי לספק transgene המכיל GFP בשליטת היזם CMV, אנו מוצאים כי adenovirus במיוחד וביעילות מדביק תאים תומכים. תמיכה דלקת יעילות התא הוא כ 25-50%, ותאי השיער לא נגועים (איור 2). חשוב לציין, אנו מוצאים כי זיהום adenoviral לתמוך תאים לא לגרום רעילות לתאי השיער או תאים תומכים, כמו ספירת תאים ב Ad-GFP infutricles ected שקולים לאלה שאינם נגועים utricles (איור 3). כך adenovirus בתיווך ביטוי גנים בתמיכה של תאים בתרבית utricles מספק כלי רב עוצמה כדי לחקור את התפקידים של תאים תומכים כמתווכים של הישרדות שיער התא, מוות והתחדשות.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Utricle Dissection והתרבות

  1. להרדים הבוגרת (4 שבועות ומעלה) העכבר באמצעות פרוטוקול מאושר לערוף.
  2. לגזוז את תעלת השמע החיצונית משני צידי הראש, ומושכים את העור קדימה לכיוון האף. לחצות את ראש מהסוף להתחלה ולהסיר את המוח משני הצדדים לגלות את המבוך הגרמי.
  3. חתוך את הגולגולת מן שבלול גרמי ולהעביר את המבוך הגרמי (כולל בולה) על מכסה המנוע רקמת התרבות מצויד המיקרוסקופ לנתח (הערה: עבודה adenovirus יש לבצע בארון דרגת הגנה II ביולוגי).
  4. על מכסה המנוע, כדי להעביר את כל שבלול מאכל תרבות 35mm רקמה המכילה כלי התקשורת המבתרים סטריליים (M199, Gibco / Invitrogen # 12350) (איור 1 א).
  5. אם בולה השמיעה הוא עדיין שלם (אפשר להסיר את בולה במהלך דיסקציה ברוטו ידי הוספת התמונות שלך בין בולה ואת שיאשבלול), להשתמש בשני מלקחיים (1 מס '3 ו - 1 # 5) לשבור את הבולה (1B איור).
  6. זהה את ציוני הדרך של הכנת שבלול גרמי: איפקס, בסיס, ossicles, חלונות סגלגלים בסיבוב השמיני, שורש העצב, תעלות בצורת חצי עיגול (איור 1 ג', ד ').
  7. מניחים את האוזן הפנימית בצלחת עם הצד המדיאלי כלפי מעלה, כך חלונות סגלגלים עגול איפקס הם בתחתית המנה, שורש העצב השמיני הוא פונה כלפי מעלה. החזק את ההכנה באמצעות מספר # 3 מלקחיים באזור של תעלות בצורת חצי עיגול (איור 1D).
  8. באמצעות אזמל מצויד בלהב # 11, לנתק את שיאו של שבלול הפסגה רק כדי שורש העצב (1D איור).
  9. להפוך את ההכנה כך הוא חתך את החלק פונה כלפי מעלה. השתמש תעלה חצי עגול ידית קדמית כמו לייצב את ההכנה (איור 1E).
  10. באמצעות מספר 5 מלקחיים, להסיר את השבלול על כישור את מטהלבסיס. בנקודה שבה האזור וו של שבלול פונה כלפי מטה, השתמש בדיקה בסדר (מחצית מספר # 55 מלקחיים שבורים) להרים את המדף הגרמי האחרון של lamina ספירלה גרמית (איור 1F), חושפת את שקיק. מתחת שקיק היא מדרגת משורת, שהוא ציון דרך חשוב. Utricle צמוד מיד מדרגת משורת (איור 1G), והוא מוקף העצם. השתמש בדיקה לשבב העצם במרחק מספיק כדי לחשוף כ 1/3 של utricle. מוציאים בזהירות את utricle באמצעות מס '55 מלקחיים (איור 1H). הליך זה יהיה בדרך כלל תוצאה של הסרת האפיתל גג פיגמנט כמו utricle נמשך מן הכנת גרמי. עם זאת, אם utricle מוסר האפיתל עם גג שלם, הגג ניתן להסיר באמצעות מס '55 מלקחיים.
  11. Utricles עבור זיהום adenovirus (או ניסויים הדמיה חי) חייב להיות מוסר במהלך otoconia לנתיחה (לפני ההדבקה).במקרה זה, להשתמש במזרק luer נעילת כי הוא מלא עם התקשורת הניתוח, מצויד במחט קטנה בקוטר (בדרך כלל 26-28 מד). החזק utricle בקצה באמצעות מס '55 (איור 1i מלקחיים). להביא את קצה המחט קרוב utricle עם שיפוע של המחט כלפי מטה. השתמש זרם של התקשורת לנתח לפוצץ את otoconia (איור 1J). לחלופין, otoconia ניתן להסיר על ידי צחצוח אותם באמצעות כלי עפעף (טד פלה, Inc # 113). Utricles שלא הולכים לעבור זיהום adenoviral הם בדרך כלל תרבותי חופשי צף 24 גם צלחות עם תרביות רקמה otoconia שלמים (ראה להלן להסרת otoconia שלאחר התיקון, שהוא קל יותר).
  12. לאחר כל utricles הם גזור, לשנות את התקשורת המבתרים לתרבות התקשורת סטרילית: DMEM F12 (Gibco # 11320) בתוספת 5% FBS ו 50 יח' / מ"ל ​​פניצילין G (Sigma).
  13. Utricles מתורבתים על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2. אם הם תרבויות להיות maintaעומד לבחינה במשך יותר מ 48 שעות, 1/2 של התקשורת תרבות יש לשנות כל שני וחמישי. תרבויות יכול להישמר במשך שבוע או יותר.

2. Adenovirus זיהום של תאים תומכים

חשוב: עבודה עם adenovirus דורש רמת בטיחות ביולוגית 2 (BSL2) נהלים הסמכה. בדוק עם מנהל מוסדי biosafety שלך כדי לקבל הדרכה והכשרה על BSL2 ההליכים.

  1. לנתח utricles לעיל בתקשורת דיסקציה (אין סרום). הסר otoconia לעיל.
  2. כאשר מוכן להדביק, להעביר 1 utricle (תאים שיער למעלה) לבאר כל אחד Nunc מיני מגש (פישר # 12-565-68) המכיל 15 μL סרום ללא DMEM F12 (זה חשוב כי בסרום יכול להשבית את הנגיף) . העברה זו קל יותר עם 1.5 מ"מ microcurette (# 10082-15 מ כלי מדעי בסדר).
  3. שלנו Ad-GFP הוא סרוטיפ 5 עם הגנים E1 ו-E3 ויראלי שנמחקו מקדם האדם CMV נהיגה transgמז (GFP). וירוס זה התקבל וקטור Biolabs (פילדלפיה, פנסילבניה vectorbiolabs.com ). וירוסים המניות ניתנים titers של 1.0-4.0 × 10 10 PFU / מ"ל. הוסף 0.5-2 μl של וירוס המניות זה טוב המכילים utricle (איור 1 ליטר). הסכום בפועל משמש משתנה בהתאם כייל הנגיף ומלאי. אנחנו בדרך כלל להדביק כל utricle עם 1.0-4.0 × 10 7 PFU.
  4. התרבות utricles של הנגיף, המכיל התקשורת ב 37 ° C / 5% CO 2 למשך 2 שעות. לאחר 2 שעות, להעביר את utricles חזרה צלחת 24 גם רקמת התרבות המכיל התקשורת והתרבות עם סרום. התרבות utricles לילה ב 37 ° C / 5% CO 2.
  5. Utricles ניתן להשתמש למחרת לניסויים הדמיה חיים, או שהם יכולים להיות קבוע עבור immunochemistry תא השיער (ראו להלן). נגיפי ביטוי transgene עליות לאורך זמן, כך שאם ביטוי transgene נמוך ב 24 שעות שלאחר זיהום או כךמועיל תאים תרבות נוספים 24 שעות סרום המכיל התקשורת. אם אתה רואה תא רעילות שיער, להפחית את כמות הנגיף בשימוש.

3. קיבוע Utricle, הסרת Otoconia, ו Immunochemistry

  1. בסוף התקופה תרבות, לתקן utricles ב paraformaldehyde 4% גם עבור 3 שעות בחדר זמני (על פלטפורמת נדנדה) או לילה ב 4 ° C. שטפי utricles (3 פעמים, 15 דקות כל אחת) ב 0.1 מ '(1X) pH של Sorensen חיץ פוספט 7.4. פעולות אלה מבוצעות צלחת 24 גם בתרבית רקמה.
  2. הסרת Otoconia: הערה: Otoconia יש להסיר לפני ההדבקה adenovirus (ראה שלב 1.11 לעיל). עם זאת, utricles שאינם להידבק יכול להיות מתורבת וקבוע עם otoconia עדיין שלם. במקרה כזה, בצע את הפעולות המתוארות כאן כדי להסיר את otoconia לאחר קיבוע. בדוק utricles על אפיתל הגג הנותר כל פיגמנט. מוציאים בזהירות את כל האפיתל הגג הנותר באמצעות 2 # 55 וorceps. כדי להסיר את otoconia, להחליף את מאגר פוספט של Sorensen עם 750-1000 μl Cal-Ex במסיר אבנית (פישר # CS510-1D). השאירו Cal-Ex על utricles דקה 1 ו 40 שניות (לא יעלה על 2 דקות). החלף Cal-Ex עם חיץ פוספט 0.1 M של Sorensen ו לשטוף (5 פעמים, 5 דקות כל אחת).
  3. דגירה utricles ב borohydride נתרן (Sigma # 452882, 1% במים deionized) במשך 10 דקות. לשטוף utricles במאגר פוספט 0.1 M של סורנסן (5 פעמים, 5 דקות כל אחת).
  4. Utricles מקום לבלום פתרון (PBS + 2% שור סרום אלבומין + 0.8% עיזים סרום רגיל + 0.4% טריטון X-100) במשך 3 שעות בטמפרטורת החדר על פלטפורמת נדנדה.
  5. הוספת נוגדנים ראשוניים דגירה לילה ב 4 ° C. נגד שרירן 7 א (או פרוטאוס Biosciences # # 25-6790 או MYO7A 138-1 מ התפתחותית מחקרים Hybridoma בנק) בשעה 1:100 בחסימת תוויות פתרון כל התאים שיער. כדי לתייג בנפרד תאים שיער striolar ולא striolar, השתמשנו פעמיים תווית protocoאני עם חד שבטי נגד calmodulin (Sigma C # 3545, 1:150) ו polyclonal נגד calbindin (Chemicon # AB1778, Temecula, קליפורניה, ארה"ב, 1:200). נוגדנים משני (בדרך כלל Alexa נוגדנים פלואוריד משניים מצומדות של Invitrogen, בקרלסבד, קליפורניה, ארה"ב) הם מדולל 1:500 לבלום פתרון מודגרות במשך 4 שעות בחושך בטמפרטורת החדר על פלטפורמת נדנדה.
  6. הר utricles על שקופיות הזכוכית באמצעות Fluoromount-G (דרום ביוטק, בירמינגהם, אל על, ארה"ב).

4. נציג תוצאות

Utricles תרבותי באמצעות שיטה זו שומרים מלא משלים של שני תאים שיער ותאים תומכים (איור 2). תאים שיער בתרבויות בריאים הצגת פרופילים גרעיני עגולים מוקפים אזורים cytoplasmic דקים כי הם שרירן 7 א חיובי (איור 2, לוח למעלה). התאים התומכים (תווית עם אנטי Sox2) הם קטנים יותר וצפופות יותר מאשר תאי שיער (איור 2, לוח נמוך יותר). ADEnovirus מדביק 25-50% מהתאים התומכים ב utricle, ולא בתאי השיער נגועים (איור 2, Ad-GFP לוחות). יש לציין כי titer עבודה אופטימלית של כל adenovirus צריכה להיקבע באופן אמפירי, שכן התא למוות שיער אפשרי אם כייל הנגיף הוא גבוה מדי. בנוסף, אזורים של נזק מכני (שנגרם במהלך דיסקציה) ייקח את כמויות גדולות של הנגיף. אלו אזורים של נזק מכני הם להבחין בקלות בקו רציף של תאים עם רמות גבוהות מאוד של ביטוי ה-GFP ותאי שיער חסר. זאת בניגוד לביטוי GFP מפוזר בתמיכה של התרבות תאים פגומים (תרשים 2).

איור 1
באיור 1. Utricle Dissection. :. שמיעתית בולה (AB) ב ':. בולה שבור באמצעות שתי מלקחיים חסון C: שבלול בוני (RW = חלון עגול, S =. העורק stapedial, C = שבלול, St = משורת) D: להב סכין המנתחים (SB) משמש כדי לנתק את שיאו של שבלול הפסגה לעצב הגולגולת השמיני (8 ה N) ASC = תעלה חצי עגול הקדמי E..: ההכנה נערכת היטב באמצעות מספר # 3 מלקחיים במזלג 1 מוכנס לתוך התעלה חצי עגול הקדמי (ASC) והשני על העצם החיצונית (החצים). מבוך קרומי מוסר באמצעות מלקחיים F:. עם מבוך קרומי הוסר, בתורו הבסיסי של lamina ספירלה גרמית גלוי ליד האזור וו. בדיקה בסדר מוכנס מתחת למדף הזה גרמי להרים את המדף למעלה להסיר אותו (חץ) G:. לאחר הסרת שקיק, utricle (U) גלוי צמוד מיד מדרגת משורת (SF) H:. Utricle (U ) מוסר באמצעות מספר # 55 מלקחיים (חץ) SF = המדרגה משורת אני:.. Utricle עם otoconia (O) הוסר חלקיתד חושיות (SE) אפיתל מתחת לעין J:. Otoconia (O) יוסרו utricle באמצעות זרם של התקשורת מועברים על ידי מזרק מצויד במחט 26-מד. צל של מחט (S) נראה בתחתית התמונה K:. Utricle עם otoconia להסיר אפיתל סנסורי (SE) L גלוי:. זיהום adenoviral: כל utricle (U) ממוקם הפרט היטב מיני מגש. תאים התומכים נגועים adenovirus ידי pipetting וירוס טוב (P = עצה Pipet).

איור 2
איור 2. Adenovirus בתיווך זיהום של תאים תומכים. Utricles נדבקו ביטוי adenovirus המניע של חלבון פלואורסצנטי ירוק (Ad-GFP). המוצגים הם תמונות confocal של שכבת שיער התא שכבת תאים תומכים באותו אזור של utricle 1. תאים שיער מסומנים עם נוגדנים נגד 7 א שרירן(מג'נטה). תאים התומכים מסומנים עם נוגדנים נגד Sox2 (אדום). סכמטי מראה את המבנה של האפיתל חושית utricle ואת המיקומים של תאים שיער (HC) ותאים תומכים (SC). מיקומם של (אופטי) סעיפים confocal המוצגים העליון (U) ונמוך (L) לוחות מסומנים על ידי קווים מקווקווים ב סכמטית. לוחות בפסגה: בתמונות שצולמו confocal ברמה של גרעין התא שיער, Ad-GFP האות מופיע הרווחים בין התאים שיער אינו חופף עם 7 א תא שיער סמן שרירן. לוחות תחתון: בקטעים confocal ברמה של גרעין התא תמיכה, Ad-GFP האות colocalizes עם סמן את התא תמיכה סוקס-2. Ad-GFP תוצאות זיהום בביטוי GFP בתמיכה תאים בלבד, ולא בתאי השיער נגועים.

איור 3
איור 3. זיהום adenoviral לא לגרום למוות של תאים שיער או תאים תומכים. אוטricles נדבקו GFP-Ad ב 4 × 10 8 PFU / מ"ל. Utricles תויגו עם נוגדנים כנגד 7 א שרירן (תא סמן שיער) ו Sox2 (תמיכה סמן התא). תא שיער ספירת תאים התומכים היו שווים עבור utricles בקרה Ad-GFP utricles נגועים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

תאים שיער חושי רגישים המוות שנגרמו על ידי מגוון רחב של לחצים, כולל הזדקנות, טראומה רעש, חשיפה לתרופות ototoxic, כולל אנטיביוטיקה aminoglycoside ו ציספלטין סוכן antineoplastic. אצל יונקים תאים שיער תוצאות המוות אובדן שמיעה קבוע ו / או הפרעות שיווי משקל. במערכות מודל במבחנה הם כלים קריטיים עבור מחקרים שמטרתם לקבוע את המנגנונים המולקולריים שבבסיס הסלולר הנייד המוות שיער, כמו גם אלה נועדה למנוע או היפוך התא למוות שיער . שלא כמו תאים שיער שבלול של יונקים בוגרים, תאים שיער של utricle לשרוד גם בתרבות. שיער Utricle תאים רגישים למוות מחשיפה של סמי מרפא אותם כי הם רעילים לתאים שיער שבלול, ואת המנגנונים העומדים בבסיס הסלולר שיער ototoxic התא מוות והישרדות דומים של תאים שיער הן utricular ו שבלול 12-18. יתר על כן, כאשר הנתונים שהתקבלו במערכת מודל utricle הם teSTED in vivo, הכנת utricle הוכיחה להיות מנבא אמין של הישרדות שיער התא ומוות שבלול בוגרת 12, 18-21. הכנה utricle העכבר גם מאפשר לנו לבחון את ההשפעות של חלבונים ספציפיים על ידי שימוש utricles מבעלי חיים מהונדס ו בנוקאאוט.

