Summary
कुछ माउस उपभेदों के माइलिन बुनियादी प्रोटीन साथ प्रयोगात्मक के autoimmune मस्तिष्क - सुषुम्नाशोथ (EAE) के शामिल होने का विरोध कर रहे हैं. यहाँ वर्णित एक सरल प्रतिरक्षण प्रोटोकॉल है कि unresponsiveness के पराजयों और कई ठेठ EAE प्रतिरोधी माउस दाग के झोले के मारे बीमारी लाती है.
Protocol
1. CFA - emulsified एंटीजन की तैयारी
- भंग फॉस्फेट 2 मिलीग्राम / एमएल की एकाग्रता में बफर समाधान (पीबीएस) में गिनी पिग MBP (Swanborg1 की विधि के अनुसार तैयार है और डिग्री सेल्सियस 4 पर lyophilized प्रपत्र में संग्रहीत). यदि MBP संश्लेषित पेप्टाइड्स (60-80 MBP, SHHAARTTHYGSLPQKSQR) 2 इस्तेमाल किया जाता है, एक समाधान 2 मिलीग्राम / एमएल तैयार. Luer - लोक के साथ एक गिलास सिरिंज में प्रतिजन समाधान (माउस प्रति 0.1 एमएल प्रतिरक्षित किया जा करने के लिए) का एक उचित मात्रा ड्रा.
- ऊपर पूरा Freund सहायक (0.1WT%) H37Ra (CFA, Difco प्रयोगशालाओं) एक गिलास Luer - लोक के साथ सुसज्जित सिरिंज में प्रतिजन समाधान के लिए बराबर मात्रा ड्रा.
- एक तीन तरह से पानी निकलने की टोंटी के साथ दो गिलास सीरिंज कनेक्ट. Plungers वापस और आगे धकेलने के द्वारा CFA साथ MBP समाधान के मिश्रण. गति रखें जब तक एक पायसन का गठन किया जाता है.
- परीक्षण करने के लिए अगर एक पायसन का गठन किया जाता है, एक सिरिंज में मिश्रण के सभी धक्का. खाली सिरिंज डिस्कनेक्ट, टी खींचवह वापस सवार एक थोड़ा और कमरे के तापमान पर साफ पानी की एक बीकर में अवशिष्ट पायस की एक बूंद का निर्वहन. यदि पायस बूंद पानी की सतह पर बरकरार, एक पायसन का गठन किया जाता है. यदि पायस ड्रॉप disperses, सीरिंज को जोड़ने और मिश्रण गति जारी है.
- प्रतिजन के एक सटीक खुराक की डिलीवरी सुनिश्चित करने के लिए एक 1 एमएल प्रतिरक्षण प्रक्रिया के लिए प्लास्टिक सिरिंज का प्रयोग करें. प्लास्टिक सिरिंज प्रतिजन पायस, सवार बाहर खींच और जहां पिछले गिलास सिरिंज 1.4 में के रूप में काट दिया गया था तीन तरह से पानी निकलने की टोंटी के उद्घाटन में खाली प्लास्टिक सिरिंज डालें.
- रिम के लिए कांच सिरिंज सवार धक्का द्वारा प्लास्टिक सिरिंज भरें. प्लास्टिक सिरिंज की पीठ सवार सम्मिलित करें और वापस प्लास्टिक सिरिंज पर 1.2 एमएल निशान तक पहुँचने तक अतिरिक्त पायस धक्का. इस पैंतरेबाज़ी का आश्वासन दिया है कि कोई हवा बुलबुला प्लास्टिक सिरिंज के अंदर फंस गया है.
- तीन तरह से पानी निकलने की टोंटी से प्लास्टिक सिरिंज निकालें. आटाप्लास्टिक सिरिंज के लिए # 26 गेज सुई Ch. 1 एमएल निशान सवार ताकि पायस अब सुई की मात्रा शून्य भरता है धक्का.
2. दाता चूहे का टीकाकरण
नोट: स्त्री C57BL / 6 चूहों आमतौर पर flanks में चार स्थलों में प्रतिजन पायसन के साथ अंतःक्षिप्त रहे हैं मूल रूप से स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान में है McFarlin 3 समूह द्वारा डिजाइन तरीकों का पालन. एक अनुभवी अन्वेषक के लिए, एक व्यक्ति पूरे कार्य कर सकते हैं. Beginners के लिए, मदद मांगा ताकि एक व्यक्ति माउस रखती है और अन्य व्यक्ति इंजेक्शन करता है हो सकता है. वैकल्पिक रूप से, माउस इंजेक्शन लिए संवेदनाहृत हो सकता है.
- माउस दृढ़ता से गर्दन की त्वचा द्वारा पकड़ और वापस 4 वें और 5 वें ऐसी है कि छाती और पेट को आसानी से सुलभ हैं उंगलियों के बीच पूंछ पकड़.
- सही बगल के ऊपर थोड़ा छाती में एक साइट पर 1mL प्लास्टिक सिरिंज की सुई प्लेस (मो के) का उपयोग और प्रतिजन पायस 0.05 एमएल subcutaneously इंजेक्षन. श्वेताभ CFA की एक छोटी सी उभाड़ना पीली त्वचा के माध्यम से देखा जा सकता है. छाती में बाईं बगल से थोड़ा ऊपर साइट के लिए एक ही दोहराएँ.
- पूंछ रिलीज और माउस के दाहिने पैर () की पकड़ ले, यह बारी और यह 4 वें और 5 वें उंगलियों के बीच में पकड़ है. रिब मामले को सही दिशा में नीचे इस साइट का पता लगाएँ और प्रतिजन पायस 0.05 एमएल इंजेक्षन.
- दाहिने पैर रिलीज करने के लिए, माउस दूसरे रास्ते बारी और 4 वें और 5 वें उंगलियों के बीच छोड़ दिया माउस के पैर पकड़. रिब मामले में बायीं ओर नीचे साइट का पता लगाएँ और प्रतिजन पायस 0.05 एमएल इंजेक्षन.
- 10 चूहों के इंजेक्शन के बाद एक ताजा सुई को बदलने के लिए, या अगर सुई की dulled हो जाता है.
3. लसीका नोड कोशिकाओं के टीकाकरण के बाद 7 से 10 दिन टिशू कल्चर के लिए अलगाव
- सात से 10 दिनों के टीकाकरण के बाद, चूहों बलिदानऔर draining लिम्फ नोड्स हटा दें. सीओ 2 साँस लेना द्वारा इच्छामृत्यु की पसंदीदा विधि है. बलिदान के बाद, अपनी पीठ पर एक विच्छेदन बोर्ड पर माउस के साथ अंग बाहर फैला और पिन के साथ बोर्ड को सुरक्षित रखना. चूहों 70% इथेनॉल का एक स्प्रे के साथ गीला कर रहे हैं.
- त्वचा में एक भट्ठा longitudinally बाँझ कैंची और संदंश के साथ ठोड़ी अप करने के लिए पेट के निचले सिरे से बीच में कटौती.
- कमर के क्षेत्र से एक पैर के नीचे पेट की त्वचा में कटौती. पील और वापस नीचे त्वचा पिन, वंक्षण लिम्फ नोड्स को उजागर.
- कट forelimbs (बाएं और दाएं) के साथ त्वचा ताकि त्वचा वापस खुली किया जा सकता है और नीचे टिकी बगल के निकट कक्षा लिम्फ नोड्स को बेनकाब.
- एक साथ काम कर रहे संदंश के दो जोड़े के साथ, दूर कवर संयोजी ऊतकों को खींच और वंक्षण लिम्फ नोड्स के आसपास. जब संयोजी ऊतकों को मंजूरी दे दी है, लिम्फ नोड के अंतर्गत संदंश की एक जोड़ी जगह है और शरीर से दूर खींच. प्लेसएक 35 मिमी पेट्री डिश में लिम्फ नोड्स बाँझ पीबीएस के साथ भर दिया.
- दूर दो कक्षा लिम्फ नोड्स दो संदंश के जोड़े का उपयोग को कवर संयोजी ऊतकों खींचो. लिम्फ नोड्स अलग करने और पेट्री डिश में उन्हें जगह है. बहुत सावधान रहना करने के लिए रक्त वाहिकाओं के क्षेत्र के रूप में खून बह रहा लिम्फ नोड्स की पहचान बहुत मुश्किल बनाता पार नहीं तोड़.
- सभी लिम्फ नोड्स के बाद एकत्र कर रहे हैं, जैव सुरक्षा हुड पेट्री डिश चाल. तोड़ने के लिए और लिम्फ नोड्स के अलावा, तंग संदंश के दो जोड़े के साथ एक दूसरे के खिलाफ पीसने. वैकल्पिक रूप से, लिम्फ नोड्स 3 एमएल प्लास्टिक पेट्री डिश के तल पर लिम्फ नोड्स के खिलाफ दबाव सिरिंज सवार की फ्लैट अंत का उपयोग करके टूट सकता है.
- नायलॉन जाल के माध्यम से पारित करने के लिए छेड़ा लसीका नोड सेल निलंबन झिल्ली और मलबे को हटा दें.
- लसीका नोड सेल निलंबन 50 बाँझ पीबीएस का उपयोग एमएल. 10 मिनट के लिए 1000 rpm पर अपकेंद्रित्र. संस्कृति के माध्यम में गोली Resuspend. एक व्यवहार्य ग करनापक्ष गिनती और 4 x 6 10 कोशिकाओं / एमएल एकाग्रता समायोजित. 1640 UseRPMI 10% भ्रूण बछड़ा सीरम, 2 मिमी एल glutamine, 1 मिमी सदस्य सोडियम पाइरूवेट, 0.1 मिमी सदस्य गैर आवश्यक अमीनो एसिड, 100 यू / एमएल पेनिसिलिन, में स्ट्रेप्टोमाइसिन 100 / μg एमएल, 10 मिमी Hepes के बफर और 5 एक्स के साथ पूरक 10 एम -5 दो मुझे. पूर्व गर्म कोशिकाओं resuspending से पहले संस्कृति.
- संस्कृति 2 अच्छी तरह से प्रति एमएल मात्रा (अंतिम सेल 8 एकाग्रता अच्छी तरह से एक्स 10 6 कोशिकाओं /) के साथ 24 अच्छी तरह से संस्कृति प्लेटों में कोशिकाओं. 100 / μg एमएल के अंतिम एकाग्रता में एक अच्छी तरह से के प्रतिजन जोड़ें. एक 37 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में 5% सीओ 2 के साथ संस्कृति की थाली रखें. 5 दिनों के लिए कोशिकाओं को सेते हैं.
4. संस्कृति की शुरूआत के बाद 5 दिन संवर्धित लसीका नोड कोशिकाओं कटाई
- पाश्चर कांच विंदुक या एक छोटी मात्रा विंदुक के साथ और नीचे pipetting द्वारा प्रत्येक अच्छी तरह से में कोशिकाओं का मिश्रण. 50 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब कोशिकाओं फसल.
- 10 मिनट के लिए 1000 rpm पर कोशिकाओं अपकेंद्रित्र. Resusपीबीएस की एक छोटी मात्रा में सेल गोली लटकना.
- कोशिकाओं गिनती और 2.5 x 10 8 बाँझ पीबीएस के साथ / कोशिकाओं एमएल व्यवहार्य सेल एकाग्रता समायोजित. # 26 गेज सुई के साथ फिट सिरिंज में कोशिकाओं ड्रा.
- प्राप्तकर्ता चूहों के पिंजरे में मदद पूंछ नस चौड़ा करना पर एक गर्मी दीपक रखें.
- एक माउस धारक का प्रयोग, धारक में भट्ठा के माध्यम से माउस की पूंछ का विस्तार. खींच पूंछ विस्तार. नस का पता लगाएँ.
- 0.2 / एमएल माउस सेल निलंबन के इंजेक्षन, 5 एक्स 10 7 कोशिकाओं बराबर है.
5. प्राप्तकर्ता चूहे की प्रतिजनी चैलेंज 20 दिनों के बाद सेल स्थानांतरण और बीमारी के लक्षण का विकास
- प्रतिजन के साथ चैलेंज प्राप्तकर्ता चूहों रोग के लक्षण नहीं दिखा. प्रक्रियाओं "दाता चूहे की प्रतिरक्षण पर धारा 2 के रूप में वही कर रहे हैं.
- प्रतिजनी चुनौती के बाद 7 से 10 दिनों के झोले के मारे रोग के विकास का निरीक्षण करते हैं.
- रोग पूंछ में कमजोरी के साथ शुरू होता है. रोग 1 के रूप में वर्गीकृत हैजब पूंछ झूलता हुआ हो जाता है. रोग 2 के रूप में वर्गीकृत है जब माउस एक पिछले अंग में रुक जाता है. रोग 3 वर्गीकृत है जब दोनों हिंद अंग झोले के मारे हुए हैं और माउस दोनों हिंद अंग drags के जब आगे रेंगने. रोग 4 वर्गीकृत है जब माउस दोनों forelimbs के उपयोग खो देता है, माउस पूरी तरह से स्थिर हो जाता है. रोग वर्गीकृत है 5 जब माउस मरणासन्न है और शरीर कर्ल. मौत बीमारी 6 ग्रेड 4 के रूप में रन बनाए है.
- MBP विशिष्ट इस प्रोटोकॉल के बाद C57BL / 6 चूहों में प्रेरित EAE monophasic है. चूहों बीमारी से ठीक हो जाते हैं, लेकिन वे सहज relapses से गुजरना नहीं हो सकता है.
6. प्रतिनिधि परिणाम
चूहों कि प्राप्त primed और इन विट्रो विस्तार दाता लसीका नोड कोशिकाओं में EAE रोग के लक्षण विकसित नहीं था, बीमारी शामिल करने के लिए उनके प्रतिरोध को दर्शाती है. हालांकि, गंभीर बीमारी प्रतिजनी चुनौती (टेबल मैं) के बाद विकसित, प्रतिजनी चुनौती की क्षमता का प्रदर्शनप्रतिरोध तंत्र पीछे में. प्रतिजनी विख्यात चुनौती से निपटने के लिए दो विशेष सुविधाओं प्रतिजन की खुराक और रोग को उत्पन्न करने के लिए चुनौती के कैनेटीक्स हैं. प्रतिजन की बहुत कम खुराक के के तालिका III में दिखाया के रूप में की जरूरत है. हैरानी की बात है, चूहों कि दाता कोशिकाओं को एक साल पहले प्राप्त अभी भी गंभीर बीमारी के विकसित जब प्रतिजन (टेबल चतुर्थ) के साथ चुनौती दी है. इन दो टिप्पणियों दृढ़ता से EAE प्रतिरोध को बनाए रखने में "लंबे समय से रहते थे" टी कोशिकाओं की भागीदारी का सुझाव देते हैं. इस प्रोटोकॉल कई EAE प्रतिरोधी माउस 4 उपभेदों के लिए लागू है.
चित्रा 1 EAE की प्रतिष्ठित प्रतिरोधी माउस उपभेदों में शामिल होने के लिए प्रयोगात्मक डिजाइन का प्रवाह चार्ट.
| नैदानिक EAE दत्तक हस्तांतरण के बाद | |||||||
| तनाव | प्रतिजन | घटना | Av. रोग ग्रेड (रेंज) | Av. शुरुआत के दिन (रेंज) | घटना | Av. रोग ग्रेड (रेंज) | Av. शुरुआत के दिन (रेंज) |
| SJL | MBP | 21/21 | 4.0 (3-5) | 8.0 (6-10) | एन डी | एन डी | एन डी |
| / C57BL 6 | MBP | 10/0 | - | - | 7/7 | 3.85 (3-5) | 9.28 (9-10) |
| / Balb ग | MBP | 0/7 | - | - | 5/5 | 3.2 (3-4) | 7.0 (7) |
| C3H/HeJ MBP | 0/7 | - | - | 4/4 | 3.2 (3-4) | 8.0 (8) | |
| / C57BL 6 | 60-80 MBP | 0/4 | - | - | 4/4 | 2.75 (2-4) | 10,2 (9-11) |
मैं टेबल की मध्यस्थता C57BL में EAE MBP / 6 चूहों की प्रेरण. C57BL / 6 चूहों में primed और इन विट्रो विस्तार दाता कोशिकाओं में प्रेरित नहीं था EAE के दत्तक हस्तांतरण. प्रतिजनी चुनौती के बाद सेल हस्तांतरण रोग शामिल करने के लिए अतिसंवेदनशील चूहों गाया. Av., औसत. एन डी नहीं किया.
| प्रतिजनी चुनौती के बाद नैदानिक EAE | ||||
| भड़काना एंटीजन | चैलेंज प्रतिजन | घटना | Av. रोग ग्रेड (रेंज) | Av. शुरुआत के दिन (रेंज) |
| MBP - CFA | CFA अकेला | 0/3 | - | - |
| MBP - CFA | ओवीए - CFA | 0/3 | - | - |
| MBP - CFA | MBP - CFA | 3/3 | 4.0 (4.0) | 7.7 (7-9) |
टेबल प्रतिजनी चुनौती के द्वितीय. विशिष्टता. प्राप्तकर्ता चूहों भड़काना के रूप में अच्छी तरह से प्रतिजन अन्य अप्रासंगिक प्रतिजनों के साथ चुनौती दी थी. केवल भड़काना प्रतिजन गंभीर बीमारी प्रेरित किया. ओवीए: चिकन ovalbumin. Av., औसत.
| प्रतिजनी चुनौती के बाद नैदानिक EAE | |||
| चैलेंज प्रतिजन खुराक (μg / माउस) | घटना | Av. रोग ग्रेड (रेंज) | Av. शुरुआत के दिन (रेंज) |
| 200 | 4/4 | 3.75 (3-4) | 8.25 (7-9) |
| 100 | 4/4 | 3.67 (3-4) | 7.5 (7-8) |
| 50 | 4/4 | 3.25 (3-4) | 8.25 (7-10) |
| 25 | 4/4 | 3.0 (3.0) | 8,25 (8-9) |
| 10 | 4/4 | 3.0 (3.0) | 8,76 (8-9) |
| 5 | 4/4 | 2.5 (2-3) | 9.75 (9-10) |
| 1 | 4/2 | 1.0 (. 1.0) | |
| 0 | 0/4 | - | - |
तालिका III. चैलेंज प्रतिजन खुराक रोग शामिल होने के लिए आवश्यक हैं. MBP के विभिन्न सांद्रता के प्राप्तकर्ता चूहों को चुनौती के लिए इस्तेमाल किया परीक्षण किया गया. Av., औसत.
| प्रतिजनी चुनौती के बाद नैदानिक EAE | ||||
| चैलेंज प्रतिजन | चैलेंज के दिन | घटना | Av. रोग ग्रेड (रेंज) | Av. शुरुआत का दिन (रेंज) |
| MBP - CFA | 5 | 3/4 | 1.33 (1-2) | 9.67 (9-10) |
| MBP - CFA | 10 4/4 | 3.0 (3.0) | 8.25 (7-9) | |
| MBP - CFA | 15 | 4/4 | 3.75 (3-4) | 7,25 (7-8) |
| MBP - CFA | 25 | 4/4 | 4.0 (4.0) | 8.0 (7-9) |
| MBP - CFA | 35 | 4/4 | 3.5 (3-4) | 7.5 (7-8) |
| MBP - CFA | 60 | 4/4 | 3.75 (3-4) | 9.0 (8-10) |
| -------------------------- | ||||
| MBP - CFA | 343 | 3/3 | 3.0 (3.0) | 10.33 (10-11) |
| MBP - CFA | 445 | 3/3 | 3.0 (3.0) | 7.0 (7.0) |
और प्रतिजनी चुनौती तालिका चतुर्थ कैनेटीक्स. प्राप्तकर्ता चूहों विभिन्न समय बिंदु के बाद चुनौती दी थी अपनाने केive सेल हस्तांतरण. Av., औसत.
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Discussion
चूहों में EAE के अध्ययन अक्सर neuroantigens, माइलिन मूल प्रोटीन (MBP), proteolipid प्रोटीन (पीएलपी) या माइलिन oligodendrocyte प्रोटीन (MOG) का उपयोग. पहले के अध्ययनों से ज्यादातर MBP इस्तेमाल किया. पीएलपी SJL चूहों से मजबूत और लगातार प्रतिक्रिया उत्तेजित करता है. हाल ही में, MOG आम उपयोग neuroantigen है क्योंकि बी -6 चूहों को इस प्रतिजन के साथ शामिल रोग के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं. जीन लक्षित माउस उपभेदों के कई बी -6 आनुवंशिक पृष्ठभूमि पर हैं. दिलचस्प है, बी -6 चूहों MOG साथ शामिल EAE के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं, लेकिन MBP साथ रोग शामिल करने के लिए प्रतिरोधी रहे हैं.
EAE के तंत्र रोग की प्रेरण तंत्र, cytokine उत्पादन और विनियामक टी कोशिकाओं को 5-7 से वसूली मध्यस्थता के प्रभाव पर केंद्रित elucidating में पिछले प्रयास की बहुत. प्रतिष्ठित EAE प्रतिरोधी चूहों रोग के प्रेरण दूसरे हाथ पर, नाश कर सकते हैं, व्यापक रूप से जांच नहीं था. यह यू बढ़ाता की कठिनाई के कारण हो सकता हैnresponsiveness. 8 अर्नोन 1981 में पहली बार पता चला कि साइक्लोफॉस्फेमाईड साथ बी -6 चूहों का इलाज इन EAE अतिसंवेदनशील चूहों MBP साथ प्रेरित गाया. दूसरों के विरोधी गामा इंटरफेरॉन के साथ कि इलाज भी सफलतापूर्वक B6 और / Balb ग 9,10 चूहों में रोग प्रेरित दिखाया. यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि इन अध्ययनों से सभी गैर विशिष्ट प्रतिजन मार्करों लक्षित करना चाहिए. दूसरी ओर, यहां वर्णित प्रोटोकॉल EAE प्रतिरोध के एक अलग पहलू पर केंद्रित है. यहाँ केवल विशिष्ट चुनौती में इस्तेमाल किया प्रतिजन EAE unresponsiveness को दूर कर सकते हैं और रोग के शामिल होने की अनुमति देता है. इस प्रोटोकॉल दोनों से primed दाता टी कोशिकाओं दत्तक हस्तांतरण और प्रतिजनी चुनौती के साथ संवेदनशीलता चरण (मैं टेबल) के साथ में EAE प्रतिरोध चरण शामिल हैं. प्रयोगों के लिए आंतरिक कारकों है कि EAE प्रतिरोध के रूप में अच्छी तरह से कारक है कि इस unresponsiveness के रिवर्स बनाए रखने का अध्ययन करने के लिए डिज़ाइन किया जा सकता है. प्रारंभ में, यह दिखाया गया था कि EAE प्रतिरोधी चूहों के लिए autoimmune प्रतिक्रिया माउंट करने में सक्षम थे जब प्रतिरक्षितMBP के साथ 4. बाद में, यह दिखाया गया था कि मस्तिष्कशोथ उत्पन्न करने वाला टी कोशिकाओं इन 2 चूहों में ही अस्तित्व में. कुछ ही 11,12 अध्ययन विरोधी CD25 एंटीबॉडी के साथ कि B10.S चूहों के इलाज चूहों के टीकाकरण के लिए पहले से पता चला proteolipid प्रोटीन (पीएलपी) के लिए प्रतिरोधी से चूहों परिवर्तित अतिसंवेदनशील है, में विनियामक टी कोशिकाओं की भूमिका (Tregs) के जिसका अर्थ EAE प्रतिरोध को बनाए रखने. हालांकि, इस मामले में जब C57BL / 6 चूहों इसी तरह व्यवहार कर रहे हैं और 13 MBP साथ प्रतिरक्षित नहीं है. चूहों के अधिकांश अनुत्तरदायी रहते हैं. इस प्रकार, EAE प्रतिरोध बहु भाज्य हो सकता है. यह माने कि, C57BL के मामले में 6 / MBP करने के लिए जवाब देने चूहों, thymic चयन सबसे MBP - प्रतिक्रियाशील टी ऐसी है कि MBP प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की परिधि में आवृत्तियों बहुत कम कर रहे हैं कोशिकाओं को नष्ट कर दिया गया है. यह नीचे की सीमा कम आवृत्ति MBP साथ प्रतिरक्षण का जवाब करने में सक्षम नहीं चूहों प्रस्तुत करना होगा. चुनौती खुराक अज्ञात तंत्र के माध्यम से, आवृत्ति मुद्दा और मीटर पर काबू पाने में सक्षम हैount एक autoimmune प्रतिक्रिया. संभव तंत्र की आगे की जांच प्रतिजनी चुनौती के दौरान Tregs द्वारा निषेध मस्तिष्कशोथ उत्पन्न करने वाला की संवेदनशीलता को प्रभावित करने में 12 आईएल -6 की भूमिका भी शामिल होगा.
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Disclosures
कोई वित्तीय प्रकटीकरण.
Acknowledgments
स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान से अनुदान (: NS37253 R01 और NS055167 N01) और राष्ट्रीय मल्टीपल स्केलेरोसिस सोसायटी (+३२८८ A6 आरजी) द्वारा भाग में समर्थित है.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Guinea pig spinal cords |  Rockland Immunochemicals |
GP-T065 | frozen |
| Freund’s Adjuvant, complete H37Ra | Difco Laboratories | 231131 | |
| Multifit interchange-able syringe | BD Biosciences |
512133 | |
| RPMI 1640 | Mediatech, Inc. |
10-040-CM | |
| OVA | Sigma-Aldrich |
A5503 | |
| Mice | Jackson Laboratory | B6 mice: 0000664 | Bar Harbor, Maine |
References
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