悬尾实验

Summary

尾部悬吊试验验证实验程序，以评估对小鼠的抗抑郁药物治疗的疗效。小鼠暂停六分钟，它们的尾巴逃生相关的行为进行评估。我们描述进行悬尾实验中使用的程序。

Abstract

尾部悬吊试验是鼠标行为潜在的抗抑郁药物的筛选有用的测试，并评估预期影响抑郁症有关的行为的其他操作。小鼠暂停它们的尾巴，用胶带，在这样的位置，无法逃避或持有到附近的表面。在测试过程中，通常是6分钟，造成逃生导向的行为进行量化。尾部悬吊的测试是一个准抗抑郁化合物的高通量筛选药物发现有价值的工具。在这里，我们描述了实施这种潜在的可能出现的问题，以及如何避免它们进一步强调测试所需的细节。我们还提供了一个尾部的攀爬行为的解决方案，如广泛使用的C57BL / 6的一个共同的问题，使这个测试在某些小鼠品系的无用。具体来说，我们通过一个小塑料鼠标尾巴，防止尾登山行为缸中止之前。最后，我们详细介绍如何手动评分，在这个测试中表现的行为。

Protocol

1。材料

1。暂停盒

尾部悬吊试验（TST）涉及暂停小鼠，它们的尾巴地面以上。在最基本的层面上，这个过程只需要吊杆货架窗台，和磁带。然而，实验者应考虑使用一个背景下，提供最佳的对比度。此外，它是审慎采取措施，以防止小鼠观察正在测试的其他动物。在我们的实验室，我们使用专门制造的尾吊箱（四小时日，巴尔的摩MD），由塑料制成的尺寸（60 55高X宽X深11.5厘米）。为了防止动物观察或相互作用彼此，每个鼠标悬浮在自己的薄壁矩形盒（55高× 15宽x 11.5厘米深度）。鼠标悬浮在车厢中的宽度和深度是足够的大小，使鼠标不能使合作ntact与墙壁。在此设置中，老鼠的鼻子和仪器地板之间的大致距离为20-25厘米。有四个相同的仪器车厢，让我们一次测试四只老鼠。暂停每个鼠标的尾部，铝吊杆（1厘米。高度x 1厘米× 60厘米，宽度长度），定位在框的顶部。在我们的实验室中使用的尺寸，我们应该算是作为一般参考。例如，个别车厢的尾部悬浮框的大小可以增加，如果一个大的远交小鼠品系（如CD - 1）是使用。

我们在每个车厢的底部放置一个可拆卸的铝制托盘收集动物粪便或尿液。我们用一个白化动物的暗灰色方块和其他毛色的小鼠奶油色的框。这样的安排，为我们提供了更好的对比度和行为因此更可靠的测试得分。

2。磁带

3。定时器

4。录像设备

一台摄像机和三脚架（或其他支持结构）是必要的。由于这种测试通常涉及多个动物在同一时间测试，现场打分将是困难的，不建议。摄像头应该记录在嗨GH足够的分辨率来呈现高质量的画面，行为得分后，将用于。务必一定是有足够的录音内存在开始测试前的相机。我们使用一台摄像机，记录数字没有使用的物理介质（如录像带），允许简单的视频传输。

5。白噪声发生器

噪声发生器应屏蔽间歇性的环境声音。特别推荐突然大声喧哗，可以听到，可能不惊人死不休小鼠在实验室环境噪声发生器的使用。在我们的试验室的环境噪声水平（不带白噪声发生器激活）约60分贝。在尖沙咀进行的位置激活与白噪声发生器总声级为70-72分贝。但是，应该指出的是，这些数字作为例子只提供，每个实验室应选择根据其独特的环境和情况下，正确的噪音水平。

6。清洁用品

每届会议结束后应清除悬浮框，彻底灭菌解决方案（例如，MB - 10，妙语Laboratories公司，威尔明顿，DE或类似）。

7。 Climbstoppers（可选：使用后应变依赖）

一些背景，如C57BL / 6小鼠的尾巴爬在测试^1。清除空心圆柱体（4厘米长，1.6厘米外径，内径1.3厘米，1.5克），切成4厘米长，由聚碳酸酯管（FourHourDay公司，巴尔的摩MD）（＃8585K41，麦克马斯特卡尔，圣塔菲泉，CA）的周围放置老鼠的尾巴，以防止这种尾登山行为^2,3。这些设备可以在任何实验室，与常用的工具和材料。

2。行为程序

1. 将相机位置。相机应尽可能靠近，以获得最高的动物可能的解决方案。
2. 将在会议期间使用的磁带碎片切割，标记，并为本届会议准备。
3. 开始白噪声发生器，如果正在使用，小鼠之前推出的试验室。白噪声水平只应足以屏蔽外部噪声。避免以高音量，并确保所有动物中使用的同一级别的白噪声。
4. 带来的一个imals进入测试室。如果房间里的动物所在考场毗邻与其他类似的环境条件，没有驯化期间可能是必要的。否则，放置在试验室动物的驯化期（一般至少一小时）。请注意，放置在同一个房间里的其他动物可以感受到嗅觉和超声波线索。
5. 如果攀登它们的尾巴，如C57BL6 / J，应变，尾巴周围Climbstoppers之前申请的磁带。
6. 老鼠的尾巴坚持磁带。使用标记的磁带结束，并确保磁带坚持回到自己的尾巴和。应适用于磁带的尾巴很结束与2-3毫米磁带以外的剩余尾。
7. 一旦每一块的磁带连接到鼠尾笼内壁粘磁带的中间部分。这将有助于防止相互缠绕磁带件。请注意，confinement以这种方式可能造成的压力和重要的是要尽快磁带每个动物的过程中完成。
8. 一旦适用于所有的磁带，开始录制前小鼠暂停，并确定了会议。
9. 暂停吊杆或架子上，在治疗组之间平衡的顺序放置磁带的动物。暂停在小鼠的方式，是因为整个尖沙咀会议将取得和阻挠相机会导致无法评估在这段时间内的行为不妨碍相机视图。检查所有磁带两端都挂平行的懈怠每个鼠标类似长度的吊杆或架子。
10. 在会话结束（通常是6分钟），返回的动物，他们homecage，小心地取出磁带，从每尾轻轻拉。不要从尾部翻录的磁带，因为这样做可能会引起疼痛的MICE.
11. 回国后的老鼠他们的殖民地房间丢弃的粪便勃利和尿液收集托盘和与消毒液擦拭仪器。

3。行为分析

1. 一般来说，尖沙咀是从开始到六分钟的长度完成。不同的另一种广泛使用的抗抑郁疗效程序，强迫游泳测试，整个会议取得。这是由于一般的发现，老鼠往往体现不动早在尖沙咀。
2. 在我们的实验室中，我们的视频文件直接从相机上传到PC进行分析。
3. 在行为分析每个鼠标移动测量花费的时间。虽然它可以直接测量的不动时间，我们发现，积极运动更容易发现和措施，而不是缺乏这种运动。
4. 尖沙咀行为分析的最重要的方面是一致的运动识别作为真正的流动记录S。小鼠，尤其是在会议开始时，清单公然逃避相关的行为。这些措施包括试图达到的器具的墙壁和吊杆，身体的强烈震动，类似于运行的四肢运动。这些动作显然构成的流动性。这些行为，然后消退而变得微妙。在我们的实验室只限于前腿，但没有参与的后腿，不计算为流动的小运动。此外，喜欢的势头，由于波动的振荡和摆在早些时候的流动性较量的经验也不能算作流动。
5. 在我们的实验室中，我们使用的时间测量屏幕上的秒表软件（Xnote秒表，dnSoft研究小组）。在屏幕上使用两个独立的秒表。第一个秒表倒计时360秒和警报行为分析期结束时的观察员。第二STOpwatch控制观察员措施所花费的时间移动。某些秒表软件有能力来分配钥匙启动和停止功能，使屏幕上的键盘可以控制秒表。相反，我们使用普通键盘输入设备，俗称为“手柄”控制的秒表。
6. 如果有一个以上的测试，并在屏幕上的鼠标目前，它是一个好主意，掩盖了其他的动物，使他们的动作不会分散观察员。这可以通过使用其他程序窗口或通过物理覆盖与纸屏幕上的其他老鼠。
7. 有可能会发生一些偏差，如果流动性的时间总额为一个特定的鼠标经过前完成分析会议可见。如果使用屏幕上的秒表是，我们建议涵盖所有，但秒表毫秒小数。覆盖秒表的观察员只知道是否秒表开启或关闭在任何时候，但不知道的总时间过去了，不带任何偏见，因此不能受到影响。使用这种方法的观察员，而盲目的动物组分配，不会有一个在每个动物的流动性水平的总体思路。
8. 观察者可靠性测试应为每一个新的观察员进行，才开始收集数据从实验动物。在我们的实验室，每一个新的观察员第一只手表一位经验丰富的观察员，而他或她是得分。在新的观察员获得足够的信心，以区别于万马齐喑流动，然后他们在实时得分与经验丰富的观察员观看，并指出任何错误。一旦成功完成这一阶段，新的观察员将分析具体的培训目的，我们在我们的实验室保持尖沙咀视频设置。只有在一个观察者相关的高层次是与经验丰富的观察员获得的调查分析，从实际尖沙咀视频实验。我们从这些培训分析的数据进行归档，以构成一个实验室内部标准。我们已经观察到的菌株之间的差异，他们表示流动（不动）的行为，以及男女之间的时间平均不动的方式。一个新的应变，性别，或转基因小鼠模型在实验室测试时，有必要再次进行这种类型的可靠性分析。

4。代表性的成果

我们已经使用了尖沙咀评估抗抑郁反应，锂在不同小鼠品系的治疗（图^1）3 。本实验的实验的详细资料载于能等人^，2011年3。

图1：在五个近交系小鼠品系的慢性锂管理后悬尾实验不动时间。小鼠组的房子D，每笼4只。在锂治疗组小鼠接受了含有锂议员三个星期4克/公斤氯化锂。控制动物无氯化锂相同的食品。 **：P <0.01，***：P <0.001表示显著，配对t检验。数据表示为平均值± SEM。 ñ :10 - 12动物每组每一株。 （从图³转载）。

在这个例子中，只在C57BL/6J小鼠和DBA/2J株慢性锂食物中提供的一个显着的治疗效果观察。在其他3株，不动时间的统计上的显著减少。这些数据表明，慢性锂治疗的抗抑郁反应应变依赖也已经与^其他 4-8抗抑郁药物观察。

Discussion

Steru 等尖沙咀发展。影响以前开发的强迫游泳测试^10-12。类似强迫游泳测试，在尖沙咀的小鼠，被放置在一个无法回避的，但适度紧张的情况。缺乏逃生相关的行为被认为是静止的。强迫游泳测试一样，尖沙咀是最好的抗抑郁药物疗效的评价的验证测试，但也可以用来评估环境，神经生物学和^基因操纵13-18的影响。在强迫游泳测试，在尖沙咀有没有体温过低的危险，由于淹没^在水中19。实验者应牢记，而强迫游泳试验和TST是类似的表面 ，有各种重要的差异，其灵敏度和性能，并一次测试的结果未必会在其他复制。对于一个优秀的差异b说明etween这两项测试看到^4,20,21以下引用。虽然大多数抗抑郁药需要数周的对患者临床上显著的影响，抗抑郁药可以发挥其功效，在尖沙咀和强迫游泳测试既以下的^急性和慢性治疗20,22,23。不过，也有许多其他行为测试，用来评估一般都是敏感的慢性治疗仅在小鼠的抗抑郁作用。这些措施包括慢性不可预见性应激^24日 ，社会击败压力^25，和新奇抑制摄食^26。

除了 ​​其占地面积小，成本低，相对容易的设置，自动化的数据收集在尖沙咀也有可能^9,27,28。自动化的两种主要方法是机电测量系统和视频分析。在机电，动物是暂停从应变计测量动物的动作（例如M版联营公司，圣奥尔本斯，VT;哈佛仪器，Holliston，MA）。另一种方法是基于软件的分析尖沙咀录像（如Noldus公司，荷兰; Cleversys公司，雷斯顿，弗吉尼亚州）。然而，即使与自动化，人为干预将仍然是必要的，因为应用参数必须进行调整为每个新的小鼠模型或应变和结果应为质量控制的目的的人类观察员核实。

一个持久的问题值得尖沙咀特别注意的是一些老鼠的尾巴爬行为，特别是常用^的 C57BL / 6株1,20。这些动物有一个迈向攀登自己的尾巴的倾向。据悉，逃生是可能的小鼠，成功地爬上他们的尾巴。因此，这些老鼠应该是从分析中排除，从而增加了所需的小鼠数量，降低了程序的可靠性。事实上，C57BL / 6小鼠品系是大多数C在神经生物学和基因研究中使用的ommon应变加剧了这一问题的影响。在本文中，我们详细尾登山行为，这是在我们的^实验室 2,3开发的解决方案。为了防止尾登山行为，我们把小鼠尾基地周围的空心圆柱体。小鼠不能守住这些圆筒，并因此无法爬上他们的尾巴。我们观察到，没有小鼠攀升使用这种方法^2,3时，它们的尾巴。此外，我们已经表明，锂的抗抑郁作用，报道在尖沙咀以前没有这些类型气瓶²⁹中，仍然存在使用^其中 3时。

应该指出的是，尖沙咀是不是较重的啮齿类动物如老鼠的建议，因为它可能对这些动物的痛苦，他们的体重只支持它们的尾巴。同样的道理，应采取谨慎异常沉重的小鼠（如小鼠用于建模肥胖），并在这些情况下，实验者应寻找其他的测试，如强迫游泳^测试 10应该牢记，任何操作，可能会影响整体活动水平可能在尖沙咀，导致虚假的结论可能改变流动。正因为如此，它是重要的独立行为的措施，如开放式的现场^测试 30的小鼠整体活动水平的测试，以验证与尖沙咀的结果。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tape
Timer
Video Camera
White Noise Generator (optional)
Climbstoppers (optional; depending upon strain used)