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Immunology and Infection

जलजनित वायरस और कृषि जूनोटिक रोगज़नक़ों के लिए ध्यान केंद्रित कांच ऊन फ़िल्टर

Published: March 3, 2012 doi: 10.3791/3930

Summary

कांच ऊन फिल्टर करने के लिए दुनिया भर में अनुसंधान समूहों की एक संख्या से जलजनित वायरस ध्यान केंद्रित किया गया है. हम यहाँ कांच ऊन फिल्टर के निर्माण के लिए एक सरल दृष्टिकोण दिखाने के लिए और फिल्टर का प्रदर्शन भी हैं जलजनित वायरल, बैक्टीरियल और प्रोटोजोआ रोगज़नक़ों ध्यान में प्रभावी.

Abstract

संदिग्ध दूषित पानी में रोगज़नक़ स्तर का मूल्यांकन करने में महत्वपूर्ण पहला कदम है एकाग्रता. एकाग्रता के तरीकों के लिए एक विशेष रोगज़नक़ समूह के लिए विशिष्ट हो सकता है, उदाहरण के लिए अमेरिकी पर्यावरण संरक्षण एजेंसी Giardia और 1 cryptosporidium, के लिए 1623 विधि है जिसका अर्थ है कई तरीकों की आवश्यकता है अगर नमूना कार्यक्रम एक से अधिक रोगज़नक़ समूह को लक्षित है करते हैं. मौजूदा तरीकों की एक और दोष यह है उपकरण जटिल और महंगा हो सकता है, उदाहरण के लिए कर सकते हैं वायरस 2 ध्यान केंद्रित करने के लिए 1MDS कारतूस फिल्टर के साथ VIRADEL विधि. हम इस लेख में वर्णन कैसे जलजनित रोगजनकों ध्यान केंद्रित करने के लिए कांच ऊन फिल्टर का निर्माण करने के लिए. फिल्टर क्षालन के बाद, ध्यान centrifugation के रूप में एक दूसरे एकाग्रता कदम, रोगज़नक़ और सांस्कृतिक या आणविक विधियों के द्वारा पता लगाने और गणना द्वारा पीछा करने के लिए उत्तरदायी है. फिल्टर के कई फायदे है. निर्माण आसान है और फिल्टर करने के लिए एक बनाया जा सकता हैny विशिष्ट नमूना जरूरतों को पूरा करने के लिए आकार. फिल्टर भागों सस्ती कर रहे हैं, यह गंभीर रूप से एक परियोजना के बजट को प्रभावित किए बिना संभव नमूनों की एक बड़ी संख्या में एकत्र करने के लिए कर रही है. बड़े नमूना मात्रा में (100s १,००० है एल) नमूना turbidity से clogging है की दर के आधार पर ध्यान केंद्रित किया जा सकता है. फिल्टर उच्च पोर्टेबल हैं और एक पंप और प्रवाह मीटर के रूप में कम से कम उपकरण, के साथ, वे समाप्त पीने के पानी की सतह के पानी, भूजल, और कृषि runoff नमूना लेने के लिए क्षेत्र में लागू किया जा सकता है. अन्त में, कांच ऊन छानने का काम तो केवल एक विधि आवश्यक है रोगज़नक़ प्रकार की एक किस्म ध्यान केंद्रित करने के लिए प्रभावी है. यहाँ हम जलजनित मानव enterovirus, एस almonella enterica, cryptosporidium parvum, और एवियन इन्फ्लूएंजा वायरस ध्यान केंद्रित करने में फिल्टर प्रभाव पर रिपोर्ट.

Protocol

1. ग्लास ऊन की तैयारी

  1. से पहले और बनाने के बाद फिल्टर के प्रत्येक बैच के, 10% ब्लीच समाधान के साथ कार्य क्षेत्र बाँझ.
  2. दस्ताने और गाउन पर रखो. कम से कम 20 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस और 15 साई वाष्पदावी विसंक्रण द्वारा एक बाल्टी जीवाणुरहित. बाँझ बाल्टी में कांच ऊन रखें.
  3. रिवर्स असमस पानी के साथ कांच ऊन और 15 मिनट के लिए लेना तर जाने.
  4. बाल्टी से रिवर्स असमस पानी नाली.
  5. एम 1 एचसीएल के साथ कांच ऊन और 15 मिनट के लिए लेना तर जाने.
  6. बाल्टी से एम 1 एचसीएल नाली.
  7. कांच ऊन रिवर्स असमस पानी से कुल्ला.
  8. मिश्रण अच्छी तरह से.
  9. पीएच कागज का उपयोग कर पीएच की जाँच करें और दोहराना रिवर्स असमस पानी से कुल्ला तक एक तटस्थ पीएच हासिल की है.
  10. पानी कुल्ला डालो.
  11. एम 1 NaOH के साथ कांच ऊन और 15 मिनट के लिए लेना तर जाने.
  12. बाल्टी से एम 1 NaOH नाली.
  13. आरEPEAT रिवर्स असमस कुल्ला है जब तक एक तटस्थ पीएच हासिल की है.
  14. पानी कुल्ला डालो.
  15. एक बाल्टी के बजाय, एक कांच ऊन वॉशर, का निर्माण किया जा सकता है जो डिजाइन में एक ग्लास विंदुक वॉशर (चित्रा 1) के लिए इसी तरह की है.
  16. कांच ऊन बाँझ फास्फेट के साथ पूरी तरह से कवर बफर Saline (पीबीएस) 6.8 पीएच को समायोजित.
  17. 4 में तैयार कांच तुरंत ऊन या दुकान का उपयोग करें डिग्री सेल्सियस यह दो सप्ताह के लिए भंडारित किया जा सकता है. उपयोग करने से पहले, सुनिश्चित करें कि पीएच तटस्थ है, क्योंकि यह समय के साथ वृद्धि होगी. यदि पीएच तटस्थ नहीं है, बाँझ फास्फेट के साथ फिर से कुल्ला खारा बफर (6.8 पीएच).

2. ग्लास ऊन फ़िल्टर कोडांतरण

  1. पीवीसी कैप और नल धागे तो पुरुष एडाप्टर नायलॉन फिटिंग टोपियां में दबाव डाला जा सकता है में एक 11/16 इंच छेद ड्रिल. यह कदम केवल पहली विधानसभा के लिए आवश्यक है. इसके बाद, टोपी साल के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. Teflon लागू करेंनायलॉन फिटिंग धागे और टोपी के लिए पेंच टेप.
  2. कांच ऊन के छोटे टुकड़ों के साथ पीवीसी पाइप पैक. एक धातु सवार का प्रयोग करें, एक कार इंजन वाल्व की तरह, तंग पैक. पैकिंग महान शक्ति की आवश्यकता नहीं है. तंग पर्याप्त पैक ताकि कांच ऊन जगह में रहता है और चैनलों फार्म नहीं है. हालांकि, इतना कसकर पानी फिल्टर के माध्यम से प्रवाह नहीं कर सकते हैं पैक नहीं है. जब उचित पैक, 4 से 5 लीटर प्रति मिनट की एक प्रवाह दर प्राप्य जब फिल्टर 40-60 साई के बीच दबाव के साथ पानी के नल से जुड़ा हुआ है होना चाहिए. पीवीसी पाइप के इस प्रोटोकॉल में निर्दिष्ट आकार के लिए, लगभग 85 ग्राम धोया और पाइप प्रति पैक कांच ऊन प्रयोग किया जाता है. धड़ा एक शीर्ष लोड हो रहा है और धोया कांच ऊन के साथ संतुलन पैक पर खाली पीवीसी पाइप पाइप जन तक 85 ग्राम बढ़ जाती है.
  3. पीवीसी टोपियां में पुरुष एडाप्टर नायलॉन फिटिंग संलग्न के साथ polypropylene जाल डालें.
  4. पीवीसी पाइप के पिरोया भाग Teflon टेप लागू.
  5. पीवीसी टोपियां पर पीवीसी पी करने के लिए पेंचipe और लेबल एक फिल्टर अंत इनफ्लो और दूसरे छोर बहिर्वाह. बाद में यह महत्वपूर्ण है क्षालन कदम के लिए. अंत लेबल है जो इनफ्लो कोई फर्क नहीं पड़ता.
  6. धक्का बाँझ फास्फेट के 60 एमएल खारा (= पीएच ६.८) के फिल्टर में एक कैथेटर का उपयोग बफर सिरिंज इत्तला दे दी. अतिरिक्त विपरीत अंत आ जाएगा.
  7. लपेटें कसकर Parafilm साथ समाप्त होता है के लिए लीक से बचने के. फ़िल्टर को 30 दिन के 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है

3. नमूनाकरण

  1. जीवाणुरहित टयूबिंग रीसर्क्युलेटिंग या डुबो 0.525% NaClO, (अर्थात् मानक घरेलू ब्लीच का एक 10% समाधान) में 30 मिनट के लिए आइटम के द्वारा नमूना के लिए इस्तेमाल किया. हाइपोक्लोराइट समाधान draining द्वारा इस का पालन करें और 0.05% सोडियम thiosulfate, 2% शेयर निर्जल सोडियम thiosulfate रिवर्स असमस पानी की एक लीटर के समाधान के 25 एमएल जोड़कर बनाया के साथ बेअसर.
  2. 7.5 से अधिक पीएच के साथ नमूना पानी के लिए, के बीच 6.5 और एचसीएल के साथ 7.0 पीएच को समायोजित. एचसीएल एकाग्रता से लेकर कर सकते हैं .25 से1 एम. चार लीटर के लिए 0.5 एम एचसीएल आम तौर पर दो 800 लीटर नमूने को, पानी के परिवेश पीएच और buffering क्षमता पर निर्भर करता है के लिए पर्याप्त है. एक क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप या Venturi (चित्रा 2) का उपयोग कर नमूने के दौरान एचसीएल इंजेक्षन. पंप गति या Venturi लक्ष्य पीएच को प्राप्त करने के लिए खोलने को समायोजित करें. उपाय नमूना लाइन क्षेत्र पीएच मीटर का उपयोग कर दुकान पर पीएच.
  3. अगर कांच ऊन फिल्टर मोज़री उच्च मैलापन के साथ पानी से एक prefilter का उपयोग करें. (Prefilter और अपने आवास के लिए निर्दिष्टीकरण सामग्री सूची ऑनलाइन में हैं.) क्योंकि रोगज़नक़ों prefilter द्वारा फँस कणों के लिए संलग्न किया जा सकता है यह कांच ऊन फिल्टर के साथ साथ eluted किया जाना चाहिए (देखें नीचे).
  4. के बीच 2 और 4 लीटर / मिनट प्रवाह दर को समायोजित करें. ठेठ नमूना मात्रा 200 के बीच और 1500 लीटर हैं.
  5. 4 डिग्री सेल्सियस पर 48 घंटे के लिए कांच ऊन और एक प्लास्टिक बाँझ बैग में फिल्टर दुकान डिस्कनेक्ट.

4. क्षालन

  1. कांच ऊन एक अंगूठी के लिए फ़िल्टर जोड़नानमूना इनफ्लो अंत में नीचे की ओर इशारा करते हुए एक polypropylene की बोतल के साथ खड़े हो जाओ. नमूना प्रवाह की दिशा के विपरीत Elute.
  2. 0.05 एम ग्लाइसिन में फिल्टर में 9.5 का एक pH साथ बाँझ 3% बीफ़ निकालने की 80 एमएल धक्का.
  3. 15 मिनट रुको.
  4. 0.05 एम ग्लाइसिन में फिल्टर में 9.5 का एक pH के साथ बाँझ 3% मांस निकालने के एक और 80 एमएल धक्का.
  5. पूरी तरह से हवा फिल्टर धक्का तक फोम फिल्टर प्रवेश के बाहर आता है.
  6. के बीच 7.0 और 7,5 एम 1 एचसीएल के साथ प्रोद्धावन में प्रयोग किया जाने वाला घोलक पीएच को समायोजित करें.
  7. 4 बजे दुकान प्रोद्धावन में प्रयोग किया जाने वाला घोलक डिग्री सेल्सियस 24 घंटे तक के लिए या समय की लंबी अवधि के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर.
  8. Prefilter Elute अगर एक प्रयोग किया जाता है. खोलना आवास कारतूस के शीर्ष और आवास के अंदर बंद सभी अवशिष्ट पानी डालना जबकि बाँझ दस्ताने हाथ के साथ जगह में prefilter पकड़े.
  9. आवास कारतूस से prefilter निकालें और यह एक 15 "x 6" ज़िप ताला बैग में पर्ची.
  10. 0.05 एम जी में बाँझ 3% बीफ़ निकालने की 200 एमएल डालोबैग में 9.5 का एक pH और ज़िप - ताला के साथ सुरक्षित रूप से सील के साथ lycine.
  11. जीता prefilter कई बार पलटना करने के लिए सुनिश्चित करें पूरे सतह मांस निकालने के साथ संपर्क में आता है.
  12. 15 मिनट रुको, कभी कभी inverting और जीता prefilter मालिश.
  13. ज़िप - ताला खोलें. Prefilter के आसपास बैग पकड़ कस ज्यादा मांस निकालने के रूप में संभव के रूप में बाहर निचोड़ करने के लिए और prefilter बाँझ दस्ताने हाथ के साथ, बाहर खींच.
  14. मांस निकालने प्रोद्धावन में प्रयोग किया जाने वाला घोलक एक polypropylene बोतल में डालो.
  15. 7.0 के बीच और 1M एचसीएल के साथ 7.5 प्रोद्धावन में प्रयोग किया जाने वाला घोलक पीएच को समायोजित करें.
  16. 4 बजे दुकान प्रोद्धावन में प्रयोग किया जाने वाला घोलक डिग्री सेल्सियस 24 घंटे तक के लिए या समय की लंबी अवधि के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर. prefilter प्रोद्धावन में प्रयोग किया जाने वाला घोलक रोगज़नक़ों के लिए अलग से विश्लेषण किया जा सकता है या गिलास ऊन फिल्टर प्रोद्धावन में प्रयोग किया जाने वाला घोलक के साथ संयुक्त.

5. प्रतिनिधि परिणाम

पैथोजन पानी turbidity (यूके) स्तर राशि वरीयता प्राप्त एल / ख, ग, घ % ± रिकवरी 1 एसडी संख्या स्वतंत्र परीक्षण
Enterovirus - पोलियो वायरस साबिन III 0.5 500 81 ± 11% 7
अँतड़ियों से संबद्धवायरस पोलियो वायरस साबिन III 0.5 5000 67 ± 12% 8
Enterovirus - पोलियो वायरस साबिन III 215 500 59 ± 32% 7
Enterovirus - पोलियो वायरस साबिन III 215 5000 38 ± 22% 6
Enterovirus - पोलियो वायरस साबिन III 447 500 56 ± 18% 8
Enterovirus - पोलियो वायरस साबिन III 447 5000 63 ± 37% 8
Cryptosporidium parvum 0.5 5 38 ± 14% 7
Cryptosporidium parvum 0.5 50 53 ± 19% 8
रोनाptosporidium parvum 215 5 40 ± 16% 7
Cryptosporidium parvum 215 50 30 ± 6% 6
Cryptosporidium parvum 447 5 33 ± 13% 8
Cryptosporidium parvum 447 50 28 ± 11% 8
साल्मोनेला enterica 0.5 5 29 ± 24% 7
साल्मोनेला enterica 0.5 500 56 ± 16% 8
साल्मोनेला enterica 215 5 32% ± 24 7
साल्मोनेला enterica 215 500 34 ± 11% 6
साल्मोनेला enterica 447 5 34 ± 18% 8
साल्मोनेला enterica 447 500 31% ± 24 8
  1. Nephelometric turbidity यूनिट
  2. जीनोमिक प्रतियां / एल के रूप में qPCR द्वारा प्रगणित enteroviruses
  3. सी. parvum oocysts रूप immunofluorescence द्वारा प्रगणित
  4. एस enterica कॉलोनी बनाने इकाइयों के रूप में संस्कृति द्वारा प्रगणित

तालिका 1. अलग पानी turbidities और रोगज़नक़ घनत्व के साथ ग्लास ऊन एकाग्रता.

पैथोजन पानी नमूना स्थान एल / वरीयता प्राप्त राशि % सिफारिश बहुत
एवियन इन्फ्लूएंजा H5N2 Sundi झील, लंगरवानी बरो 2500 42.9%
एवियन इन्फ्लूएंजा H5N2 मिंटो फ्लैट, फेयरबैंक्स उत्तर सितारा बरो 2500 36.7%
एवियन इन्फ्लूएंजा H5N2 भारवाहन घाटी, लंगरवानी बरो 2500 7.8%
एवियन इन्फ्लूएंजा H5N2 पॉटर मार्श, लंगरवानी बरो 2500 41.5%
एवियन इन्फ्लूएंजा H5N2 विलो झील, युकोन Koyukuk बरो 2500 15.5%
  1. जीनोमिक प्रतियां / एल के रूप में qPCR द्वारा मापा

एवियन इन्फ्लूएंजा वायरस की टेबल ग्लास 2. ऊन एकाग्रता अलास्का में पांच स्थानों से पानी का उपयोग कर.

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चित्रा 1 कांच ऊन वॉशर का आरेख. यह एक बाल्टी के बजाय इस्तेमाल किया जा सकता है rinsing से समय की बचत. एक ग्लास विंदुक वॉशर के लिए इसी तरह की अवधारणा है.

चित्रा 2
चित्रा 2. क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप से एसिड इंजेक्शन के साथ ग्लास ऊन निस्पंदन. नोट: "टी" संबंधक जहां पंप टयूबिंग पानी के नल और कांच ऊन फिल्टर के बीच में नमूना लाइन में एसिड का परिचय. केवल अगर नमूना पानी एक pH 7.5 पीएच समायोजन आवश्यक है.

ग्लास ऊन फिल्टर पानी से मैलापन स्तर और रोगज़नक़ घनत्व (तालिका 1) की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ रोगज़नक़ों को ध्यान में प्रभावी रहे हैं. इस परीक्षण के लिए, 20 लीटर dechlorinated पानी के नल सूखे गाद दोमट मिट्टी (0, 1.27, या 2.75 छ / एल) मैलापन के वांछित स्तर को प्राप्त करने के साथ मिलाया गया था और उसके बाद विभिन्न घनत्व में रोगज़नक़ों के साथ वरीयता प्राप्त है. पानीएक कांच ऊन फिल्टर के माध्यम से पारित कर दिया गया था, प्रोद्धावन में प्रयोग किया जाने वाला घोलक में केंद्रित रोगज़नक़ों प्रगणित थे, और इस मूल्य प्रतिशत वसूली गणना में मीटर था. पानी है, वह है कि, प्रतिशत वसूली गणना की विभाजक में वरीयता प्राप्त रोगज़नक़ों की मात्रा पहले एक नकारात्मक प्रोद्धावन में प्रयोग किया जाने वाला घोलक में रोगज़नक़ों बोने तो रोगज़नक़ों गणना द्वारा निर्धारित किया गया था. नकारात्मक प्रोद्धावन में प्रयोग किया जाने वाला घोलक एक फिल्टर के माध्यम से एक गैरवरीय 20 लीटर नमूना गुजर रहा है और eluting द्वारा तैयार किया गया था. एक नकारात्मक प्रोद्धावन में प्रयोग किया जाने वाला घोलक में वरीयता प्राप्त रोगज़नक़ों बढ़ाता रोगज़नक़ गणना में मतभेद है कि मैट्रिक्स कांच ऊन फिल्टर द्वारा बनाई गई मतभेद से परिणाम सकता बचा जाता है. इस कदम के महत्व जब qPCR द्वारा रोगज़नक़ों बढ़ाता Lambertini एट अल में चर्चा की है 3. एक 20 लीटर नकारात्मक नियंत्रण नमूना कांच ऊन छानने का काम निर्धारित करने के लिए कोई देशी रोगज़नक़ों मौजूद है कि प्रतिशत वसूली गणना उलझाना सकता है के माध्यम से ध्यान केंद्रित किया गया था. एक 10 माइक्रोन नाममात्र ध्यान में लीन होना आकार prefilter डब्ल्यूके रूप में इस्तेमाल जब मैलापन स्तर ≥ 215 NTU था.

पोलियो वायरस वास्तविक समय qPCR माध्यमिक एकाग्रता और न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण प्रक्रियाओं और प्राइमरों और जांच Lambertini एट अल में वर्णित 3. का उपयोग मात्रा cryptosporidium parvum के अंतिम केंद्रित नमूना (FCSV) के पोलियो वायरस के लिए माध्यमिक एकाग्रता प्रक्रिया के द्वारा बनाई गई मात्रा में मात्रा निर्धारित किया गया था . Oocysts immunofluorescence (cryptosporidium MeriFluor और Giardia जांच किट, मेरिडियन जीवन विज्ञान, Inc, सिनसिनाटी, ओह) द्वारा कल्पना थे साल्मोनेला enterica FCSV में चढ़ाना द्वारा मात्रा निर्धारित किया गया था (XLD अगर पर Remel, Lenexa, के एस) और गिनती चालू. कॉलोनी के गठन - इकाइयों.

ग्लास ऊन फिल्टर एवियन इन्फ्लूएंजा वायरस (तालिका 2) को ध्यान में प्रभावी रहे हैं. कम pathogenicity में एवियन इन्फ्लूएंजा वायरस (H5N2) पानी में अलास्का में कई स्थानों से वरीयता प्राप्त किया गया था और प्रतिशत वसूली की गणना के रूप में abov वर्णितई. माध्यमिक एकाग्रता और न्यूक्लिक एसिड प्रक्रियाओं के रूप में पोलियो वायरस के लिए प्रदर्शन किया गया, वायरस qPCR द्वारा मात्रा निर्धारित किया गया था प्राइमरों और जांच Spackman एट अल में वर्णित का उपयोग 4.

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Discussion

कांच ऊन फिल्टर कई शोध टीमों 3,5,6 द्वारा इस्तेमाल किया गया है समाप्त पीने के पानी 7, 8,9 भूजल, सतह 10 पानी, समुद्र पानी 11, 12 अपशिष्ट के रूप में जल स्रोतों की एक किस्म से मानव आंतों वायरस ध्यान केंद्रित करने के लिए, और कृषि अपवाह 13. यहाँ हम रिपोर्ट है फिल्टर भी एवियन इन्फ्लूएंजा वायरस के रूप में अच्छी तरह से जीवाणु और प्रोटोजोआ साल्मोनेला enterica (serovar ताकि) और cryptosporidium parvum, क्रमशः रोगज़नक़ों ध्यान केंद्रित करने में प्रभावी हैं. Deboosere एट अल एवियन इन्फ्लूएंजा वायरस के 14 भी हाल ही में रिपोर्ट कांच ऊन एकाग्रता.

फिल्टर फायदेमंद हैं कि वे सस्ती, उच्च पोर्टेबल, पानी matrices की एक विस्तृत श्रृंखला में प्रयोग करने योग्य, और जलजनित रोगजनकों के कई प्रकार के ध्यान केंद्रित करने के लिए प्रभावी रहे हैं. वे किसी भी आकार के लिए निर्माण किया जा सकता है, अनुसंधान जरूरतों पर निर्भर करता है. कीटाणुरहित करना के बादआयन, फिल्टर housings, पुन: प्रयोज्य हैं.

कांच ऊन फिल्टर, तथापि, सीमाएँ हैं. किसी भी वायरस एकाग्रता विधि कि वायरस सोखना (जैसे, 1MDS फिल्टर, CUNO इंक, Meriden, सीटी) लिए electropositively चार्ज मीडिया पर निर्भर करता है के साथ के रूप में, फिल्टर प्रभाव परिवेश पानी पीएच पर निर्भर करता है. हमारी प्रयोगशाला में हम 7.5 पीएच को काट के रूप में चयन किया है, जिसके ऊपर पानी का पीएच नीचे लगातार नमूने दौरान फिल्टर इनपुट लाइन में 0.25 एम एचसीएल के पम्पिंग द्वारा निकाला जाता है. उच्च pH पानी पीएच समायोजन के बिना जांचा जा सकता है, लेकिन फिल्टर 3 प्रभावशीलता की लागत पर. एक और सीमा शैल्फ जीवन है. हम 4 में संग्रहीत फ़िल्टर के लिए दिखाया गया है ° छह सप्ताह कि रोगज़नक़ एकाग्रता प्रभावशीलता (अप्रकाशित डेटा) अस्वीकार नहीं करता है के लिए सी. बहरहाल, लंबे समय तक भंडारण बार नहीं किया गया परीक्षण किया है, conservatively, डेटा की गुणवत्ता सुनिश्चित करने के लिए, हम फिल्टर 30 दिनों से अधिक उम्र का उपयोग नहीं करते. आमतौर पर, फिल्टर बना रहे हैं के रूप में की जरूरत है. कुछ countrie में एक अन्य संभावित अंधी गलीएस फ्रेंच पहले अखबारों में निर्दिष्ट स्रोत से कांच ऊन प्राप्त है. हाल ही में, हम मानक unfaced शीसे रेशा इन्सुलेशन का प्रदर्शन समान रूप से प्रभावी है, और यह हार्डवेयर या घर सुधार दुकानों से आसानी से उपलब्ध है (माल सूची ऑनलाइन देखें).

सभी प्रयोगों के लिए, यह महत्वपूर्ण है नियंत्रण के दो सेट, एक उपकरण खाली करने के लिए सुनिश्चित करें कांच ऊन फिल्टर का निर्माण और एक वसूली नियंत्रण के दौरान दूषित फिल्टर के रूप में डिजाइन काम करने के लिए सुनिश्चित गया चला. ये नियंत्रण किसी जलजनित रोगज़नक़ एकाग्रता विधि के लिए आवश्यक हैं.

एक कांच ऊन फिल्टर का प्रयोग के रूप में यह एक नल के लिए संलग्न करने और नल पर बदल के रूप में सरल या के रूप में एक दूरस्थ स्थान में एक नदी तलछट से लदी नमूने, पंप, पीएच, और समायोजन करने के लिए एक को clogging रोकने के prefilter की आवश्यकता के रूप में जटिल हो सकता है. हमारे शोध समूह के लिए, कांच ऊन फिल्टर का उपयोग का सबसे बड़ा लाभ को इकट्ठा करने के लिए और पानी के नमूने के हजारों का विश्लेषण करने की क्षमता हैमानव और पशुओं के रोगज़नक़ों, रोगज़नक़ और वातावरण है कि और अधिक महंगा है, जटिल तरीकों 13,15 के साथ संभव के रूप में नहीं होता है में बहुतायत वितरण पर डेटा उपज के लिए है.

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Disclosures

हितों का कोई संघर्ष की घोषणा की.

Acknowledgments

हम वीडियो सुना के लिए धन्यवाद विलियम टी. Eckert. कांच ऊन प्रोटोकॉल के विकास आंत्र (WAHTER अध्ययन) जोखिम, अमेरिका EPA स्टार R831630 अनुदान द्वारा वित्त पोषित के लिए विस्कॉन्सिन जल और स्वास्थ्य परीक्षण का हिस्सा था. के USGS से वित्तीय समर्थन के साथ अलास्का के नमूने ए रीव्स, Ramey, और बी Meixell के द्वारा एकत्र किए गए. व्यापार, उत्पाद, या फर्म के नाम के किसी भी उपयोग वर्णनात्मक प्रयोजनों के लिए ही है और अमेरिकी सरकार द्वारा बेचान संकेत नहीं करता है.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hydrochloric acid Fisher Scientific A144-500
Sodium hydroxide Fisher Scientific BP359-212
Phosphate Buffered Saline Sodium chloride Potassium phosphate-dibasic Potassium phosphate-monobasic Fisher Scientific BP358-212 BP363-500 BP362-500
Sodium hypochlorite i.e., household bleach Clorox
Sodium thiosulfate, anhydrous Fisher Scientific S 475-212
Beef extract, desiccated BD Biosciences 211520
Glycine Fisher Scientific G46-500
Oiled sodocalcic glass wool Or R-11 unfaced fiberglass insulation Johns Manville Bourre 725 QN
Polypropylene mesh Industrial Netting xN4510
2"x4" Sch 80 PVC threaded pipe nipple Grainger 6MW35
2" Sch 40 PVC cap Grainger 5WDW3
Male adapter nylon fitting (1/2"x1/2") US Plastic Corp. 62178
Sample bottles for eluate- 1 liter Fisher Scientific 03-313-4F
60 mL syringe Fisher Scientific NC9661991
pH strips Whatman, GE Healthcare 2614 991
Prefilter, Polypropylene, 10 inch cartridge, 10 μm McMaster-Carr 4411K75
Prefilter housing Cole-Parmer S-29820-10

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Millen, H. T., Gonnering, J. C.,More

Millen, H. T., Gonnering, J. C., Berg, R. K., Spencer, S. K., Jokela, W. E., Pearce, J. M., Borchardt, J. S., Borchardt, M. A. Glass Wool Filters for Concentrating Waterborne Viruses and Agricultural Zoonotic Pathogens. J. Vis. Exp. (61), e3930, doi:10.3791/3930 (2012).

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