Summary
methicillin - 내성으로 인해 실험 쥐의 심내막염 모델
Abstract
심내막염을 포함한 Endovascular 감염은 생명을 위협하는 전염성 syndromes 있습니다 1-3. 포도상 구균은 unacceptably 높은 병적 상태, 심지어 적절한 항균 대리인 트리 트먼트 4-6과 사망률과 같은 syndromes의 가장 일반적인 전세계 원인입니다. 인해 methicillin - 내성 S.로 감염의 증가 구균 (MRSA)은 vancomycin 임상 치료 실패 및 linezolid와 daptomycin 저항의 증가 문제의 높은 가격은 같은 감염 환자의 더 복잡한 관리 기능을 가지고 있고, 높은 의료 비용 7, 8로 이끌었다. 또한, 그것은 항생제 치료 결과와 최근의 연구는 임상 설정에 기반되어, 따라서 잘 환자 대 환자에서 다양한 호스트 요인에 의해 영향을받을 수 있다고 강조한다. 따라서, 호스트 요인 동물 대 동물에서 유사한있는 endovascular 감염의 관련 동물 모델은 더미생물 pathogenesis뿐만 아니라, 소설 항균 대리인의 효능을 조사하는 것이 매우 중요합니다. 쥐의 심내막염은 밀접하게 인간의 기본 밸브 심내막염을 대략 잘 확립된 실험 동물 모델입니다. 이 모델은 특히 포도상 구균 독성 요인의 역할과 포도상 구균 심내막염에 대한 항생제 치료 regimens의 효능을 검사하기 위해 사용되었습니다. 이 보고서에서는 세균 pathogenesis 및 항생제 치료에 반응을 조사하는 데 사용할 수있는 MRSA에 의한 실험 심내막염 모델을 설명합니다.
Protocol
1. 감염 MRSA 변종 준비
- 소이 한천 배지 (TSA) 플레이트 Trypticase 양의 혈액 (특정 시약 및 장비의 표 참조) -80에서 재고 관에서 MRSA 문화의 loopful ° C를 접종하고, 37 ° C에서 하룻밤 동안 품어.
- 전혀 오염이없는 있는지 확인하기 위해 혈액 한천 플레이트 (유사 식민지의 phenotypes)에서 문화의 순도를 확인합니다.
- 양의 혈액 TSA 플레이트에서 한 식민지를 선택하고 15 ML 스냅인 뒤덮인 튜브에 5 ML Trypticase 간장 국물 (TSB)에 식민지의 예방.
- 37 품어 ° C에서 200 rpm으로 떨고있는 하룻밤.
2. 수술 카테터를 준비
10cm 길이로하고, 멸균 포셉와 팁을 눌러 한쪽 끝을 녹여, 폴리에틸렌 튜브 (Becton 디킨슨, 순서없이 427,401. PE10)을 잘라. 카테터의 한쪽 끝을 씰링의 목적은 catheterization 동안 출혈을 방지하는 것입니다.
3. 사전의urgery 준비 및 아나스타샤
- isofluorane - 산소 가스 혼합물 (50 % : 50 %)를 포함하는 챔버에서 개최되는 Sprague-Dawley 쥐 (할렌, 인디애나 폴리스 여성, 2백50-3백g) 마취하기 전까지는 (적용됩니다 예 : 근육은 긴장과 페달 반사 부재 있습니다 ) 및 가스 혼합물로 수술하는 동안 anesthetized 상태의 동물을 유지합니다.
- 턱에서 불과 Betadine 및 70 % 에탄올과 흉골 아래 목 부분을 청소합니다.
4. 수술
- 수술 전반에 걸쳐 무균 기술을 사용합니다. 수직 흉골 위의 목의 유일한 피부 계층을 통해 절개 (1-1.5 cm)를 확인합니다.
- 무딘 절개 사용하여 곡선 톱니 포셉 2 켤레를 사용하여 오른쪽 경동맥을 노출 근막을 분리.
- 부드럽게 목 캐비티의 동맥을 밖으로 끌어 올려서, 그리고 실크 봉합사의 두 개 10cm 길이 동맥 아래와 노출된 두부 끝에 동맥을 묶을, 아르테에 클립을 삽입출혈을 방지하는 공예.
- 카테 테르 introducer (Becton 디킨슨, 주문 안돼. 406,999)를 사용하여 동맥의 상단에 작은 구멍을 만들고, 동맥에있는 구멍을 통해 포셉로 카테터를 삽입, 클립을 제거하고 심장 방향으로 카테터를 밀어 때까지 저항 충족하고 있습니다.
- 동맥의 꼬리 끝에 주변의 느슨한 봉합을 묶어하고 카테터가 정한 장소에있을 때 실크 봉합사가있는 장소에서 카테터를 확보 : I) 삽입된 카테 테르의 길이 (4~5센티미터) 추가 발전에 ii) 본 저항 및 3) 심장 박동과 카테터의 맥동. 실험의 나머지를위한 장소에 카테터를 남겨주세요.
- 과잉 봉합 및 카테 테르의 끝을 잘라, 그리고 카테 테르로부터 출혈이 없다는 것을 확인하십시오. 목 피부 아래에 미심쩍은 부분을 넣어, 피부 클립으로 피부를 닫습니다.
- 마취에서 회복 때까지 따뜻한 곳에 새장에 쥐를 삽입하고, 음식과 물을 제공합니다. 도중에 자주 쥐를 확인하고후 마취에서 회복.
- 이 수술은 '카테고리 전자 "절차입니다. 고통을 생산 절차는 동물에게 고통을 동반 MRSA 감염 이후 진통제에 의해 누그 러지지 않은 것입니다.
5. MRSA 감염
- 감염은 1 칠일 수술 사이에 수행하지만, 실험 내에서 일관성있게 유지할 수 있습니다.
- 클린 쥐의 70 %의 에탄올과 꼬리, 그리고 원하는 셀 개수 (10 4 - 가장 S. 구균의 변종에 대한 10 6 cfu / 동물)에서 0.5 ML MRSA를 삽입. 꼬리 정맥에서 정맥 G 2분의 1 인치 바늘 27와주의 사항 : MRSA 문화 biosafety 레벨 2 (BSL2)에 속하는 인력과 환경에 어느 정도 잠재적인 위험을 가지고 있습니다.
- hemostasis는 새장에 쥐를 제공하기 전에 발생할 때까지 사이트에서 압력을 잡아.
6. 희생 고양이와 문화 대상 조직
- 나트륨 pentobarbital (200 MG의 IP 주사로 쥐를 희생/ ㎏) 1-6일 이후 감염 후.
- 그녀의 쥐를 삽입하고 70 % 에탄올로 가슴을 닦으십시오.
- 흉골 아래의 가슴에 V 자형의 절개를 확인하고 가슴을 노출하는 흉골의 각 측면에있는 갈비뼈의 연골을 했네요.
- 최대 부드럽게 가슴을 당겨와 클립 대동맥 가까운 심장 조직을 통해 마음을 해방하기 위해 해부.
- 4x4 인치 거즈 내부와 멸균 배양 접시에 마음을 놓고, 왼쪽 심실 내벽을 통해 상처를 만들고 왼쪽 양면 챔버를 엽니다.
- 카테 테르 게재 위치를 시각적으로 확인합니다. 검사하고 가위와 집게와 밸브에서 vegetations를 제거합니다.
- 무게와 homogenize vegetations을, 그리고 양적 문화를 위해 PBS로 직렬 dilutions하다.
7. 대표 결과
바로 동맥에 카테터를 삽입하고 심장쪽으로 4~5센티미터에 대한 카테터를 밀어 후 저항 experien 될 것입니다ced. 저항이 감지되지 않으면 카테터는 성공적으로 카테터의 배치에 영향을 줄 수있는 심장 챔버의 왼쪽에 삽입되지 않았을 수 있습니다. 이전 9 출판 올바른 카테터 게재 위치는 그림 1에 표시됩니다.
MRSA 감염 샘플 중 하나는 감염 시료의 감염과 정결에 대한 정확한 가능한 세균 수를 확인 정량 교양 있어야합니다. 또한, vegetations에서 발견한 미생물들은 inoculum에 사용된 것과 동일해야합니다.
표 1은 S.의 독성의 예를 제시 이전 9로 출판 되었음 : 쥐 심내막염 모델에서 구균 변형. 모든 동물은 10 5 10 6 cfu의 inocula 맡고 및 6-3 사이의 일 높은 S로 감염 개발한 endocardits 후 희생 심장 vegetations뿐만 아니라 신장과 비장의 구균 밀도 ( SD, 표준 편차. P 10 5 10 6 CFU 남겨놓은 동물과 관련한 <0.001. 표 1. S. 쥐 심내막염 모델 9 가지 inocula과 심장 vegetations의 구균 밀도. 
그림 1. 카테터가 올바른 위치 (심장 챔버의 왼쪽)에 있으며, 수많은 vegetations은 대동맥 판막 9 시에 볼 수 있습니다. Inoculum (animas 호) 조직의 10 CFU / g ±에서 SD를 기록할 평균 : 초목 신 비장 10 6 CFU / 동물 (9) 10.36 ± 0.85 7.30 ± 0.64 6.70 ± 0.57 10 5 CFU / 동물 (8) 9.93 ± 0.53 7.14 ± 0.53 6.44 ± 0.63 10 4 CFU / 동물 (7) 3.46 ± 0.50 * 1.81 ± 0.74 * 1.58 ± 0.59 *
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Discussion
쥐 심내막염은 세균 감염 9-11의 치료 pathogenesis 및 항균 대리인의 생체내 연구에 대한 중요하고 잘 특징 동물 모델입니다. 또한, 쥐의 심내막염 모델은 급성과 하위 급성 감염의 합성을 대표하고, 밀접하게 인간의 대응과 인간의 원시 밸브 심내막염을 모방한 것이었 지요. 또한,의 주거 카테터와 함께, 그것은 고전 biofilm - 연관된 감염, 임상 설정 12 일반적이고 어려운 문제를 나타냅니다. 가장 중요한 것은 쥐 심내막염 모델로 생성된 결과는 매우 재현할 수 있습니다.
S.의 pathogenicity 쥐 심내막염 모델에서 구균은 다른 동물 모델로, inoculum 선량, 박테리아의 성장 단계 (로그 대 고정), 동물의 나이, 그리고 동물의 유전적 배경 9, 13을 포함하여 매개 변수의 수에 따라 달라질 수 있습니다. 외과의 성공 요금은 H입니다연구원의 기술적인 전문 지식과 수술 기술시 ighly 의존. 수술의 성공에 의해 측정할 수 : 1) 수술에서 회복 동물의 수를, 2) 희생의 시간에 정확한 장소에서 카테터, 그리고 3) vegetations 심장 판막에 존재.
요약에서는 쥐의 심내막염은 밀접하게 임상 상황을 모방한 것이었 실용적인, 재현성 및 중요한 모델입니다. 따라서 실험 심내막염의 syndromes의 치료 항균 대리인의 미생물 pathogenesis 및 효능 포함한 패혈증 연구의 모든 분야에 적합합니다.
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Disclosures
관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.
Acknowledgments
이 작품은 건강의 미국 국립 연구소에 의해 지원되었다 [부여 ASB에 R01AI-39108]와 미국 심장 협회 [보조금 SDG 0630219N 및 YQX에 대한 지원 09GRNT2180065].
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Blood agar plate, 5% sheep blood in Trypticase Soy agar(TSA) | Hardy Diagnostics | A10BX | |
| Trypticase Soy broth (TSB) | BD Biosciences | 211825 | |
| Shaking incubator | Labnet International | I5311-DS | |
| Polyethylene tubing | BD Biosciences | 427401 | |
| Catheter introducer | BD Biosciences | 6999 | |
| Isofluorance | Western Medical Suppy, Inc | 2147 | Follow safety and handling information |
| Surgical Instruments | Fine Science Tools and Biomedical Research Instruments, Inc. | Find the instruments from the two companies for your needs |
References
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