एक सरल तकनीक के लिए Published: June 12, 2012 doi: 10.3791/3765

DOI

Automatic Translation

• English (Original)
• العربية (Arabic)
• 中文 (Chinese)
• dansk (Danish)
• Nederlands (Dutch)
• français (French)
• Deutsch (German)
• עברית (Hebrew)
• हिंदी (Hindi)
• italiano (Italian)
• 日本語 (Japanese)
• 한국어 (Korean)
• norsk (Norwegian)
• português (Portugese)
• русский (Russian)
• español (Spanish)
• svenska (Swedish)
• Türkçe (Turkish)

Mohit Parekh¹, Stefano Ferrari¹, Enzo Di Iorio¹, Vanessa Barbaro¹, Davide Camposampiero¹, Marianthi Karali², Diego Ponzin¹, Gianni Salvalaio¹

¹Fondazione Banca Degli Occhi del Veneto O.N.L.U.S., ²Telethon Institute for Genetics & Medicine (T.I.G.E.M.)

Summary

कागज उत्पाद कॉर्निया के लिए एक सरल तकनीक और मानव शव दाताओं की आंख दुनिया से रेटिना ऊतकों अंतड़ी निकालना वर्णन करता है. तकनीक यहाँ वर्णित उत्पाद अच्छी गुणवत्ता प्रत्यारोपण, शल्य चिकित्सा या अनुसंधान प्रयोजनों के लिए आंख का दुनिया के अन्य ऊतकों को नुकसान पहुँचाए बिना इस्तेमाल किया जा ऊतकों में मदद करेगा.

Protocol

1. कॉर्निया की स्वस्थानी छांटना में नेत्र ग्लोब से

1. लामिना का उपयोग करने से पहले लगभग 15 मिनट हवा का प्रवाह कैबिनेट पर स्विच करें. लामिना का प्रवाह 70% isopropyl शराब का उपयोग हुड साफ. शल्य टोपी और मुखौटा के रूप में व्यक्तिगत सुरक्षात्मक कपड़ों पर डाल दिया. हाथ और forearms रगडें और एक बाँझ तौलिया का उपयोग कर सूखी. बाँझ दस्ताने और गाउन या सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग कर आस्तीन पहनो.
2. Aseptically एक बाँझ साधन ट्रे रखकर बाँझ क्षेत्र सेट करें. सत्यापित करें कि उपकरणों बाँझ कर रहे हैं. बाँझ उपकरणों पैक खोलें और बाँझ कोई संदूषण से परहेज क्षेत्र पर फ्लिप.
3. स्थिति (आँख जार) बोतलों आँख ग्लोब युक्त इतना है कि वे उपयोग में आसानी के लिए बाँझ क्षेत्र के किनारे करने के लिए आसन्न हैं के साथ सभी बाँझ सामग्री और उपकरणों (तालिका 2).
4. पहले से तैयार संरक्षण / भंडारण मध्यम के साथ बोतलों लेबल के रूप में 3 तालिका में संकेत दिया है और जगहलामिना हवा प्रवाह मैं - पीवीपी के साथ हुड (आयोडीन polyvinylpyrrolidone), सोडियम thiosulphate के और एक बाँझ नमकीन घोल की सतह पर हूँ पीबीएस (फॉस्फेट बफर खारा).
5. नेत्र ऊतकों और समाधान सामान्य कमरे के तापमान तक पहुँचने के लिए के रूप में वे रेफ्रिजरेटर में 4 डिग्री सेल्सियस पर संरक्षित कर रहे हैं की अनुमति दें दोहराया / वार्मिंग ठंडा चक्र से बचें. समाधान के lids और भीतर की ओर से आंख जार ऊपर की तरफ उनके संबंधित जार करने के लिए अगले का सामना रखो.
6. आँख बाँझ संदंश का उपयोग जार से gauzes और स्पंज निकालें. बाँझ मैं पीवीपी 0.5% में 2 मिनट नेत्र ग्लोब संक्रामक रोगाणुओं से मुक्त करना के लिए दुनिया भर में विसर्जित कर दिया. बाँझ ट्रे के ढक्कन पर दो संदंश बाँझ क्षेत्र से बाहर रखें. सोडियम thiosulphate 0.1% में 1 बाँझ संदंश की एक और जोड़ी का उपयोग मिनट के लिए दुनिया भर में स्थानांतरण. वही संदंश का प्रयोग, बाँझ नमकीन घोल (पीबीएस) युक्त बोतल के लिए दुनिया हस्तांतरण और इसे छोड़ जब तक यह संचालित है. टी से अन्य नेत्र विश्व के लिए एक ही प्रक्रिया दोहराएँवह एक ही दाता है.
7. लामिना हवा प्रवाह हुड के नीचे, खुला कॉर्निया से बाँझ धुंध (पट्टियों) कॉर्निया जा रही है और लगभग 5 मिमी श्वेतपटल का उपयोग दुनिया लपेटो. आँख बल्ब बस पर्याप्त दबाव बनाए रखने के हाथ में आयोजित किया जा सकता है. ऊतक संपूर्ण सर्जरी के दौरान नम रखा जाना चाहिए.
8. संदंश साथ कैंची के साथ उपयोग किया जाता है कंजाक्तिवा के अंतिम अवशेष को दूर. प्रयुक्त उपकरणों ऊपर आपरेशन के लिए अन्य उपकरणों से अलग रखें. एक स्केलपेल ब्लेड का प्रयोग के किनारी क्षेत्र से 3-4 मिमी की एक scleral चीरा प्रदर्शन, 360 ° से तो चीरा विस्तार, लिए अंतर्निहित uveal ऊतक भेधना से बचने या सामान्य कॉर्निया की वक्रता किसी भी विकृति का कारण. चार बड़े चार छोटे - छोटे कांच का शरीर के स्राव से बचने के अंतराल छोड़ने चीरों कटौती. सभी चार अंतराल के किसी भी अन्य ऊतकों की नहीं हटाने सुनिश्चित करने काट रहे हैं.
9. छोटे scleral सजीले टुकड़े की उपस्थिति काटने बाधा सकता है, तो COMP करने के लिए सुनिश्चित करें किlete microsurgery कैंची के साथ scleral छांटना. इस आपरेशन रंजित रेटिना, और कांच का शरीर को नुकसान पहुँचाए बिना किया जाना चाहिए.
10. का चीरा निरीक्षण करने के लिए सुनिश्चित करें के लिए यह पूरा हो गया है. यदि चीरा कॉर्निया के साथ पत्राचार में इस बिंदु पर ही सिलिअरी शरीर को सही ढंग से corneo scleral रिम का पालन करता है प्रदर्शन किया गया है.
11. लिपटे नेत्र दुनिया बाँझ क्षेत्र के केंद्र के पास नीचे सेट. कॉर्निया संदंश का उपयोग करने के लिए scleral रिम स्थिर और हाथ काटना के लिए इस्तेमाल किया सिलिअरी शरीर रंजित नीचे और बटन corneo-scleral से दूर खींच पकड़ हटाने पूरा.
12. धीरे बटन corneo-scleral से किसी भी शेष adhesions अलग. न एक तरीका है कि पार कॉर्निया तनाव का कारण बन सकता है और न ही इसे पीछे छोड़ पूर्वकाल कक्ष पर नीचे की अनुमति corneo-scleral रिम खींच.
13. कॉर्निया के endothelial सेल घनत्व एक hypotonic समाधान और कोशिका मृत्यु की जाँच की है एक Tryp का उपयोग कर का उपयोग कर जाँच की हैलगभग 1 मिनट और कोशिकाओं के लिए एक नीले रंग धुंधला तो एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के तहत गिना जाता है और कोशिकाओं / ² मिमी के रूप में मापा. पूर्वकाल कक्ष ढक्कन का सामना करते हुए पीछे पेट्री प्लेट के नीचे का सामना करना चाहिए. endothelial सेल घनत्व मैन्युअल रूप से गिना जा सकता है उद्देश्य के में 100X बढ़ाई के तहत एक ग्रिड का उपयोग कर. कम से कम स्वीकार किए जाते हैं प्रत्यारोपण के लिए इटली में कोशिकाओं की संख्या 2200 endothelial कोशिकाओं / ² मिमी है.
14. Corneo-scleral रिम पहले से तैयार corneal भंडारण मध्यम आर टी (कमरे के तापमान) के रूप में 3 तालिका में दिखाया में संरक्षित करने के लिए एक corneal पंजा का उपयोग स्थानांतरण.
15. एक प्राकृतिक क्रिस्टलीय लेंस के लिए पीछे कक्ष जांच करते हैं. यदि श्वेतपटल तैयार है, दुनिया से uvea के सभी अवशेषों और कांच का हास्य हटा दें. ध्यान से खोलना और उसके संबंधित नेत्र जार शेष पीछे खंड वापसी, सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग कर. अन्य नए उपकरणों का उपयोग करते हुए दुनिया के लिए प्रक्रिया को दोहराएँ. कॉर्निया बुद्धि को ठीक करेंघंटे corneal पंजा और 31 में भंडारण मीडिया (अंग संस्कृति) के तहत संरक्षित डिग्री सेल्सियस excised कॉर्निया के रूप में चित्र 1a में दिखाया गया, तो keratoplasty या अनुसंधान के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
16. उपयुक्त बेकार डिब्बे में अनावश्यक सामग्री और जैव खतरनाक अपशिष्ट निपटान. कार्य क्षेत्र को साफ 70% isopropyl शराब स्प्रे का उपयोग कर एक बार काम पूरा हो गया है.
17. यदि हां, तो 28 दिनों के बाद कॉर्निया सभी मूल्यांकन मापदंडों का कहना है [के रूप में आकारिकी, सेल गिनती, पारदर्शिता, मोटाई और सूक्ष्म जीव विज्ञान के परीक्षण बैक्टीरियल और Bactec 9240 (Becton डिकिंसन, मिलान, इटली) साधन का उपयोग कवक], यह तब तक ले जाया जा सकता है अस्पतालों परिवहन माध्यम का उपयोग कर तालिका 4 में दिखाया गया. कॉर्निया और हटाया जाना चाहिए लामिना का हवा का प्रवाह कैबिनेट के तहत मध्यम परिवहन भंडारण से रखा.
18. के रूप में, भंडारण के दौरान, कॉर्निया प्रत्यारोपण के लिए आवश्यक अपने सामान्य आकार से गहरा हो जाता है, नेत्र बैंकों डे - सूजन एजेंटों का उपयोग करने के लिए मोटाई कम. हम6% dextran T500 उपयोग करने के लिए परिवहन माध्यम में सामान्य आकार के कॉर्निया वापस पाने के लिए. हालांकि 4-8% dextran T500 इस्तेमाल किया जा सकता है, 6% हमारे लिए सबसे अच्छी सेवा की है. इस सर्जन कॉर्निया प्रत्यारोपण के रूप में जल्द ही के रूप में वे इसे प्राप्त करने के लिए यह आसान बनाता है.

2. रेटिना की ओकुलर ग्लोब से कॉर्निया Excising करने के बाद अंतड़ी निकालना

1. छांटना के बाद, कॉर्निया प्रत्यारोपण या अनुसंधान के लिए अपने आकारिकी और endothelial सेल घनत्व के आधार पर चुना जाता है और 31 में भंडारण या मध्यम संरक्षण में रखा डिग्री सेल्सियस नेत्र दुनिया के शेष फिर श्वेतपटल अलगाव के रूप में शल्य चिकित्सा प्रयोजनों के लिए उपयोग के लिए आगे कार्रवाई की है, अनुसंधान के लिए रेटिना आदि
2. रेटिना छांटना के पूर्व, सुनिश्चित करें कि नेत्र दुनिया बरकरार है और केवल श्वेतपटल के एक भाग के साथ कॉर्निया हटा दिया जाता है. अगर पतला कांच का शरीर बाहर स्रावित है यह मुश्किल हो जाता है के लिए एक रेटिना ऊतक निकालने के लिए.
3. यदि दाता नीचे है उम्र के 65 साल, श्वेतपटल हैसीरम वैज्ञानिक परीक्षण के बाद शल्य चिकित्सा प्रयोजनों के लिए में बाँझ पीबीएस के तहत संरक्षित है. इस मामले में, श्वेतपटल कटौती नहीं केवल कांच का शरीर निकाल दिया जाता है और पूरे श्वेतपटल संरक्षित है.
4. रेटिना छांटना के लिए, एक छोटे या ऑप्टिक तंत्रिका का उपयोग कर बाँझ संदंश और कैंची की ओर बढ़ श्वेतपटल की corneal ओर से कट चीरा के साथ शुरू करते हैं. संदंश का उपयोग श्वेतपटल का हिस्सा पकड़ो और ऑप्टिक तंत्रिका भाग कांच का शरीर को नुकसान से बचने के द्वारा हिस्सा काटने की ओर सीधे कैंची से काट.
5. Choroidal सजीले टुकड़े में श्वेतपटल से अलग किया जाना चाहिए के रूप में वे एक साथ फंस रहे हैं. पूरे श्वेतपटल कटौती रंजित ऊतक का पर्दाफाश करने के लिए. एक बार श्वेतपटल पूरी तरह से कट जाता है, ऑप्टिक तंत्रिका के पास काटने से कांच का शरीर के बाकी के साथ के के श्वेतपटल अलग. कांच का रंजित साथ कवर शरीर के एक पूरे गेंद दिखाई के रूप में चित्रा 2 में दिखाया जाएगा.
6. दो बाँझ संदंश का प्रयोग रंजित परत धीरे दूर यह एक साथ उठासंदंश की जोड़ी और अन्य के साथ हटाने. वैकल्पिक रूप से, रंजित परत कैंची का उपयोग कर हटाया जा सकता है, लेकिन इस आदर्श के रूप में यह नुकसान रेटिना के कारण हो सकता है बचा जाना चाहिए. रंजित परत आंशिक रूप से निकालें और इसे काट निकालने की सुविधा.
7. एक बार रंजित परत हटा दिया जाता है, रेटिना की एक पारदर्शी परत स्पष्ट रूप से देखा जा के रूप में चित्रा 2b में दिखाया जाएगा. रंजित परत एक इंटीरियर Bruch झिल्ली जो भी हटाया जा सकता है लेकिन यह मुश्किल है कि यह एक नग्न आंखों के साथ की पहचान.
8. इसी तरह, दो संदंश का उपयोग करने के लिए रेटिना परत को हटाने जैसा चित्र 2c में दिखाया गया है. यह आसान है अगर ऑप्टिक तंत्रिका के पास excised रेटिना की उच्च राशि को अलग. आँख की सभी परतों अब 2d चित्र में दिखाया के रूप में देखा जा सकता है.
9. एक बार रेटिना ऊतक निकाल दिया गया है, यह विभिन्न प्रयोजनों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और इसलिए बाद के चरणों और शर्तों के संरक्षण के लिए प्रयोग किया जाता के अनुसार भिन्न हो सकती है. उदाहरण के लिए,रेटिना ऊतक आरएनए स्थिरीकरण अभिकर्मकों (ऐसे RNAlater) या lysis बफर (शाही सेना या डीएनए निष्कर्षण के लिए), / dispase trypsin (कोशिकाओं के अलगाव के लिए), फिक्सिंग के समाधान (पूर्व आयल या अक्टूबर में ऊतकों के लिए एम्बेड करने के लिए है युक्त ट्यूब में रखा जा सकता है ) immunohistochemistry.
10. सभी क्षेत्र में काम कर रहे साफ़ और 70% isopropyl शराब स्प्रे का उपयोग कर क्षेत्र को साफ.

3. प्रतिनिधि परिणाम

रिम corneo-scleral के रूप में चित्र 1a में देखा scleral रिम और endothelial आकारिकी, कॉर्निया के इस तरह आम तौर पर मर्मज्ञ स्वच्छपटलदर्शी के लिए इस्तेमाल के लिए आवश्यक राशि के साथ एक अच्छी तरह से excised कॉर्निया है. यदि excised कॉर्निया के पूर्वकाल stroma के अस्पष्टता की उपस्थिति के साथ क्षतिग्रस्त है, कॉर्निया endothelial keratoplasty / पीछे lamellar keratoplasty (stroma के एक भाग के साथ अन्तःचूचुक) के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. जबकि, अगर endothelial परत क्षतिग्रस्त है या यदि endothelial सेल घनत्व <2200 कोशिकाओं / ² मिमी (alian) मानक, कॉर्निया पूर्वकाल - तहदार स्वच्छपटलदर्शी (पूर्वकाल stroma के एक भाग के साथ उपकला) के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. यदि endothelial सेल गिनती की आवश्यकता की तुलना में कम है, कॉर्निया में पूर्वकाल तहदार स्वच्छपटलदर्शी या अनुसंधान के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, जबकि यदि कॉर्निया पूरी तरह से क्षतिग्रस्त है, यह अनुसंधान के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है के रूप में चित्रा 1b, 3b और 3c या त्याग में दिखाया गया है. क्षति ऊतक छेड़छाड़ का एक कारण हो सकता है, पूर्व मोतियाबिंद stromal या descemet endothelial निशान प्रमुख सर्जरी, रोगी का जीवन आदि के दौरान शारीरिक चोट का विकास इसलिए, यह आवश्यक हो जाता है ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के तहत भट्ठा दीपक और फिर साथ के लिए हर ऊतक की जांच ठीक निशान / / सिलवटों टुकड़ी. कॉर्निया आमतौर पर अंग संस्कृति (लगभग 31 डिग्री सेल्सियस) आमतौर पर यूरोपीय देशों या hypothermic स्थितियों में इस्तेमाल किया (लगभग 4 डिग्री सेल्सियस) आम तौर पर संयुक्त राज्य अमेरिका में इस्तेमाल किया. के रूप में दो अलग अलग परिस्थितियों में संरक्षित है हम अंग संस्कृति का उपयोग के रूप में यह बांध को पुनर्जीवित करने में मदद करता हैवृद्ध उपकला कोशिकाओं, फिर - फिर ज़िदा करना एक उच्च पोस्टमार्टम के समय के साथ endothelial सेल की जांच करने के लिए, 4 सप्ताह की भंडारण अवधि, जो एक शल्य चिकित्सा की योजना के लिए पर्याप्त खिड़की देता कॉर्निया आदि सूक्ष्मजीवविज्ञानी (जीवाणु और कवक) और सीरम वैज्ञानिक परीक्षण के लिए पर्याप्त समय देता है 7 दिनों के लिए परिवहन मध्यम में अच्छी तरह से संरक्षित किया जा सकता है.

श्वेतपटल सभी choroidal सजीले टुकड़े के कोमल हटाने सुनिश्चित करने के भाग के द्वारा भाग में कटौती कर सकता है. कांच का तरल जब ऑप्टिक तंत्रिका, रंजित, या रेटिना तेजी से कट जाता है के रूप में चित्रा 4 में दिखाया उगलना कर सकते हैं. Retinas यदि शाही सेना के विश्लेषण के लिए excised RNAlater में संरक्षित किया जाना चाहिए के रूप में जल्दी के रूप में ऊतकों excised कर रहे हैं. आमतौर पर रंजित और रेटिना परत के 1x1 सेमी excised है और 4 में 24 घंटे के लिए यह RNAlater में रखने के बाद ° ° तक ताजा Eppendorf ट्यूब (सुरक्षित लॉक ट्यूबों, 2 मिलीलीटर) में सी शुष्क साथ प्रयोग किया जाता है या भेज दिया सी -80 के तहत संरक्षित है बर्फ. रेटिना ऊतक ऑप्टिक तंत्रिका निकट दो संदंश का उपयोग कर excised परितारिका से दूर किया जाना चाहिएया सिलिअरी के लिए अन्य pigmented संरचनाओं के साथ संक्रमण से बचने और संरक्षण कंटेनर को हस्तांतरित किया जाना चाहिए आरएनए के रूप में तुरंत मार्जिन अस्थिर हो जाता है, जबकि रेटिना को पुन: प्राप्त करने.

चित्रा 1: एक अच्छा और एक खराब गुणवत्ता के कॉर्निया के बीच तुलना) एक अच्छी तरह से excised कॉर्निया. आमतौर पर इस तरह के एक कॉर्निया से 4 सप्ताह के लिए अंग संस्कृति के तहत संरक्षित है. सूक्ष्मजीवविज्ञानी (Bactec 9240 साधन का प्रयोग करके) और रूपात्मक परीक्षा (सेल मृत्यु दर निर्धारण के लिए trypan नीले रंग के साथ कोशिकाओं को धुंधला हो जाना और 100X बढ़ाई के साथ एक ऑप्टिकल खुर्दबीन के नीचे कोशिकाओं देख) अस्पताल (चित्र 3a) के लिए परिवहन से पहले किया जाता है, ख) एक तुला कॉर्निया है, जो अंततः भ्रष्टाचार उच्च descemet परतों और उच्च endothelial सेल एक भट्ठा दीपक खुर्दबीन के उपयोग की जांच की क्षति के लिए कारण अस्वीकृति के लिए होता है. आमतौर पर इस तरह के एक कॉर्निया Res के लिए प्रयोग किया जाता हैearch या खारिज कर दिया है.

चित्रा 2 विधि रेटिना ऊतक के एक सटीक काटना सुनिश्चित करने के लिए किया है.) नेत्र 95 घुमावदार मिमी या कुंद अंत बाँझ कैंची और 100 मिमी 0.70 मिमी दांत बाँझ संदंश द्वारा शासित 11X2 के साथ 24mm ब्लेड का उपयोग कर दुनिया से श्वेतपटल विदारक. श्वेतपटल संदंश यह सीधे ऑप्टिक तंत्रिका की ओर कैंची का उपयोग काटने के साथ एक तरफ पकड़ से कटौती की जानी चाहिए. रंजित परत अब आसानी से देखा जा, ख) दो 100 मिमी 0.70 मिमी बाँझ संदंश दांत द्वारा शासित 11X2 का प्रयोग, रंजित इसे दो हिस्सों में बाँटने के द्वारा हटा दिया जाता है, जो अंतर्निहित पारदर्शी रेटिना परत से पता चलता है, ग) पारदर्शी रेटिना परत के पास बहुत ध्यान से excised है कांच का तरल पदार्थ का उपयोग कर एक ही संदंश के उत्सर्जन के बिना ऑप्टिक तंत्रिका. दोनों संदंश रेटिना के प्रत्येक पक्ष को पकड़ और ऊतक धीरे startin हटाया जाना चाहिएजी ऑप्टिक तंत्रिका के पास कॉर्निया की ओर बढ़ रेटिना ऊतक का एक अच्छा राशि प्राप्त करने के. ऊतक विभिन्न आकारों में काटा जा सकता है और विश्लेषण प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया घ) आंख की कॉर्निया को हटाने के बाद विभिन्न परतों के इस आंकड़े में देखा जा सकता है. रंजित शरीर पहले पीछा रेटिना द्वारा आंख के अन्य भागों को नुकसान पहुँचाए बिना हटा दिया जाता है.

चित्रा 3. सेल घनत्व और एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के 100X बढ़ाई के नीचे देखा आकारिकी की विभिन्न प्रकार की तुलना में) अच्छा endothelial सेल (> 2200 कोशिकाओं / ² मिमी) घनत्व और आकारिकी (कम बहुरूपता, कम अध: पतन, कोई अपविकास और 0%. एक कॉर्निया प्रत्यारोपण के लिए उपयुक्त है में) मृत्यु दर,) ख गरीब endothelial सेल घनत्व (लगभग 1200 - 1400 कोशिकाओं / ² मिमी) और आकारिकी (बहुत उच्च बहुरूपता और DEGENकक्षों की लगभग 30-40% समग्र मृत्यु दर के साथ eration) trypan नीले रंग धुंधला के बाद मनाया जाता है, ग) endothelial कोशिकाओं का एक हिस्सा endothelial पत्रक के टुकड़ी के कारण क्षतिग्रस्त हो रहे हैं जबकि नेत्र विश्व से कॉर्निया को पुन: प्राप्त करने. इस क्षेत्र दाग में trypan नीले द्वारा कोशिकाओं की मृत्यु देख द्वारा की पुष्टि की है, घ) descemet का परतों झुका, कॉर्निया तनाव पार बनाने, उपकरणों छांटना के समय में तीव्रता आदि का उपयोग करके कॉर्निया की छेड़छाड़ की वजह से गठन कर रहे हैं. आंकड़ा मोटी विकसित चिकित्सकजनित और कॉर्निया की ऑप्टिक क्षेत्र परिधि के बीच पाया सिलवटों से पता चलता है.

रंजित और रेटिना के ऊतकों चित्रा 4. हर्जाना जबकि कॉर्निया अंततः excising कांच का तरल पदार्थ का उत्सर्जन होता है. रेटिना कांच का शरीर में फंसा हो जाता है यह मुश्किल उत्पाद शुल्क के लिए एक अच्छी गुणवत्ता ऊतक वाई बनानेसंदूषण thout.

तालिका 1. 2009 और 2010 के दौरान Fondazione बैंका मानव नेत्र ग्लोब के प्रदर्शन का उपयोग गतिविधियों की सीमा का सारांश (वेनेज़िया, इटली) Occhi Degli. ऊतकों का लगभग 60% प्रत्यारोपण के लिए इस्तेमाल किया गया, इस प्रकार वैज्ञानिक और चिकित्सा अनुसंधान के लिए आंख का ग्लोब के एक उच्च संख्या (लगभग 40%) छोड़ने.

अनुपूरक चित्रा 1 मानव ⁵ आँख के एनाटॉमी. मानव आँख के विभिन्न भागों में इस आंकड़े में संकेत कर रहे हैं, ऊतकों की सही स्थिति का पालन करने के लिए इस्तेमाल किया.

Discussion

दोनों, सही छांटना और कॉर्निया और रेटिना के ऊतकों के समुचित संरक्षण endothelial क्षति या descemet सिलवटों की उच्च संख्या के रूप में छोटे दोष भ्रष्टाचार विफलता या तापमान परिवर्तन जबकि कॉर्निया की mishandling के रेटिना के ऊतकों की अखंडता समझौता कर सकते हैं करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं के रूप में महत्वपूर्ण हैं. इस पत्र के उद्देश्य को दिखाने के लिए कैसे कॉर्निया और रेटिना के ऊतकों को बेहतर अलग किया जा सकता है कि प्रत्यारोपण या अनुसंधान प्रयोजनों के लिए उनके उपयोग में समझौता हो सकता है नुकसान या परिवर्तन उत्प्रेरण के बिना है. आवश्यक न्यूनतम सेल घनत्व (> 2200 कोशिकाओं / ² मिमी), सेल आकार के रूप में अच्छा आकृति विज्ञान, संरचना, कहनेवाला सीमाओं और dystrophy का अच्छा और उचित मोटाई कॉर्निया की पारदर्शिता के साथ साथ अभाव की कम अध: पतन पहचान है जो एक ऊतक के लिए उपयुक्त बना रहे हैं प्रत्यारोपण. यदि स्केलपेल ब्लेड मोटे तौर पर प्रयोग किया जाता है या अन्य उपकरणों को तीव्रता से उपयोग किया जाता है, यह केवल कॉर्निया नुकसान नहीं करता है, लेकिन यह भी कांच का शरीर है जो furt बनाता हैअन्य ऊतकों की उसे छांटना और अधिक मुश्किल (चित्रा 4). रेटिना एक पारदर्शी ऊतकों और इसलिए की पहचान मुश्किल है अगर यह कांच का तरल के साथ जारी है, यह सामान्य रूप से रेटिना और अधिक जटिल ऊतक के छांटना पड़ता है. यदि कांच का शरीर के साथ से excised, रेटिना ऊतक या निकाले शाही सेना की गुणवत्ता बहुत गरीब अन्य नेत्र भागों के साथ संदूषण की वजह से हो जाएगा. इस प्रकार, उत्पाद कॉर्निया या रेटिना के लिए एक उपयुक्त तकनीक बहुत महत्वपूर्ण है के लिए एक बेहतर गुणवत्ता के ऊतकों को पुनः प्राप्त.

पिछले दो वर्षों (तालिका 1) से हमारे पिछले आंकड़ों से संकेत मिलता है कि corneas है कि हम आँख ग्लोब से एकत्र की लगभग 60% प्रत्यारोपण के विभिन्न प्रकार के लिए उपयुक्त हैं. यह एक और प्रदर्शन है कि corneal छांटना इस पत्र में वर्णित तकनीक नेत्र ग्लोब से उच्च गुणवत्ता वाले कॉर्निया ऊतकों को इकट्ठा करने के लिए एक अच्छा तरीका है. corneas, ज़ाहिर है, प्रत्यारोपण के लिए अनुपयुक्त हो सकता है कारण हो सकता है अन्य मानकोंstromal असामान्यताएं, संदूषण, endothelial घनत्व / आकारिकी, दाता उपयुक्तता और यांत्रिक / शारीरिक आघात के कारण होता है जबकि कॉर्निया को बनाए रखने के रूप में uch. हालांकि, अगर ऊपर मापदंडों ठीक हैं, हम यहाँ वर्णित है तकनीक अच्छी गुणवत्ता के ऊतकों की पुनर्प्राप्ति सतह नेत्र रोग के साथ रोगियों में प्रत्यारोपण के लिए इस्तेमाल की अनुमति देता है.

जबकि पशु मॉडल से रेटिना के ऊतकों की अंतड़ी निकालना के बारे में जानकारी व्यापक रूप से उपलब्ध है ^11,12, हमारे ज्ञान करने के लिए यह पहली बार है कि एक ऐसी तकनीक मानव आँख ग्लोब से रेटिना के ऊतकों के अलगाव के लिए वर्णित है. दरअसल, साहित्य पर शोध, इस विषय पर चर्चा कागज़ों पर किसी भी परिणाम उपज नहीं था. हम मानते हैं कि अगर मानव नेत्र दुनिया विच्छेदन के रूप में वर्णित किया जाता है, अनुसंधान वैज्ञानिकों के लिए अच्छी गुणवत्ता के ऊतकों को उनके अनुसंधान परियोजनाओं के लिए इस्तेमाल किया जा करने में सक्षम हो जाएगा. दुनिया भर के कई नेत्र बैंकों आँख (लेकिन corneas के भी) बल्ब है कि नहीं कर रहे हैं प्राप्त होने की संभावना हैंप्रत्यारोपण के लिए uitable. हमारे मामले में, corneas के (और आंख बल्ब) और है कि हम जमा प्रक्रिया का लगभग 40% (के कारणों में से एक विस्तृत श्रृंखला के कारण) नहीं किया जा प्रत्यारोपित कर सकते हैं, लेकिन अभी भी अनुसंधान प्रयोजनों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इस पत्र में वर्णित तकनीक उच्च गुणवत्ता वाले ऊतकों के संग्रह की अनुमति है. यह हाल ही में हमारे समूह द्वारा प्रदर्शन किया गया था जब शाही सेना के साथ विश्लेषण टी <24hrs जो इस ¹⁰ समाचार पत्र में वर्णित तकनीक का उपयोग करते हुए काटा गया रेटिना ऊतकों से निकाला है. हमें विश्वास है कि उसी तकनीक रेटिना transcriptome की पढ़ाई, (ii) के अध्ययन और व्यक्तिगत चिकित्सा में ⁸ मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल का उपयोग अग्रिम के लिए इस तरह के रूप में (i) के कई अन्य विभिन्न प्रयोजनों के लिए रेटिना के ऊतकों को अलग करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, (iii ) शाही सेना अभिव्यक्ति एटलस मानव ⁹ retinas, (iv) में रेटिनाइटिस पिगमेंटोसा जीन विकसित करने के लिए स्टेम सेल के अध्ययन के शाही सेना निष्कर्षण विधि (v) के अनुकूलन के लिए रेटिना के ऊतकों को पुनर्जीवित करने के लिए, आदि

इस तकनीक डब्ल्यूबीमार लोग हैं, जो ऐसे excisions या प्रयोगों प्रदर्शन करना चाहता हूँ लेकिन विधि पर सीमित जानकारी के लिए मानव corneas या retinas के उपयोग के लिए फायदेमंद हो सकता है.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Materials for excision of cornea and retina.
Guarded disposable scalpel	Blade size 15	Swann-Morton
Sterile bandages	5 cm X 5 cm, 8 layered, 5 pcs	Artsana
Sterile disposable medical towel	35 X 50 cm	U.Jet
Sterile scissors	Blades 24 mm / overall length. 95 mm curved, blunt	e.janach
Sterile forceps	Stainless steel -100 mm 11 X 2 ruled by 0.70 mm teeth	e.janach
Corneal claw – Disposable medical device		NIIOS (Hippocratech)
PBS	100 ml PBS [10x] in 900 ml d/w (distilled water)	Sigma-Aldrich
Na-thiosulphate	1 gm Na-thiosulphate in 1 litre of PBS [1x]	Sigma-Aldrich
I-PVP	5 gm I-PVP in 1 litre d/w	Sigma-Aldrich
Table 2. The table describes the materials used for excision of cornea and retina and the company they are received from.
Materials for storage medium (2000 ml).
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10ml/l)
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10ml/l)
Antibiotic/antimycotic	Sigma-Aldrich	A5955-20ML	10ml/l
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)
Table 3. Materials for storage medium.
Preparation of storage medium
Add all the ingredients using the specific concentrations as given above in a jar and mix well. Filter them using pore size of 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) with help of a peristaltic pump. Preserve the medium in the bottles at RT.
Materials for transport medium (2000 ml).
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10 ml/l)
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10 ml/l)
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)
Dextran t500	Pharmacosmos	551005004007	6% (60 gm/litre)
Table 4. Material for transport medium.
Preparation of transport medium
Add Dextran 6% in ~ 1.5 litre of MEM and leave it overnight. Add the rest of ingredients in the media and filter using 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) using a vacuum pump. Preserve the medium in the bottles at RT.