האותות כי לתווך הישרדות ומוות של תאים שיער חושית תחת לחץ הם הבינו היטב. עם זאת, הראיות המתעוררים עולה כי סוגי תאים אחרים באוזן הפנימית עשויה למלא תפקידים חשובים בקביעה האם תאים שיער תחת הלחץ בסופו של דבר לחיות או למות 11, 22, 23. מערכת מודל utricle ניתן להשתמש כדי לבחון אלו קריטיים תאים תאים אינטראקציות האפיתל בוגרת חושי היונקים. זיהום adenoviral מספק שיטה של ​​שינוי ביטוי גנים בתאים התומכים, ובכך להקל על מחקרים של התפקיד (ים) של תאים תומכים בהישרדות שיער התא, מוות, phagocytosis, והתחדשות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

אין ניגוד עניינים הצהיר.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי המחלקה למחקר המיפוי של המכון הלאומי לחירשות והפרעות תקשורת אחרות. תמיכה נוספת ניתן על ידי NIDCD 5R01 DC007613.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Medium 199 GIBCO, by Life Technologies 12350
DMEM/F12 GIBCO, by Life Technologies 11320
Fine forceps (#55) Fine Science Tools 11255-20
Fine forceps (#5) Fine Science Tools 11252-30
Forceps (#3) Fine Science Tools 11231-30
Penicillin G Sigma-Aldrich P3032
Fetal bovine serum Invitrogen 10082-139
Nunc mini-tray Fisher Scientific 12-565-68
Adenovirus-GFP Vector Biolabs 1060*
Cal-Ex decalcifier Fisher Scientific CS510-1D
sodium borohydride Sigma-Aldrich 452882
Anti-Myosin 7a (polyclonal) Proteus Biosciences 25-6790
Anti-Myosin 7a (monoclonal) Developmental Studies Hybridoma Bank MYO7A 138-1
Anti-Calmodulin Sigma-Aldrich C 3545
Anti-Calbindin Chemicon International AB1778
Fluoromount G SouthernBiotech 0100-01
Table 1. Reagents and tools used in utricle culture and adenovirus infection
* Note: Ad-GFP is normally provided by Vector Biolabs at a stock titer of 1x1010 PFU/ml. We requested a custom amplification in order to provide the stock virus at a titer of 1.2×1011 PFU/ml.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Cunningham, L. L. The adult mouse utricle as an in vitro preparation for studies of ototoxic-drug-induced sensory hair cell death. Brain Res. (2006).
  2. Schmitt, N. C., Rubel, E. W., Nathanson, N. M. Cisplatin-induced hair cell death requires STAT1 and is attenuated by epigallocatechin gallate. J. Neurosci. 29, 3843-3851 (2009).
  3. Ou, H. C. Identification of FDA-approved drugs and bioactives that protect hair cells in the zebrafish (Danio rerio) lateral line and mouse (Mus musculus) utricle. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 10, 191-203 (2009).
  4. Chiu, L. L. Using the zebrafish lateral line to screen for ototoxicity. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 9, 178-190 (2008).
  5. Sugahara, K., Rubel, E. W., Cunningham, L. L. JNK signaling in neomycin-induced vestibular hair cell death. Hear Res. 221-221 (2006).
  6. Matsui, J. I., Cotanche, D. A. Sensory hair cell death and regeneration: two halves of the same equation. Curr. Opin. Otolaryngol. Head Neck Surg. 12, 418-4125 (2004).
  7. Ryals, B. M., Rubel, E. W. Hair cell regeneration after acoustic trauma in adult Coturnix quail. Science. 240, 1774-176 (1988).
  8. Corwin, J. T., Cotanche, D. A. Regeneration of sensory hair cells after acoustic trauma. Science. 240, 1772-174 (1988).
  9. Shang, J. Supporting cell division is not required for regeneration of auditory hair cells after ototoxic injury in vitro. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 11, 203-222 (2010).
  10. Stone, J. S., Cotanche, D. A. Hair cell regeneration in the avian auditory epithelium. Int. J. Dev. Biol. 51, 6-7 (2007).
  11. Lahne, M., Gale, J. E. Damage-induced activation of ERK1/2 in cochlear supporting cells is a hair cell death-promoting signal that depends on extracellular ATP and calcium. J. Neurosci. 28, 4918-4928 (2008).
  12. Cunningham, L. L., Cheng, A. G., Rubel, E. W. Caspase Activation in Hair Cells of the Mouse Utricle Exposed to Neomycin. Journal of Neuroscience. 22, 8532-8540 (2002).
  13. Matsui, J. I. Caspase inhibitors promote vestibular hair cell survival and function after aminoglycoside treatment in vivo. J. Neurosci. 23, 6111-6122 (2003).
  14. Matsui, J. I., Ogilvie, J. M., Warchol, M. E. Inhibition of caspases prevents ototoxic and ongoing hair cell death. J. Neurosci. 22, 1218-1227 (2002).
  15. Nakagawa, T. A novel technique for inducing local inner ear damage. Hear Res. 176, 1-2 (2003).
  16. Forge, A., Li, L. Apoptotic death of hair cells in mammalian vestibular sensory epithelia. Hear Res. 139, 1-2 (2000).
  17. Liu, W. Caspase inhibitors prevent cisplatin-induced apoptosis of auditory sensory cells. Neuroreport. 9, 2609-2614 (1998).
  18. Taleb, M. Hsp70 inhibits aminoglycoside-induced hearing loss and cochlear hair cell death. Cell Stress Chaperones. 14, 427-437 (2009).
  19. Taleb, M. Hsp70 inhibits aminoglycoside-induced hair cell death and is necessary for the protective effect of heat shock. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 9, 277-289 (2008).
  20. Francis, S. P. Celastrol Inhibits Aminoglycoside-Induced Ototoxicity via Heat Shock Protein 32 (HSP32). Cell Death and Disease. (2011).
  21. Wang, J. Caspase inhibitors, but not c-Jun NH2-terminal kinase inhibitor treatment, prevent cisplatin-induced hearing loss. Cancer Res. 64, 9217-9224 (2004).
  22. Bird, J. E. Supporting cells eliminate dying sensory hair cells to maintain epithelial integrity in the avian inner ear. J. Neurosci. 30, 12545-12556 (2010).
  23. Sato, E. Expression of fractalkine receptor CX3CR1 on cochlear macrophages influences survival of hair cells following ototoxic injury. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 11, 223-234 (2010).

