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Biology

Crustacean साथ लंबी अवधि के घातक विषाक्तता टेस्ट Artemia franciscana doi: 10.3791/3790 Published: April 14, 2012

Summary

इस अध्ययन और एक मूल्यवान पद्धति के लिए लंबी अवधि (14 दिन) घातक रासायनिक पदार्थों, औद्योगिक अपशिष्ट या मल और खारे पानी जलीय पर्यावरण पर तरल नमूने द्वारा exerted विषाक्तता निर्धारित प्रोटोकॉल के विकास और मानकीकरण का सवाल है,

Abstract

हमारे अनुसंधान गतिविधियों के खारे पानी / खारा पानी और तलछट के लिए विशेष संदर्भ के साथ पर्यावरण की गुणवत्ता का मूल्यांकन करने के लिए जैविक विधियों के प्रयोग के लक्ष्य. जैविक संकेतकों की पसंद विश्वसनीय वैज्ञानिक ज्ञान पर आधारित होना चाहिए, और संभवतः मानकीकृत प्रक्रियाओं की उपलब्धता पर. इस अनुच्छेद में, हम एक मानकीकृत प्रोटोकॉल है कि समुद्री जलीय Artemia का इस्तेमाल रसायन और / या समुद्री पर्यावरण matrices के विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए उपस्थित थे. वैज्ञानिकों का प्रस्ताव है कि नमकीन चिंराट (Artemia) के दुनिया भर में उपयोग करने के लिए एक मानक bioassay के विकास के लिए एक उपयुक्त उम्मीदवार है. नमकीन चिंराट (Artemia) पर विभिन्न रसायनों और विषैले पदार्थ के विषैले प्रभाव पर कागज के एक नंबर प्रकाशित किया गया है. विषाक्तता अध्ययन के लिए इस जलीय के प्रमुख लाभ शुष्क अल्सर की कुल उपलब्धता है, तुरंत इन परीक्षण में इस्तेमाल किया जा सकता है और मुश्किल खेती की मांग नहीं की है 3 प्रयोजनों के लिए,. प्रस्तावित विधि एक endpoint के रूप में मृत्यु दर शामिल है. जीवित बचे लोगों की संख्या में गिना गया और मौतों का प्रतिशत गणना की गई. लार्वा मृत माना गया है अगर वे 4 अवलोकन के कई सेकंड के दौरान किसी भी आंतरिक या बाह्य आंदोलन प्रदर्शन नहीं किया था. यह प्रक्रिया मानकीकृत परीक्षण संदर्भ पदार्थ (सोडियम Dodecyl सल्फेट) था, कुछ परिणाम इस काम में रिपोर्ट कर रहे हैं. यह लेख एक वीडियो कि प्रक्रियात्मक विषाक्तता परीक्षण के प्रदर्शन का वर्णन है, प्रोटोकॉल के लिए संबंधित सभी चरणों को दिखाने के साथ.

Protocol

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1. विधि मानक

हमारे परीक्षण पदार्थ सांद्रता के अंतराल या एकाग्रता या कमजोर पड़ने के स्तर है कि 14 दिनों से अधिक उजागर जीवों की 50% की मृत्यु (50 नियंत्रण रेखा) का कारण होता है का निर्धारण करने के प्रयोजन के लिए एक परीक्षण के नमूने के Artemia लार्वा को उजागर और परिभाषित स्थितियों की बैठक इस विधि के द्वारा. आवश्यक है और यदि संभव हो तो, निम्नलिखित भी निर्धारित किया जा सकता है: एक) एकाग्रता है कि स्तर को उजागर जीवों के 20% (20 नियंत्रण रेखा) की मौत का कारण बनता है, ख) उच्चतम विश्लेषण एकाग्रता स्तर है कि एक उच्च मृत्यु दर की तुलना में निर्धारित नहीं करता है नकारात्मक नियंत्रण (NOEC), न्यूनतम परीक्षण एकाग्रता स्तर है कि 14 दिन, नकारात्मक नियंत्रण (LOEC) की तुलना में एक उच्च मृत्यु दर के बाद निर्धारित करता है.

