Summary
शिस्टोस्टोमा mansoni अंडे टी सहायक टाइप 2 (Th2) प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, परजीवी संक्रमण के लक्षण, अस्थमा और एलर्जी सूजन के शक्तिशाली stimulators हैं. इस प्रोटोकॉल एस का इस्तेमाल mansoni अंडा इंजेक्शन Th2 साइटोकाइन प्रेरित फेफड़ों में सूजन की प्रतिक्रिया, अंडे के आसपास फेफड़ों ग्रेन्युलोमा गठन द्वारा विशेषता, eosinophilia और बृहतभक्षककोशिका वैकल्पिक सक्रियण के लिए एक सीडी 4 उत्पन्न.
Abstract
शिस्टोस्टोमा परजीवी रक्त flukes है कि एक अनुमान के अनुसार 200 मिलियन लोगों को दुनिया भर में 1 को संक्रमित कर रहे हैं. साथ शिस्टोस्टोमा, जिगर और तिल्ली का बढ़ना तंतुमयता सहित गंभीर विकृति, पुराने संक्रमण परजीवी ही दो के बजाय परजीवी अंडे के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के कारण होता है. परजीवी अंडे एक Th2 प्रतिक्रिया आईएल-4 का उत्पादन आईएल -5, आईएल -13, मैक्रोफेज की वैकल्पिक सक्रियण और इयोस्नोफिल्स की भर्ती द्वारा विशेषता प्रेरित. यहाँ, हम एक परजीवी विशिष्ट फेफड़ों में Th2 साइटोकाइन प्रतिक्रियाओं और लिम्फ नोड्स, फेफड़े granulomas अंडा आसपास के गठन से draining, और airway सूजन की जांच के लिए एक मॉडल के रूप में शिस्टोस्टोमा mansoni अंडे का इंजेक्शन का वर्णन.
Intraperitoneal संवेदीकरण और नसों में चुनौती एस के बाद mansoni अंडे जहां वे फेफड़ों पैरेन्काइमा भीतर फंस रहे हैं फुफ्फुसीय धमनियों के माध्यम से फेफड़ों को ले जाया जाता हैgranulomas द्वारा लिम्फोसाइटों, इयोस्नोफिल्स और वैकल्पिक रूप से सक्रिय 3-6 मैक्रोफेज से बना. ब्रोन्को वायुकोशीय रिक्त स्थान में ग्रेन्युलोमा गठन सूजन के साथ जुड़े, के विस्तार से draining लिम्फ नोड्स और CD4 टी सेल सक्रियण मनाया जा सकता है. प्रोटोकॉल विस्तार के हम संक्रमित यकृत (7 से संशोधित) से अलग शिस्टोस्टोमा mansoni अंडे, सुग्राही और चूहों को चुनौती देने और अंगों (ब्रोन्को वायुकोशीय पानी से धोना (बाल), फेफड़ों और draining लिम्फ नोड्स) के विश्लेषण के लिए ठीक करने के लिए यहाँ. हम भी प्रतिनिधि histologic और immunologic अतिरिक्त immunologic विश्लेषण के लिए डेटा और सुझाव शामिल हैं.
कुल मिलाकर, इस विधि vivo मॉडल में फेफड़ों में पेट का कीड़ा प्रेरित immunologic प्रतिक्रियाओं की जांच करने के लिए है, जो मोटे तौर पर पेट का कीड़ा संक्रमण, fibrotic रोग, एलर्जी सूजन और अस्थमा सहित Th2 भड़काऊ रोगों के अध्ययन के लिए लागू है प्रदान करता है. इस मॉडल की typ का अध्ययन करने के लिए लाभ2 ई फेफड़ों में सूजन एक शक्तिशाली फेफड़ों में Th2 भड़काऊ प्रतिक्रिया के reproducibility और draining लिम्फ नोड्स, अंडा आसपास granulomas के histologic परीक्षा द्वारा सूजन के मूल्यांकन के आसानी, और परजीवी की लंबी अवधि के भंडारण के लिए क्षमता में शामिल अंडे.
Protocol
1. सफ़ाई शिस्टोस्टोमा mansoni अंडे
- Schistosome cercariae, जो शिस्टोस्टोमा जीवन चक्र में 8 संक्रामक चरण के साथ स्विस वेबस्टर चूहों को संक्रमित. वैकल्पिक रूप से, NIAID Schistosomiasis संसाधन केंद्र (से schistosome संक्रमित चूहों प्राप्त http://www.schisto-resource.org/~~V ). संक्रमण के बाद 6-7 सप्ताह के लिए चूहों को छोड़ दें, जो समय बिंदु, अंडे जिगर में मौजूद हैं और नीचे वर्णित के रूप में बरामद किया जा सकता है (चित्र 1 को देखें).
- सीओ 2 के साथ चूहों Euthanize, और 70% इथेनॉल के साथ गीला है. पीठ पर माउस रखें. कुंद संदंश और कैंची का प्रयोग दूर त्वचा और अंतर्निहित पेरिटोनियम में कटौती. आबकारी जिगर, ribcage और डायाफ्राम के नीचे स्थित है.
- पतले यकृत क़ीमा और पाचन मिश्रण का जिगर प्रति 20 एमएल / Collagenase dispase (0.5 मिलीग्राम / एमएल), पेनिसिलिन (100 यू / एमएल) और पीबीएस में स्ट्रेप्टोमाइसिन (100 μg / एमएल) की रचना जोड़ें. Mixt रखोure और एक 50 एमएल फाल्कन ट्यूब में एक 37 डिग्री सेल्सियस एक प्रकार के बरतन में रात भर सेते हैं.
- 400/3 XG मिनट / 20 डिग्री सेल्सियस पर मिश्रण अपकेंद्रित्र धीरे से अतिरिक्त तरल डालना और पीबीएस के साथ ट्यूब भर. फिर से केंद्रापसारी और पीबीएस धोने को दोहराएँ. पिछले centrifugation के बाद, 25 एमएल पीबीएस में resuspend गोली.
- एक मानक रसोई धातु (जिगर के टुकड़े को मैश करने के लिए उपयोग के माध्यम से एक गिलास बीकर में एक 50 एमएल सिरिंज सवार) झरनी, एक ठीक छलनी के माध्यम से (10 एमएल सिरिंज का उपयोग करने के लिए ठीक छलनी के माध्यम से मिश्रण धक्का मिश्रण से गुजर रहा बाद के माध्यम से resuspended गोली तनाव एक दूसरे गिलास बीकर में).
- एक 50 एमएल फाल्कन ट्यूब में तनावपूर्ण मिश्रण डाल दिया. 400/5 XG अपकेंद्रित्र मिनट / 20 डिग्री सेल्सियस ध्यान बाहर गोली खोने के बिना सतह पर तैरनेवाला डालना. 3 एमएल पीबीएस में resuspend गोली.
- ओवरले एक 20% Percoll के पर धीरे मिश्रण, 8 से एमएल Percoll और 32 एमएल 0.25M sucrose (परिवार कल्याण = 342.3 इतना 8.56 जी sucrose/100 एमएल एच 2 0) के 40 एमएल ढाल.
- 10 मिनट / 800/20 - XG ° सी. अपकेंद्रित्र से एक विंदुकपतला जिगर की कोशिकाओं के ऊपर परत त्यागें. एक हस्तांतरण विंदुक के साथ तल पर अंडे गोली निकालें और एक 15 एमएल फाल्कन ट्यूब में डाल दिया.
- 10 एमएल पीबीएस / 1 मिमी EDTA / 1 मिमी EGTA अपकेंद्रित्र सेटिंग्स का उपयोग कर में धो गोली 3X: 3 मिनट / 30 20 / XG डिग्री सेल्सियस 500 μL पीबीएस में Resuspend.
- 10 मिनट / 800/20 XG डिग्री सेल्सियस: एक नया 25% Percoll, 10 एमएल ढाल (2.5 एमएल Percoll और 7.5 एमएल 0.25M sucrose) अपकेंद्रित्र सेटिंग्स का उपयोग करने पर उपरिशायी मिश्रण
- 10 एमएल अपकेंद्रित्र सेटिंग्स का उपयोग कर पीबीएस में 3X धो: 3 मिनट / 30/20 - XG ° सी.
- पिछले 10 एमएल धोने में, 100 μL हटाने के अंडे गिनती. अंडे जल्दी बसने तो, फाल्कन ट्यूब नमूने हटाने से पहले अच्छी तरह से मिला होगा. 900 μL पीबीएस के साथ 100 μL नमूना पतला. मिश्रण की 100 μL विदारक माइक्रोस्कोप (1:10 मन्दन) का उपयोग कर एक खुर्दबीन स्लाइड पर बूंदों के रूप में गिना जाना चाहिए. विस्तृत बोर विंदुक युक्तियाँ इस्तेमाल किया जाना चाहिए.
- पीबीएस में 50,000 अंडे / एमएल पर अंडे Resuspend. अंडे -80 ° सी में कई महीनों के लिए भंडारित किया जा सकता है और एक बार या twic, thawedउपयोग के लिए ए. उपयोग से पहले, सुनिश्चित करें कि अंडे अब भी बरकरार हैं (छवि देखते हैं 1.) के लिए एक खुर्दबीन के नीचे का निरीक्षण किया.
2. एस के साथ intraperitoneal संवेदनशील mansoni अंडे 0 दिन:
- +५००० Eggs/100 μL पीबीएस पर एक 5 एमएल snapcap की ट्यूब में अंडे तैयार. इंजेक्शन के लिए, आवश्यक से 50% से अधिक अंडे का अनुमान है.
- एक 23 गेज 3/4inch सुई और माउस प्रति अंडा निलंबन के 100 μL के साथ एक 1 एमएल सिरिंज के लोड करें. अंडे बसा है, तो तुरंत उपयोग से पहले अंडे के साथ लोड सुई.
- रॉक आगे और पीछे सिरिंज अंडे प्रत्येक इंजेक्शन के पहले मिश्रण है, और intraperitoneally माउस प्रति निलंबन के 100 μL इंजेक्षन.
3. रेट्रो कक्षीय एस के साथ नसों में चैलेंज mansoni अंडे 14 दिन:
- अंडे +५००० eggs/100 μL पर इसके बाद के संस्करण के रूप में तैयार.
- (4%), या isoflurane (10 मिलीग्राम / किग्रा) xylazine और ketamine (120 मिलीग्राम / किग्रा) के साथ में intraperitoneally के साथ विशेष कक्ष में चूहों असंवेदनता उत्पन्न करना. Anest की गहराईhesia लुटेरा pinching और कोई शारीरिक प्रतिक्रिया सुनिश्चित करने के द्वारा निर्धारित किया जाता है.
- 1 एमएल और अंडे के साथ 23 गेज 3/4inch सुई सिरिंज के बाद लोड हो रहा है, संदंश उपयोग बेवल कोण में नीचे का सामना करना पड़ के साथ एक 90 डिग्री कोण पर सुई मोड़. सुनिश्चित करें कि कोई बुलबुले मौजूद हैं.
- माउस को एक तरफ रखें. त्वचा को वापस लेना है तो आँख फैलाना, और नेत्रगोलक पीछे वाहिकाओं में एक 45 ° नाक कोण पर 100 μL इंजेक्षन जाएगा.
- सुई को वापस लेने और प्रकाश रक्तस्राव को नियंत्रित करने के लिए दबाव लागू होते हैं.
इन सभी प्रक्रियाओं की देखभाल के साथ बाहर किया जाना चाहिए, और चूहों जब तक वे संज्ञाहरण से उबरने के लिए निगरानी की जानी चाहिए. इन प्रोटोकॉल के पेंसिल्वेनिया संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) विश्वविद्यालय द्वारा अनुमोदित किया गया.
4. प्रयोगात्मक हार्वेस्ट: 22 दिवस
- सीओ 2 के साथ चूहों Euthanize.
- 70% इथेनॉल, और पीठ पर जगह के साथ गीला माउस.
- कुंद forc का उपयोगEPS, माउस पेट समझ और त्वचा में एक छोटा सा चीरा बनाते हैं. ध्यान से कैंची के साथ त्वचा को हटाने और रिब पिंजरे और peritoneum बेनकाब.
- पेरिटोनियम खोलने के कट. उदर महाधमनी कटौती पाश्चर विंदुक के साथ रक्त ठीक है. बर्फ पर स्टोर.
- जिगर नीचे ले जाएँ डायाफ्राम बेनकाब. ठीक कैंची का उपयोग करने डायाफ्राम कटौती. ध्यान से खुला रिब पिंजरे में कटौती करने के लिए फेफड़े के ऊतकों को बेनकाब.
- पुनर्प्राप्त parathymic लिम्फ नोड्स है कि ठीक संदंश के साथ फेफड़ों नाली. रिब पिंजरे के नीचे tucked रहे हैं 9 थाइमस के दोनों तरफ,. बर्फ के पर 1mL बाँझ मीडिया में स्टोर (10% गर्मी - निष्क्रिय भ्रूण बछड़ा सीरम, 100 यू / एमएल पेनिसिलिन, में स्ट्रेप्टोमाइसिन 100 / μg एमएल, 2 मिमी एल glutamine, 50 माइक्रोन 2 - mercaptoethanol का, सब में Invitrogen से उपलब्ध है के साथ पूरक DMEM).
- बाल ठीक है, और histologic विश्लेषण के लिए फेफड़ों में हवा भरना, intratracheal इंटुबैषेण किया जाना चाहिए. ओर लार की गिल्टी को ले जाकर ट्रेकिआ बेनकाब, और placiट्रेकिआ के तहत एनजी ठीक संदंश. ठीक कैंची का प्रयोग, ट्रेकिआ के बीच में एक छेद में कटौती, और फेफड़ों में टयूबिंग डालें. सुरक्षित शल्य धागे के साथ बांधने द्वारा टयूबिंग.
- पीबीएस भरा टयूबिंग 1 एमएल सिरिंज और 1 एमएल पीबीएस के साथ संलग्न फेफड़ों फुलाना. ध्यान से सिरिंज के साथ बाल धोने को पुनः प्राप्त. बर्फ पर स्टोर.
- पीबीएस भरा 1 एमएल सिरिंज में टयूबिंग 4% paraformaldehyde (पीएफए) और संलग्न फेफड़ों फुलाना.
- टयूबिंग निकालें, और पीएफए की लीक को रोकने के लिए शल्य धागा कस.
- ध्यान से 5 एमएल 4% पीएफए के साथ और फेफड़ों ऊतक में एक 50 एमएल फाल्कन ट्यूब जगह काटना.
5. बरामद ऊतकों की तैयारी
- सीरम: थक्का करने के लिए रक्त के लिए 30 मिनट से 2 घंटे के लिए बर्फ पर निम्न भंडारण, सीरम centrifugation द्वारा रक्त से बरामद किया है (13000/10 है XG मिनट / 4 डिग्री सेल्सियस). सीरम -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत है और साइटोकाइन ELISAs या एस के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है mansoni अंडा प्रतिजन विशिष्ट आईजीजी निर्धारण ELISAs
- लिम्फ नोड्स: एकल कोशिका निलंबन के लिए तैयार कर रहे हैं और कोशिकाओं की गिनती करने के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की भयावहता का मूल्यांकन किया है. Th2 सेल ध्रुवीकरण की जांच करने के लिए, कोशिकाओं रहे हैं एस के साथ फिर से उत्तेजित mansoni 72 घंटे के लिए अंडा प्रतिजन. Intracellar साइटोकाइन धुंधला प्रवाह cytometry द्वारा जांच किया जा सकता है, और supernatants और बरामद किया जा सकता Th2 साइटोकिन्स की एलिसा (आईएल -4, आईएल -5, आईएल -13) 6 ° सी -20 में संग्रहीत.
- बाल: कक्ष pelleted (400/5 XG मिनट / 4 डिग्री सेल्सियस). बाल तरल पदार्थ बरामद किया है और एलिसा द्वारा Th2 साइटोकिन्स के विश्लेषण के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत. बाल कोशिकाओं गिनती airway सूजन के लिए एक readout के रूप में उपयोग किया जाता है. 10,000-100,000 कोशिकाओं (/ 500 rpm के 5 मिनट / 4 डिग्री सेल्सियस) के cytocentrifuge की तैयारी, Diffquik धुंधला के बाद सूजन की गणना की अनुमति देगा 4, 6 घुसपैठ. वैकल्पिक रूप से, बाल कोशिकाओं प्रवाह cytometry 6 द्वारा जांच की जा सकती है.
- फेफड़े के ऊतकों: फेफड़े ऊतक stor है4 में रात भर एड डिग्री सेल्सियस निश्चित ऊतक आयल - एम्बेडेड sectioned, और ऊतकीय और immunofluorescence विश्लेषण के लिए स्लाइड पर घुड़सवार है.
6. प्रतिनिधि परिणाम
इस प्रोटोकॉल सभी के लिए आवश्यक (मैं) तैयार शिस्टोस्टोमा vivo प्रयोग में mansoni अंडे छवि (1), (ii) के संवेदनशील और इन अंडों के साथ चूहों को चुनौती शुद्ध और (iii) फेफड़ों की सूजन की प्रतिक्रिया की परीक्षा के लिए अंगों को ठीक कदम विवरण. Vivo मॉडल में इस reproducibly एक शक्तिशाली Th2 फेफड़ों भड़काऊ प्रतिक्रिया ड्राइव. इस airway सूजन और eosinophilia द्वारा दिखाया गया है के रूप में बाल कोशिकाओं की गिनती और cytocentrifuge तैयारी (छवि 2) द्वारा कल्पना. एच एंड ई दाग फेफड़ों वर्गों के अंडा प्रेरित granulomas (छवि 3a) के लिए जांच की जा सकता है, और फेफड़ों वर्गों के immunofluorescent धुंधला वैकल्पिक रूप से सक्रिय मैक्रोफेज और प्रतिरोध के रूप में Th2 साइटोकाइन प्रेरित जीन का दृश्य की अनुमति देता हैटिन की तरह अणु α (RELM) के (3b छवि). प्रतिजन विशेष सीडी 4 Th2 साइटोकाइन प्रतिक्रिया ELISAs द्वारा आईएल-5 के लिए जांच की है आईएल -4, और प्रतिजन उत्तेजित parathymic लसीका नोड कोशिकाओं आईएल -13 (4 छवि).
चित्रा. 1 शिस्टोस्टोमा mansoni अंडा इंजेक्शन मॉडल granulomatous यकृत के प्रतिनिधि चित्र, उच्च S.mansoni अंडा बोझ की विशेषता है, और S.mansoni अंडे के दिखाए जाते हैं - औसत (एल) आकार (डब्ल्यू) 50 माइक्रोन 120 माइक्रोन.
चित्रा 2 एस. mansoni अंडा इंजेक्शन airway सूजन ड्राइव ए. (एन) भोले या S.mansoni (एस.एम.) अंडा इंजेक्शन चूहों से बाल सेल नंबर (5 x10). * पी <0.05. बी बाल कोशिकाओं की Cytocentrifuge तैयारी. मैक, बृहतभक्षककोशिका, EOहै, eosinophil, लसीका, लिम्फोसाइट. शराबख़ाना, 10 माइक्रोन.
चित्रा 3 फेफड़े granulomas और वैकल्पिक रूप से सक्रिय S.mansoni अंडा आसपास मैक्रोफेज की विज़ुअलाइज़ेशन. ए फेफड़े ग्रेन्युलोमा आसपास एस.एम. अंडा (काला तीर) एच एंड ई दाग फेफड़ों वर्गों में कल्पना की थी. बी RELMα के लिए immunofluorescence धुंधला (हरा), (लाल) mannose रिसेप्टर और DAPI (नीला) ग्रेन्युलोमा autofluorescent एस.एम. अंडा (काला तीर) के आसपास में वैकल्पिक रूप से सक्रिय मैक्रोफेज सफेद तीर से पता चलता है. शराबख़ाना, 50 माइक्रोन.
चित्रा 4. S.mansoni अंडा प्रतिजन विशिष्ट Th2 cytokine प्रतिक्रिया (एन) भोले एस.एम. या अंडा इंजेक्शन चूहों के से parathymic लसीका नोड कोशिकाओं से draining एस.एम. साथ उत्तेजित थे </ Em> 72 घंटे के लिए अंडा प्रतिजन, 4 - आईएल, आईएल -5 और आईएल -13 के लिए supernatants की एलिसा द्वारा पीछा किया. स्केल, एनजी एमएल / * पी <0.05.
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Discussion
यहाँ, एक मॉडल शिस्टोस्टोमा mansoni अंडे को रोजगार के लिए टाइप 2 फेफड़ों की सूजन प्रेरित वर्णित है. इस मॉडल की विशेषता सुविधाओं शक्तिशाली Th2 प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, airway सूजन और फेफड़े ग्रेन्युलोमा गठन शामिल है. चूंकि इन मानकों सीडी 4 Th2 सेल 11 प्रतिक्रियाओं पर निर्भर हैं, इस Th2 सेल प्रतिक्रियाओं पर प्रोटीन विशिष्ट या वंश विशेष के विलोपन का प्रभाव की जांच के लिए एक उपयोगी मॉडल है. यहाँ readouts Th2 साइटोकिन्स विशिष्ट प्रतिजन की मात्रा का ठहराव, वायुमार्ग में सेल घुसपैठ का विश्लेषण, और फुफ्फुसीय granulomas का आकार भी शामिल होगा. एक अतिरिक्त पैरामीटर है कि मापा जा सकता है अंडा प्रेरित 12 तंतुमयता है. यह मेसन trichrome, जो कोलेजन बयान है कि वाहिकाओं, वायुमार्ग, और ग्रेन्युलोमा के भीतर (6 में दिखाया गया है) के आसपास होता है की दृश्य की अनुमति देता है के साथ अंडा इंजेक्शन फेफड़ों वर्गों धुंधला द्वारा मापा जाता है.
हालांकि इस protocराजभाषा एस रोजगार mansoni अंडे, इस मॉडल की एक सीमा कि यह एस reproduce नहीं है mansoni संक्रमण, जो संक्रामक cercariae के साथ चूहों से संक्रमण द्वारा किया जाता है. हालांकि, इस मॉडल के लाभ की स्थापना के लिए सुविधा है, और है कि वहाँ अन्वेषक के संक्रमण का कोई खतरा नहीं है. शुद्धि के बाद, अंडे आसानी से हो सकता है और जम कर सकते हैं कई महीनों के बाद इस्तेमाल किया. एक बार thawed, अंडे संक्रामक नहीं हैं, और इसलिए अधिक रहते है, अंडे, या संक्रामक cercariae की तुलना में आसानी से संभाला जा सकता है. जब इंजेक्शन के लिए अंडे की तैयारी, एक यह सुनिश्चित करना चाहिए कि अंडे खुर्दबीन के तहत निरीक्षण से बरकरार हैं. अंडा विघटन, विस्तृत बोर विंदुक युक्तियाँ और सुई कम से कम जब से निपटने, और केवल जब आवश्यक अंडे की pipetting इस्तेमाल किया जाना चाहिए. के बाद से अंडे तेजी से बस, यह भी महत्वपूर्ण है गिनती या इंजेक्शन लगाने से पहले कोमल कमाल द्वारा फिर से निलंबित.
हालांकि शुद्ध अंडे के जमे हुए किया जा सकता है, संक्रमित यकृत संसाधित किया जाना चाहिएतुरंत सफल अंडे की शुद्धि के लिए. संक्रमण की गंभीरता को, और जिगर में मौजूद अंडे की संख्या के बाद से तनाव निर्भर माउस हैं, अंडा वसूली और अंडे की पैदावार के लिए समय अंक इस्तेमाल चूहों पर निर्भर अलग अलग होंगे. यहाँ स्विस वेबस्टर महिलाओं का इस्तेमाल किया गया, और बलिदान 10,000-30,000 अंडे / जिगर की पीढ़ी के लिए 6-7 सप्ताह के बाद संक्रमण के पर. एक उपयोगी संदर्भ के रूप में, Cheever एट अल. कई माउस 13 उपभेदों में जिगर अंडा बोझ विस्तार.
अंडा इंजेक्शन मृत्यु प्रेरित नहीं करता. हालांकि, चूहों से अधिक संवेदनाहृत अगर शिकार, अगर अंडा तैयारी अच्छी तरह से धोया नहीं (के रूप में प्रोटोकॉल में विस्तृत) हो सकता है, या यदि अंडा इंजेक्शन गंभीर रक्तस्राव का कारण बनता है. रेट्रो कक्षीय इंजेक्शन के लिए एक विकल्प के अंडे की पूंछ नस इंजेक्शन है. यह भी एक शक्तिशाली फेफड़ों अंडा प्रेरित सूजन 3 प्रतिक्रिया में परिणाम है. इन सभी प्रक्रियाओं की देखभाल के साथ बाहर किया जाना चाहिए, और चूहों जब तक वे संज्ञाहरण से उबरने के लिए निगरानी की जानी चाहिए.
अंत में, एस के इस प्रोटोकॉल विवरण इंजेक्शन फेफड़ों की सूजन और Th2 सेल प्रतिक्रिया के शामिल होने के लिए mansoni अंडे, और कीड़ा प्रेरित सूजन, अस्थमा, एलर्जी, और तंतुमय रोगों के अध्ययन के लिए लागू होता है.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
इस काम के स्वास्थ्य (NIH) AI091759 और Crohn है और बृहदांत्रशोथ फाउंडेशन अमेरिका के विलियम और Shelby Modell परिवार फाउंडेशन अनुसंधान पुरस्कार (एम.एन. करने के लिए) के राष्ट्रीय संस्थानों द्वारा समर्थित किया गया. Schistosome संक्रमित चूहों NIAID Schistosome संसाधन केंद्र (NIAID अनुबंध N01 A130026) द्वारा आपूर्ति की गई.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Collagenase/Dispase | Roche Applied Science | 11 097 113 001 (500mg) | |
| Diff Quik Hema 3 Stain | Pack | Fisher Scientific Co. LLC | 122-911 |
| DMEM | Liquid | Gibco | 11965 |
| Falcon 50mL | Pack | Falcon | 352070 |
| Intramedic PE Tubing | Becton Dickinson and Co. | 427410 (0.58mm) | |
| Isoflurane | Abbot Animal Health | 52600405 (250mL) | |
| Ketamine | Fort Dodge, Animal Health | 100mg/mL | |
| Mannose receptor antibody | Biotin | AbD Serotec | MCA2235B |
| Metallic Strainer | Standard kitchen strainer | Target | Laurentiis |
| Paraformaldehyde | Electron Microsc. Sciences | 15710 (16%) | |
| Penicillin/ Streptomycin | Gibco | 15070 (100x) | |
| Percoll | GE Healthcare Biosciences | 17 0891 01 (1 Liter) | |
| RELMα antibody | Peprotech | 500-P214 (50μg) | |
| Surgical Thread | Surgical Specialties Corp. | SP118 (2.0 USP 100yds) | |
| Syringe Needle | BD Vacutainer Lab. Med. | 305143 (23g, 3/4 inch) | |
| USA Standard Testing Sieve | W.S. Tyler, Inc. | 150μm, 0.0059" ASTME-11, Spec. No. 100 |
|
| Xylazine | Butler | 20mg/mL |
References
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