Erratum

Formal Correction: Erratum: Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection
Posted by JoVE Editors on 04/17/2012. Citeable Link.

A correction was made to Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection. The incorrect version of figure 2 was published, the middle initials of the authors were omitted, and the acknowledgements were updated.

Figure 2. Adenovirus-mediated infection of supporting cells was corrected to include a schematic showing the structure of the utricle sensory epithelium. The incorrect figure was inadvertently published. This error does not change the scientific conclusions of the article in any way. The editors apologize for this error.

The acknowledgements were updated to:

The authors are grateful to Dr. Shimon P. Francis for generating the confocal micrographs.

This work was supported by the Division of Intramural Research at the National Institute on Deafness and Other Communication Disorders. Additional support was provided by NIDCD 5R01 DC007613.

From:

This work was supported by the Division of Intramural Research at the National Institute on Deafness and Other Communication Disorders. Additional support was provided by NIDCD 5R01 DC007613.

The authors were updated to:

Carlene S. Brandon, Christina Voelkel-Johnson, Lindsey A. May, Lisa L. Cunningham

From:

Carlene Brandon, Christina Voelkel-Johnson, Lindsey May, Lisa Cunningham

דיסקציה של Utricle עכבר מבוגר adenovirus בתיווך זיהום המשנה תאים
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Brandon, C. S., Voelkel-Johnson, C., May, L. A., Cunningham, L. L. Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection. J. Vis. Exp. (61), e3734, doi:10.3791/3734 (2012).More

Brandon, C. S., Voelkel-Johnson, C., May, L. A., Cunningham, L. L. Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection. J. Vis. Exp. (61), e3734, doi:10.3791/3734 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter