Summary
В этой статье мы продемонстрируем тесты для изучения теплового ноцицепции в
Protocol
Типичный план экспериментальные шаги для подготовки нормального или УФ-чувствительных личинок на двух тепловых анализов ноцицепции показано на рисунке 1.
1. Подготовка Личинки
- Мужское и женское потомство личинками желаемый генотип может быть проверено непосредственно. Кроме того, генетический крест можно настроить для получения потомства личинок определенного генотипа интерес. Установка креста в бутылки с лету пищи на 20-30 девственной женщины и мужчины 15-20.
- 5 дней после того, как яйцо лежало, сбора урожая и чистой начале третьего возраста личинок на черпая из мягкой пищи лету и мягко напряжение с проточной водой через 630 мкм (размер пор) сетки. Трансфер в начале третьего возраста личинок (~ 3-4 мм в длину вдоль передне-задней оси) в небольшой влажный площадку пищи, чтобы предотвратить голод и dessication. Если ноцицептивной чувствительности должны быть проверены, следуют последующие шаги 2.1-2.11. Если личинки должны быть испытаны в absencе повреждение тканей, переходите к пункту 3.1.
2. Превращение в эфир и УФ-облучения
- Построить превращение в эфир камеру.
- Отрежьте нижнюю с 1,5 мл микроцентрифужных трубку.
- С горячим шпателем расплава металла разреза края микроцентрифужных трубку.
- Нанесите мелкую сетку, чтобы расплавленный поверхности трубы и дайте ему остыть. Превращение в эфир камера позволит ввод паров эфира, но запретить личиночной побега.
- Используйте пинцет или кистью аккуратно разместить 10 личинок в начале третьего возраста в домашних превращение в эфир камеру.
- Место личинок по внутренней стороне крышки и близких.
Примечание: Следующие два шага должны быть выполнены в вытяжном шкафу, как эфир взрывоопасных химических и его пары могут обезболить человека, а также личинки.
- Поместите превращение в эфир камеру, содержащую личинки внутри банка Коплин содержащих 10 мл стакан проведенияватный тампон пропитанный ~ 1,5 мл диэтилового эфира.
- Винт на крышке банки Коплин подвергать личинок эфира пары от 2 до 2,5 минут. Обратите внимание, что более длительное время превращение в эфир может негативно сказаться поведения личинок или выживания.
- После превращение в эфир, удалите превращение в эфир камеру с Коплин банка / стакан, дав несколько секунд в капюшоне для эфира пары, чтобы рассеять. Теперь вы можете перейти от капота к лаборатории.
- Используйте бутылку воды шприц аккуратно промыть личинок из превращение в эфир камеру в небольшой чашке Петри.
- Используйте пинцет и Kimwipe, чтобы уничтожить личинки под наркозом сухой и аккуратно наносить их спинной стороны на полосу двухсторонний скотч крепится к 3 "х 1" предметное стекло стеклом.
- Поместите скользят по нижней поверхности камеры УФ облучением и подвергать личинки к ультрафиолетовому излучению в течение 6 секунд при 20 мДж / см 2 интенсивности.
- Погрузите слайд в воду, чтобы аккуратно плавать личинок прочь двусторонний scotcч ленты.
- Используйте пинцет или кистью аккуратно поместить облучения личинок в 15 х 45 мм, одна драма стекло культуры флакон, содержащий ~ 1,0 мл лету питания, где они могут восстановиться в течение переменного периода времени (8 -24 часов) при 25 ° C или другие необходимые культура температуры до повторного сбора для тепловых анализов ноцицепции.
3. Местное Анализ зонд тепла
Мы поставляем вредных тепловой стимул для отдельных личиночных сегмент тела с помощью заказных термозонд фирмы Pro-Dev техники (см. таблицу материалов). Хотя этот датчик имеет оптимальные конструктивные особенности (небольшой металлический наконечник от ~ 0,07 мм 2 площади и возможности точно поддерживать заданную температуру точку 23 ° C до 65 ° C) в принципе любой инструмент с небольшой совет, который можно нагреть к определенной температуры в течение периода до 20 секунд должно быть достаточно. Зонда используется для стимуляции раннего возраста 3 личинки именно на Дорсал срединной линии на брюшной A4 сегмента (см. рисунок 2). В ответ на это тепловой стимул, личинки, как правило проявляют отвращение поведение вывод подвижного сторону на 360 градусов и более. Это поведение отличается от их света ответ на прикосновение без вредных комнатной температуре металлический зонд, который обычно включает в себя краткую паузу в своей двигательной активности 13.
Протокол анализа зонд тепла:
- Предварительно установленная температура теплового зонда заданного уровня.
- Используйте кисть или пинцетом аккуратно передавать отдельные личинки на плоской платформе (мы обычно используем небольшой кусок винила вырезанные из связующих), на котором личинки впоследствии будут стимулироваться. Личинки должны быть покрыты тонкой пленкой воды до контакта с тепловой датчик. Пленка воды охватывает личинки должны быть как можно меньше и полностью покрывать личинку, обеспечивая при этом, что личинка не сухим при прикосновении к виниловым.
- Слегка нажмите зонда против личинок в сегменте A4 с легким давлением кончика примерно под углом 45 ° между зондом и поверхностью личинки (см. Рисунок 2). Давление должно вызывать небольшое углубление на поверхности личинки и, как правило, достаточно для предотвращения передвижения. Если личинка продолжает движение, применить немного больше давления, и это, как правило, прекращается. Не записывайте данные из личинок, которые перемещаются за пределами поля зрения, или для которых постоянный контакт датчика не может быть достигнуто, пока ответа или 20 с обрезания.
- Продолжить стимулирование личинки до вывода ответа проявляется либо до 20 секунд отсечки будет достигнута, что наступит раньше. Отвечая личинки обычно сначала показать предварительные поведением подъема головы и хвоста. Это обычно сопровождается выводом поведение подвижного крайней мере, на 360 градусов. Только полный рулон на 360 градусов оценивается как nocifensive поведения (предварительный HEAг или хвост повышение не является).
- После вывода поведение начинается выпуск контакта с зондом и записывать задержка или время выхода. Если нет вывода поведение наблюдается в течение 20 секунд, то личинка не является ответчиком. Респондентов можно разделить на 2 категории. Если вывод поведение показано в течение 5 секунд, то личинка быстро ответчика. Если вывод поведение показано 5-20 секунд, затем личинки медленно ответчика (см. Рисунок 1 в Бэбкок и соавт. 2009) 1.
4. Глобальный пробирной пластинчатый теплообменник
Анализ пластинчатый теплообменник предназначен для измерения тепловой ноцицепции у личинок дрозофилы, когда все животные сталкиваются с вредными тепловой раздражитель. Индивидуальные середине 3-го возраста личинки находятся в 80 мкл каплю воды на 60 х 15 мм блюдо Петри - см. рисунок 3 схемы и фотографии анализа наборавверх. Чашку Петри помещают на твердую нагревательный блок (называемый "тепловой тарелка"). Когда температура повышается капли воды, личинка демонстрирует серию из пяти стереотипное поведение мы называем глава трэш, рулон, кнутом, арест и паралич. Поскольку эти поведения в той или иной степени функции заданной температуры пластинчатый теплообменник и объем воды, в которой личинка погружена мы представляем здесь, что мы нашли, что оптимальные условия (95 ° C тепла пластине, 80 мкл капли воды), для соблюдения всех 5 поведение с минимальным перекрытием между ними.
Протокол анализа тепло пластины:
- Установите волоконно-оптических световодов, чтобы там достаточно высокий контраст освещения для просмотра личинки. Использование тест личинка, если необходимо. Индикатор питания должна быть на низком, чтобы избежать температуры окружающего воздуха от личинки к тестированию.
- Поместите нагревательный блок в пластинчатый теплообменник с плоской поверхности и поместите на пластинчатый теплообменникМикроскоп базы. Включите пластинчатый теплообменник для «высокого» положения, позволяющие приблизительно 15 минут для стабилизации температуры, и настроить соответствующим образом для достижения температура поверхности 95 ° C.
- Измерьте 80 мкл дистиллированной воды и поместите каплю воды в середине 60-х 15 мм полистирола чашку Петри с micropipettor.
- Используйте пинцет, чтобы аккуратно разместить чистую середине 3-го возраста личинки в середине капли воды. Попробуйте перевести личинка с минимально возможным количеством воды так, что капли для нагрева остается как можно ближе к оригиналу 80 мкл.
- Аккуратно поместите чашку Петри содержащих капли воды и личинки на твердый блок отопления на пластинчатый теплообменник. Быстро настроить расположение блюдо так все личинки и капли воды в поле зрения. См. Рисунок 3 и видео 1-6.
- Запустите таймер на данный момент чашку Петри помещают на твердую блока нагрева пластинчатых теплообменников и записьВремя начала каждого поведения. При желании, поведение может быть видео, записанное - см. видео на 1-5 представителя примеры каждого поведения. Программное обеспечение Leica версии 3.7 был использован для записи фильмов, режим записи была "непрерывная", разрешение камеры было 3-мегапиксельная камера (мы использовали зум 0.63x, с которой рассчитывается разрешение изображения составляет 10 мкм / пиксель) и кадров / сек были 44.5.
5. Представитель Результаты
Местное Анализ зонд тепла:
При контакте с тепловым датчиком, личинка обычно показывают предварительные поведением подняв голову и хвост. Как правило, снятие головы появляться первые следуют подъема хвоста. Через несколько секунд после этого предварительного поведение личинок обычно начинается прокатки бокам которого мы называем "поведением вывод отвращение". Время, после которого предварительное поведение или поведение вывод показан могут варьироваться в зависимости от температуры или GEмагнитного фона. В нашем первоначальном исследовании мы измерили процент личинок выставке отвращение вывода при различных температурах набор острия зонда и обнаружили, что 48 ° C была низкая температура, при которой все личинки ответил быстро (<5 с). Здесь мы сообщаем о том, что потолок в личиночной тепловой ответ ноцицепции (рис. 4а). 100% быстрое реагирования наблюдаются вплоть до датчика температуры 52 ° C. Тем не менее, при 54 ° С и выше, 90% и более личинок не в состоянии ответить даже после 20 секунд контакта. Эти личинки ли продолжать движение после 20 с обрезания.
Как отмечалось ранее 1 категории вывод поведение при каждой температуре могут быть построены и по сравнению статистически. Учитывая, что это поведенческий анализ есть некоторая изменчивость от личинки до личинки, так и между отдельными пользователями. Для учета этого мы обычно измеряют 3 набора из 30 личинок на условия теста. В дополнение к простой классификации шthdrawal задержки, которые мы ранее сообщали, мы сообщаем, что амплитуда (количество рулонов или время, проведенное в поведении вывод отвращение) также может быть измерена (см. Рисунок 4). Удивительно, но, как представляется, существует обратная зависимость между температурой входа и надежность ответ, потому что более низкие температуры по всей видимости, спровоцировать большее количество рулонов (рис. 4б) и проводят больше времени в выводе отвращение (данные не представлены). Это может означать, что длительность воздействия вредных температура может быть главным фактором, определяющим надежность.
Анализ пластинчатый теплообменник:
Пять стереотипных двигательного поведения наблюдаются при переходе личинки погружаются в воду на пластинчатый теплообменник. Они описаны ниже и показано на видео наряду с типичными двигательного поведения неотапливаемых личинки в воде. Среднее время ожидания, при котором такое поведение наблюдается показано на рисунке 5, Как и средняя температура капли воды измеряется для каждой задержки. При оптимальных условиях анализа представленных здесь процент личинок показывает поведение каждого отдельного колебалась от 77 до 100% (рис. 5Б), хотя время от времени прокатки и порка поведения опущены, перекрытия, или происходит в обратном порядке. Наблюдаемое поведение, в хронологическом порядке приведены ниже и можно посмотреть на видео в то время, указанные ниже:
- Нормальное движение в отсутствие тепла: перистальтические передвижения сопровождается поиском движения головы. Смотрите видео с 6:27.
- Глава Thrash: личинка движется возглавить быстро вперед или боковое движение. Это движение похоже на их нормального передвижения в воде (см. видео 1), но происходит более отрывисто и настойчиво. Смотрите видео с 6:40.
- Рулон: Личинка катится сторону по крайней мере на 360 °. Смотрите видео с 6:50. Это может произойтипеременное число раз, а иногда и включает неполный рулонах. Для целей забил поведение мы рассчитывать только полные 360 ° рулонах. Такое поведение наиболее близки тому, которое наблюдалось с местным применением тепловой датчик.
- Кнут: Личинка экспонатов быстрое сжатие-релизе движения вдоль передне-задней оси, которые приносят главы очень кратко близко к хвосту. Смотрите видео с 7:11. Порка часто наблюдается в быстрой последовательности или в то же время, как прокатки.
- Захват: личинка вытягивается вдоль передне-задней оси и обладает высокой частоте всего тела пожимая поведение, не сгибая. Смотрите видео с 7:25.
- Паралич: личинка прекращает движение. В некоторых личинок это постоянное, тогда как другие, то выставлять низкие частоты пульсаций движения. Смотрите видео с 7:36.
Эти данные позволяют предположить, что температура капли воды и задержки с началом пяти символовхарактерное поведение наблюдается при глобального потепления личинки / капли воды тесно связаны.
Рисунок 1. Схема экспериментальной шагов для подготовки и анализа личинок. Перед анализом ноцицепции с датчиком температуры или пластинчатый теплообменник, личинок, полученных от конкретной акции или генетических крестом собирают и очищают от пищи. Если ноцицептивной чувствительности (в отличие от базовой ноцицепции) должна быть оценена, заготовки следует превращение в эфир (воздействие эфира), монтаж, УФ-облучения, а период восстановления на лету пищи. Собранные или восстановлены личинки затем подвергаются вредных температур теста либо с помощью тепла зонд (локальные) или пластинчатый теплообменник (глобальной) анализа. Номера относятся к разделам текста методами, которые описывают шаг (ы) показано на рисунке.
Figurе 2. Экспериментальная установка для локального анализа зонд тепла. Тепло зонд контролирует терморегулятор, который используется для установки и поддержания температуры зонда. Зонд проводится перпендикулярно передне-задней оси и используется для стимулирования личинки под углом 45 ° к горизонтали. Датчик контакта сделаны специально в брюшной сегмент A4, как показано. Пользователь должен поддерживать этот контакт с мягким давлением до 20 секунд или до отсечки подвижного поведения начинается. Если температура воспринимается как вредные, личинка появится отвращение поведение вывода характеризуется, по крайней мере один 360-ролла. Количество рулонов может быть один или несколько (см. рисунок 4B).
Рисунок 3. Экспериментальная установка для анализа тепло пластины. (A) мультфильм горизонтальной зрения 60 х 15 мм блюдо Петри, содержащие один середине 3-й взвезда личинки в 80 мкл капли воды. (B) Карикатура сверху личинки помещают в середину капли воды, как рассматривать через микроскоп. (C) Фотография горизонтальный вид на рабочей станции для этого анализа. (D) Фотография личинка, если смотреть в микроскоп.
Рисунок 4. Количественная оценка поведенческих ответ, используя анализ тепла зондом. () Земельный процентов респондентов, относящихся к каждой категории (быстро, медленно, и не отвечающих) в зависимости от температуры. (Б) земельный задержку отвращение вывод поведение в зависимости от числа рулонов каждой личинки выставлены на четырех различных температурах испытания повышения вредности (42 ° С, 44 ° C, 46 ° C, 48 ° C, 50 ° C и 52 ° C).
Рисунок 5. Тепло пластины теста: задержка и температуры по сравнению с БехАвиор. (А) Задержка и средний перепад температуры воды в каждой поведенческой реакции при оптимальных условиях 95 ° C (температура горячей поверхности пластины) и 80 мкл капли воды (п = 150). Заметим, что каждый поведение наблюдается в течение определенного интервала времени. Температура воды капли измерялась с помощью термопары вставляются в верхней или нижней части капли (п = 10 капель для каждого места), и эти измерения были усреднены. (Б) процент личинок выставке каждый поведенческой реакции при оптимальных условиях анализа. Обмолота, захват и паралич наблюдается почти 100% времени при прокатке и порка наблюдались 77 и 80% случаев, соответственно. На нижней поверхности уставки температуры захват и паралич не наблюдалось в течение 200 с и выше уставки прокатки и порку можно пропустить или могут возникнуть одновременно. п = 150. (C) процент личинок, которые выживают после начала паралича поведения. Личинки были нагреты до бытьхлопкоочистительных паралич, а затем удаляются на стандартных условиях культуры для восстановления. Макет обработанных личинок получили эквивалент лечения, за исключением теплового воздействия. Формирование куколок и взрослых жизнеспособной количественно в дни 7-13. п = 120.
Рисунок 6. Инактивация личинок ноцицептивных сенсорных нейронов увеличивается поведенческий задержки ответа. Сюжет задержки каждого поведения для указанных генотипов: W 1118, Gal4 109 (2) 80 = MD-Gal4 / +, UAS-Ork1.Δ-C / +, UAS-Ork1.Δ-NC / +, MD- Gal4/UAS-Ork1.Δ-C и md-Gal4/UAS-Ork1.Δ-NC. MD-дисков Gal4 выражение UAS регулируемых трансгенов во всех четырех классах multidendritic периферических сенсорных нейронов, UAS-Ork1.Δ-C 14 выражает собой модифицированную версию Drosophila открытым выпрямитель К + каналов, необходимых для синаптической передачи, а U AS-Ork1.Δ-NC 14 выражает далее модифицированную версию этого же канала, который не вмешивается в синаптической передачи. Обратите внимание, что только личинки нести и MD-Gal4 водитель 6 и UAS-Ork1.Δ-C трансгенов проявляют повышенный задержки для четырех из пяти наблюдаемых поведения (трэш, рулон, арест и паралич). Отметим также, что из-за повышенной латентности качению этих животных кнутом перед тем, как бросить. Asterisk обозначает р <0,05 по Стьюдента-тест. п = 30 личинок на генотип.
Справочная Видео 1. Нажмите сюда, чтобы посмотреть видео .
Справочная Видео 2. Нажмите сюда, чтобы посмотреть видео .
Справочная видео 3."Целевых =" _blank "> Нажмите здесь, чтобы посмотреть видео.
Справочная Видео 4. Нажмите сюда, чтобы посмотреть видео .
Справочная Видео 5. Нажмите сюда, чтобы посмотреть видео .
Справочная Видео 6. Нажмите сюда, чтобы посмотреть видео .
Discussion
Анализы описанные здесь, могут быть использованы для качественного и количественно оценить личинок разных генотипов для реагирования на вредные термические раздражители. Главной особенностью анализа зонд тепла в том, что стимул дается только в одном локусе. Это по-видимому, приводит к стрельбе лишь небольшая часть IV класса нейронов в сегменте связаться с зондом и, возможно, те, в непосредственной близости сегментов 11. В связи с местной стимуляции, анализ тепла зонд имитирует общий чувственный опыт обнаружения вредных стимулов, которые локализованы в определенной области тела, такие как рукой контакта горячей печи. Недостаток анализа зонд тепла является то, что у него есть пользователь-пользователь изменчивости, вероятнее всего, может быть связано с тремя факторами: а) давление, с которым пользователь применяет зонда личинки, II) точное местоположение зонда на личинку по отношению к основной ноцицептивных нейронов, и, в) точно англе, на котором зонд контактирует с поверхностью личинки.
Ранее мы сообщали о количественных стратегия классификации личинок в не отвечающих, медленно реагирования и быстрого реагирования на основе их вывода задержки до заданной температуры 1. Здесь мы сообщаем о личиночной реагирования на еще более высоких температурах. Интересно, что мы находим, что есть потолок для личиночной тепловой ноцицептивных реакций и что это потолок находится между 52 и 54 ° C. Это может свидетельствовать о том, что личинки не имеют переходный рецепторный потенциал (ГТО) канала способны стробирования при температуре выше 52 ° C. Кроме того, он может предположить, что нейроны или мышц используется для запуска или выполнения двигательной реакции поврежден, прежде чем они могут даже работать в выводе отвращение. Мы также представляем различные анализе амплитуды вывода ответа, используя либо количество рулонов в качестве показателя "надежности" в ответ. Наивно, одинбыло бы ожидать, что эти параметры будут увеличиваться с ростом температуры или времени стимуляции. Удивительно, но мы обнаружили, что это не так. Личинки стимулировали в течение длительного времени при температуре на нижней границе диапазона вредных (42 ° С), показывают более рулонах и проводят больше времени, чем прокатка личинок исследовали при более высоких температурах (48-52 ° С). Это говорит о том, что в окно вредных температура это в первую очередь продолжительность воздействия, что определяет амплитуду реакции. Так как личинки подвергаются очень вредные температурах (48-52 ° С) отвечает в среднем очень быстро, они не проявляют столько рулонов, как личинки подвергаются менее вредные температуры в течение длительного периода времени. Анализ АЧХ сообщил здесь добавляет еще количественного измерения, по которым различные генотипы или экологических манипуляций можно сравнить.
Главной особенностью анализа пластинчатых теплообменников является то, что речь идет о глобальном воздействии вредныхтепла. Как таковая, она больше похожа на животное, сидящее в отопительном котле, чем прикосновение к горячей печке. Хотя это и не ясно, когда личинки могут возникнуть глобальный болевые раздражители в дикой природе, в лаборатории поведенческой реакции на это воздействие глобального являются более сложными, чем те, которые наблюдаются при местном стимуляции. Сила анализа пластинчатые теплообменники, а также отметил другие 3, в том, что у него мало пользователь-пользователь изменчивости, поскольку касаются личинка не является составной частью протокола. Единственная существенная разница, кажется, в определении поведения, когда каждый начинает, и это может быть сведено к минимуму при повторном просмотре / знакомство. Интересно различие между анализов является температура, при которой начинается отвращение поведения. Это намного ниже, в анализе пластинчатые теплообменники, чем от жары зонда. Предварительные поведение, демонстрируемое личинок контакт с зондом тепла (голова и хвост повышение) может быть коррелируют головы трэш наблюдается при ~ 27 ° C в жару платформыэлектронного анализа. Вполне возможно, что эта реакция отражает "дискомфорт" больше, чем "боль". Мы не наблюдали коррелят порки, арест и паралич даже при высоких (до 48 ° С) температурах в анализе датчик температуры и может быть, что критическая масса сенсорных нейронов стрельбы из более чем одной области тела , необходимые для доставки на такое поведение. Интересно, что арест и паралич поведение наблюдается при температуре (~ 34 - 37 ° C) ниже нижней части ноцицептивных порога наблюдается тепло зонд о том, что глобальная стимуляция может повлечь суммирующий нейрональных ответов, что недостаточно, чтобы вызвать поведение с местными Применение тепла зонда. То, что эти температуры на самом деле воспринимается как вредные для личинок подтверждается тем фактом, что личинки, которые начинают паралич поведения и впоследствии позволило восстановить на лету пищу не в большинстве случаев выживают (рис. 5С). Дальнейшая поддержка аргумент, что тепло плели анализа читает из ноцицептивных реакций является то, что блокирование синаптической передачи в известной ноцицептивных сенсорных нейронов увеличивает латентность большинства наблюдаемых поведение (рис. 6). Наблюдение, что нет увеличения задержки для более высоких температур битья поведение предполагает, что другие сенсорные нейроны, которые не выражают MD-Gal4 которые могут потребоваться для такого поведения.
В целом, как тесты включают подвергая отдельные личинки вредных тепловой стимул определенной температуре - горячей кончик небольшой зонд металла в местный анализа и погружение в капле быстро нагревать воду в глобальной анализа. Поведенческие реакции личинок дрозофилы различного генетического происхождения и / или подвергаются различным условиям окружающей среды (например, плюс-минус повреждение тканей), могут быть изучены и количественно с помощью этих методов. В конечном счете, результаты этих исследований помогут нам лучше понять генетическую сетей управления НОКiception у дрозофилы и других родственных видов.
Disclosures
Нам нечего раскрывать.
Acknowledgments
Мы благодарим христианской Ландри за тепло зонд дизайн, Даниэль Babcock для развития личиночных анализа зонд тепла, Шон Суини, предложившего анализа пластинчатый теплообменник, Блумингтон Drosophila со Центр лету запасы, и Галко лаборатории членов критическое чтение рукописи. Эта работа была поддержана NIH R01 NS069828 к MJG и NIH MARC U-STAR обучения Грант (T34GM079088 в Университете Хьюстона Downtown Ученые Академии) для доступа меньшинств к исследованиям карьеры (AVG).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Thermal Probe | Pro-Dev Engineering | Custom-built on demand | Contact information can be provided on request |
| Dry Bath Incubator | Fisher Scientific | 11-718 | 1 solid heating block and 1 heating block with 16mm wells |
| Leica DFC290 12v/400mA Color camera | Leica Microsystems | 12730080 | Any equivalent camera will do. |
| Leica MZ6 microscope | Leica Microsystems | Part number for MZ6 zoom body (optics carrier) is 10445614 | |
| Schott Ace Modulamp Unit | Schott AG | A20500 | |
| Schott Dual Gooseneck 23 inch Fiber Optic Light Guide | Schott AG | Schott A08575 | |
| Thermal Control Unit | TSCI corp. | Custom Built | Details can be provided on request |
| Zeiss Stemi 2000 microscope | Carl Zeiss, Inc. | NT55-605 | Any equivalent microscope will do. |
| Forceps | Fine Science Tools | FS-1670 | |
| 1mm mesh | Genesee Scientific | 57-101 | |
| Paintbrush | Blick Art Materials | 06762-1002 | |
| UV crosslinker | Fisher Scientific | 1199289 | |
| Coplin Jars | Fisher Scientific | 08-816 | |
| 10ml beaker | Fisher Scientific | 02-540C | |
| Diethyl ether | Fisher Scientific | E138-500 | |
| 35 X 10 mm Polystyrene Petri Dish | Falcon BD | 351008 | We have not tested alternative dishes. |
| Glass Microscope Slide | Corning | 26003 | |
| Thermocouple | Omega Engineering, Inc. | HH802U | |
| Piece of vinyl | Office Depot | 480009 | |
| Microcentrifuge tube | Denville Scientific | C-2170 |
References
- Babcock, D. T., Landry, C., Galko, M. J. Cytokine signaling mediates UV-induced nociceptive sensitization in Drosophila larvae. Curr. Biol. 19, 799-806 (2009).
- Tracey, W. D., Wilson, R. I., Laurent, G., Benzer, S. painless, a Drosophila gene essential for nociception. Cell. 113, 261-273 (2003).
- Oswald, M., Rymarczyk, B., Chatters, A., Sweeney, S. A novel thermosensitive escape behavior in Drosophila larvae. Fly (Austin). 5, 17810 (2011).
- Grueber, W. B., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Tiling of the Drosophila epidermis by multidendritic sensory neurons. Development. 129, 2867-2878 (2002).
- Moore, A. W., Jan, L. Y., Jan, Y. N. hamlet, a binary genetic switch between single- and multiple- dendrite neuron morphology. Science. 297, 1355-1358 (2002).
- Gao, F. B., Brenman, J. E., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Genes regulating dendritic outgrowth, branching, and routing in Drosophila. Genes Dev. 13, 2549-2561 (1999).
- Walters, E. T., Illich, P. A., Weeks, J. C., Lewin, M. R. Defensive responses of larval Manduca sexta and their sensitization by noxious stimuli in the laboratory and field. J. Exp. Biol. 204, 457-469 (2001).
- Woolf, C. J., Ma, Q. Nociceptors--noxious stimulus detectors. Neuron. 55, 353-364 (2007).
- Hwang, R. Y. Nociceptive neurons protect Drosophila larvae from parasitoid wasps. Curr. Biol. 17, 2105-2116 (2007).
- Xiang, Y. Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall. Nature. 468, 921-926 (2010).
- Grueber, W. B. Projections of Drosophila multidendritic neurons in the central nervous system: links with peripheral dendrite morphology. Development. 134, 55-64 (2007).
- Sweeney, N. T., Li, W., Gao, F. B. Genetic manipulation of single neurons in vivo reveals specific roles of flamingo in neuronal morphogenesis. Dev. Biol. 247, 76-88 (2002).
- Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila. Neuron. 12, 1195-1206 (1994).
- Nitabach, M. N., Blau, J., Holmes, T. C. Electrical silencing of Drosophila pacemaker neurons stops the free-running circadian clock. Cell. 109, 485-495 (2002).