2. परीक्षण सामग्री

2.1 Artemia अंडे

परीक्षण प्रदर्शन, Artemia franciscana 5 अंडे से प्राप्त है. प्रमाणित अंडे या अल्सर परीक्षण समर्थन का उपयोग व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं, गुणवत्ता आश्वासन अनुसंधान प्रभाग, अमेरिका पर्यावरण संरक्षण एजेंसी, सिनसिनाटी 45,268 ओह, संयुक्त राज्य अमेरिका से या जलीय प्रदूषण में बायोलॉजिकल रिसर्च, गेन्ट विश्वविद्यालय, बेल्जियम के लिए प्रयोगशाला से उदा.

2.2 जल मन्दन

सिंथेटिक समुंदर का पानी कमजोर पड़ने के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, मान्यता प्राप्त विश्लेषणात्मक गुणवत्ता अभिकर्मकों या आसुत या de-ionized पानी में एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध तैयार भंग करके तैयार किया. आदर्श खारे पानी बनाने के लिए नमक मिश्रणों व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं, उदाहरण के तुरंत महासागर मिश्रण के. यह 35 (± 2) के बराबर लवणता के साथ एक मन्दन पानी के सिफारिश की है के रूप में के रूप में अच्छी तरह से भंग संतृप्ति के मूल्य का 80% से अधिक की ऑक्सीजन एकाग्रता और 25 की एक तापमान (2 ±) और पीएसयूडिग्री; सी. 48 घंटे और कम से कम 0.45 माइक्रोन की porosity के साथ फिल्टर में निस्पंदन के लिए वातन के बाद, कमजोर पड़ने 0-4 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर अंधेरे में 30 दिन की एक अधिकतम के लिए भंडारित किया जा सकता है

2.3 algal संस्कृति

यह अनुशंसा की जाती है कि परीक्षण जीवों Dunaliella tertiolecta microalgae पर फ़ीड, जो तेजी से बढ़ने और 6 1.3x10 का घनत्व तक पहुँचने - 2.0x10 6 कोशिकाओं / एमएल. पर्यावरणीय नमूनों पर परीक्षण 2.0x10 6 कोशिकाओं / 6 मिलीग्राम की तुलना में उच्च घनत्व के साथ संस्कृतियों की आवश्यकता है. यह सुझाव दिया है कि Dunaliella tertiolecta संस्कृति समुद्री जल युक्त मीडिया में बढ़ता है (30 (± 2) पीएसयू और 20 (± 1) डिग्री सेल्सियस) आवश्यक पोषक तत्वों, खनिज और विटामिन के अलावा के साथ. Algal मीडिया रचना और तैयारी पर कुछ संकेत परिशिष्ट में रिपोर्ट कर रहे हैं. प्रारंभिक सेल घनत्व लगभग 10 5 कोशिकाओं / एमएल सुझाव दिया है. काई संस्कृति में बनाए रखा है20 में कमरा थर्मोस्टेट (± 1) डिग्री सेल्सियस, फ्लोरोसेंट लैंप 3000 (300 ±) प्रकाश की 16 घंटे की एक photoperiod अंधेरे के 8 घंटे के लिए अनुपात के साथ LX, के साथ प्रकाशित किया.

अन्य phytoplankton प्रजातियों के भोजन के लिए भी इस्तेमाल किया हो सकता है लेकिन यह के phytoplankton इन प्रजातियों के साथ तुलनात्मक अध्ययन Dunaliella tertiolecta "बराबर" प्रजाति को खोजने के लिए आवश्यक होगा, क्योंकि प्रयोगात्मक शर्तों के (जैसे प्रारंभिक सेल घनत्व, प्रकाश रोशनी, तापमान, की रचना संस्कृति मीडिया और एक्सपोज़र समय) phytoplankton प्रजातियों के बीच बदलता है. इसके अलावा microalgae विभिन्न प्रदूषण सहिष्णुता के लिए विचार किया जाना चाहिए, क्योंकि प्रदूषक और phytoplankton भी Artemia के प्रभाव की वृद्धि और विकास पर प्रभाव.

