Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

التغلب على عدم التجاوب في التجارب الذاتية التهاب الدماغ (EAE) سلالات الفئران المقاومة للنقل بواسطة بالتبني والتحدي الأنتيجين

Published: April 9, 2012 doi: 10.3791/3778
Automatic Translation
1, 2, 2
1Department of Medicine, Section of Cardiology, St. John-Providence Health System, 2Department of Immunology and Microbiology, Wayne State University School of Medicine

Summary

سلالات الفئران معينة قادرة على مقاومة تحريض التهاب الدماغ والنخاع الذاتية التجريبية (EAE) مع البروتين الأساسي المايلين. الموصوفة هنا هو بروتوكول تحصين بسيط هو أن يعكس عدم تجاوب ويستحث مرض شلل في نموذجي EAE عدة بقع الفأر المقاوم.

Abstract

التهاب الدماغ والنخاع الذاتية التجريبية (EAE) هو مرض التهاب الجهاز العصبي المركزي (CNS)، وقد استخدمت في نموذج حيواني لدراسة هذا المرض المزيل للبشرية، والتصلب المتعدد (MS). ويتميز EAE بواسطة تسلل مرضية للخلايا وحيدات النوى في الجهاز العصبي المركزي والمظاهر السريرية للمرض مشلول. مشابهة لمرض التصلب العصبي المتعدد، EAE هو أيضا تحت السيطرة الوراثية في ذلك سلالات الفئران معينة تكون عرضة للتحريض المرض والبعض الآخر مقاومة. عادة، C57BL / 6 (H-2 ب) تحصين الفئران مع البروتين الأساسي المايلين (MBP) فشل لتطوير علامات مشلول. هذا تجاوب هي بالتأكيد ليست بسبب عيوب في التصنيع أو مستضد تقديم المستضد من MBP، كما تم استخدام بروتوكول تجريبي وصفها هنا للحث على EAE حاد في C57BL / 6 الفئران فضلا عن غيرها من سمعته الطيبة سلالات الفئران المقاومة. وبالإضافة إلى ذلك، قد دماغي المنشأ استنساخ الخلايا التائية من C57BL / 6 و BALB / ج الفئران على رد الفعل إلى MBP كان نجاحمعزولة تماما وترويجها.

بروتوكول تجريبي ينطوي على استخدام الخلوي نظام نقل بالتبني الذي MBP-معبي (200 ميكروغرام / الماوس) معزولة C57BL / 6 خلايا العقدة الليمفاوية المانحة وتربيتها لمدة خمسة أيام مع مستضد إلى توسيع مجموعة خلايا تي MBP محددة. في نهاية الفترة والثقافة، ويتم نقل 50000000 خلايا قابلة للحياة إلى المتلقين مسانج ساذج عن طريق الوريد الذيل. الفئران المعالجة لذلك المتلقي عادة لا تتطور EAE، مما يؤكد وضعهم المقاومة، وأنها يمكن أن تبقى إلى أجل غير مسمى طبيعي. عشرة أيام نقل الخلية آخر، هي الطعن الفئران المتلقي مع مساعد فرويند الكامل (CFA)، مستحلب MBP في أربعة مواقع في جنباته. EAE حاد يبدأ في تطوير هذه الفئران 10-14 يوما بعد التحدي. وأظهرت النتائج أن الاستقراء من مرض معين كان المستضدية كما تحد مع مستضدات غير ذي صلة لم لحث على العلامات السريرية للمرض. بشكل ملحوظ، والمعايرة من الجرعة المستخدمة لمستضدتحدي أظهرت الفئران المتلقي أنه يمكن أن يكون ما يصل الى 5 ميكروغرام / الماوس. وبالإضافة إلى ذلك، أظهرت دراسة الحركية للتوقيت التحدي مستضدي هذا التحدي للحث على المرض كانت فعالة في أقرب وقت آخر 5 أيام التحدي المستضدية وطالما أن أكثر من 445 يوما آخر مستضدي التحدي. هذه البيانات نقطة بقوة نحو تورط "طويلة الأمد" سكان الخلية تي في الحفاظ على عدم استجابتها. لم يتم تعريف اشتراك الخلايا التائية التنظيمية (Tregs) في هذا النظام.

