Summary
Мезотелиальной анализ оформления, описанные здесь преимущества флуоресцентно меченых клеток и покадровой видео микроскопии для визуализации и количественного измерения взаимодействия рака яичников многоклеточных сфероидов и мезотелиальной монослоя клеток. Этот тест моделирует ранних стадиях метастазирования рака яичников.
Protocol
1. Рак яичников Сотовые сфероид Формирование
- RFP-экспрессирующие клетки рака яичников культивируют в 10% базы Средний (пользовательские культуральной среде ячейку, содержащую 50:50 смесь 199 и MCDB105, 10% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки и 1% пера стрептококк). Чтобы выразить ППП в немеченого клеток рака яичников, трансфекции клеток плазмиды, содержащей ППП и выбрать для клеток, экспрессирующих ППП. Кроме того, вирусные векторы могут быть использованы для временно выразить флуоресцентные белки, или клетки могут быть предварительно инкубируют с красным флуоресцентным красителем клетки трекер (Invitrogen).
- До формирования сфероидов рака яичников, необходимо подготовить с низким коэффициентом сцепления 96 круглых блюд нижней культуры. Для производства с низким коэффициентом сцепления плит культуры, 30μl поли-НЕМА (6 мг полигидроксиэтилметакрилат в 1 мл 95% этанола) раствор добавляют в каждую лунку 96 Corning блюдо культуре клеток. 96 Пластины инкубировали при 37 ° C, не увлажненном инкубаторе для испарения этанола, лeaving пленка поли-НЕМА в каждую лунку. Это поли-НЕМА фильм мешает клеткам прикрепляться к нижней части так, что заставляет клетки растут в виде суспензии 18. [Кроме того, Ultra-Low вложений культуры пластин (Corning) может быть использован вместо поли-НЕМА покрытием блюд.]
- После того, как с низким коэффициентом сцепления плит культуры готовят, trypsinize тарелку яичника раковые клетки, гранулы клеток в настольные центрифуги (Heraeus) в 900 RCF в течение 3 минут, супернатант аспирации и вновь приостановить на 10% средней базы.
- Подсчитайте клеток с использованием гемоцитометра.
- Регулировка концентрации клеток, что есть 100 клеток в 50 мкл 10% средней базы.
- Добавить 50 мкл равномерно приостановлено разбавленной суспензии клеток в каждую лунку 96 поли-НЕМА покрытием блюдо культуры.
- Инкубируйте 96 пластины в 37 ° C культуре клеток инкубатора в течение 16 часов (это время должно быть увеличено или уменьшено в зависимости от количества времени, необходимого длячастности клеточная линия для формирования многоклеточных сфероидов или желаемых условий эксперимента), что позволяет клеткам рака яичников в кластер вместе, образуя единый многоклеточный сфероид в каждую лунку. Некоторые раковые клетки могут подвергаться апоптозу в этот период, поэтому важно выбрать время до индукции апоптоза.
2. Мезотелиальной формирования монослоя сотовых
- В капоте культуре клеток, предварительно покрыть скважины 6 и стеклянным дном Маттек блюдо с фибронектин, добавив 2 мл 5 мкг фибронектина / мл PBS раствора в каждую лунку в блюдо и инкубации при комнатной температуре в течение 30 минут. Оптическое качество стекла основания в блюдах Маттек позволяет с высоким разрешением микроскопических изображений.
- GFP-экспрессирующих мезотелиальной клетки культивируют в 10% средней базы. Trypsinize тарелку мезотелиальные клетки, спина вниз в настольные центрифуги (Heraeus) в 900RPM течение 3 минут, аспирации супернатант, и вновь приостановить на 10% средней базы.мезотелиальной клетки, используемые здесь уже выразил GFP, когда они были получены, но немеченого мезотелиальные клетки могут быть получены путем трансфекции плазмидой, содержащей кДНК GFP или preincubating клетки зеленым флуоресцентным красителем клетки трекер (Invitrogen).
- После 30-минутной инкубации фибронектина (в пункте 2.1), промыть лунки блюдо Маттек с 2 мл PBS.
- Аспирируйте PBS и пластина 6 x10 5 мезотелиальной клетка на лунку в каждую лунку 6 и Маттек блюдо. Инкубируйте блюдо Маттек в 37 ° C культуре клеток инкубатор ночь, чтобы мезотелиальной клетки придают блюду и образуют монослой.
3. Мезотелиальной Анализ оформление сотовых
- С помощью пипетки, чтобы собрать сфероидов рака яичников с 96 поли-НЕМА покрытие пластин.
- Аспирируйте среды от одной скважины из 6 и Маттек блюдо с мезотелиальной монослоя клеток. Промыть раз с 2 мл PBS. Добавить все сфероидов от 96 рпоздно одну лунку блюдо Маттек (~ 3 число сфероидов, которые собираются быть отображены на счет для посадки сфероидов со стороны блюда, которые не могут быть отображены).
- Поместите блюдо Маттек на сцене перевернутой широкопольных флуоресцентного микроскопа способна выполнять замедленную изображения на протяжении по крайней мере 8 часов. Использование моторизованных этапе изображение несколько позиций в блюдо, с несколькими сфероид событий интеркаляции, в одном эксперименте. Мы используем Nikon Ti-E Перевернутая моторизованный Широкоугольные флуоресценции покадровой микроскоп со встроенным совершенная система фокусировки и низкий [20x-0.75 числовой апертурой (NA)] увеличение / NA дифференциального интерференционного контраста (DIC) оптики, трансиллюминатор Nikon галогенные с 0,52 А. большое рабочее расстояние (LWD) конденсатор, Nikon быстро (<100 мс время переключения) возбуждения и испускания фильтры (GFP Ex 480/40, Em 525/50, ЗП-mCherry Ex 575/50 Em 640/50), Саттер быстро передается и эпифлуоресцентной свет путь Смарт ShutТерс, Nikon линейной кодировкой моторизованных этапе Hamamatsu ORCA-AG охлаждения прибор с зарядовой связью (ПЗС) камеры, заказ микроскоп инкубации камеру с температурой и CO 2 управления, Nikon NIS-Elements AR версии 3, и TMC виброизоляции таблице.
- Яичников сфероидов раковые клетки будут оседать на дно блюда и приложить к мезотелиальной монослоя клеток. Соберите GFP, ППП и фазовые изображения 20 + сфероид / монослоя взаимодействия, каждые 10 минут, в течение 8 часов.
- RFP-выражения яичников сфероидов раковые клетки могут вторгаться в GFP-экспрессирующих мезотелиальной монослоя клетки создания отверстий в монослое. После 8 часов, измерения размеров отверстий, прослеживая черных дыр в GFP изображений с использованием элементов программного обеспечения (или другого соответствующего программного обеспечения, такие как изображение J). Нормализовать размер отверстия в исходное сфероид размера путем деления размера отверстия в 8 часов по размеру сфероид в соответствующий образ ППП в нулевой момент времени. В этой бывшейпример, размер отверстия измеряется только один раз, но она может быть измерена несколько раз в течение восьми часов эксперимент, чтобы лучше понять динамику интеркаляции.
4. Представитель Результаты
В этом примере, мы сравнили мезотелиальной возможность оформления OVCA433 яичника раковые клетки сфероидов, которые имеют ослабленный выражение Талин-1 для контроля OVCA433 сфероидов. OVCA433 сфероидов из каждой группы были добавлены в блюдо Маттек содержащие ZT мезотелиальной монослоя клеток. Шесть сфероидов из каждой группы были обследованы через каждые 10 минут в течение восьми часов (рис. 4, фильм 3 фильм 4). Отверстий производится в монослое по распространению сфероидов были измерены и шесть позиций из каждой группы были усреднены. Рисунок 4 показывает, что средняя площадь оформление созданного Талин 1 сфероидов нокдаун был значительно меньше, чем средняя площадь созданного управления сфероидов, предполагая, что Таллин требуется для оформления мезотелиальной на OVCA433 сфероидов рака яичников.
Рисунок 1. Метастазы рака яичников. Первичные опухоли яичников или развиваться из эпителия яичников поверхности или фаллопиевых труб. Опухолевые клетки / кластеров оторваться от первичной опухоли и собирать в брюшной полости. Опухолевые клетки могут объединять для формирования многоклеточных сфероидов. Сфероидов затем приложить к мезотелиальной монослоя клетки, выстилающие брюшную полость. Мезотелиальной клеток исключены из под прилагаемой сфероид рака яичников, что позволяет сфероидов, чтобы получить доступ к основным базальной мембраны.
Фильм 1. Метастазы рака яичников. Нажмите здесь, чтобы посмотреть фильм .
Рисунок 2.
Рисунок 3. Мезотелиальной Анализ оформления. Сфероидов Рак яичника образуется путем инкубации 100 RFP-выражения рака яичников клеток на лунку в поли-НЕМА покрытием 96 круглых блюдо нижней культуры при 37 ° С в течение 16 часов. Поли-HEMA препятствует клеткам прикрепляться к культуре блюдо, позволяя клеткам оставаться во взвешенном состоянии и соблюдать друг с другом в единый кластер на лунку. Мезотелиальной монослоя клеток подготовленного нанесение 6x10 5 мезотелиальной клеток на лунку в фибронектина покрытием 6 хорошо блюдо Маттек и инкубирования пластин при 37 ° С в течение 16 часов. Сфероидов, которые затем передаются на блюдо с Маттек мезотелиальной монослоя и двух клеточных популяций загружаются через каждые 10 минут в течение 8 часов при использовании Nikon Ti-E Inverted моторизованный Широкоугольные флуоресценции покадровой микроскоп и элементы программного обеспечения.
Фильм 2. Мезотелиальной Анализ оформления. Нажмите здесь, чтобы посмотреть фильм .
Рисунок 4. Ослабление Талин 1 выражение в OVCA433 сфероидов уменьшается мезотелиальной возможность оформления. OVCA433 сфероидов (красный) и без ослабленного выражение Талин 1 было разрешено присоединиться к вторжению и в ZT мезотелиальной монослоя (зеленый). Эти две популяции клеток были обследованы через каждые 10 минут в течение 8 часов при использовании Nikon Ti-E Перевернутая моторизованный Широкоугольные флуоресценции покадровой микроскоп и элементы программного обеспечения. График показывает, что ослабление Талин 1значительно снижает мезотелиальной оформления ячейки (квантиль участок с зелеными полосами на средства).
Фильм 3. Управление OVCA433 сфероидов (красный) вторжение в мезотелиальной монослоя (зеленый). Щелкните здесь для просмотра фильмов .
Фильм 4. Ослабление Талин 1 выражение в OVCA433 сфероидов (красный) уменьшается мезотелиальной (зеленый) оформление способности. Нажмите здесь, чтобы посмотреть фильм .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
"Анализ мезотелиальной просвет", представленные здесь используется замедленная микроскопии для наблюдения за взаимодействием рака яичников многоклеточных сфероидов и мезотелиальной монослоя клетки, в больших пространственных и временных деталей. Ранее несколько групп 8-14 использовал конечной анализы, чтобы показать, что клетки рака яичников придают и вторгнуться в мезотелиальной монослоя клеток. Этот тест уникален тем, что он использует флуоресцентно меченых клеток отличить опухолевые клетки от мезотелиальные клетки, так что динамика этих двух клеточных популяций можно наблюдать по всему анализа. Процесс интеркаляции могут быть визуализированы в реальном времени и скорости мезотелиальной оформление может быть количественно измерять с течением времени. Использование Timelapse микроскопия позволяет внимательно следить за динамикой взаимодействия двух клеточных популяций в различных экспериментальных условиях. Кроме того, небольшой процент или мезотелиальной клеток или рака яичников сеООО могут быть помечены с третьей флуоресцентных маркеров для наблюдения за динамикой отдельных клеток в популяции. Отслеживание отдельных клеток с течением времени, направленность и скорость миграции могут быть рассчитаны. Для выполнения более высокое разрешение анализ мезотелиальной оформление, полное внутреннее отражение флуоресценции (TIRF) микроскопия может быть использована. Если координационного спаек помечены в мезотелиальные клетки, диссоциация мезотелиальной спайки по выступающим расширения опухолевых клеток можно наблюдать, как описано в нашей предыдущей публикации 17.
Этот анализ может быть использован для сравнения вторжения способность раковых клеток яичника сфероидов, которые были генетически измененные или фармакологически выяснить молекулярные механизмы, посредством которых яичников сфероидов раковых клеток очистить мезотелиальной монослоя или выявить небольшие молекулы ингибиторов этого процесса. Кроме того, анализ требует очень небольшого количества клеток рака яичников, поэтому основной тумоГ клетки из жидкости выделений могут быть использованы (см. ограничения ниже), если помечены preincubating клеток cytotracker красителей (Invitrogen). Анализ также поддаются анализу высокой пропускной способностью. Чтобы выполнить высокую пропускную способность генетических и фармакологических исследованиях клеток рака яичников может быть трансфекции с различными векторами миРНК или лечения различных фармакологических ингибиторов в каждую лунку 96-луночного планшета. Мезотелиальной монослоя клетки могут быть покрыты в 96 стеклянным дном блюда культуры и сфероидов могут быть переданы 1:01 от поли-НЕМА покрытие пластин монослоя содержащих пластины. Все эти шаги могут быть оптимизированы для использования с скрининг роботов так, что сотни siRNAs или ингибиторы обследование в одно время.
Одним из преимуществ этого теста является возможность моделировать сила зависит от интеркаляции клеток рака яичников в мезотелиальной монослоя. Наши лаборатории использовали тяги силовой микроскопии (TFM) для определения механических лRCE регулирует мезотелиальной 17 оформление. Мы обнаружили, что гиперэкспрессия интегринов α5 увеличить сократительную способность клеток высевали на покрытой фибронектином подложке, в то время RNAi-опосредованной нокдаун Талин, или миозина II уменьшилось клетки сократимость 17. С подавлением α5 интегрина, Талин, или миозина II в яичниках сфероидов раковые клетки также уменьшилась мезотелиальной оформления, наши измерения TFM поддерживают идею, что мезотелиальной оформление в мероприятии зависит от сотовой сократительной силы, в которых клетки с более высокой сократительной силы, вызванные большим мезотелиальной оформление. Таким образом, анализ мезотелиальной оформление может быть использован для более глубокого понимания интеркаляции событий, связанных с метастазами яичников сфероида, которые зависят от механических сил.
Этот анализ имеет несколько ограничений, чтобы рассмотреть. Во-первых, в целях формирования многоклеточных сфероидов, клетки должны культивировать в суспензии, по крайней мере 6 часов. Есликлетки не могут выжить без матрицы связаться с возможностью оформления будут поставлены под угрозу. Во-вторых, это выгодно использовать яичника раковые клетки, которые образуют единый, компактный многоклеточных сфероидов. Если клетки рака яичников только образуют рыхлые скопления, они могут распадаться в переводе с polyHEMA покрытием пластины блюдо с мезотелиальной монослоя, создавая сфероидов различных форм и размеров, которые будут добавлять изменчивость данных. В-третьих, если использовать клетки неоднородны, это придаст дополнительный изменчивости размеров отверстий создан в монослое. Важно использовать несколько скважин репликации (10-20/sample) в связи с изменчивостью степени интеркаляции после восьми часов. В анализах, описанные здесь, устоявшихся рака яичников (OVCA433) и мезотелиальной (ZT) клеточных линий были использованы. Чтобы сделать этот анализ более клинически значимым, первичный рак яичников клетки, из асцитной жидкости больных, могут быть использованы. Было бы интересно determНИС, если в пробирке мезотелиальной возможность оформления ячейки коррелирует с клиническим исходом. Ограничения выше, особенно важно учитывать при использовании первичных проб, так как количество первичных элементов доступны является ограничивающим фактором. Кроме того, важно, чтобы проверить целостность мезотелиальной монослоя до выполнения этого теста. Мезотелиальной монослоя могут быть установлены и окрашены для межклеточных белков соединения, чтобы мезотелиальной переходы клетки не повреждены.
Наконец, анализ мезотелиальной оформления могут быть легко изменены, чтобы ответить на конкретные экспериментальные вопросы. Здесь мы использовали фибронектина как компонент ECM, которая позволяет яичников и мезотелиальные клетки присоединиться к стеклянным дном блюда культуры, однако, и другие компоненты ECM могут быть использованы в том числе коллагена и ламинина. Кроме того, другие типы клеток, которые находятся под базальной мембраной, в том числе фибробластов, может быть добавлено к этой экспериментальной системе, оценить рольиз этих типов клеток в мезотелиальной оформление 9,19,20. Наконец, взаимодействие других типов опухолевых клеток (например, поджелудочной железы, молочной железы и т.д.) с мезотелиальные клетки также могут быть смоделированы с помощью этого теста. И это возможно для изучения взаимодействия между раковыми клетками и эндотелиальными монослоя с помощью этого теста, чтобы имитировать intravasation или кровоизлияние (Подобные тесты были описаны в: 15,16,21-27).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Нам нечего раскрывать.
Acknowledgments
Мы хотели бы поблагодарить Nikon Imaging центр в Гарвардской медицинской школе, в частности, Дженнифер воды, Лара Петрак и Венди лосося, для обучения и использования их микроскопы Timelapse. Мы также хотели бы поблагодарить Роза Ng и Ахим Бессер за полезные обсуждения. Эта работа была поддержана NIH Грант 5695837 (М. Iwanicki) и GM064346 к АБ, за счет гранта от доктора Мирьям и Шелдон Адельсон Г. Medical Research Foundation (для АБ).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| OVCA433 Ovarian Cancer Cells | Gift from Dr. Dennis Slamon | ||
| ZT Mesothelial Cells | Gift from Dr. Tan Ince | ||
| Medium 199 | GIBCO, by Life Technologies | 19950 | |
| MCDB105 | Cell Applications Inc. | 117-500 | |
| FBS-heat inactivated | GIBCO, by Life Technologies | 10082 | |
| Pen-Strep | GIBCO, by Life Technologies | 15070 | |
| 96 well plates | Corning | 3799 | |
| Polyhydroxyethylmethacrylate (poly-HEMA) | Sigma-Aldrich | 192066-25G | For poly-HEMA solution dissolve 6mg poly-HEMA powder in 1ml of 95% EtOH |
| EtOH | Pharmco-AAPER | 111ACS200 | Dilute to 95% in dH20 |
| Cell culture hood | Nuaire | NU-425-300 | |
| Tissue culture incubator | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 3110 | |
| incubator for poly-HEMA plates | Labline Instruments | Imperial III 305 | |
| Tabletop centrifuge | Heraeus Instruments | 75003429/01 | |
| 6 well glass-bottom dish | MatTek Corp. | P06G-1.5-20-F | |
| Fibronectin | Sigma-Aldrich | F1141-1MG | |
| PBS | Cellgro | 21-040-CV | |
| Microscope | Nikon Instruments | Ti-E Inverted Motorized Fluorescence time-lapse microscope with integrated Perfect Focus System | |
| Lens | Nikon Instruments | 20X-0.75 numerical apeture | |
| Halogen transilluminator | Nikon Instruments | 0.52 NA long working distance condenser | |
| Excitation and emission filters | Chroma Technology Corp. | GFP Ex 480/40, Em 525/50 RFP-mCherry Ex 575/50 Em 640/50 | |
| Transmitted and Epifluoresce light path | Sutter Instrument Co. | Smart Shutters | |
| Linear-encoded motorized stage | Nikon Instruments | ||
| Cooled charged-coupled device camera | Hamamatsu Corp. | ORCA-AG | |
| Microscope incubation chamber with temperature and CO2 control | Custom Made | ||
| Vibration isolation table | TMC | ||
| NIS-Elements software | Nikon Instruments | Version 3 |
References
- Jemal, A. CA Cancer J. Clin. 59, 225-249 (2009).
- Ries, L. G., Melbert, D., Krapcho, M., Stinchcomb, D. G., Howlader, N., Horner, M. J., Mariotto, A., Miller, B. A. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2005. , National Cancer Institute. Bethesda, MD. Available from: http://seer.cancer.gov/csr/1975_2005 (2007).
- Burleson, K. M. Ovarian carcinoma ascites spheroids adhere to extracellular matrix components and mesothelial cell monolayers. Gynecol. Oncol. 93, 170-181 (2004).
- Birbeck, M. S., Wheatley, D. N. An Electron Microscopic Study of the Invasion of Ascites Tumor Cells into the Abdominal Wall. Cancer Res. 25, 490-497 (1965).
- Witz, C. A., Monotoya-Rodriguez, I. A., Schenken, R. S. Whole explants of peritoneum and endometrium: a novel model of the early endometriosis lesion. Fertil. Steril. 71, 56-60 (1999).
- Zhang, X. Y. Characteristics and growth patterns of human peritoneal mesothelial cells: comparison between advanced epithelial ovarian cancer and non-ovarian cancer sources. J. Soc. Gynecol. Investig. 6, 333-340 (1999).
- Kenny, H. A., Nieman, K. M., Mitra, A. K., Lengyel, E. The First Line of Intra-abdominal Metastatic Attack: Breaching the Mesothelial Cell Layer. Cancer Discovery. 1, 100-102 (2011).
- Niedbala, M. J., Crickard, K., Bernacki, R. J. Interactions of human ovarian tumor cells with human mesothelial cells grown on extracellular matrix. An in vitro model system for studying tumor cell adhesion and invasion. Exp. Cell. Res. 160, 499-513 (1985).
- Kenny, H. A., Krausz, T., Yamada, S. D., Lengyel, E. Use of a novel 3D culture model to elucidate the role of mesothelial cells, fibroblasts and extra-cellular matrices on adhesion and invasion of ovarian cancer cells to the omentum. Int. J. Cancer. 121, 1463-1472 (2007).
- Ksiazek, K. Senescent peritoneal mesothelial cells promote ovarian cancer cell adhesion: the role of oxidative stress-induced fibronectin. Am. J. Pathol. 174, 1230-1240 (2009).
- Burleson, K. M., Boente, M. P., Pambuccian, S. E., Skubitz, A. P. Disaggregation and invasion of ovarian carcinoma ascites spheroids. J. Transl. Med. 4, 6-6 (2006).
- Heyman, L. Vitronectin and its receptors partly mediate adhesion of ovarian cancer cells to peritoneal mesothelium in vitro. Tumour. Biol. 29, 231-244 (2008).
- Heyman, L. Mesothelial vitronectin stimulates migration of ovarian cancer cells. Cell. Biol. Int. 34, 493-502 Forthcoming.
- Lessan, K., Aguiar, D. J., Oegema, T., Siebenson, L., Skubitz, A. P. CD44 and beta1 integrin mediate ovarian carcinoma cell adhesion to peritoneal mesothelial cells. Am. J. Pathol. 154, 1525-1537 (1999).
- Leroy-Dudal, J., Heyman, L., Gauduchon, P., Carreiras, F. Adhesion of human ovarian adenocarcinoma IGROV1 cells to endothelial cells is partly mediated by the alphav integrins-vitronectin adhesive system and induces an alteration of endothelial integrity. Cell. Biol. Int. 29, 482-488 (2005).
- Leroy-Dudal, J. Transmigration of human ovarian adenocarcinoma cells through endothelial extracellular matrix involves alphav integrins and the participation of MMP2. Int. J. Cancer. 114, 531-543 (2005).
- Iwanicki, M. Ovarian cancer spheroids use myosin-generated force to clear the mesothelium. Cancer Discovery. 1, 144-157 (2011).
- Folkman, J., Moscona, A. Role of cell shape in growth control. Nature. 273, 345-349 (1978).
- Gregoire, L., Munkarah, A., Rabah, R., Morris, R. T., Lancaster, W. D. Organotypic culture of human ovarian surface epithelial cells: a potential model for ovarian carcinogenesis. In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 34, 636-639 (1998).
- Roberts, P. C. Sequential molecular and cellular events during neoplastic progression: a mouse syngeneic ovarian cancer model. Neoplasia. 7, 944-956 (2005).
- Okada, T., Okuno, H., Mitsui, Y. A novel in vitro assay system for transendothelial tumor cell invasion: significance of E-selectin and alpha 3 integrin in the transendothelial invasion by HT1080 fibrosarcoma cells. Clin. Exp. Metastasis. 12, 305-314 (1994).
- Zervantonakis, I. K., Kothapalli, C. R., Chung, S., Sudo, R., Kamm, R. D. Microfluidic devices for studying heterotypic cell-cell interactions and tissue specimen cultures under controlled microenvironments. Biomicrofluidics. 5, 13406-1310 (2011).
- Brandt, B. 3D-extravasation model -- selection of highly motile and metastatic cancer cells. Semin. Cancer Biol. 15, 387-395 (2005).
- Condeelis, J., Segall, J. E. Intravital imaging of cell movement in tumours. Nat. Rev. Cancer. 3, 921-930 (2003).
- Dai, J., Ting-Beall, H. P., Hochmuth, R. M., Sheetz, M. P., Titus, M. A. Myosin I contributes to the generation of resting cortical tension. Biophys. J. 77, 1168-1176 (1999).
- Laferriere, J., Houle, F., Taher, M. M., Valerie, K., Huot, J. Transendothelial migration of colon carcinoma cells requires expression of E-selectin by endothelial cells and activation of stress-activated protein kinase-2 (SAPK2/p38) in the tumor cells. J. Biol. Chem. 276, 33762-33772 (2001).
- Dong, C., Slattery, M. J., Rank, B. M., You, J. In vitro characterization and micromechanics of tumor cell chemotactic protrusion, locomotion, and extravasation. Ann. Biomed. Eng. 30, 344-355 (2002).
