Summary
Biz kemirgen embriyolardan hipokampal ve kortikal nöronlar yalıtmak ve kültürüne hızlı bir metodoloji tanıtılmıştır. Bu protokol bize neredeyse saf nöronal kültürlerin gerekli olduğu deneyler yapmasına imkan tanıyor.
Abstract
Biz E15-17 rat embriyoları hipokampal veya kortikal nöronların ayırmak ve kültür için hızlı bir yöntem tarif edilir. Prosedürü fare ve insan birincil nöronlar ve sinir progenitörlerin izolasyonu başarıyla uygulanabilir. Ayrışmış nöronlar ila birkaç hafta serum içermeyen aracı madde içinde muhafaza edilir. Bu kültürler nucleofection, immünsitokimya, nükleik asit hazırlanması yanı sıra elektrofizyoloji için de kullanılabilir. Büyük nöronal kültürler da iyi bir verim lentiviral transdüksiyonu ile oranı ve daha az etkin bir şekilde, kalsiyum fosfat ya da bu gibi lipid lipofektamin bazlı yöntem ile transfekte edilebilir.
Protocol
1. Poli-D-Lizin (PDL): Hazırlanması
- 1 mg / ml 'lik bir stok solüsyonu elde etmek için PDL 5 mg steril GKD 2 O 5 ml ilave edilir.
- Birkaç kez pipetleme tarafından stok solüsyonu karıştırın.
- Hemen kullanın veya 2-8 Poly-D-Lizin Çözüm saklamak ° C
2. Poly-D-Lizin (PDL): Kaplama Plastik Hücre Kültürü Yemekleri
- Steril GKD 2 O ile 10 ug / ml 'lik nihai konsantrasyona PDL stok solüsyonu ile seyreltilir.
- Kültür yüzey alanı (60 mm çanak için 3 ml) kapsayacak şekilde 60 mm çanak pipetleyin yeterli bir çözüm.
- Kültür yüzey hatta kaplama sağlamak için hafifçe sallayın.
- Gece boyunca oda sıcaklığında (RT) az kaplı inkübe edin.
- Ertesi gün, genellikle diseksiyon gün, aspirasyon tarafından Poly-D-Lizin Çözüm kaldırmak ve steril GKD 2 O 3 ml kısaca yıkayın Bu adımı yineleyin. İkinci yıkamadan sonra, aspirasyon tamamen su çıkarmak.
- Plakalar üç hafta için 4 ° C'de saklanabilir.
3. Poly-D-Lizin (PDL) ve Laminin: Cam hazırlanması ve Kaplama İki odacıklı Slaytlar
- Sırasıyla, 10 ve 5 ug / ml, nihai konsantrasyon Steril GKD 2 O karışımı PDL (1 mg / ml) ve laminin (1 mg / ml) stok çözeltileri.
- Cam bir kuyu iki odacıklı slayt kültür yüzey alanı (2 hatta cam çift odacıklı slayt her iyi için 1 ml) kapsayacak şekilde pipetleyin yeterli bir çözüm.
- Kültür yüzey hatta kaplama sağlamak için hafifçe sallayın.
- Gece boyunca oda sıcaklığında kaplı inkübe edin.
- Ertesi gün, aspirasyon yoluyla Poly-D-Lizin-Laminin kaplama çözümü kaldırmak ve steril GKD 2 O. 1 ml ile iki kez kısaca yıkayın İkinci yıkamadan sonra, aspirasyon tamamen su çıkarmak.
- Odacık slaytlarınızı üç hafta için 4 ° C'de saklanabilir.
Not: Herhangi bir cam haznesi slayt izlemeye kaplanabilirg bu protokol. Her bir slayt kontrolü test Deneysel ortamda (örneğin tedavi edilmezse karşı tedavi, untransfected karşı transfekte) sağlar çünkü çoğu zaman çift odacıklı slaytlar kullanın.
4. Nöronal Diseksiyon ve Kültür
- 37 ° C su banyosunda aşağıdaki reaktifler Isınma:
- Orijinal 100 ml şişe üzerine TrypLE Express.
- Neurobasal/B27 tam orta (tablo görüyorum). Isıttı hacmi (on 60 mm kaplamalı yemekler örneğin 30 ml) kaplamalı olarak yemeklerinin sayısına bağlıdır.
- Dört adet 60 mm'lik kültür kaplarına ve 15 ml BD Falcon yüksek netlik polipropilen konik tüpe 13 ml soğuk Hazırda E çözeltisinden 3 ml ekleyin.
- Üç 100 mm'lik kültür kaplarına her birine soğuk diseksiyon orta (tablo II, Dr Olimpia Meucci, kişisel iletişim bakın) 25-30 ml ekleyin. Orta büyük bir hacmi içeren bu plakaları, hemen sonra embriyo yıkamak için kullanılacaktıramniyotik kese (adımları 4.7 ve 4.8) kaldırılması.
- Laboratuvar Hayvanları Humane Bakımı ve Kullanımı Halk Sağlığı Hizmetleri Politikası'na uygun olarak ve kurumsal olarak onaylanmış hayvan bakım altında CO 2 tarafından bir E17 zamanlı gebe sıçan Euthanize ve protokolünü kullanır.
- % 70 EtOH ile alt karın püskürtün ve rahim ve embriyoların açığa bir makas ile deri ve kas yoluyla mediale kesti.
- Bütün fetuslarda çıkarın ve soğuk diseksiyon orta (25-30 ml, adım 4.3 'e bakınız) aşırı içeren steril 100 mm tabağına yerleştirin.
- Amniyotik kese makas küçük bir çifti kullanılarak embriyo kesin ve soğuk diseksiyon orta içeren ikinci 100 mm tabağına yerleştirin.
- 5-10 saniye hafifçe eğerek 100 mm çanak ile oda sıcaklığında embriyoların yıkayın. Daha sonra, diseksiyon orta içeren üçüncü 100 mm çanak Durulanmış embryo transfer. Aşırı orta İki yıkama genellikle kan tüm izlerini silmek için yeterlidir. Bununla birlikte, eğer imalatıaçıklı, soğuk diseksiyon orta 25-30 ml içeren taze bir 100 mm çanak ile bir kez daha yıkayın.
- Stereomikroskopta ve kavisli bir forseps kullanarak, deri ve kafatası çekerek her rat embriyo beyni ayıklayın. Soğuk Hazırda E. ile 60 mm yemekleri (genellikle, tabağı başına en fazla 5 beyinleri ile) buz üzerinde bu plakalar tutun birinde bütün beyin yerleştirin.
- Seferinde bir çanak alın ve bir mikroskop altında, hemisfer ayırmak ve orta beyin ve meninks çıkarmadan serebral korteks izole.
- İsteğe Bağlı: orta hat boyunca kesme beyinleri, hipokampi ayıklamak ve hipokampal nöronlar yalıtmak için aşağıdaki prosedürü izleyin.
- Tüm diseksiyonlar tamamlanıncaya kadar buz üzerinde serebral korteks bırakın soğuk Hazırda E. 13 ml içeren 15 ml berrak konik tüp tüm diseke korteksleri toplayın. Kendi küçük boyutları nedeniyle, disseke hipokampi yerine 15 ml tüp bir 1.5 ml Eppendorf tüp toplanabilir. Ya da bu adım korteksleri az, eğer istenirsehipokampi 1 ml'lik bir şişe içinde cryotube yerleştirilebilir hazırda E + 2 +% B27 gentamisin (50 ug / ml) 2-4 korteksleri veya şişe başına 2-4 hipokampi oranında + Fungizone (250 ng / ml). Beyin dokusu kadar bir hafta (daha sonraki dönemlerde henüz test edilen değil) için karanlıkta 4 ° C'de saklanabilir. Gerektiğinde, Hazırda E içeren 15 ml tüp için beyin dokusu aktarmak ve daha sonra nöronlar yalıtmak için aşağıdaki protokolü takip ince pens kullanın.
- Bir doku kültürü kaput tüp aktarın. Korteksleri tüpün dibe sonra dikkatlice süpernatant kaldırmak için izin verin.
- , 15 ml konik tüp taze Hazırda E 13 ml ekleyin korteksleri tüpün dibe çöktüğünden izin ve dikkatli supernatant çıkarın. Bu adım 2 kez daha tekrarlayın ve son yıkamadan sonra, özenle tüm medya çıkarın.
- Sıcak Tr; enzimatik 1-2 ml (hipokampi izolasyonu için daha az kullanın korteksleri sayısına bağlı olarak) ekleyerek serebral korteks sindirmekypLE Express. Parafilm ile tüp kap kapatır ve 10 dakika boyunca 37 ° C'de su banyosu içinde tüp yüzer.
- Kap açılmadan önce% 70 etanol ile tüp püskürtmek ve korteksleri borusunun alt kısmında yerleşir ve süpernatan kaldırmak için izin hazırda E. 10 ml ilave edilir. Bu adım TrypLE Express yıkanmaya üç kez tekrarlayın. Son adım olarak, dikkatle tüm medya çıkarın.
- Yavaşça (4-5 kez) bir yangın-parlatılmış cam Pasteur (çapı yaklaşık 1 mm) kullanılarak Neurobasal/B27 tam medyum 2 ml korteksleri öğütmek. Kabarcıkları önlemek için dikkatli olun.
- Çapında küçük bir steril cam Pasteur pipeti (yani çapı 1/2-3/4 mm pipet) ile başka bir 4-5 kez tekrarlayın. Bir Pasteur pipeti bu küçük kullanmayın veya hücreleri yok edecek.
- Yerleşmek için (eğer varsa, genellikle çok az) doku kalan parçaları izin verin.
- Doku parçaları yerleşmiş bırakarak, yeni bir 15-ml tüpüne üst tek bir hücre süspansiyonu transfer edin. KürkNeurobasal/B27 tam orta 10-12 ml hücre süspansiyonu kadar sulandırmak incele.
- İyice karıştırın ve bir 1.5 ml Eppendorf tüp 50x Sayma Çözüm (Tablo III) 490 ul hücre süspansiyonu 10 ul ekleyerek sayım için hücre seyreltik.
- 5.0 x 10 4 / cm 2 arasında derişimde PDL-kaplı levhalar üzerine plakası hücreleri. Nucleofection yapılmasını mümkün olmaması durumunda, daha yüksek bir konsantrasyonu (8-10 x 10 4 / cm 2) de hücrelerin kaplama önermektedir.
- Yaklaşık 13 x 10 6 nöronların her E17 fetus türetilen Normal olarak, biz, Deneme başına 9-10 fetus incelemek. Daha fazla embriyoların gerekirse, tüm prosedürü iki saatten fazla sürecek olmadığından emin olun.
- Eğer istenirse, 24 saat sonra izole, sitosin-β-D-arabinofuranoside (AraC) 10 uM glial proliferasyonu önlemek amacıyla, her bir çanak eklenebilir. Neurobasal/B27 orta glial proliferasyonu inhibe Bununla birlikte, bu adım gerekli değildirGibi üreticinin önerilerine (Invitrogen / Gibco).
- Kesin zaman istenen türev aşaması bağlı olmasına rağmen, nöronlar, in vitro olarak 4-5 gün sonra deneyler için kullanılabilir. Biz hayatta önemli bir azalma (Şekil 1) olmadan 4 hafta için kültürlü nöronlar var.
- Genişletilmiş kültür için, taze hazırlanmış Neurobasal/B27 tam orta her hafta kültür ortamı değiştirin.
5.. Temsilcisi Sonuçlar
Cam haznesi slaytlar nöronlar üzerinde kültive immünsitokimya tabi tutulabilir. Şekil 1 kültüründe beş gün sonra sabit ve nöronal işlemleri gösteren anti-MAP-2 antikoru ile immunolabeled bir kortikal nöron tipik bir görüntüsü gösterilmektedir.
Şekil 2 kültüründe 3 hafta sonra bir sıçan hipokampal nöron bir temsilcisi görüntüsünü gösterir. Tamamen farklılaşmış hücre nöronal morfoloji MAP-2 tarafından vurgulanır immunolabeling (MAP-2 nöronal belirteç, fare monoklonal antikor klonunun AP-20, Gene Tex, Irvine, CA), daha önce tarif edildiği gibi 1 standart bir prosedür izlenerek,. Görüntüleri EXi aqua kamera (Qimaging), motorlu Z ekseni ve SlideBook5 kazanım / Dekonvolüsyonun yazılımı (Akıllı Görüntüleme Yenilikler, Inc, Denver, CO) ile donatılmış Nikon Eclipse E400 dik floresans mikroskobu ile görüntülenmiştir. Her bir resmin üç boyutlu görüntüleri bir dizi birini iki boyutlu resme deconvoluted ve çözünürlüğü artırmak için yakın maksimal yoğunluğu sinyali kesme ayarlayarak çözüldü.
Şekil 3 nöronal kültürlerin saflığı gösterir. Protein lizatları DIV7 sıçan nöronal kültürlerin (ctx) gelen ve insan glioblastoma (GBM) bir durumda elde edilmiştir. Beklenildiği gibi, nöronal lizat nöronal protein MAP-2 ve astrositik işaretleyici GFAP negatif için güçlü bir şekilde pozitif olduğu; GBM proteini lizat negatif f ikenya GFAP MAP-2 ve pozitif.
Bizim protokol biz orta diseksiyon ve durulama olarak yıllarca Hazırda E kullanarak rağmen, son zamanlarda biz daha fazla kullanmak için beyin dokuları korumak için ek bir ve çok pratik kullanım incelemiş bulunuyoruz. Şekil 4 in vitro 5 (DIV5) bir gün göstermektedir embriyosu kendi orijinal Diseksiyon sonra hazırda E + B27 in bir hafta süreyle 4 ° C de muhafaza korteksleri izole sıçan kortikal nöronların kültürü. Nöronlar daha önce tarif edildiği gibi PDL ve laminin ile kaplanmış bir cam iki bölmeli kayar üzerine ekildi. Elde edilen görüntü SlideBook5 toplama / yukarıda tarif edildiği gibi Dekonvolüsyonun yazılımı (Şekil 2) kullanılarak deconvoluted edildi.
Şekil 1. PmaxGFP (Amaxa, Lonza, Walkersville, MD) ile nucleofected ve MAP ile immunolabeled bir kortikal nöron Temsilcisi görüntü-2 Antikor, kırmızı. Orijinal büyütme 100x.
Şekil 2. Kültür 3 hafta sonra hipokampal nöronların, kırmızı, MAP-2 immün gösteren Temsilcisi görüntü. DAPI boyama, mavi, hücre çekirdeği gösterir. Orijinal büyütme 40x.
Nöronal hücre kültürlerinin saflığı gösteren Şekil 3. Western blot. Sıçan ve insan nöronal protein GBM lizatlarının 30 ug elektroforez ile ayrılmış ve standart prosedürler takip 1 Western blot analizi tabi tutuldu. Anti-MAP-2 Hücre Sinyalleşme (Danvers, MA) ile bir tavşan poliklonal olarak, anti-GFAP antikoru Chemicon (Millipore, Billerica, MA) ile bir fare monoklonal, ve fare monoklonal antikoru, anti-Grb2 BD Transduction Laboratories (yapıldı Sparks, MD). Grb2 bir yükleme kontrol olarak kullanılmıştır. 
Şekil 4. Temsilcisi in vitro 5 gün resimleri (DIV5) sol korteks elde edilen sıçan kortikal nöronların Hazırda E onların diseksiyonu sonrası bir hafta boyunca, 4 ° C + B27. Bir cam çift odacıklı slayt kültüre nöronlar A) Faz kontrast. Orijinal büyütme 20X. B) İmmünofloresan yeşil, nöronal süreçleri MAP-2 ekspresyonu gösteren; kültür astrositik işaretleyici GFAP negatif idi. DAPI boyama, mavi, hücre çekirdeği gösterir. Orijinal büyütme 40x.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Rat hipokampal ve kortikal nöronların diseksiyon ve kültür yöntemi burada açıklanan kimyasal olarak tanımlanmış bir orta (Şekil 3) yetiştirilen yaklaşık saf nöronal kültürlerin kullanıldığı deneyler sağlar. Serumsuz medya kültürü neredeyse saf nöronlar için protokolleri daha önce 2,3,4 tanımlanmış olmasına karşın, bizim yöntem yapılan önemli değişiklikler vardır. Geleneksel protokolleri farklı (yani Banker ve ark.) 5, biz TrypLE Express, daha nazik bir ayrışma enzimi ile tripsin yerini almıştır. Biz de potansiyel nöronal hücrelerin bütünlüğünü etkileyecek iki adım atladık: korteks veya hipokampi kıyma haline gelme enzimatik sindirimi öncesinde ve DNaz kullanarak. Ayrıca, Hazırda E embriyoların diseksiyon (adım 4.2) kalıcı ve sağlıklı hücreleri korumak için yardımcı oldu. Hazırda E (Invitrogen, Yaşam Teknolojileri, Grand Isl ortam karbon dioksit seviyeleri nöral doku veya hücrelerin bakımı için kullanılan bir besin ortamında olduğunuve, NY). Başlangıçta izole beyin bölgelerinde (hipokampus, striatum ve korteks) gönderilmesi için formüle edilmiş, Hazırda E orta sinir dokusunun izolasyonu sırasında beyinde canlı tutmak için veya mikroskopi, elektrofizyoloji veya akım sitometri sırasında nöronların sağlıklı tutmak için kullanılabilir. Gerçekten de, Şekil 4 cam iki odacıklı slaytlar üzerinde 5 gün süreyle kültüre sıçan kortikal nöronların bir temsilci resmi gösterir. Önce kendi işleme, korteks 4 derecede saklandı ° Hazırda C D E17 embriyoların kendi diseksiyonu sonrası bir hafta boyunca karanlıkta + B27. İlginçtir, birkaç gün için 4 ° C'de muhafaza dokusundan izole nöronların embriyo diseksiyonu aynı gün izole edilenler için morfolojik olarak benzer bulunmuştur. Zaman gebe bir hayvan tam olarak yararlanmak, bu nedenle, deney planlama ve zaman embriyoların diseksiyonu sonrası farklı zamanlarda nöronların tecrit seçeneği olması son derece yararlı olabilir.
Bu mentione edilmelidird bizim protokol E13 ile E17 için embriyonlar üzerinde verimli çalışır, ancak yeni doğan veya yetişkin kemirgenler için test olmamıştı ki. Aynı zamanda, insan fetal nöronların (yayınlanmamış veriler) izolasyonu ve kültürü için çok iyi çalıştı.
Burada anlatılan yöntem ile izole edilen hücreler RNA / DNA veya protein çıkarılması için bir hücre hasat sayıda gerektiren deneyler için doku kültür tabaklarında kaplanabilmektedir. Örnekler, HIV-Tat protein 1 yönelik çalışmalarımızın gibi bazı bileşikler veya peptitler ile nöronların tedavisi içerir. Büyüme faktörü-kaynaklı sinyalizasyon yolları da araştırılmıştır edilebilir ya da RNA gen ekspresyonu ya miRNA profil dizileri 6 için de arıtılabilir.
Ayrıca, kaplama öncesi nöronların nucleofection molekülleri veya nöronal farklılaşma 1 etkileyen büyüme koşulları araştırmak için bir araç sağlar. Diğer uygulamalar lipofektamin 2000 farklılaşmış nöronların transfeksiyon (Invitr dahilogen, Carlsbad, CA) 1. Transfeksiyon verim nucleofection kıyasla çok düşük olsa da, lusiferaz haberci testi ya elektrofizyoloji çalışmaları gibi çok hassas deneyleri için uygundur. Buna ek olarak, cam haznesi slaytlar nöronlar üzerinde kültive immünsitokimya (Şekil 1 ve 4B) 1 tabi tutulabilir. Son olarak, başarılı bir şekilde, daha önce tarif edildiği gibi 7,8 izole sinir progenitörlerin tanımlanan bir ortamda kültüre edildiği son adımda bir modifikasyonu olan, fare embriyosu 7 den sinirsel progenitörlerin ayırmak için bu protokolü takip etti. Genel olarak, bu basit bir yöntem uygulamaları çeşitli sahiptir ve kolay bir şekilde desteklemek üzere nöronal kültürleri glia gerekmez çalışmaları için nöronlar sağlar. Bununla birlikte, glial co-veya kültür glial-türevi şartlandırılmış ortamı gibi Pfrieger ve Ba tarafından tarif çalışmalar gliyal hücreleri 9 tarafından indüklenen sinaps oluşumu mekanizmaları, incelemek için, bu nöronal kültürler eklenebilirrres 10.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Çıkar çatışması ilan etti.
Acknowledgments
Biz editoryal yardım için Jonna Ellis teşekkür ederim. Ruh Sağlığı Ulusal Enstitüsü: açıklanan proje Ödülü Numarası R01MH079751 (F. Peruzzi PI) tarafından desteklenmiştir. Içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka Ruh Sağlığı Ulusal Enstitüsü veya Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmez.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Neurobasal | 98% | ||
| B27 | 2% | ||
| Glutamax | 0.5 mM | ||
| Table I. Neurobasal/B27 complete medium. | |||
| Glucose | 16 mM | ||
| Sucrose | 22 mM | ||
| HEPES | 10 mM | ||
| NaCl | 160 mM | ||
| KCl | 5 mM | ||
| Na2HPO4 | 1 mM | ||
| KH2PO2 | 0.22 mM | ||
| Gentamicin | 50 μg/ml | ||
| Fungizone | 250 ng/ml | ||
| pH | 7.4 | ||
| Osmolarity | 320-330 mOsm | ||
| Table II. Dissection medium. | |||
| Neurobasal/B27 complete medium | 240 | ||
| Trypan Blue Stain 0.4% | 250 | ||
| Total | 490 | ||
| Table III. 50x Counting solution. | |||
| Hibernate E | Brainbits | 767171 | |
| Neurobasal | GIBCO, by Life Technologies | 21103-049 | |
| B27 | GIBCO, by Life Technologies | 17504-044 | |
| Fungizone | GIBCO, by Life Technologies | 15290-018 | |
| Gentamicin sulfate | Sigma-Aldrich | G1264 | |
| Glutamax 200 mM | GIBCO, by Life Technologies | 35050 | |
| TrypLE Express w/o phenol red | GIBCO, by Life Technologies | 12604 | |
| Cytosine-β-D-arabinofuranoside hydrochloride | Sigma Aldrich | C6645 | |
| Poly-D-Lysine | Sigma Aldrich | P6407 | |
| Laminin 1 mg/ml | EMD Millipore | CC095 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H3375 | |
| Trypan Blue Stain 0.4% | GIBCO, by Life Technologies | 15250 | |
| Table IV. Specific reagents. | |||
| Stereo Microscope | Olympus Corporation | SZ61 | |
| Large Forceps | Fine Science Tools | 11022-14 | |
| Fine-tipped forceps | Moria | MC40B | |
| Micro fine-tipped forceps | Moria | MC31 | |
| Razor-sharp scissors | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-6820 | |
| Micro Dissecting scissors | Fine Science Tools | 91460-11 | |
| Micro Dissecting Curved scissors | Fine Science Tools | 14067-11 | |
| Glass 2-chamber slides | Lab-Tek | 154461 | |
| 60 mm dishes | BD Biosciences | 353002 | |
| 100 mm dishes | Corning | 430167 | |
| 15 ml tubes | BD Biosciences | 352099 | |
| 1.5 ml cryo-tube vial | Nalge Nunc international | 375353 | |
| Table V. Specific equipment. | |||
References
- Aprea, S. Tubulin-mediated binding of human immunodeficiency virus-1 Tat to the cytoskeleton causes proteasomal-dependent degradation of microtubule-associated protein 2 and neuronal damage. J. Neurosci. 26, 4054-4062 (2006).
- Kivell, B. M., McDonald, F. J., Miller, J. H. Serum-free culture of rat post-natal and fetal brainstem neurons. Brain Res. Dev. Brain Res. 120, 199-210 (2000).
- Kivell, B. M., McDonald, F. J., Miller, J. H. Method for serum-free culture of late fetal and early postnatal rat brainstem neurons. Brain Res. Brain Res. Protoc. 6, 91-99 (2001).
- Brewer, G. J. Serum-free B27/neurobasal medium supports differentiated growth of neurons from the striatum, substantia nigra, septum, cerebral cortex, cerebellum, and dentate gyrus. J. Neurosci. Res. 42, 674-683 (1995).
- Banker, G., Goslin, K. Culturing nerve cells. , The MIT Press. Cambridge. (1998).
- Eletto, D. Inhibition of SNAP25 expression by HIV-1 Tat involves the activity of mir-128a. J. Cell Physiol. 216, 764-770 (2008).
- Gualco, E. IGF-IR-dependent expression of Survivin is required for T-antigen-mediated protection from apoptosis and proliferation of neural progenitors. Cell Death Differ. 17, 439-451 (2010).
- Gage, F. H. Survival and differentiation of adult neuronal progenitor cells transplanted to the adult brain. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 11879-11883 (1995).
- Keyser, D. O., Pellmar, T. C. Synaptic transmission in the hippocampus: critical role for glial cells. Glia. 10, 237-243 (1994).
- Pfrieger, F. W., Barres, B. A. Synaptic efficacy enhanced by glial cells in vitro. Science. 277, 1684-1687 (1997).