Protocol

1. إعداد CFA-مستحلب مستضد

  1. حل خنزير غينيا MBP (أعدت وفقا لطريقة Swanborg1 وتخزينها في شكل مجفف بالتجميد في درجة مئوية 4) في حل العازلة الفوسفات (PBS) بتركيز 2 ملغ / مل. إذا الببتيدات MBP توليفها (MBP 60-80، SHHAARTTHYGSLPQKSQR) تستخدم 2، يعد حل 2 ملغ / مل. وضع مبلغ مناسب من حل المستضد (يتم تحصين 0.1 مل لكل فأر) في حقنة زجاجية مع luer لوك.
  2. وضع حجم H37Ra مساعد فرويند الكامل ل(0.1WT٪) (CFA، Difco مختبرات) على قدم المساواة في حل مستضد إلى آخر حقنة زجاجية مجهزة luer لوك.
  3. ربط المحاقن الزجاج اثنين مع محبس ثلاثي. خلط الحل MBP مع اتفاق وقف اطلاق النار عن طريق دفع الغطاسون ذهابا وإيابا. الحفاظ على الحركة حتى يتم تشكيل مستحلب.
  4. لاختبار إذا تم تشكيل مستحلب، ودفع كل من الخليط في واحدة حقنة. قطع المحقنة الفارغة، وسحب تيانه الغطاس الوراء قليلا وتصريف قطرة من المستحلب المتبقي في كوب من الماء النظيف في درجة حرارة الغرفة. إذا كان انخفاض مستحلب لا تزال سليمة على سطح الماء، ويتم تشكيل مستحلب. إذا كان انخفاض مستحلب يشتت، إعادة الحقن ومواصلة حركة الاختلاط.
  5. استخدم حقنة بلاستيكية 1 مل لعملية التحصين لضمان وصول جرعة دقيقة من المستضد. لنقل مستحلب مستضد إلى المحقنة البلاستيكية، وسحب الغواص وتدرج المحقنة فارغة من البلاستيك في افتتاح الثلاثية محبس حيث تم قطع الحقنة الزجاجية كما هو الحال في السابق 1.4.
  6. ملء محقنة بلاستيكية إلى حافة طريق دفع المكبس من المحاقن الزجاج. إدراج المكبس من المحاقن البلاستيكية الظهر وابعاد مستحلب الزائدة حتى تصل إلى 1.2 مل علامة على حقنة من البلاستيك. هذه المناورة يؤكد أن المحاصرين لا فقاعة هواء داخل المحقنة البلاستيكية.
  7. إزالة المحاقن البلاستيكية من محبس ثلاثي. عطاالفصل إبرة # 26 مقياس لحقنة من البلاستيك. دفع المكبس إلى علامة 1 مل بحيث يملأ مستحلب الآن حجم الفراغ من الإبرة.

2. تحصين الفئران المانحة

ملاحظة: يتم حقن عادة أنثى C57BL / 6 الفئران مع مستحلب مستضد في أربعة مواقع في جنباته، وفقا للأساليب مصممة أصلا من قبل مجموعة من McFarlin 3 في المعاهد الوطنية للصحة. لمحقق من ذوي الخبرة، ويمكن شخص واحد أداء المهمة بأكملها. للمبتدئين، قد تكون طلبت مساعدة حتى شخص واحد يحمل الماوس والشخص الآخر لا الحقن. بدلا من ذلك، يمكن للفأر أن يكون تخدير للحقن.

  1. عقد الماوس بحزم جلد العنق وكبح الذيل بين اصابع ال 4 و 5 من هذا القبيل عشر أن الصدر والبطن ويمكن الحصول عليها بسهولة.
  2. وضع إبرة حقنة من البلاستيك 1mL في موقع في الصدر أعلى قليلا من الإبط الأيمن (من مواستخدام) وحقن 0.05 مل من مستحلب المستضد تحت الجلد. يمكن رؤية انتفاخ قليل من اتفاق وقف اطلاق النار من خلال بيضاء البشرة الفاتحة. تكرر الشيء نفسه بالنسبة للموقع في الصدر أعلى قليلا من الإبط الأيسر.
  3. الافراج عن الذيل واتخاذ اجراء من القدم اليمنى (من الفأرة)، وتحويلها لأنه عقد في الفترة الواقعة بين 4 و 5 عشر أصابع. تحديد موقع أقل بقليل من حالة ضلع في الجهة اليمنى وحقن 0.05 مل من مستحلب مستضد.
  4. الافراج عن القدم اليمنى، وتحويل الماوس في الاتجاه الآخر، وعقد في القدم اليسرى (من الفأرة) في الفترة الواقعة بين 4 و 5 عشر أصابع. تحديد موقع أقل بقليل من حالة ضلع في الجهة اليسرى وحقن 0.05 مل من مستحلب مستضد.
  5. تغيير إلى إبرة جديدة بعد حقن الفئران من 10، أو إذا كانت إبرة مبلد يصبح.

3. عزل الخلايا الليمفاوية عقدة لزراعة الأنسجة 7 إلى 10 أيام بعد التلقيح

  1. سبعة إلى 10 أيام بعد التطعيم، والتضحية الفئرانوإزالة العقد اللمفية النازفة. الأسلوب المفضل من القتل الرحيم هو عن طريق استنشاق 2 CO. بعد التضحية، وضع الفأرة على ظهرها على لوح تشريح مع أطرافه ممدودة وحصل على متن الطائرة مع المسامير. ومبلل الفئران مع وابل من الإيثانول بنسبة 70٪.
  2. قطع فتحة في الجلد طوليا في وسط من النهاية السفلى من البطن حتى الذقن مع مقص العقيمة وملقط.
  3. قطع الجلد من منطقة البطن والفخذ وصولا الى كل ساق. قشر مرة أخرى لخفض الرقم الجلد، وفضح الغدد الليمفاوية الأربية.
  4. قطع الجلد على طول الأمامية (اليسار واليمين) بحيث يمكن مقشر البشرة مرة أخرى، وتمركزها على فضح الغدد الليمفاوية الإبطية بالقرب من الإبط.
  5. مع اثنين من أزواج من ملقط العمل معا، والانسحاب بعيدا عن الأنسجة الضامة التي تغطي وحول الغدد الليمفاوية الأربية. عندما يتم مسح الأنسجة الضامة، ووضع زوج واحد من ملقط تحت العقدة الليمفاوية والجذب بعيدا عن الجسم. ضعالغدد الليمفاوية في طبق بيتري 35 ملم مليئة برنامج تلفزيوني العقيمة.
  6. الانسحاب بعيدا عن الأنسجة الضامة تغطي الليمفاوية الإبطية عقدتين باستخدام اثنين من أزواج من الملقط. عزل الغدد الليمفاوية ووضعها في طبق بيتري. نكون حذرين للغاية ليس لكسر الأوعية الدموية عبور المنطقة في الوقت الذي يجعل من النزيف تحديد الغدد الليمفاوية في غاية الصعوبة.
  7. بعد يتم جمع جميع الغدد الليمفاوية، حرك طبق بيتري إلى غطاء للسلامة الأحيائية. كسر وندف الغدد الليمفاوية بعيدا مع اثنين ازواج من الملقط، وطحن واحد ضد الآخر. بدلا من ذلك، يمكن تقسيم الغدد الليمفاوية حتى باستخدام نهاية شقة من المكبس من حقنة بلاستيكية 3 مل الضغط ضد الغدد الليمفاوية في الجزء السفلي من طبق بيتري.
  8. تمرير العقدة الليمفاوية مثار تعليق الخلية من خلال شبكة من النايلون لإزالة الأغشية والحطام.
  9. وتشكل الخلية العقدة الليمفاوية إلى تعليق 50 مل باستخدام برنامج تلفزيوني العقيمة. الطرد المركزي في 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقيقة. Resuspend لبيليه في ثقافة المتوسط. القيام ج قابلة للحياةELL الاعتماد وضبط تركيز للخلايا X 10 6 4 / مل. UseRPMI 1640 تستكمل مع 10٪ مصل العجل الجنين، 2 مم L-الجلوتامين، 1 صوديوم MEM البيروفات مم، 0.1 ملي MEM غير الاساسيين من الأحماض الأمينية، و 100 البنسلين يو / مل، 100 الستربتومايسين ميكروغرام / مل، 10 ملم والعازلة Hepes × 5 10 -5 م 2-ME. قبل دافئ ثقافة قبل resuspending الخلايا.
  10. ثقافة الخلايا في لوحات ثقافة 24-جيدا مع حجم 2 مل لكل بئر (نهائي تركيز خلية 8 × 10 6 خلية / جيدا). إضافة إلى كل مستضد جيدا بتركيز نهائي من 100 ميكروغرام / مل. وضع لوحة الثقافة في الحاضنة 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2. احتضان خلايا لمدة 5 أيام.