2.4 संदर्भ पदार्थ

इस परीक्षण में संदर्भ पदार्थ सोडियम Dodecyl के सल्फेट है.

2.5 प्रयोगशाला कांच के बने पदार्थ

  1. 100 मिलीलीटर borosilicate ग्लास beakers (18 परीक्षण और समाधान स्थानांतरित करने के लिए 18 का प्रदर्शन करने के लिए) सहित परीक्षण कंटेनर.
  2. एक कुप्पी के लिए मानक समाधान तैयार करने (जैसे 500 मिलीलीटर फ्लास्क).
  3. छह बोतल (जैसे 200 मिलीलीटर की बोतल) परीक्षण समाधान को तैयार है.
  4. ग्लास या हटाने योग्य के साथ 5 सेमी व्यास पेट्री डिश polystyrene अल्सर को सक्रिय करने और अंडे सेने के पकवान से Artemia परीक्षण कंटेनर को स्थानांतरित करने के लिए इस्तेमाल किया जा रहा शामिल हैं.
  5. ग्लास nauplii स्थानांतरित करने के लिए पाश्चर pipettes (लौ द्वारा गोल सुझावों के साथ).
  6. ग्लास cannulae या पाश्चर Artemia स्थानांतरित करने के लिए 3 मिलीग्राम डिस्पोजेबल प्लास्टिक pipettes (कटौती की जानी).
  7. Micropipettes और स्नातक की उपाधि प्राप्त pipettes परीक्षण समाधान तैयार करने के लिए.
  8. छह बोतल से परीक्षण समाधान टी के लिए स्थानांतरित करने के लिए स्नातक की उपाधि प्राप्त सिलेंडर (जैसे 50 मिलीलीटर सिलेंडर)वह कंटेनर परीक्षण.

3. पुटी सक्रियकरण

3.1. पेट्री अल्सर युक्त व्यंजन + पानी डालने का कार्य

परीक्षण जीवों को उत्पन्न करने के लिए, अल्सर के 20 मिलीग्राम परीक्षण से पहले 48 घंटे के कमजोर पड़ने के पानी की 12 मिलीलीटर युक्त एक पेट्री डिश में रखा जाता है.

3.2. प्रकाश में और अंधेरे में ऊष्मायन

पेट्री डिश 25 पर बनाए रखा है (± 2) डिग्री सेल्सियस और एक (1000 ±) चार हज़ार लक्स (वर्ग मीटर प्रति lumens) एक घंटे के लिए रोशनी की तीव्रता में.

3.3. माइक्रोस्कोप का उपयोग मध्यम जगह

24 घंटे के बाद, एक कृत्रिम पानी से भरा नई पेट्री डिश में अंडे सेने के लार्वा स्थानांतरित कर रहे हैं. हस्तांतरण का उपयोग कर खुर्दबीन, यानी एक प्रकाश स्रोत का उपयोग इतना है कि अंडे सेने, phototropic लार्वा प्रकाश किरण की ओर पलायन किया जाता है. एक गिलास पाश्चर विंदुक हस्तांतरण बनाने के लिए प्रयोग किया जाता है, कि केवल नवजात लार्वा की गिरफ्तारी सुनिश्चित करने केई हस्तांतरित और झिल्ली में अभी भी अल्सर या लार्वा.

3.4. अंधेरे में ऊष्मायन

लार्वा युक्त पकवान एक अंधेरे थर्मास्टाटिक कक्ष में 25 में 24 घंटे के लिए रखा जाता है (2 ±) डिग्री सेल्सियस

4. परीक्षण समाधान की तैयारी

4.1. पदार्थ वजनी + कुप्पी के लिए स्थानांतरण

यह सिफारिश की है कि परीक्षण पदार्थ के लिए मानक समाधान एक 500 मिलीलीटर की कुप्पी में पदार्थ की 0.5 ग्राम घुला देनेवाला द्वारा तैयार की है. कुप्पी de-ionized या आसुत पानी से भर जाता है और जब तक परीक्षण पदार्थ को पूरी तरह भंग है समाधान हड़कंप मच गया है. समाधान के लिए उपयोग की समय पर तैयार है जब तक यह ज्ञात नहीं है कि पदार्थ समाधान में स्थिर है. उस मामले में, परीक्षण से पहले दो दिन के लिए मानक समाधान किया जा तैयार हो सकता है.

4.2. नकारात्मक नियंत्रण की तैयारी, कमजोर पड़ने पानी और शैवाल वाई जोड़ने10 मिलीलीटर विंदुक वें

नकारात्मक नियंत्रण एक कुप्पी (जैसे 200 मिलीलीटर मात्रा) में कमजोर पड़ने पानी काई के निलंबन का एक नि: शेष भाजक जोड़ने ताकि 5 10 कोशिकाओं / एमएल के एक घनत्व प्राप्त किया जाता है के द्वारा तैयार किया जाता है.

4.3. परीक्षण समाधान की तैयारी: कमजोर पड़ने पानी, शैवाल और मानक समाधान जोड़ने

यह सुझाव दिया है कि परीक्षण समाधान पाँच 200 मिलीलीटर बोतल में कि परीक्षण के लिए वांछित सांद्रता प्राप्त की है ताकि निर्दिष्ट मात्रा में कमजोर पड़ने पानी के लिए मानक समाधान जोड़कर तैयार कर रहे हैं. जीवों के लिए फ़ीड, एक Dunaliella tertiolecta microalgae निलंबन की aliquots और इस्तेमाल किया जा सकता है 10 5 कोशिकाओं / एमएल के एक घनत्व तक पहुँचने जब ​​परीक्षण समाधान के लिए तैयार कर रहे हैं जोड़ा है. कमजोर पड़ने पानी, algal निलंबन और मानक समाधान: इसके अलावा की निम्नलिखित आदेश की सिफारिश की है. परीक्षण समाधान की तैयारी के बाद, वे परख में इस्तेमाल किया जा जितनी जल्दी हो सके है.

4.4. कुप्पी से परीक्षण कंटेनर के समाधान स्थानांतरण तो पेट्री डिश,

परीक्षण समाधान की बराबर मात्रा में (50 मिलीलीटर) परीक्षण स्नातक की उपाधि प्राप्त सिलेंडर का उपयोग कंटेनरों में पेश कर रहे हैं. प्रत्येक एकाग्रता के लिए तीन प्रतिकृतियां बना रहे हैं. परीक्षण के प्रत्येक श्रृंखला के लिए, एक नियंत्रण कंटेनर कमजोर पड़ने पानी का परीक्षण समाधान की मात्रा के बराबर राशि के साथ तैयार है. परीक्षण समाधान के बराबर मात्रा में (के बारे में 12 मिलीलीटर) पेट्री डिश में पेश कर रहे हैं. परीक्षण के प्रत्येक श्रृंखला के लिए, एक नियंत्रण पेट्री डिश में प्रयोग किया जाता है.

5. जांच के लिए तैयार

5.1. द्वितीय - तृतीय चरण में nauplii

पुटी सक्रियण के बाद अड़तालीस घंटे, nauplii द्वितीय III लार्वा मंच तक पहुँचने के लिए और फिर परीक्षण के लिए प्रयोग करने योग्य हैं.

5.2. पेट्री माइक्रोस्कोप का उपयोग बर्तन में nauplii हस्तांतरण

पेट्री डिश पुटी के लिए इस्तेमाल किया सक्रियण थर्मास्टाटिक कक्ष से बाहर ले लिया है. लार्वा की एक छोटी मात्रा में हैं पेट्री नियंत्रण और परीक्षण समाधान युक्त बर्तन में स्थानांतरित कर रहे हैं. इस काम के लिए पर्याप्त विस्तृत व्यास की एक विंदुक उपयोग इतना है कि जीवों से क्षतिग्रस्त हो नहीं खुर्दबीन के साथ प्रदर्शन किया है. परीक्षण के इस चरण में, एक गिलास पाश्चर (लौ द्वारा गोल टिप के साथ) विंदुक और एक पाशर्ववत तैनात प्रकाश स्रोत है कि कुल के लिए Artemia को प्रोत्साहित करती है हस्तांतरण के साथ प्रदर्शन किया जा सकता है.

5.3. Nauplii परीक्षण कंटेनरों में पेट्री डिश से खुर्दबीन के साथ हस्तांतरण

दस लार्वा परीक्षण समाधान पेट्री डिश के से परीक्षण कंटेनर के लिए स्थानांतरित कर रहे हैं. इसके अलावा इस आपरेशन पाश्चर विंदुक और माइक्रोस्कोप का उपयोग करके किया जाना है. यह अनुशंसा की जाती है कि एक से अधिक 1 एमएल नहीं मात्रा लार्वा की यात्रा के दौरान परीक्षण प्रणाली की कुल मात्रा को प्रभावित नहीं स्थानांतरित कर रहा है.

e_step "> 5.4. पूर्ण कंटेनर parafilm के साथ कवर किया

परीक्षण beakers parafilm (हवाई यात्रा के लिए एक अंतर को छोड़कर) के साथ कवर किया जाता है, और 25 के एक तापमान (± 2) डिग्री सेल्सियस परीक्षण की पूरी अवधि के लिए और 900 lx (± 100) की रोशनी में एक photoperiod के साथ बनाए रखा अंधेरे के 10 घंटे के लिए प्रकाश के 14 घंटे के अनुपात.

6. मध्यम और खाद्य अनुपूरक की जगह

6.1. जीवित रहने की दर नियंत्रण

दो दिन के बाद परीक्षण शुरू कर दिया है, और फिर 5, 7, 9, और 12 दिनों के बाद जीवित रहने की दर को सत्यापित करने के लिए और मध्यम और खाद्य पूरक की जगह खुर्दबीन के तहत Artemia मनाया जाता है.

जीवित जीवों की संख्या प्रत्येक परीक्षण कंटेनर में गिना जाता है. खुर्दबीन के नीचे अवलोकन और मामूली यांत्रिक उत्तेजना (जैसे एक गिलास पाश्चर विंदुक के साथ लार्वा को छू) जीव है कि कुछ आंदोलन के बारे में 10 के लिए नहीं दिखाते बादeconds मृत माना जाना चाहिए.

6.2. एक परीक्षण समाधान एक 10 मिलीलीटर और micropipette साथ परीक्षण किया जा पदार्थ की विंदुक नमूना के साथ शैवाल नमूना दिखाने की तैयारी. कुप्पी से परीक्षण कंटेनर समाधान स्थानांतरण

जबकि परीक्षण, परीक्षण समाधान समय - समय पर किया जा जगह चाहिए और एक ही दिन के रूप में वे करने के लिए इस्तेमाल किया जा रहे हैं में तैयार किया. टेस्ट समाधान मानक पहले से तैयार समाधान से बना रहे हैं.

6.3. पुराने परीक्षण कंटेनर से Artemia कटौती पाश्चर विंदुक उपयोग, तीन नए कंटेनर करने के लिए स्थानांतरण

Artemia के हस्तांतरण पर्याप्त विस्तृत व्यास के साथ एक विंदुक का उपयोग इतनी के रूप में क्षति के लिए नहीं जीवों द्वारा किया जाता है. इस चरण के दौरान, एक 3 मिलीग्राम प्लास्टिक पाश्चर विंदुक (कटौती की जानी) इस्तेमाल किया जा सकता है.

6.4. एक बीकर में लार्वा या तो जीवित या मृत Artemia युक्त

बाद 1 परीक्षण के अंत में जोखिम के 4 दिन, जीवित लार्वा की संख्या में गिना जाता है और कार्यपत्रक पर दर्ज की गई. नियंत्रण रेखा 50 और / या नियंत्रण रेखा 20, NOEC और 14 दिनों में LOEC, गणना कर रहे हैं और दर्ज की गई है, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से 95% जहां उपयुक्त हो, और गणना के तरीकों में विश्वास की सीमा.

7. प्रतिनिधि परिणाम

परीक्षण (14 दिन) के अंत में, प्रत्येक एकाग्रता में मृत्यु दर का प्रतिशत, गणना निम्नलिखित सूत्र के अनुसार:

(एम / एस एन) * 100

जहाँ:

एम एस नमूना विश्लेषण में मृत्यु हो गई व्यक्तियों की औसत संख्या

N उजागर व्यक्तियों की कुल संख्या है

तालिका 1 Artemia (14D) के साथ एक परीक्षण को सोडियम Dodecyl सल्फेट के लिए संपर्क के डेटा का एक उदाहरण की रिपोर्ट.

"> प्रत्येक प्रतिकृति में मृत्यु हो गई व्यक्तियों की संख्या
सांद्रता (मिलीग्राम / l) मृत्यु दर (%)
मैं द्वितीय तृतीय
नकारात्मक नियंत्रण 0 2 1 10
1.56 1 2 0 10
3.12 2 0 2 13
6.25 3 2 3 27
12.5 8 9 10 90
25.0 10 10 10 100
50.0 10 10 10 100

इसके अलावा, निर्धारितनियंत्रण रेखा एक ग्राफिकल गाऊसी लघुगणक साजिश या उपयुक्त सांख्यिकीय तरीकों (भाला धारण करनेवाला सिपाही Karber उदाहरण या Probit विधि के लिए) का उपयोग कर से 50 मूल्य. 50 नियंत्रण रेखा के एक तालिका के डेटा के लिए गणना 8.18 (7.15-9.37) मिलीग्राम / लीटर है. यदि अधिकतम एकाग्रता एक कम मृत्यु दर 50% की वजह से परीक्षण, आप नियंत्रण रेखा 50 मूल्य जो तो अविश्वसनीय है या यहां तक कि गैर - गणनीय होगा की गणना करने के लिए नहीं आगे बढ़ना चाहिए. इस मामले में, तथापि, परीक्षण सांद्रता की सीमा का विस्तार से परीक्षण दोहराना उचित होगा. वैकल्पिक रूप से, नियंत्रण रेखा के मूल्य 50 उच्चतम परीक्षण एकाग्रता से अधिक के रूप में और अधिक सही ढंग से व्यक्त किया है, संभवतः उच्चतम परीक्षण एकाग्रता में मृत्यु दर का प्रतिशत और एक कोई प्रभाव नहीं करने के लिए उच्चतम इसी एकाग्रता का संकेत है.

परिणाम वैध माना जाता है अगर निम्नलिखित शर्तों के परीक्षण के अंत में मुलाकात किया गया है:

  1. नियंत्रण की औसत मृत्यु दर≤ 20% है;
  2. जहां 14 दिनों में Dodecyl सोडियम सल्फेट, 50 नियंत्रण रेखा का उपयोग करने का अंतराल (5 ±) मिलीग्राम / l 8.0 में शामिल है.

यदि उपरोक्त शर्तों को पूरा नहीं किया गया है, सभी जीवों का एक ही बैच के साथ प्राप्त डेटा अमान्य माना जाना चाहिए और परीक्षण दोहराया.

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Discussion

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Artemia सबसे मूल्यवान परीक्षण इतनी दूर किया ecotoxicity परीक्षण और अनुसंधान के लिए उपलब्ध जीवों में से एक है हमें राज्य है कि यह संभव है Artemia विष विज्ञान और ईकोटोकसीकोलौजी में में उपयोग करने के लिए संबंधित कई विकल्प को बनाए रखने की अनुमति देता है. विशेषताओं है कि bioassays के लिए एक उपयुक्त प्रजातियों में इस जीव को बारी हैं: एक विस्तृत भौगोलिक वितरण, प्रतिकूल पर्यावरणीय परिस्थितियों और विभिन्न पोषक तत्वों, अपेक्षाकृत सरल प्रयोगशाला संस्कृति और रखरखाव, हेरफेर करने के लिए प्रतिरोध, कम जीवन चक्र, बड़े वंश उत्पादन और उच्च अनुकूलन क्षमता कुछ प्रजातियों के बारे में जानकारी के एक काफी राशि का अस्तित्व. Artemia के इस्तेमाल के खिलाफ एक आलोचना अपने रासायनिक जोखिम के लिए संवेदनशीलता के लिए संदर्भित किया जाता है: ecotoxicity अध्ययन के लिए एक कम संवेदनशील प्रजाति के रूप में पहले के अध्ययनों Artemia (24 घंटे जोखिम के लिए परीक्षण) का उल्लेख है, जब एक ही प्रयोगात्मक 3 शर्तों के तहत अन्य परीक्षण जीवों की तुलना में. के चुनाव कोecotoxicity परीक्षण के लिए विधि इस संबंध में महत्वपूर्ण है. हम एक तरीका है कि 4 जोखिम के 24 घंटे के लिए प्रोटोकॉल के एक ही शुरू करने की स्थिति (nauplii एक परीक्षण जीव के रूप में अल्सर के उपयोग से प्राप्त) प्रमाण के अनुसार करना चाहता था, लेकिन अपेक्षाकृत लंबी जोखिम बार (14 दिन) के साथ एक और अधिक सकता है प्रदान संवेदनशील प्रतिक्रिया. इस प्रोटोकॉल में निश्चित रूप से तीव्र परीक्षण की तुलना में अधिक संवेदनशील प्रतिक्रिया की अनुमति देता है लेकिन यह एक पुरानी परीक्षण के लिए एक विकल्प के रूप में नहीं किया क्योंकि 14 दिनों की एक जोखिम प्रासंगिक नहीं है अगर हम Artemia का अनुमान उम्र पर विचार कर सकते हैं. endpoint के चयन के लिए इस पद्धति व्यापक रूप से चर्चा की गई है. शुरू में दोनों मृत्यु दर और विकास (यानी 14 दिन के प्रदर्शन के बाद पृष्ठवर्म लंबाई) चुना गया, क्योंकि हम भी एक लंबी अवधि के परीक्षण के लिए एक sublethal प्रभाव का अवलोकन सुनिश्चित करना चाहता था. हालांकि, sublethal endpoint के कम 6 मृत्यु दर में तुलना में संवेदनशील होना पाया गया. इस कारण से मृत्यु दर केवल descript में वर्णित endpoint हैप्रोटोकॉल और वीडियो में आयन. यह निष्कर्ष अन्य शोधकर्ताओं के अध्ययन 7,8 जो देखा अस्तित्व उन्हें (अस्तित्व, विकास और प्रजनन) द्वारा विचार उन लोगों के बीच सबसे संवेदनशील endpoint है कि के साथ संगत है.

प्रस्तावित विधि रसायन अपशिष्ट, और पर्यावरण 9 matrices के विषाक्तता के मूल्यांकन के लिए उपयोगी है. सुविधा में यह अन्य उप घातक ऐसे बायोमार्कर (यानी enzymatic गतिविधि) 10 के रूप में पुरानी विषाक्त प्रभाव, का परीक्षण करने के लिए दिलचस्प हो सकता है.

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Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

References

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Crustacean साथ लंबी अवधि के घातक विषाक्तता टेस्ट<em> Artemia franciscana</em
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Manfra, L., Savorelli, F., Pisapia, M., Magaletti, E., Cicero, A. M. Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana. J. Vis. Exp. (62), e3790, doi:10.3791/3790 (2012).More

Manfra, L., Savorelli, F., Pisapia, M., Magaletti, E., Cicero, A. M. Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana. J. Vis. Exp. (62), e3790, doi:10.3791/3790 (2012).

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