Summary
تعفن الدم يشير إلى متلازمة الاستجابة الالتهابية الجهازية الناجمة عن العدوى الميكروبية، ويمكن محاكاة عن طريق تقنية جراحية تسمى ربط الأعور وثقب (CLP). نحن هنا وصفا لطريقة استخدام CLP-الناجم عن نموذج حيواني لفحص الأعشاب الطبية عن وكلاء العلاجية.
Abstract
تعفن الدم يشير إلى متلازمة الاستجابة الالتهابية الجهازية الناجمة عن العدوى الميكروبية. فقد كان محاكاة بصورة روتينية في الحيوانات عن طريق العديد من التقنيات، بما في ذلك ضخ السم البكتيري الخارجية (endotoxemia) أو البكتيريا (تجرثم الدم)، فضلا عن ثقب الجراحي للالأعور الأعور بواسطة الربط وثقب (CLP) 1-3. CLP يسمح البكتيريا تسرب وتلوث برازي من التجويف البريتوني، ومحاكاة هذا المرض الإنسان السريرية لالتهاب الزائدة الدودية مثقب أو انسدادات. يمكن السيطرة عليها من شدة تعفن الدم، وهو ما انعكس في معدلات وفيات الأطفال في نهاية المطاف، جراحيا من خلال تغيير حجم الإبرة المستخدمة لثقب الأعوري 2. في الحيوانات، CLP يدفع مماثلة، والدورة الدموية ثنائي الطور الاستجابات القلبية الوعائية، والتمثيل الغذائي، والمناعية كما لوحظ أثناء السريرية للتسمم الإنسان 3. وبالتالي، يعتبر نموذج CLP باعتباره واحدا من النماذج لتعفن الدم التجريبية 1-3 معظم ذات الصلة سريريا. </ P>
وقد استخدمت مختلف النماذج الحيوانية لتوضيح الآليات المعقدة التي يقوم عليها المرضية للتسمم التجريبية. نتيجة قاتلة من تعفن الدم ويعزى ذلك جزئيا إلى تراكم مفرط للالسيتوكينات في وقت مبكر (مثل TNF، IL-1 و الإنترفيرون γ) 4-6 والوسطاء proinflammatory الراحل (على سبيل المثال، HMGB1) 7. مقارنة مع السيتوكينات proinflammatory في وقت مبكر، في وقت متأخر من القائم بأعمال الوساطة لديها أوسع نافذة العلاجية للتطبيقات السريرية. على سبيل المثال، إدارة تأخر HMGB1 الأجسام المضادة لإبطال مفعولها بعد 24 ساعة من بداية CLP، لا يزال انقاذ الفئران من الفتك 8،9، وإنشاء HMGB1 كوسيط في وقت متأخر من تعفن الدم القاتلة. وقد بدأت اكتشاف HMGB1 كوسيط في وقت متأخر من التمثيل حقل جديد من التحقيقات لتطوير علاجات الإنتان باستخدام الادوية العشبية الصينية التقليدية. في هذه الورقة، ونحن تصف إجراء من CLP-الناجم عن تعفن الدم، واستخدامه في فحص الأدوية العشبية لصاحب الجلالةGB1 استهداف العلاجات.
Protocol
1. إنشاء نموذج حيواني للتسمم
- الفئران هي تخدير مع الكيتامين (75 ملغم / كغم، العضلي، والتراسل الفوري) وزيلازين (10 ملغم / كغم، IM)، ووضعها في موقف ضعيف.
- إصلاح أقدام الفأر مع شريط لضمان وضع مستقر.
- تنظيف البطن مع 3 الدعك بالتناوب من betadine أو غيرها مطهر الجلد والكحول. ثم، وجعل شق خط الوسط 15 ملم لفضح الأعور.
- Ligate الأعور مع خياطة الحرير 4-0 في ما يقرب من 5.0 مم من طرف الأعور، ثم ثقب الجدعة ligated الأعوري مرة واحدة مع إبرة قياس 22 للسماح للقذف من البراز.
- يتم استبداله على الفور الأعور مرة أخرى إلى وضعها الطبيعي داخل البطن.
- إغلاق موقع شق في طبقتين، عن طريق إغلاق أول من الجهاز العضلي في البطن مع الخيوط الجراحية القابلة للامتصاص، ومن ثم إغلاق الجلد مع مقاطع الجرح أو الغرز غير ممتص.
- احياء الفأر مع 0.5 مل محلول ملحي، وفعل واحدسراج الدين من imipenem (0.5 ملغ / الماوس، تحت الجلد) فورا بعد الانتهاء من العملية الجراحية.
- عودة الماوس مرة أخرى إلى قفص نظيفة مع حرية الوصول إلى الغذاء والماء.
- في مختلف CLP وقت آخر نقطة، ويدير انتزاع الاعشاب أو مكون intraperitoneally.
- ويتم رصد البقاء على قيد الحياة الحيوانية لأكثر من أسبوعين. وينبغي أن يتم التخلص الحيوانات المحتضرة واظهار الصعوبات على الوقوف والتنفس احتضارية، ضمور العضلات ونزيف حاد غير المنضبط من قبل الكربون جرعة زائدة من استنشاق ثاني أكسيد الكربون.
- من المهم أن نلاحظ أن تعميم مستويات خلوى هي المعالم الهامة في هذه الدراسات. وقد تبين أن المسكنات المختلفة للتأثير على الافراج خلوى والأنشطة، وبالتالي كان بالإمكان تجنب عمدا في رعاية ما بعد الجراحة.
2. إعداد مستخلصات الاعشاب
- استخراج الأعشاب في الماء الساخن (85 درجة مئوية) للموارد البشرية 1-4 (1 ساعة للأوراق، و 4 ساعات عن الجذور).
- أجهزة الطرد المركزي في الماء حتىجزء luble (3300 غرام، 20 دقيقة، 4 درجات مئوية) لإزالة جزيئات غير قابلة للذوبان.
- رشاحة الكسر طاف من خلال مرشح ميكرون 0.2.
- في جزء واضح الترشيح للذوبان في الماء ومن ثم مجزأة بواسطة الترشيح الفائق باستخدام Centriprep YM-10 تصفية الطرد المركزي (أي دليل. 4305، ميليبور).
- أسفرت يتم فحص منخفضة (<10 كيلو دالتون) وعالية (> 10 كيلو دالتون) كسور الوزن الجزيئي (MWF) لHMGB1 المثبط للأنشطة التي تستخدم الثقافات البلاعم.
- إدارة داخل الصفاق من HMGB1 المثبط للانتزاع الاعشاب أو المكونات في 24 CLP آخر ساعة لتقييم فعاليتها العلاجية.
3. البريتوني بلعم العزلة
- ويدير Thioglycollate مرق (4٪، 2.0 مل) intraperitoneally في الفئران العادية.
- ويتم حصاد الضامة البريتوني الابتدائي في 3 أيام كما هو موضح سابقا 10.
- الضامة هي ما قبل مثقف في المتوسط DMEM (Gibco BRL، وغراند ايلاند، نيويورك) تستكمل مع 10٪ الجنين مصل بقري (FBS)، 2 الجلوتامين ملمول / لتر، و 1٪ البنسلين.
- تغسل بلطف الضامة تمسكا بها، ومثقف في، المصل خالية OPTI-MEM المتوسطة أنا قبل ساعتين من التحفيز مع الذيفان الداخلي الجرثومي (lipopolysaccharide، LPS، كولاي 0111: B4، سيغما الدريخ).
- في 16 ساعة بعد التحفيز LPS، ويتم تحديد مستويات HMGB1 في المتوسط ثقافة الغربية من قبل تحليل النشاف 11.
- وكميا لشدة الفرقة النسبية باستخدام صورة المعاهد الوطنية للصحة 1،59 البرامج لتحديد مستويات HMGB1 مع الإشارة إلى منحنيات معيار ولدت مع تنقيته HMGB1.
4. ممثل النتائج
1. CLP يستحث الالتهاب النظامية والمحلية.
في غضون ساعات قليلة من الجراحة CLP، والحيوانات تظهر علامات سريرية للتسمم والتي تشمل انتصاب الشعر، والخمول، جالسين، وانخفاض في كمية الغذاء والماء. الحيوانات تطوير التهاب الصفاق الحاد مع النظامية على التواليعدوى يموتون عادة في غضون 48-96 ساعة. ومع ذلك، يمكن حتى العمر والجنس، والخلفية الوراثية المتطابقة الحيوانات تستجيب لقوانين وسياسات المنافسة لعملية جراحية بطريقة مميزة في سياق الإنتان التجريبية. على سبيل المثال، في 48 CLP آخر ساعة، في حين أن بعض الحيوانات قد تكون اقتربت من حالة الاحتضار (كما هو موضح في الشكل رقم 1)، وبعضها الآخر قد تبقى في حالة غير المحتضرة.
وكشف المسح الشامل لتعميم السيتوكينات فوارق هائلة في مستويات السيتوكينات عدة (على سبيل المثال، IL-6، KC، MIP-2، وsTNFR1) بين الفئران في الولايات المحتضر وغير المحتضر، (الشكل 1) 12. ولا سيما، وقد تم تصنيف هؤلاء الوسطاء التهابات كدلالة على وجود بديل للتسمم بسبب مستوياتها المتداولة هي تنبؤ موثوقة من نتائج قاتلة في التجارب السريرية 12-14 أو تعفن الدم 15. وبالإضافة إلى ذلك، CLP التي يسببها أيضا إطلاق المحلية من مختلف السيتوكينات المؤيدة والمضادة للالتهابات وكيموكينات. على سبيل المثال، فيلا يزال 48 ساعة آخر CLP، كميات كبيرة من السيتوكينات (على سبيل المثال، IL-6) وكيموكينات (KC وMIP-2) يمكن قياسها ليس فقط للنظام ككل في الدم، ولكن محليا أيضا في السائل غسيل البريتوني (الشكل 2).
2. الكشف عن HMGB1 المثبط للانتزاع الاعشاب أو المكونات.
باستخدام الثقافات بلعم، كنا قادرين على تقييم قدرات انتزاع الاعشاب مختلف مكونات أو في عرقلة الافراج عن HMGB1 الذيفان الداخلي الناجم عن (الشكل 3). في ضوء قدرتها على إطلاق HMGB1 تثبيط، ونحن مواصلة استكشاف مدى فعاليتها في تعفن الدم النماذج الحيوانية. ونظرا لحركية في وقت متأخر وطويلة من تراكم HMGB1 في تعفن الدم التجريبية 8، أعطيت الجرعة الأولى من HMGB1 مثبطات 24 ساعة بعد ظهور تعفن الدم - وهذه نقطة مرة عندما وضعت الفئران علامات واضحة على تعفن الدم بما في ذلك، والخمول الإسهال وانتصاب الشعر،. كما هو مبين في الشكل (4)، وتأخر إدارة المتكرر لج الشاي الاخضر الكبرىomponent، يبيغاللوكاتيشين-3-غالاتي (يغكغ)، ابتداء من 24 ساعة بعد بدء تعفن الدم، انقاذ الفئران بشكل ملحوظ من تعفن الدم القاتلة 12. حتى عندما يعطى عن طريق الفم، يغكغ انقاذ الفئران لا يزال من تعفن الدم القاتلة، زيادة كبيرة في معدلات البقاء على قيد الحياة الحيوانية من 16٪ إلى 44٪ 16. سيكون من المهم تحديد ما إذا كانت العلاجات التوافقية مع المكونات العشبية عدة يمكن تحقيق حماية أفضل كبيرة في النماذج الحيوانية للتسمم. أخذت معا، وهذه البيانات التجريبية التحقق من صحة نهجنا في شاشة وكلاء علاجية جديدة باستخدام نموذج حيواني من CLP-الناجم عن تعفن الدم.
5. ممثل النتائج
الشكل 1. مستويات تداول من علامات بديلة تكون أعلى بشكل كبير في الحيوانات التفسخ تقترب الدولة المحتضرة. BALB / ج الفئران تعرضوا للتسمم بواسطة CLP ورصدها لتطوير علامات المرض. فيالمرحلة المتأخرة من تعفن الدم (52 ساعة آخر CLP)، وقد تم جمع الدم في الفترة من 3 الفئران العادية (-CLP) و 3 فئران المجاري تقترب من حالة الاحتضار، و 3 فئران الصرف الصحي في ولاية غير المحتضرة. تم تجميع المصل من كل مجموعة، ويعاير لملف التعريف خلوى بواسطة صفائف الأجسام المضادة. لاحظ الفرق الكبير في المستويات النسبية للعلامات بديلة عدة بين الجماعات المختلفة. مقتبس من دوى: 10.1371/journal.pone.0001153.g006 مع الإذن الممنوح من الناشر.
الشكل 2. وتعرض الكشف عن السيتوكينات المحلية والجهازية وكيموكينات في آخر 48 ساعة الفئران BALB / C CLP. إلى تعفن الدم بواسطة CLP، وكان حصاد الدم أو السائل البريتوني في 48 CLP آخر ساعة. وتم قياس المستويات النسبية للالسيتوكينات عدة وسائل كيموكينات في تجميع غسيل مصل الدم أو البريتوني بواسطة صفائف الضد خلوى، وأعرب عن وحدات التعسفي (الاتحاد الافريقي). كما SA سائل الرقابة والدم والبريتونيوقد تم الحصول على mples من الحيوانات السليمة العادية (-CLP) بدون فتح البطن.
الشكل 3. عنصر العشبية الجرعة بشكل تابع منعت الذيفان الداخلي الناجم عن إطلاق HMGB1 في الثقافات بلعم الابتدائية. وحفز الابتدائية الضامة البريتوني الفئران مع LPS في غياب، أو وجود عنصر العشبية (على سبيل المثال، EGCG، 15 ميكرومتر). في 16 ساعة بعد التحفيز LPS، تم تحديد مستويات HMGB1 في المتوسط ثقافة الغربية من قبل تحليل النشاف. مقتبس من دوى: 10.1371/journal.pone.0001153.g006 مع الإذن الممنوح من الناشر.
الشكل 4. عنصر العشبية انقاذ الفئران من تعفن الدم القاتلة. BALB / ج الفئران تعرضوا للتسمم قاتلة بواسطة CLP، ومكون العشبية (EGCG) كان intraperitoneally تدار في +24، +48، +72 ساعات بعد بداية تعفن الدم. وتم رصد بقاء imal لمدة تصل الى أسبوعين. واستخدمت طريقة كابلان ماير لمقارنة الاختلافات في معدلات الوفيات بين الجماعات. *، P <0.05 مقابل المالحة. مقتبس من دوى: 10.1371/journal.pone.0001153.g006 مع الإذن الممنوح من الناشر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
في المختبر، وقد استخدمت عدة نماذج حيوانية من تعفن الدم إلى فهم الآلية المرضية للتسمم من أجل تطوير علاجات جديدة محتملة. أهميتها السريرية لا يزال موضع نقاش قبل الترجمة الناجحة من الدراسات على الحيوانات في التطبيقات السريرية للتسمم. على الرغم من أن الأجسام المضادة ضد السيتوكينات في وقت مبكر (على سبيل المثال، TNF) كانت وقائية في النماذج الحيوانية من endotoxemia / تجرثم 17،18، فإنها تزداد سوءا في الواقع البقاء في نموذج حيواني من تعفن الدم 19. وبالمثل، فشلت معظم المضادة للتنف وكلاء لاظهار فعالية في التجارب السريرية للتسمم 20-22. هذا الفشل يعكس جزئيا على مدى تعقيد الآليات المسببة للأمراض الكامنة وراء تعفن الدم 23،24. وبالإضافة إلى ذلك، قد يكون أيضا تعزى إلى عيوب في اختيار من: 1) الأهداف العلاجية الممكنة أو المخدرات؛ 2) جرعات الأمثل وتوقيت للمخدرات، و 3) غير واقعي نتيجة التدابير السريرية (مثل معدلات وفيات) 25. وقد قدمت الاكتشافات الحديثة لHMGB1 استهداف انتزاع الاعشاب و / مكونات، بما في ذلك Danggui 26، 12،16 الشاي الأخضر، و 27 Danshen الأمثلة الناجحة لنماذج التحقيق قبل السريرية الحيوانية التي تستخدم للتسمم. واجراء مزيد من التحقيقات في هذا المجال إلقاء المزيد من الضوء على التعاقب الجزيئية الكامنة وراء تنظيم الاستجابة المناعية الفطرية، وتقديم أدلة لتطوير علاجات لأمراض التهابات مختلفة. الاولى عندما وضع قوانين وسياسات المنافسة في المختبر الخاص بك، ينبغي بذل جهد لتنفيذ الإجراء عملية جراحية في أسرع وقت ممكن، وبالضبط لضمان إعادة الإنتاج، وخصوصا عند استخدام عدد كبير (30-40) من الفئران لمقارنة معدلات البقاء على قيد الحياة بين المجموعات التجريبية من عدة تجربة. استخدام طويل المفعول التخدير (مثل الكيتامين وزيلازين) يسمح لنا لإكمال CLP إجراء العمليات الجراحية على عدد كبير من الفئران في فترة زمنية قصيرة نسبيا، وتساعد في الوقت نفسه إلىإزالة التباين المحتملة جرعة وقعت في كثير من الأحيان عند استخدام التخدير متقلبة. ويمكن اتخاذ معدلات البقاء على قيد الحياة والنظامية تراكم خلوى من علامات الأداء الناجح لإجراء CLP.
وقد CLP النموذج المستخدم على نطاق واسع في القوارض بسبب مزايا واضحة في انخفاض التكلفة، والبساطة في إجراء العمليات الجراحية، واسعة النطاق، والمناعية المرضية، والأوصاف الفسيولوجية. ومع ذلك، هناك عدد من أوجه القصور في نموذج الفأر 1-3 CLP. على سبيل المثال، مثل كل النماذج الحيوانية، وسلطت الضوء على التفاوت بين الأنواع من حقيقة أن ربط الأعوري بدون ثقب يمكن أن تكون قاتلة في الفئران الإنسان، ولكن ليس في. وعلاوة على ذلك، وذلك بسبب صغر حجم الفأر والجفاف لاحقة لCLP، فإنه غالبا ما يكون من الصعب الحصول على عينات من الدم لقياس مسلسل خلوى. ويمكن التغلب على هذه العيوب جزئيا عن طريق وضع نماذج CLP في الحيوانات الكبيرة 2،3،27،28. وبالإضافة إلى ذلك، من المهم أن نشير إلى أن معدلات وفيات ووتحدد إلى حد كبير من التقدم من التهاب الصفاق في القوارض، من خلال حجم قذف البراز، والتي تتأثر مقياس لإبرة تستخدم لثقب في الأعور، وعدد من ثقوب، إجمالي حجم الأعور ligated واللزوجة من البراز 2، 3. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن لجرعة وتردد الإدارة من المضادات الحيوية في مرحلة مبكرة من CLP تؤثر أيضا على معدلات وفيات. أخيرا، يمكن لمصادر الحيوانية والبيئة السكنية يسهم أيضا في التباين في معدلات وفيات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الخدمات المعمارية والهندسية والأب وشارك في المخترعين من طلبات براءات الاختراع المتعلقة HMGB1 مثبطات (tanshinones) كعوامل علاجية محتملة لتعفن الدم.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة، المعهد الوطني للعلوم الطبية العامة (R01GM063075) والمركز الوطني للطب التكميلي والبديل (R01AT05076).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Betadine | Purdue Products L.P. | 25655-41-8 | |
| imipenem | Merck & Co., Inc. | 9882821 | |
| Ketamine HCl | Hospira Inc. | RL-0065 | |
| Xylazine | Lloyd, Inc. | 4821 | |
| Autoclip | BD Biosciences | 427631 | |
| 4-0 silk suture | Roboz Surgical Instruments Co. | SUT-15-2 | |
| Surflo I.V. Catheter | Terumo Medical Corp. | SR*OX2419CA | |
| RayBio mouse cytokine antibody array | RayBiotech, Inc. | AAM-CYT-3 | |
| Thioglycollate | BD Biosciences | 211716 |
References
- Wichterman, K. A., Baue, A. E., Chaudry, I. H. Sepsis and septic shock--a review of laboratory models and a proposal. J. Surg. Res. 29, 189-201 (1980).
- Baker, C. C., Chaudry, I. H., Gaines, H. O., Baue, A. E. Evaluation of factors affecting mortality rate after sepsis in a murine cecal ligation and puncture model. Surgery. 94, 331-335 (1983).
- Hubbard, W. J. Cecal ligation and puncture. Shock. 24, Suppl . 1. 52-57 (2005).
- Akira, S., Takeda, K. Toll-like receptor signalling. Nat. Rev. Immunol. 4, 499-511 (2004).
- Baggiolini, M., Loetscher, P. Chemokines in inflammation and immunity. Immunol. Today. 21, 418-420 (2000).
- Balkwill, F. Cytokines--soluble factors in immune responses. Curr. Opin. Immunol. 1, 241-249 (1988).
- Wang, H. HMG-1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice. Science. 285, 248-251 (1999).
- Yang, H. Reversing established sepsis with antagonists of endogenous high-mobility group box 1. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 296-301 (2004).
- Qin, S. Role of HMGB1 in apoptosis-mediated sepsis lethality. J. Exp. Med. 203, 1637-1642 (2006).
- Ray, A., Dittel, B. N. Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells. J. Vis. Exp. (35), e1488 (2010).
- Rendon-Mitchell, B. IFN-gamma Induces High Mobility Group Box 1 Protein Release Partly Through a TNF-Dependent Mechanism. J. Immunol. 170, 3890-3897 (2003).
- Li, W. A Major Ingredient of Green Tea Rescues Mice from Lethal Sepsis Partly by Inhibiting HMGB1. PLoS ONE. 2, e1153 (2007).
- Osuchowski, M. F., Welch, K., Siddiqui, J., Remick, D. G. Circulating cytokine/inhibitor profiles reshape the understanding of the SIRS/CARS continuum in sepsis and predict mortality. J. Immunol. 177, 1967-1974 (2006).
- Heuer, J. G. Evaluation of protein C and other biomarkers as predictors of mortality in a rat cecal ligation and puncture model of sepsis. Crit. Care. Med. 32, 1570-1578 (2004).
- Bozza, F. A. Cytokine profiles as markers of disease severity in sepsis: a multiplex analysis. Crit. Care. 11, R49 (2007).
- Li, W. EGCG stimulates autophagy and reduces cytoplasmic HMGB1 levels in endotoxin-stimulated macrophages. Biochem. Pharmacol. 81, 1152-1163 (2011).
- Beutler, B., Milsark, I. W., Cerami, A. C. Passive immunization against cachectin/tumor necrosis factor protects mice from lethal effect of endotoxin. Science. 229, 869-871 (1985).
- Tracey, K. J. Anti-cachectin/TNF monoclonal antibodies prevent septic shock during lethal bacteraemia. Nature. 330, 662-664 (1987).
- Eskandari, M. K. Anti-tumor necrosis factor antibody therapy fails to prevent lethality after cecal ligation and puncture or endotoxemia. J. Immunol. 148, 2724-2730 (1992).
- Ziegler, E. J. Treatment of gram-negative bacteremia and septic shock with HA-1A human monoclonal antibody against endotoxin. A randomized, double-blind, placebo-controlled trial. The HA-1A Sepsis Study Group. N. Engl. J. Med. 324, 429-436 (1991).
- Ziegler, E. J. Treatment of gram-negative bacteremia and shock with human antiserum to a mutant Escherichia coli. N. Engl. J. Med. 307, 1225-1230 (1982).
- Abraham, E. Efficacy and safety of monoclonal antibody to human tumor necrosis factor alpha in patients with sepsis syndrome. A randomized, controlled, double-blind, multicenter clinical trial. TNF-alpha MAb Sepsis Study Group. JAMA. 273, 934-941 (1995).
- Cohen, J. Adjunctive therapy in sepsis: a critical analysis of the clinical trial programme. Br. Med. Bull. 55, 212-225 (1999).
- Dellinger, R. P. Surviving Sepsis Campaign: international guidelines for management of severe sepsis and septic shock: 2008. Crit. Care Med. 36, 296-327 (2008).
- Wang, H., Zhu, S., Zhou, R., Li, W., Sama, A. E. Therapeutic potential of HMGB1-targeting agents in sepsis. Expert. Rev. Mol. Med. 10, e32 (2008).
- Wang, H. The aqueous extract of a popular herbal nutrient supplement, Angelica sinensis, protects mice against lethal endotoxemia and sepsis. J. Nutr. 136, 360-365 (2006).
- Li, W. A cardiovascular drug rescues mice from lethal sepsis by selectively attenuating a late-acting proinflammatory mediator, high mobility group box 1. J. Immunol. 178, 3856-3864 (2007).
- Fukuyama, M. Mixed bacterial infection model of sepsis in rabbits and its application to evaluate superantigen-adsorbing device. Blood Purif. 23, 119-127 (2005).