4. حصاد مثقف الخلايا الليمفاوية عقدة 5 أيام بعد بدء الثقافات

  1. خلط الخلايا في كل بئر بواسطة pipetting صعودا وهبوطا مع ماصة باستير الزجاج أو ماصة حجم صغير. حصاد الخلايا لأنبوب الطرد المركزي 50 مل.
  2. منبذة الخلايا في 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقيقة. Resuspend وبيليه الخلية إلى حجم صغير من برنامج تلفزيوني.
  3. عد الخلايا وضبط تركيز خلية قابلة للحياة إلى 2.5 × خلايا 8 10 / مل مع برنامج تلفزيوني العقيمة. رسم الخلايا في حقنة مزودة إبرة # 26 مقياس.
  4. وضع مصباح الحرارة على قفص من الفئران المتلقية للمساعدة على تمدد الأوردة الذيل.
  5. باستخدام الماوس حامل، تمديد ذيل الفأر من خلال شق في حامل. سحب لتوسيع الذيل. تحديد موقع الوريد.
  6. حقن 0.2 مل / الماوس لتعليق خلية، أي ما يعادل 5 × 10 7 الخلايا.

5. التحدي مستضدي من الفئران مستلم 20 خلية آخر أيام بنقل وتطوير أعراض المرض

  1. الفئران المتلقي التحدي لا تظهر عليها علامات المرض مع المستضد. الإجراءات هي نفس المادة 2 على "تحصين الفئران المانحة".
  2. مراقبة تطور المرض مشلول 7 إلى 10 أيام بعد التحدي مستضدي.
    1. يبدأ المرض مع ضعف في الذيل. تم تصنيف مرض ك 1عندما ذيل يصبح رخو. تم تصنيف مرض ك 2 عندما مشلولة الماوس في أحد أطرافه الخلفية. تم تصنيف المرض 3 عندما شلت كل أطرافه الخلفية والفأر تستمر كل من أطرافه الخلفية عند الزحف إلى الأمام. تم تصنيف مرض 4 عندما يفقد استخدام الفأرة على حد سواء الأمامية، ترك الماوس ثابت تماما. تم تصنيف المرض 5 عند الفأر تحتضر والهيئة تجعيد الشعر حتى. وسجلت وفاة ودرجة المرض 6 4.
  3. MBP محددة EAE في الفئران التي يسببها C57BL / 6 بعد هذا البروتوكول هو حيد الطور. قد الفئران على التعافي من المرض، ولكنها لا تخضع لانتكاسات عفوية.

6. ممثل النتائج

الفئران التي تلقت ومعبي في المختبر، موسعة الخلايا المانحة العقدة الليمفاوية لم تتطور لديهم أعراض المرض EAE، والتي تعكس مقاومتهم للتحريض المرض. ومع ذلك، وضعت بعد مرض شديد التحدي مستضدي (الجدول الأول)، مما يدل على قدرة التحدي مستضديفي عكس آلية مقاومة. اثنين من السمات الخاصة للتحدي مستضدي احظت هي جرعة من مستضد وحركية من التحدي للحث على المرض. هناك حاجة إلى جرعة منخفضة جدا من المستضد كما هو مبين في الجدول الثالث. والمثير للدهشة، أن الفئران التي تلقت الخلايا المانحة في العام السابق لا يزال تطوير المرض الشديد عندما تحدى مع المستضد (الجدول الرابع). هذه الملاحظات 2 توحي بقوة تورط خلايا "طويلة الأمد" تي في الحفاظ على المقاومة EAE. هذا البروتوكول ينطبق على العديد من سلالات الفئران EAE المقاوم 4.

الشكل 1.
الرسم البياني رقم 1 التدفق. من التصميم التجريبي لتحريض EAE في سمعته الطيبة سلالات الفئران المقاومة.

السريرية EAE
بعد نقل بالتبني 		بعد التحدي مستضدي
توتر مولد المضاد حدوث AV. مرض الصف
(المدى) 		AV. يوم من بدء
(المدى) 		حدوث AV. مرض الصف
(المدى) 		AV. يوم من بدء
(المدى)
SJL MBP 21/21 4.0 (3-5) 8.0 (6-10) ND ND ND
C57BL / 6 MBP 0/10 - - 7/7 3.85 (3-5) 9.28 (9-10)
BALB / ج MBP 0/7 - - 5/5 3.2 (3-4) 7.0 (7)
C3H/HeJ MBP 0/7 - - 4/4 3.2 (3-4) 8.0 (8)
C57BL / 6 MBP 60-80 0/4 - - 4/4 2.75 (2-4) 10.2 (9-11)

الجدول الأول. تحريض MBP بوساطة EAE في C57BL / 6 الفئران. بالتبني نقل EAE معبي والخلايا في المختبر من الجهات المانحة، لم تحفز الموسع ليس في C57BL / 6 الفئران. أصدرت مستضدي الخلية آخر نقل التحدي الفئران عرضة للتحريض المرض. AV.، في المتوسط. ND، وليس القيام به.

السريرية EAE بعد التحدي مستضدي
فتيلة مستضد التحدي مستضد حدوث AV. مرض الصف
(المدى)		 AV. يوم من بدء
(المدى)
MBP-CFA CFA وحده 0/3 - -
MBP-CFA OVA-CFA 0/3 - -
MBP-CFA MBP-CFA 3/3 4.0 (4.0) 7.7 (7-9)

الجدول الثاني. خصوصية التحدي مستضدي. وقد تم الطعن الفئران المتلقي مع مستضد فتيلة فضلا عن مستضدات غير ذات صلة أخرى. فقط للمستضد فتيلة التي يسببها مرض شديد. OVA: ovalbumin الدجاج. AV.، في المتوسط.

السريرية EAE بعد التحدي مستضدي
جرعة المستضد التحدي (ميكروغرام / الماوس) حدوث AV. مرض الصف
(المدى) 		AV. يوم من بدء
(المدى)
200 4/4 3.75 (3-4) 8.25 (7-9)
100 4/4 3.67 (3-4) 7.5 (7-8)
50 4/4 3.25 (3-4) 8.25 (7-10)
25 4/4 3.0 (3.0) 8.25 (8-9)
10 4/4 3.0 (3.0) 8.76 (8-9)
5 4/4 2.5 (2-3) 9.75 (9-10)
1 2/4 1.0 (1.0)
0 0/4 - -

جدول مستضد التحدي الثالث. الجرعات المطلوبة لتحريض المرض. تم اختبار تركيزات مختلفة من MBP تستخدم للطعن في الفئران المتلقي. AV.، في المتوسط.

السريرية EAE بعد التحدي مستضدي
التحدي مستضد يوم التحدي حدوث AV. مرض الصف
(المدى) 		AV. يوم من بدء
(المدى)
MBP-CFA 5 3/4 1.33 (1-2) 9.67 (9-10)
MBP-CFA 10 4/4 3.0 (3.0) 8.25 (7-9)
MBP-CFA 15 4/4 3.75 (3-4) 7.25 (7-8)
MBP-CFA 25 4/4 4.0 (4.0) 8.0 (7-9)
MBP-CFA 35 4/4 3.5 (3-4) 7.5 (7-8)
MBP-CFA 60 4/4 3.75 (3-4) 9.0 (8-10)
--------------------------
MBP-CFA 343 3/3 3.0 (3.0) 10.33 (10-11)
MBP-CFA 445 3/3 3.0 (3.0) 7.0 (7.0)

الجدول الرابع. حركية التحدي مستضدي. وقد تم الطعن الفئران المتلقي في مختلف وقت آخر نقطة اعتمادإيف نقل الخلية. AV.، في المتوسط.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

دراسات من EAE في الفئران غالبا ما تستخدم في neuroantigens، المايلين الأساسية البروتين (MBP)، بروتين شحم بروتيني (حزب العمال التقدمي)، أو بروتين النخاعين oligodendrocyte (موج). دراسات سابقة تستخدم في الغالب MBP. حزب العمال التقدمي يحفز استجابات قوية وثابتة من الفئران SJL. وفي الآونة الأخيرة، MOG هو neuroantigen شيوعا بسبب B6 الفئران عرضة للمرض التعريفي مع هذا المستضد. العديد من سلالات الجينات الماوس المستهدفة هي على خلفية B6 الوراثية. ومن المثير للاهتمام، B6 الفئران عرضة للتحريض EAE مع موج بل هي مقاومة للمرض مع الحث MBP.

الكثير من الجهود السابقة في توضيح آليات EAE تركزت على آليات تحريض المرض، والآثار المترتبة على إنتاج السيتوكينات وبوساطة من قبل استرداد التنظيمية خلايا تي 5-7. كيف كانت سمعته الطيبة الفئران المقاومة EAE يمكن تخريب تحريض المرض، من ناحية أخرى، لم يتم التحقيق على نطاق واسع. وهذا قد يكون بسبب صعوبة قياس شnresponsiveness. أرنون 8 في عام 1981 وأظهرت الأولى التي B6 معالجة الفئران مع سيكلوفوسفاميد تقديم هذه الفئران عرضة لEAE التي يسببها مع MBP. وأظهرت آخرون أن العلاج بالأدوية المضادة للفيروسات جاما أيضا بفعل المرض بنجاح في B6 وBALB / ج الفئران 9،10. تجدر الإشارة إلى أن جميع هذه الدراسات تستهدف غير مستضد علامات محددة. من ناحية أخرى، وبروتوكول وصفها هنا يركز على جوانب مختلفة من المقاومة EAE. هنا يمكن للمستضد محددة فقط المستخدمة في التغلب على التحدي تجاوب EAE ويسمح للتحريض المرض. هذا البروتوكول يشمل كلا من مرحلة المقاومة EAE مع نقل بالتبني من معبي الخلايا التائية المانحة وحساسية المرحلة مع التحدي مستضدي (الجدول الأول). ويمكن تصميم التجارب لدراسة العوامل الجوهرية التي تحافظ على مقاومة EAE فضلا عن العوامل التي عكس هذا تجاوب. في البداية، وتبين أن الفئران المقاومة EAE كانوا قادرين على شن الاستجابات الذاتية عندما المحصنينمع MBP 4. في وقت لاحق، تبين أن دماغي المنشأ خلايا تي وجدت في هذه الفئران 2. وأظهرت بعض الدراسات الحديثة أن العلاج 11،12 من الفئران B10.S مع المضادة للأضداد CD25 قبل تحصين الفئران لبروتين شحم بروتيني (حزب العمال التقدمي) تحويل الفئران من مقاومة للحساسية، مما يعني ضمنا دور الخلايا التائية التنظيمية (Tregs) في مواصلة المقاومة EAE. ومع ذلك، هذا ليس هو الحال عندما يتم التعامل بالمثل C57BL / 6 الفئران وتحصين مع MBP 13. معظم الفئران لا تزال لا تستجيب. وبالتالي، قد EAE المقاومة تكون متعددة مضروب. وافترض أنه، في حالة C57BL / 6 الفئران الاستجابة لMBP، واختيار الغدة الصعترية وحذف خلايا تي معظم MBP التفاعل مثل تلك الترددات من خلايا تي MBP التفاعل في محيط منخفضة للغاية. هذا من شأنه أن تردد أقل من عتبة منخفضة يجعل الفئران غير قادرة على الاستجابة لتحصين مع MBP. الجرعة التحدي، من خلال آليات غير معروف، غير قادرة على التغلب على هذه القضية وتردد مount رد فعل المناعة الذاتية. واجراء مزيد من التحقيقات من الآليات الممكنة وتشمل دور IL-6 12 خلال التحدي المستضدية في التأثير على قابلية دماغي المنشأ إلى تثبيط بواسطة Tregs.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

لا الإفصاحات المالية.

Acknowledgments

معتمدة في جزء من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (R01 NS37253 وNS055167 N01) والجمعية الوطنية لمرض التصلب العصبي المتعدد (RG-3288 A6).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Guinea pig spinal cords Rockland Immunochemicals GP-T065 frozen
Freund’s Adjuvant, complete H37Ra Difco Laboratories 231131
Multifit interchange-able syringe BD Biosciences 512133
RPMI 1640 Mediatech, Inc. 10-040-CM
OVA Sigma-Aldrich A5503
Mice Jackson Laboratory B6 mice: 0000664 Bar Harbor, Maine

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Swanborg, R. H. Experimental allergic encephalomyelitis. Methods in Enzymology. Sabato, G. D. 162, Academic Press. New York, NY. 413-421 (1988).
  2. Shaw, M. K., Kim, C., Hao, H. W., Chen, F., Tse, H. Y. Induction of myelin basic protein-specific experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice: Mapping of T cell epitopes and T cell Vb gene segment usage. J. Neuroscience Research. 45, 690-699 (1996).
  3. McCarron, R., McFarlin, D. E. Adoptively transferred experimental autoimmune encephalomyelitis in SJL/J, PL/J, and (SJL/J x PL/J)F1 mice. Influence of I-A haplotypes on encephalitogenic epitope of myelin basic protein. J. Immunol. 141, 1143-1149 (1988).
  4. Shaw, M. K., Kim, C., Ho, K. -L., Lisak, R. P., Tse, H. Y. A combination of adoptive transfer and antigenic challenge induces consistent murine experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice and other reputed resistant strains. J. Neuroimmunol. 39, 139-150 (1993).
  5. Krishnamoorthy, G., Saxena, A., Mars, L. T., Domingues, H. S., Mentele, R., Ben-Nun, A., Lassmann, H., Dornmair, K., Kurschus, F. C., Liblau, R. S., Wekerle, H. Myelin-specific T cells also recognize neuronal autoantigen in a transgenic mouse model of multiple sclerosis. Nat. Med. 15, 626-632 (2009).
  6. Anderson, A. C., Reddy, J., Nazareno, R., Sobel, R. A., Nicholson, L. B., Kuchroo, V. K. IL-10 plays an important role in the homeostatic regulation of the autoreactive reperteroire in naïve mice. J. Immunol. 173, 828-834 (2004).
  7. Anderton, S. M. Treg and T-effector cells in autoimmune CNS inflammation: a delicate balance easily disturbed. Eur. J. Immunol. 40, 332-334 (2010).
  8. Arnon, R. Experimental allergic encephalomyelitis - susceptibility and suppression. Immunol. Rev. 55, 5 (1981).
  9. Billiau, A., Heremans, H., Vandekerckhove, F., Dijkmans, R., Sobis, H., Meulepas, E., Carton, H. Enhancement of experimental allergic encephalomyelitis in mice by antibodies against IFN-g. J. Immunol. 140, 1506-1510 (1988).
  10. Arbomson-Leeman, S., Alexander, J., Bronson, R., Corroll, J., Southwood, S., Dorf, M. Experimental autoimmune encephalomyelitis-resistant mice have highly encephalitogenic myelin basic protein (MBP)-specific T cell clones that recognize a MBP peptide with high affinity for MHC class II. J. Immunol. 154, 388-398 (1995).
  11. Reddy, J., Illes, Z., Zhang, X., Encinas, J., Nicholson, L., Sobel, R. A., Wucherpfennig, K. W., Kuchroo, V. K. Myelin proteolipid protein-specific CD4+CD25+ regulatory cells mediate genetic resistance to experimental autoimmune encephalomyelitis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 15434-15439 (2004).
  12. Korn, T., Reddy, J., Gao, W., Bettelli, E., Awasthi, A., Petersen, T. R., Backstrom, B. T. Myelin- specific regulatory T cells accumulate in the CNS but fail to control autoimmune inflammation. Nature Med. 13, 423-431 (2007).
  13. Shaw, M. K., Li, J., Ho, P. P., Hao, H., Lisak, R. P., Tse, H. Y. Induction of myelin basic protein-specific adoptive experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice. Longevity of donor T cells and lack of disease relapses. Neuroimmunology Research Focus. Broglie, P. V. , Nova Science Publisher. New York. 175-191 (2007).

Tags

علم المناعة، العدد 62، وأمراض المناعة الذاتية، التهاب الدماغ والنخاع الذاتية التجريبية، والتحصين، بروتين النخاعين الأساسي، ونقل بالتبني، والشلل
التغلب على عدم التجاوب في التجارب الذاتية التهاب الدماغ (EAE) سلالات الفئران المقاومة للنقل بواسطة بالتبني والتحدي الأنتيجين
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Shaw, M. K., Zhao, X. q., Tse, H. Y. … More

Shaw, M. K., Zhao, X. q., Tse, H. Y. Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge. J. Vis. Exp. (62), e3778, doi:10.3791/3778 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter