Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

مرشحات الصوف الزجاجي للفيروسات التي تنتقل عن طريق التركيز ومسببات الأمراض الحيوانية المنشأ الزراعي

Published: March 3, 2012 doi: 10.3791/3930

Summary

وقد استخدمت المرشحات الصوف الزجاجي للتركيز الفيروسات تنتقل عن طريق المياه من قبل عدد من المجموعات البحثية في مختلف أنحاء العالم. هنا نعرض مقاربة بسيطة لبناء مصافي الصوف الزجاجي وإظهار الفلاتر هي أيضا فعالة في التركيز التي تنقلها المياه الفيروسية، ومسببات الأمراض البكتيرية والأوالي.

Abstract

الخطوة الأساسية الأولى في تقييم مستويات العوامل المسببة للأمراض في المياه الملوثة المشتبه فيها هو تركيز. طرق تركيز تميل الى أن تكون محددة لمجموعة العوامل المسببة للأمراض معينة، على سبيل المثال الولايات المتحدة وكالة حماية البيئة 1623 طريقة لالجيارديات والكريبتوسبوريديوم وهو ما يعني مطلوبة أساليب متعددة إذا كان البرنامج لأخذ العينات وتستهدف أكثر من مجموعة العوامل المسببة للأمراض. عيب آخر من الأساليب المتبعة حاليا هي معدات يمكن ان تكون معقدة ومكلفة، على سبيل المثال طريقة VIRADEL مع فلتر خرطوشة 1MDS لتركيز الفيروسات 2. في هذه المادة ونحن تصف كيفية بناء مصافي الصوف الزجاجي لتركيز مسببات الأمراض التي تنقلها المياه. بعد شطف مرشح، والتركيز هو قابل للتركيز خطوة الثانية، مثل الطرد المركزي، تليها كشف العوامل المسببة للأمراض وتعداد من قبل وسائل ثقافية أو الجزيئي. المرشحات لديها العديد من المزايا. البناء هو سهل ويمكن أن يبنى على المرشحات لنيويورك حجم لتلبية متطلبات محددة لأخذ العينات. الأجزاء مرشح غير مكلفة، مما يجعل من الممكن لجمع عدد كبير من العينات دون التأثير بشدة على ميزانية المشروع. يمكن أن تتركز كميات عينة كبيرة (100S إلى 1000 ق م) وفقا لمعدل انسداد من التعكر عينة. المرشحات هي المحمولة للغاية ومع الحد الأدنى من المعدات، مثل المضخات وتدفق متر، ويمكن تنفيذها في هذا المجال لأخذ العينات النهائية مياه الشرب والمياه السطحية والمياه الجوفية، ومياه الصرف الزراعي. وأخيرا، والزجاج الترشيح صوف فعالة لتركيز مجموعة متنوعة من أنواع الممرض ذلك إلا أسلوب واحد هو ضروري. نحن هنا يقدم تقريرا عن فعالية مرشح في تركيز الفيروس المعوي الإنسان التي تنقلها المياه، S almonella الملهبة، الكريبتوسبوريديوم parvum، وفيروس انفلونزا الطيور.

Protocol

1. إعداد الصوف الزجاجي

  1. قبل وبعد اتخاذ كل دفعة من المرشحات، وتعقيم منطقة العمل مع حل التبييض 10٪.
  2. وضعت على قفازات وثوب. تعقيم دلو عن طريق جهاز الأوتوكليف في 121 درجة مئوية و 15 رطل ما لا يقل عن 20 دقيقة. وضع الصوف الزجاجي في وعاء معقم.
  3. تشبع الصوف الزجاجي بالماء التناضح العكسي والسماح للنقع لمدة 15 دقيقة.
  4. استنزاف المياه التناضح العكسي من دلو.
  5. تشبع الصوف الزجاجي مع حمض الهيدروكلوريك M (1) واسمحوا نقع لمدة 15 دقيقة.
  6. استنزاف 1 M حمض الهيدروكلوريك من دلو.
  7. شطف الصوف الزجاجي بالماء التناضح العكسي.
  8. مزيج دقيق.
  9. التحقق من الرقم الهيدروجيني باستخدام ورقة الأس الهيدروجيني وتكرار شطف المياه التناضح العكسي إلى أن يتم تحقيق محايد الرقم الهيدروجيني.
  10. صب قبالة المياه شطف.
  11. تشبع الصوف الزجاجي مع هيدروكسيد الصوديوم 1 م والسماح للنقع لمدة 15 دقيقة.
  12. استنزاف 1 م هيدروكسيد الصوديوم من دلو.
  13. REPEAT والتناضح العكسي شطف حتى يتم التوصل إلى محايد الرقم الهيدروجيني.
  14. صب قبالة المياه شطف.
  15. بدلا من دلو، ويمكن بناؤها لغسيل الصوف الزجاجي، والتي تشبه في تصميمها لغسالة ماصة الزجاج (الشكل 1).
  16. تغطية الصوف الزجاجي تماما مع الفوسفات معقم مخزنة المالحة (PBS) إلى تعديل درجة الحموضة 6.8.
  17. استخدام المعدة الصوف الزجاجي مباشرة أو مخزن في 4 درجات مئوية. يمكن تخزينه لمدة تصل الى أسبوعين. قبل استخدام، للتأكد من درجة حموضة محايدة لأنها سوف ترتفع مع مرور الوقت. إذا كان الرقم الهيدروجيني ليست محايدة، مع الفوسفات عقيمة إعادة شطف مخزنة المالحة (الرقم الهيدروجيني 6.8).

2. تجميع تصفية الصوف الزجاجي

  1. حفر حفرة 11/16 بوصة في مباراة دولية بولي كلوريد الفينيل والمواضيع الصنبور بحيث يمكن ثمل والنايلون محول ذكر التجهيزات في مباراة دولية. هذه الخطوة كانت ضرورية فقط من أجل انعقاد الجمعية العمومية الأولى. بعد ذلك، يمكن استخدام أغطية لسنوات. تطبق تفلونالشريط إلى المواضيع التجهيزات النايلون والمسمار في مباراة دولية.
  2. حزمة من الأنابيب البلاستيكية مع قطع صغيرة من الصوف الزجاجي. استخدام المكبس المعدني، مثل سيارة صمام محرك، إلى حزمة ضيقة. التعبئة والتغليف لا يتطلب قوة كبيرة. حزمة ضيقة بما يكفي بحيث الصوف الزجاجي يبقى في مكان وقنوات لا تشكل لا. ومع ذلك، لا حزمة باحكام حتى الماء لا يمكن أن تتدفق من خلال مصفاة. عندما معبأة بشكل مناسب، يجب أن معدل التدفق من 4 إلى 5 لترات في الدقيقة الواحدة يمكن تحقيقه عندما يتم إرفاق مرشح لصنابير المياه مع الضغوط بين 40-60 رطل. لحجم الأنابيب البلاستيكية المحددة في هذا البروتوكول، ما يقرب من 85 غراما يغسل ويستعمل الصوف الزجاجي معبأة في الأنابيب. الفارغة والأنابيب البلاستيكية الفارغة على توازن أعلى التحميل وحزمة مع الصوف الزجاجي غسلها حتى كتلة الأنابيب يزيد 85 غراما.
  3. إدراج شبكة البولي بروبلين في مباراة دولية PVC مع ذكر التجهيزات النايلون محول المرفقة.
  4. تطبق تفلون الشريط إلى أجزاء مترابطة من الأنابيب البلاستيكية.
  5. برغي في مباراة دولية PVC إلى ع خبورصة البترول الدولية وتسمية واحدة نهاية مرشح تدفق والطرف الآخر على تدفق. وهذا هو المهم في وقت لاحق لاتخاذ الخطوة شطف. هو المسمى الذي تدفق نهاية لا يهم.
  6. يميل دفع 60 مل من الفوسفات معقم مخزنة المالحة (الرقم الهيدروجيني = 6.8) في التصفية باستخدام قسطرة حقنة. وسوف تزيد يخرج الطرف الآخر.
  7. لف تنتهي بشكل وثيق مع Parafilm لتجنب تسرب. ويمكن تخزين مرشحات تصل إلى 30 يوما في 4 درجات مئوية.

3. أخذ العينات

  1. تعقيم الأنابيب المستخدمة لأخذ العينات بواسطة إعادة تدوير أو تخبط العناصر لمدة 30 دقيقة في NaClO 0.525٪ (أي حل 10٪ من التبييض المنزلي قياسي). اتبع هذا من خلال تجفيف محلول هيبوكلوريت وتحييد مع ثيوسلفات الصوديوم 0.05٪، الذي أدلى به بإضافة 25 مل من مخزون مائي 2٪ صوديوم ثيوسلفات حل للتر واحد من المياه التناضح العكسي.
  2. لعينة المياه مع الرقم الهيدروجيني أكبر من 7.5، وضبط درجة الحموضة إلى ما بين 6.5 و 7.0 مع حمض الهيدروكلوريك. ويمكن تركيز حمض الهيدروكلوريك وتتراوح من 0.25M إلى 1 ليتر أربعة M. 0.5 متر حمض الهيدروكلوريك عموما كافية لعينات 800 2 لتر، اعتمادا على الرقم الماء المحيطة وقدرة التخزين المؤقت. حقن حمض الهيدروكلوريك أثناء أخذ العينات باستخدام مضخة تمعجية أو بخاخ (الشكل 2). ضبط سرعة المضخة أو بخاخ الافتتاحية لتحقيق الهدف الرقم الهيدروجيني. قياس درجة الحموضة في العينة منفذ خط باستخدام مقياس درجة الحموضة المجال.
  3. استخدام prefilter إذا قباقيب الصوف الزجاجي مرشح من المياه مع ارتفاع درجة التعكر. (المواصفات لprefilter والسكن فيها هي في قائمة المواد على الانترنت.) لأن يمكن تركيبها مسببات الأمراض إلى جزيئات محاصرين من قبل prefilter يجب مزال أنه جنبا إلى جنب مع مرشح الصوف الزجاجي (انظر أدناه).
  4. ضبط معدل تدفق إلى ما بين 2 و 4 لترات / دقيقة. حجم العينة النموذجية هي ما بين 200 و 1500 لتر.
  5. قطع مرشح الصوف الزجاجي، ومخزن في حقيبة بلاستيكية معقمة في 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 48 ساعة.

4. شطف

  1. لصق الفلتر الصوف الزجاجي الى حلقةنقف مع نهاية تدفق عينة نحو الانخفاض في زجاجة البولي بروبلين. أزل عكس اتجاه تدفق العينة.
  2. دفع 80 مل من مستخلص عقيمة لحوم البقر 3٪ في جليكاين 0.05 M مع الرقم الهيدروجيني من 9.5 إلى التصفية.
  3. انتظر 15 دقيقة.
  4. دفع آخر مل 80 من معقم مستخلص لحم البقر 3٪ في جليكاين M 0.05 مع الرقم الهيدروجيني من 9.5 إلى التصفية.
  5. دفع الهواء شامل للمرشح حتى رغوة يخرج من مدخل مرشح.
  6. ضبط درجة الحموضة إلى شطافة بين 7.0 و 7.5 مع حمض الهيدروكلوريك 1 م.
  7. شطافة مخزن في 4 درجات مئوية لتصل إلى 24 ساعة أو عند -20 درجة مئوية لفترات أطول من الوقت.
  8. أزل من prefilter إذا تم استخدام واحد. فك الجزء العلوي من خرطوشة الإسكان وتصب كل المياه قبالة المتبقية داخل السكن في حين الضغط على prefilter في مكان بالأيدي بعد ارتداء القفازات المعقمة.
  9. إزالة prefilter من خرطوشة الإسكان، وتنزلق قبل ان تتحول الى 15 "× 6" حقيبة الرمز البريدي قفل.
  10. صب 200 مل من مستخلص عقيمة لحوم البقر 3٪ في ز 0.05 مlycine مع الرقم الهيدروجيني من 9.5 في كيس وختم بشكل آمن مع قفل الرمز البريدي.
  11. قلب لprefilter أكياس عدة مرات لضمان كامل سطح يأتي في اتصال مع استخراج لحوم البقر.
  12. انتظر 15 دقيقة، وأحيانا قلب تدليك prefilter أكياس.
  13. فتح الرمز البريدي قفل. قبضة الكيس حول prefilter بإحكام للضغط على لحوم البقر وانتزاع أكبر قدر ممكن وسحب prefilter خارج بالأيدي بعد ارتداء القفازات المعقمة،.
  14. صب شطافة مستخلص لحم البقر في زجاجة البولي بروبلين.
  15. ضبط درجة الحموضة إلى شطافة بين 7.0 و 7.5 مع حمض الهيدروكلوريك 1M.
  16. شطافة مخزن في 4 درجات مئوية لتصل إلى 24 ساعة أو عند -20 درجة مئوية لفترات أطول من الوقت. ويمكن للشطافة prefilter تحليلها بشكل منفصل عن مسببات الأمراض أو جنبا إلى جنب مع مرشح شطافة زجاج والصوف.

5. ممثل النتائج

الممرض مستوى المياه العكرة (NTU) 1 مبلغ مصنف / لتر ب، ج، د استرداد٪ ± 1 SD تجارب عدد المستقلة
المعوي، فيروس شلل الأطفال سابين الثالث 0.5 500 81٪ ± 11 7
الأمعاءفيروس شلل الأطفال سابين-III 0.5 5000 67٪ ± 12 8
المعوي، فيروس شلل الأطفال سابين الثالث 215 500 59٪ ± 32 7
المعوي، فيروس شلل الأطفال سابين الثالث 215 5000 38٪ ± 22 6
المعوي، فيروس شلل الأطفال سابين الثالث 447 500 56٪ ± 18 8
المعوي، فيروس شلل الأطفال سابين الثالث 447 5000 63٪ ± 37 8
الكريبتوسبوريديوم parvum 0.5 5 38٪ ± 14 7
الكريبتوسبوريديوم parvum 0.5 50 53٪ ± 19 8
بكاءptosporidium parvum 215 5 40٪ ± 16 7
الكريبتوسبوريديوم parvum 215 50 30٪ ± 6 6
الكريبتوسبوريديوم parvum 447 5 33٪ ± 13 8
الكريبتوسبوريديوم parvum 447 50 28٪ ± 11 8
السالمونيلا الملهبة لل 0.5 5 29٪ ± 24 7
السالمونيلا الملهبة لل 0.5 500 56٪ ± 16 8
السالمونيلا الملهبة لل 215 5 32٪ ± 24 7
السالمونيلا الملهبة لل 215 500 34٪ ± 11 6
السالمونيلا الملهبة لل 447 5 34٪ ± 18 8
السالمونيلا الملهبة لل 447 500 31٪ ± 24 8
  1. Nephelometric التعكر وحدة
  2. الفيروسات المعوية تعداد بواسطة qPCR كما نسخ الجيني / L
  3. جيم parvum تعداد بواسطة المناعي مثل بيض التوكسوبلازما
  4. S. الملهبة للتعداد بواسطة الثقافة بوصفها مستعمرة تشكيل وحدات-

جدول الصوف الزجاجي 1. مع تركيز turbidities المياه متفاوتة وكثافة العوامل المسببة للأمراض.

الممرض عينة مياه الدولة مبلغ مصنف / L 1 ٪ ريكو جدا
أنفلونزا الطيور H5N2 Sundi بحيرة، مرسى بورو 2500 42.9٪
أنفلونزا الطيور H5N2 مينتو شقق، فيربانكس نورث ستار بورو 2500 36.7٪
أنفلونزا الطيور H5N2 تعدية البضائع وادي، مرسى بورو 2500 7.8٪
أنفلونزا الطيور H5N2 الخزاف مارش، مرسى بورو 2500 41.5٪
أنفلونزا الطيور H5N2 بحيرة الصفصاف، يوكون، Koyukuk بورو 2500 15.5٪
  1. تقاس qPCR كما نسخ الجيني / L

جدول الصوف الزجاجي 2. تركيز من فيروس انفلونزا الطيور باستخدام مياه من خمسة مواقع في ولاية ألاسكا.

les/ftp_upload/3930/3930fig1.jpg "ALT =" الشكل 1 "/>
الشكل 1. التنظيمي للغسيل الصوف الزجاجي. ويمكن استخدام هذا بدلا من دلو، وتوفير الوقت من الشطف. هذا المفهوم هو مشابه للزجاج غسالة ماصة.

الشكل 2
الرقم الصوف الزجاجي 2. الترشيح مع حقن حمض بواسطة مضخة تمعجية. لاحظ "T" موصل حيث يدخل أنبوب مضخة حامض في خط عينة بين حنفية الماء والزجاج مرشح الصوف. ضبط الأس الهيدروجيني هو ضروري فقط إذا كان الماء عينات لديه درجة الحموضة> 7.5.

مرشحات الصوف الزجاجي فعالة في تركيز الجراثيم من المياه مع مجموعة واسعة من مستويات العكارة وكثافة الممرض (الجدول 1). لاختبار هذا، كانت مختلطة 20 لترا نزع الكلور منه ماء الصنبور مع المجففة الطمي التربة الطميية (0، 1.27، 2.75 أو جرام / لتر) لتحقيق المستوى المطلوب من التعكر ومن ثم بذرت مع مسببات الأمراض بكثافات مختلفة. الماءتم تمرير من خلال زجاج فلتر الصوف، وتعداد الجراثيم المركزة في شطافة، وهذه القيمة هي البسط في المئة حساب الانتعاش. تم تحديد كمية مسببات الأمراض المصنفة في الماء، وهذا هو، ومقام في المئة حساب الانتعاش، من خلال بذر أول مسببات الأمراض إلى شطافة سلبي تعداد ثم العوامل الممرضة. أعدت شطافة سلبي من قبل تمرير غير المصنف 20 عينة لتر من خلال مرشح ويبلغ حجمه. قياس مسببات الأمراض المصنفة في شطافة سلبية يتجنب الاختلافات في تعداد العوامل المسببة للأمراض التي يمكن أن تنجم عن الاختلافات مصفوفة التي أنشأتها زجاج فلتر الصوف. ويناقش أهمية هذه الخطوة عندما قياس مسببات الأمراض التي qPCR في Lambertini وآخرون. 3. وتركزت A 20 لتر عينة سيطرة السلبية عن طريق الترشيح الصوف الزجاجي لتحديد ما لم يكن هناك مسببات الأمراض الحالية الأصلية التي يمكن أن يتغلب على حساب انتعاش في المئة. A 10 الاسمي مسام ميكرون حجم prefilter ثتستخدم عندما يكون مستوى العكارة وكان ≥ 215 NTU.

وكان فيروس شلل الأطفال من قبل كميا في الوقت الحقيقي باستخدام qPCR تركيز الثانوية وإجراءات استخراج حامض النووي والاشعال والتحقيق وصفها في Lambertini وآخرون. 3. الكريبتوسبوريديوم parvum وكميا في حجم عينة مركزة النهائي (FCSV) التي تم إنشاؤها بواسطة الإجراء تركيز الثانوية للفيروس شلل الأطفال . وكان بيض التوكسوبلازما تصور من قبل المناعي (MeriFluor الكريبتوسبوريديوم والجيارديات عدة كشفها، ميريديان علوم الحياة، وشركة، سينسيناتي، أوهايو). وكميا السالمونيلا الملهبة في FCSV بواسطة طلاء على أجار XLD (Remel، Lenexa، KS) والفرز المكونة للمستعمرة، وحدة.

مرشحات الصوف الزجاجي فعالة في التركيز فيروسات أنفلونزا الطيور (الجدول 2). وكان المصنف منخفض فيروس تسببها أنفلونزا الطيور (H5N2) في المياه من عدة مواقع في ولاية ألاسكا والانتعاش في المئة محسوبة على النحو المبين اعلاهه. وأجريت تركيز الثانوية والإجراءات الحمض النووي بالنسبة لفيروس شلل الأطفال، وكان كميا الفيروس عن طريق qPCR باستخدام الاشعال والتحقيق وصفها في Spackman وآخرون 4.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

وقد استخدمت المرشحات الصوف الزجاجي من قبل فرق بحثية عدة 3،5،6 التركيز الفيروسات المعوية الإنسان من مجموعة متنوعة من مصادر المياه مثل مياه الشرب انتهت 7، 8،9 المياه الجوفية والمياه السطحية 10، مياه البحر 11، مياه الصرف الصحي 12، و جريان المياه الزراعية 13. نحن هنا نورد مرشحات فعالة أيضا في التركيز فيروس انفلونزا الطيور، فضلا عن مسببات الأمراض البكتيرية والأوالي السالمونيلا الملهبة (التيفية الفأرية ضرب مصلي) وparvum الكريبتوسبوريديوم، على التوالي. Deboosere وآخرون. كما ذكرت مؤخرا تركيز الصوف الزجاجي من فيروس انفلونزا الطيور 14.

الفلاتر هي مفيدة لأنها غير مكلفة، والمحمولة للغاية، وقابلة للاستخدام في مجموعة واسعة من المصفوفات المياه، وفعالة لتركيز العديد من أنواع مسببات الأمراض التي تنقلها المياه. ويمكن بنائها إلى أي حجم، اعتمادا على الاحتياجات البحثية. بعد تطهيرايون، وأماكن إيواء تصفية قابلة لإعادة الاستخدام.

مرشحات الصوف الزجاجي، ولكن، هل يكون لها حدود. كما هو الحال مع أي فيروس الأسلوب الذي يعتمد على تركيز وسائل الاعلام اتهم electropositively لامتصاص فيروس (على سبيل المثال، 1MDS مرشح، كونو شركة، ميريدين، ط م)، فعالية مرشح يعتمد على درجة حموضة المياه المحيطة. في مختبرنا اخترنا 7.5 درجة الحموضة مثل وقف انتاج المواد الانشطارية، أعلاه والتي يتم ضبط درجة الحموضة المياه عن طريق ضخ نحو الانخفاض بشكل مستمر 0،25 M حمض الهيدروكلوريك في سطر الإدخال مرشح خلال أخذ العينات. ويمكن أخذ عينات مياه أعلى درجة الحموضة دون تعديل درجة الحموضة، ولكن على حساب فعالية فلتر 3. آخر التقييد هو العمر الافتراضي. لقد أظهرنا للمرشحات تخزينها في 4 درجات مئوية لمدة ستة أسابيع أن الممرض فعالية تركيز لا ينخفض ​​(بيانات غير منشورة). ومع ذلك، أوقات أطول التخزين لم يتم اختبارها لذلك، بتحفظ، لضمان جودة البيانات، ونحن لا تستخدم المرشحات مضى عليها أكثر من 30 يوما. عادة، يتم إجراء تصفية حسب الحاجة. آخر حاجز محتمل في بعض الناميهق يتم الحصول على الصوف الزجاجي من مصدر فرنسي المحددة في وقت سابق من أوراق. في الآونة الأخيرة، أثبتنا مستوى العزل من الألياف الزجاجية unfaced غير فعالة على قدم المساواة، وهذا في متناول الجميع من تحسين المخازن أو الأجهزة المنزلية (انظر قائمة المواد على الانترنت).

لجميع التجارب، فمن المهم لتشغيل مجموعتين من الضوابط، وهي فارغة معدات لضمان عدم تلوث فلاتر الصوف الزجاجي أثناء عملية البناء ومراقبة لضمان استرداد الفلاتر تعمل كما تم تصميمها. هذه الضوابط ضرورية لأية وسيلة تركيز العوامل المسببة للأمراض التي تنقلها المياه.

ويمكن استخدام مرشح الصوف الزجاجي ان تكون بسيطة مثل إرفاقها حنفية، وتحول على الصنبور أو معقدة كما أخذ عينات من الرواسب النهرية لادن في مكان بعيد، والتي تتطلب مضخات، وتعديل درجة الحموضة، وprefilter لمنع انسداد. لمجموعة أبحاثنا، أكبر فائدة من استخدام مرشحات الصوف الزجاجي هو القدرة على جمع وتحليل آلاف من عينة المياهق لمسببات الأمراض البشرية والحيوانية، مما أسفر عن بيانات عن وفرة العناصر الممرضة والتوزيع في البيئة والتي لم يكن ممكن مع طرق، أكثر تكلفة معقدة 13،15.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

ونحن نشكر ويليام ت. إيكرت لروايته الفيديو. وكان تطوير زجاج بروتوكول صوف جزء من المياه ويسكونسن والمحاكمة الصحة للمخاطر المعوية (WAHTER الدراسة)، الذي تموله الولايات المتحدة STAR المنح وكالة حماية البيئة R831630. تم جمع عينات من ألاسكا ريفز A.، رامي ألف، وباء Meixell بدعم مالي من هيئة المسح الجيولوجي الامريكية. أي استخدام الأسماء التجارية، والمنتج، أو شركة لاغراض صفية فقط ولا تعبر عن تأييد حكومة الولايات المتحدة.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hydrochloric acid Fisher Scientific A144-500
Sodium hydroxide Fisher Scientific BP359-212
Phosphate Buffered Saline Sodium chloride Potassium phosphate-dibasic Potassium phosphate-monobasic Fisher Scientific BP358-212 BP363-500 BP362-500
Sodium hypochlorite i.e., household bleach Clorox
Sodium thiosulfate, anhydrous Fisher Scientific S 475-212
Beef extract, desiccated BD Biosciences 211520
Glycine Fisher Scientific G46-500
Oiled sodocalcic glass wool Or R-11 unfaced fiberglass insulation Johns Manville Bourre 725 QN
Polypropylene mesh Industrial Netting xN4510
2"x4" Sch 80 PVC threaded pipe nipple Grainger 6MW35
2" Sch 40 PVC cap Grainger 5WDW3
Male adapter nylon fitting (1/2"x1/2") US Plastic Corp. 62178
Sample bottles for eluate- 1 liter Fisher Scientific 03-313-4F
60 mL syringe Fisher Scientific NC9661991
pH strips Whatman, GE Healthcare 2614 991
Prefilter, Polypropylene, 10 inch cartridge, 10 μm McMaster-Carr 4411K75
Prefilter housing Cole-Parmer S-29820-10

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. US Environmental Protection Agency. Method 1623: Cryptosporidium and Giardia in Water by Filtration/IMS/FA. EPA 815-R-05-002. , (2012).
  2. Cashdollar, J. L., Dahling, D. R. Evaluation of a method to re-use electropositive cartridge filters for concentrating viruses from tap and river water. J. Virol. Methods. 132, 13-17 (2006).
  3. Lambertini, E. Concentration of enteroviruses, adenoviruses, and noroviruses from drinking water by use of glass wool filters. Appl. Environ. Microbiol. 74, 2990-2996 (2008).
  4. Spackman, E. Development of a real-time reverse transcription PCR assay for Type A influenza virus and the avian H5 and H7 hemagglutinin subtypes. J. Clin. Microbiol. 40, 3256-3260 (2002).
  5. Environment Agency. Optimisation of a new method for detection of viruses in groundwater. Report No. NC/99/40. , Environment Agency, National Groundwater and Contaminated Land Centre. West Midlands, United Kingdom. (2000).
  6. Vilaginés, P., Sarrette, B., Husson, G., Vilaginés, R. Glass wool for virus concentration at ambient water pH level. Water Sci. Technol. 27, 299-306 (1993).
  7. Vivier, J. C., Ehlers, M. M., Grabow, W. O. Detection of enteroviruses in treated drinking water. Water Res. 38, 2699-2705 (2004).
  8. Powell, K. L. Enteric virus detection in groundwater using a glass wool trap. In: Groundwater: Past Achievements and Future Challenges. Sililo, O. , Balkema, Rotterdam. 813-816 (2000).
  9. Hunt, R. J., Borchardt, M. A., Richards, K. D., Spencer, S. K. Assessment of sewer source contamination of drinking water wells using tracers and human enteric viruses. Environ. Sci. Technol. 44, 7956-7963 (2010).
  10. van Heerden, J., Ehlers, M. M., Heim, A., Grabow, W. O. Prevalence, quantification and typing of adenoviruses detected in river and treated drinking water in South Africa. J. Appl. Microbiol. 99, 234-242 (2005).
  11. Vilaginés, P. Round robin investigation of glass wool method for poliovirus recovery from drinking water and sea water. Water Sci. Technol. 35, 445-449 (1997).
  12. Gantzer, C., Senouci, S., Maul, A., Levi, Y., Schwartzbrod, L. Enterovirus genomes in wastewater: concentration on glass wool and glass powder and detection by RT-PCR. J. Virol. Methods. 65, 265-271 (1997).
  13. Pathogen losses in surface water runoff from dairy manure applied to corn fields. Borchardt, M. A., Jokela, W. E., Spencer, S. K. American Society for Microbiology General Meeting, New Orleans, LA, , (2011).
  14. Deboosere, N. Development and validation of a concentration method for the detection of influenza A viruses from large volumes of surface water. Appl. Environ. Microbiol. 77, 3802-3808 (2011).
  15. Lambertini, E. Virus contamination from operation and maintenance practices in small drinking water distribution systems. J. Water Health. 9, 799-812 (2011).

Tags

علم المناعة، العدد 61، فيروس انفلونزا الطيور، وأخذ العينات البيئية، والكريبتوسبوريديوم، وتركيز العوامل المسببة للأمراض، السالمونيلا، والمياه، التي تنقلها المياه الأمراض، ومسببات الأمراض التي تنقلها المياه
مرشحات الصوف الزجاجي للفيروسات التي تنتقل عن طريق التركيز ومسببات الأمراض الحيوانية المنشأ الزراعي
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Millen, H. T., Gonnering, J. C.,More

Millen, H. T., Gonnering, J. C., Berg, R. K., Spencer, S. K., Jokela, W. E., Pearce, J. M., Borchardt, J. S., Borchardt, M. A. Glass Wool Filters for Concentrating Waterborne Viruses and Agricultural Zoonotic Pathogens. J. Vis. Exp. (61), e3930, doi:10.3791/3930 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter