Summary
זיהום כרוני עם helminths אדמה משודרת-(STHs) גורם לחוסר ספיגה, stunting, ומבזבז בילד שגדל. לפיכך, ניתן להניח כי זיהומים אלה גם להפחית את הכושר הגופני של ילדים. כאן, אנו לדמיין שתי טכניקות לאבחנה של STHs ומבחן טיסת המעבורת 20-המטר להערכת כושר הגופני של הילדים.
Abstract
helminth זיהומי קרקע, משודר (STH) הם נפוצים. ואכן, יותר מ 1 מליארד בני אדם מושפעים, בעיקר בעולם המתפתח שבו שורר עוני והתנהגות היגיינה, אספקת מים, ותברואה היא לעתים קרובות 1,2 הלקוי. Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, ושני מיני תולעי הקרס, Ancylostoma duodenale וNecator americanus, הוא STHs הנפוץ ביותר 3. הניטל העולמי המוערך בשל תולעי קרס מחלה, כרצה, וtrichuriasis הוא 22.1, 10.5, ו -6.4 מ'שנתי נכות מותאמות חיים (DALYs), בהתאמה 4. יתר על כן, כ 30-100000000 אנשים מוערכים שהם נגועים בStrongyloides stercoralis, מין sth המוזנח ביותר של משמעות העולמית שללא ספק גם גורם להשפעה על בריאות ציבור ניכרת 5,6. דלקות מרובות מינים (כלומר, STHs השונה טפח באדם יחיד) הם נפוצים, והזיהומים היו לין ked ליעילים ירוד והשקפה בכך כלכלית של מדינות מתפתחות 1,3.
לאבחון של STHs המשותף, ארגון הבריאות העולמית (WHO) ממליץ קאטו כץ טכניקת 7,8, אשר היא שיטה פשוטה יחסית לקביעת השכיחות והעצמה של זיהומים כאלה. זה מאפשר זיהוי של ביצי הטפיל שנושאים עוברים נגועים בצואה שלהם.
בנוגע לאבחנה של S.stercoralis, אין כיום כלי פשוט ומדויק זמין. טכניקת Baermann היא השיטה הנפוצה ביותר למועסקת האבחנה שלו. העיקרון שעומד מאחורי טכניקת Baermann הוא שזחלי S.stercoralis הפעילים להגר אל מחוץ לדגימת צואה טרייה מוארת כזחלים הם phototactic 9. זה דורש חומרי מעבדה מתוחכמים פחות ופחות זמן רב יותר מאשר שיטות תרבות וחיסונית 5.
t "> morbidities קשורים למגוון זיהומים STH מתסמינים חריפים אך נפוצים, כגון כאבי בטן, שלשולים, וגרד, לסימפטומים כרוניים, כגון אנמיה, תחת ותת תזונה, ופגיעה קוגניטיבית 10. מאז הסימפטומים הם בדרך כלל אינם נוקבים ו עדין, הם לעתים קרובות נעלמו מעיניו, נחשבים למצב רגיל על ידי אנשים מושפעים, או כאל תסמינים של מחלות אחרות שעשויה להיות נפוצים יותר בהגדרת נתונה. לפיכך, ניתן לשער כי בניטל האמיתי של זיהומי sth אינו מוערך כראוי על ידי הערכה כלים להסתמך על סימנים עצמיים שהוכרזו ותסמינים כמו שקורה בדרך כלל בסקרי אוכלוסייה מבוססת.בשנתי ה -1980 המאוחרות ותחילת 1990, סטיבנסון ועמיתים הדגישו את האפשרות של זיהומי sth הפחתת הכושר הגופני של בנים בגילאי 6-12 שנים 11,12. קו זה של חקירה מדעית צבר תנופה חדשה לאחרונה 13,14,15. מבחן 20-המטר (מ ') מעבורת הריצה פותחאומת על ידי ד ז'ה ואח'. 16 ומשמש בעולם למדידת הכושר האירובי של 17 ילדים. המבחן הוא קל לתקנן וניתן לבצעו בכל המקום כמובן 20-מ 'ארוך ושטוח ריצה ומקור שמע זמינים, מה שהופך את השימוש בו אטרקטיבי בהגדרות של משאבים מוגבלים 13. כדי להקל ולתקנן בניסיונות להעריך אם זיהומי sth יש השפעה על הכושר הגופני של ילדים בגיל בית הספר, אנו מציגים מתודולוגיות שלאבחן זיהומי sth או כושר אמצעים פיסיים, כי הם פשוט לביצוע ובכל זאת, מספק תוצאות מדויקות ושחזור. זה יעזור ליצור ראיות חדשות בנוגע להשפעה הבריאותית של זיהומי STH.
Protocol
1. טכניקת קאטו כץ
- הנח בתבנית סטנדרטית קאטו כץ עם חור להחזקת 41.7 מיליגרם (מ"ג) של צואה בשקופית מיקרוסקופ.
- סקופ 2-3 גרם (ז) של דגימת צואה טרייה על גבי פיסת עיתון או נייר אלומיניום, ולחץ על חתיכת חוט או רשת פלסטיק על גבי מסננת לזה.
- בעזרת מרית פלסטיק קטנה, מגרד את החומר המנופה את הרשת ולמלא לגמרי את החור בתבנית קאטו כץ עם זה. כדי להסיר חומר צואתי עודף, רמת התוכן של החור בעזרת המרית.
- אנכי להסיר את התבנית ללא מפריע את החומר צואתי עכשיו דבקות שקופיות מיקרוסקופ. התבנית והמרית ניתן לנקות במים עם חומר ניקוי, ושימוש חוזר.
- מניח חתיכת הנייר צלופן, מראש ספוג בפתרון ירוק גליצרין-מלכיט לפחות 24 שעות (שעות), על דגימת הצואה בשקופית מיקרוסקופ.
- כדי להפיץ את החומר צואתי למריחה עבה, לחץ בעדינות מייקר נקישקופית היקף נגד שקופיות המדגם, באופן שווה הפצת החומר בתוך המעגל בקוטר מעט קטן יותר מרוחבו של שקופיות מיקרוסקופ.
- אפשר השקופית כדי לנקות למשך 30-60 דקות (דקות), שבמהלכו חייבות להרחיק את השקופיות מאור השמש ישיר. ואז, באופן שיטתי לבחון את המריחה העבה תחת מיקרוסקופ אור (גדלת 40-100x). לספור את מספר ביצי sth ורבד לפי מין (כלומר, A.lumbricoides, T.trichiura, ותולעי קרס). מן ראוי לציין כי ביצי helminth אחרות (למשל Schistosoma mansoni) יכולות גם להיות מזוהות על ידי שיטה זו ויש למנות והוקלטו בנפרד.
- כדי לקבל אומדן סטנדרטי של עוצמת הזיהום, הביע באופן קונבנציונלי כמספר ביצים לגרם הצואה (EPG), להכפיל את מספר הביצים ב -24 (24 x 41.7 מ"ג ≈ 1 ז).
2. טכניקת Baermann
- להעמיד דוכן שיכול להכיל זכוכית משפך ולצרף צינור גומי, נסגר שנינותקליפ חה, לתחתית המשפך.
- הנח מסננת או חתיכת מסך חוט בצורה חרוטה, במשפך ושכבתה עם פיסת הגזה רפואית.
- מלא את המשפך במים ברז ולהבטיח כי הגדרה שלמה לא ידלוף.
- סקופ 20-30 גרם צואה טריה לאמצע הגזה הרפואית ולוודא שהוא שקוע לחלוטין במים. להוסיף עוד מים במידת צורך. מקפל את הבד הרפואי על המדגם.
- מלמטה, להאיר אור מלאכותי במשפך ל2 שעות.
- מסנן 50 מ"ל (מ"ל) של החלק התחתון של המים במשפך לתוך צינור צנטריפוגות ידי שחרור קליפ על צינור הגומי בעדינות.
- צנטריפוגה מים שנאספו ב 600 XG (כוח הצנטריפוגלי יחסי) למשך 5 דקות ויוצקים בזהירות את supernatant מבלי להפריע למשקעים. שמור את הטיפין האחרונות בצינור.
- Re-להשעות את 2 טיפי המשקעים ופיפטה של הפתרון לשקופית מיקרוסקופ ולבחון את השקופיתתחת מיקרוסקופ אור (גדלת 40X לאיתור והגדלה 100-400x אישור מינים). זחלים של השלב הראשון (L1) של ס ' stercoralis הם חיים ופעיל לעבור מתחת למיקרוסקופ.
3. מבחן הפעלת הסעות 20-מ '
- מדוד מסלול שטוח וישר 20-מ 'ריצה ולסמן אותו עם גביעים.
- עזרת משתתף המבחן ללבוש לפקח על קצב לב על פרק כף היד והמשדר המקביל סביב החזה 18. ציוד זה מאפשר לקצב הלב של המשתתף שנמדד לפני ואחרי הבדיקה ובכך עוקב אחר אם המשתתף הפעיל מאמץ מקסימאלי.
- להורות למשתתף לרוץ הלוך ושוב על המסלול על ידי ביצוע הקצב של אותות קול מוקלטים מראש תוחמים הקפות 20-מ '. החל ממהירות ריצה של 8.5 ק"מ לשעה (ק"מ / שעה), תדירות של תמרורי עליית מרווחים 20-מ 'על ידי מקבילה של 0.5 ק"מ / שעה בכל דקות.
- ודא הבמשתתף מתחיל מרווח חדש 20-מ 'בכל פעם שנשמעה אות ומסיים אותו לפני האות הבאה מגיעה.
- עצור את המשתתף אם הוא / היא לא פועלת בהתאם לקצב שני מרווחים רצופים 20-מ '.
- רשום את מהירות ריצה הגבוהה ביותר שצוינה עבור המרווח האחרון שהמשתתף השלים באופן מלא, יחד עם הגיל והמין של המשתתף.
- ודא שקצב הלב המושג בסוף הבדיקה הוא קצב הלב המקסימאלי של הילד 19. אם קצב לב זה לא הגיע, הילד עלול לא משקיעים מאמץ מקסימאלי, ולכן יש לחזור על הבדיקה.
- להעריך את הקיבולת המרבית האירובית (VO 2 max) של המשתתף, תוך שימוש במשוואה שהציגה לז'ה ועמיתים לעבודה: VO 2 max = 31.025 + 3.238 * מהירות (בק"מ / שעה) - 3.248 * גיל (בשנים) + .1536 * מהירות (בק"מ / שעה) * גיל (בשנים).
4. נציג תוצאות
במונחים שלאבחון STH עם טכניקת קאטו כץ, מאפיינים ייחודיים של את ביצי helminth השונות מאפשר זיהוי של רוב המינים 20. את הביצים של A.lumbricoides (מיקרומטר כ 45-75 (מיקרומטר) ארוך ורחב 35-50 מיקרומטר, איור 1) יש קירות מעטפת עבים יותר מאשר את הביצים של T.trichiura (איור 2) ותולעי קרס (איור 3). ביצית מופרה של A.lumbricoides (איור 1) יש מעייל חלבי חיצוני, שגורם לזה להיראות חום זהוב, ואילו ביצה שאינן מופרה חסרת המעייל החיצוני הזה והוא מעט מוארך וגדול יותר באופן כללי. את הביצים של T.trichiura (כ 50 מיקרומטר ארוך ו22 מיקרומטר רחב, איור 2) הן מוארכות ויש לי תקעי קוטב מובחנים. תולעי קרס ביצים (כ 64-76 מיקרומטר ארוך ו36-40 מיקרומטר רחב, איור 3), מצד השני, יש קיר דק מאוד, ואחריו טבעת ברורה סביב אשכול צפוף של תאיםבמרכז הביצה.
S.stercoralis זחלי L 1 (איור 4) הם ארוכים מיקרומטר כ 180-380 ויש חלל buccal קצר מאוד. Primordium איברי מין מובהק (מודגש בחץ כחול בתרשים 4) ניתן לראות והזנב של הזחלים (מסומן בחץ אדום באיור 4) יש קצה חד.
כהשפעה האמיתית של זיהומי sth על הכושר הגופני של ילדים עדיין נדונה 13,14,15, אין תוצאת נציג להשפעתם בשלב זה. פרשנות של תוצאות בדיקת טיסת מעבורת 20-מ 'יכולה להתבצע בדרכים שונות. הכושר הגופני של ילדים ניתן להשוות בין נבדקים נגועים ולא נגועים, שאינם דומים במונחים של גיל ומין, מצבים אחרים שעשוי להיות רלוונטיים לבריאות, מצב סוציו אקונומי, הרגלים תרבותיים. ניתן לעשות זאת בסקר חתך 13,14,15 בימצב STH זיהום וכושר גופני של ילדים נגועים ולא נגועים מוערך בנקודת זמן מסוימת. עוצמת הראיות תהיה גבוהה יותר כאשר בעקבות עיצוב מחקר אקראי ומבוקר שבו הכושר הגופני של ילדים בגיל בית הספר הוא העריך לפני ואחרי טיפול anthelminthic / פלצבו, ומאפשרת גם להערכה קצרת טווח וארוך טווח. אחד נוסף, תוכל לנסות לזהות קשר מנת תגובה אפשרי בין עוצמת זיהומי sth וכושר גופני ולהשוות רמות שונות של multiparasitism 1 עם כושר גופני. בעבודה שהוצגה על ידי יאפ ועמיתים לעבודה 15, כושר גופני, כפי שהוא מתואר על ידי VO 2 max, נמצא להיות מופחת באופן משמעותי בילדים שנדבקו בT.trichiura בהשוואה לילדים שלא נדבקו בT.trichiura (איור 5) .
Figu 1. מחדש תמונות מיקרוסקופיות של ביצי A.lumbricoides: מופרות () ושאינן מופרות-(ב ') בהגדלת 500x. סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר.
איור 2. תמונה מיקרוסקופית של ביצת T.trichiura בהגדלת 500x. סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר.
איור 3. תמונה מיקרוסקופית של ביצי תולעי קרס בהגדלת 500x. סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר.
איור 4. תמונה מיקרוסקופית של זחל 1 ליטר S.stercoralis בהגדלת 250x. חיצים מעידים זנב (אדום) וprimordium איברי המין (כחול). סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר.
d/3966/3966fig5.jpg "/>
איור 5. גרף המראה את רמת הכושר הגופנית של ילדים שנדבקו בT.trichiura בהשוואה לרמת הכושר הגופנית של ילדים לא נגועה בט trichiura.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
השלושה הפרוטוקולים המתוארים במאמר זה נבדקו והוצא להורג בחלק הדרום המערבי של מחוז יונאן, הרפובליקה העממית של סין בין בני המיעוט האתני Bulang 21 ובחלקים שונים של אפריקה 6,13,14.
ישנן מספר תבניות זמינות עבור טכניקת קאטו כץ. כל חור בגודל מובחן יהיה לספק כמות ניכרת של חומר צואתי. לחישוב EPGs, על כן יש צורך לדעת את היחידה של התבנית, כדי להכפיל את מספר המנה של ביצים עם הגורם הנכון כדי להגיע לאומדן EPG. יתר על כן, כאשר תולעי הקרס נמצאים בקהילה תחת חקירה, חיוני לקרוא את שקופיות זמן קצר לאחר הכנה (לאחר זמן פינוי של 30 דקות אבל תוך זמן סליקה מרבית של 60 דקות). הסיבה העיקרית היא כי בטמפרטורות גבוהות, ביצי תולעי מעיים במהירות להתפרק 22. הזמן בין ייצור הצואה ידי נקוב המחקרticipant והבדיקה של הדגימות חשוב גם כמרווח של 3 שעות או יותר יכול להביא לירידה של 50% ברגישות של טכניקת קאטו כץ לאבחון תולעי הקרס 23. לבסוף, כדי לשפר את רגישות האבחון של טכניקת קאטו כץ, במיוחד באזורים הסובלים מדלקות בעצמה נמוכה sth, דגימות צואה מרובות יש המתקבלת ממשתתף, ומריחות עבות כפולות או שלושה עותקים קאטו כץ צריך להיות מוכן מכל דגימת צואה 7,24.
בכל קשור לטכניקת Baermann, יש להיזהר בעת ביצוע הניסוי כרימות של תולעת עשויות להיות נוכחות, ולכן, חובה ללבוש כפפות. למרות טכניקת Baermann מראה רגישות גבוהה בהרבה מטכניקות ריכוז אחרות ופחות מייגע מאשר שיטות תרבות, יש חסרונות חשובים. לדוגמה, כמות גדולה של חומר צואתי טרי נדרשה, אשר מהווה בעיה כאשר חולים לשלוח דגימות צואה קטנות.מצד השני, דגימת צואה גדולה עלולה להגביר את הסיכוי לגילוי רימות בזיהומים בעצמה נמוכה 9. בנוסף, קיים סיכון שהזחלים של נמטודות האחרת, כגון תולעי קרס או Trichostrongylus spp., עשויים להיות נוכחים, בדיקה מיקרוסקופית ובכך זהירה היא מוצדקת.
ישנן דרכים ישירות ועקיפות של מדידת מקסימום 2 VO להערכות כושר אירוביות. פרוטוקולים ישירים הליכונים, אופני כושר דורשים מחזור, וציוד מיוחד ומגושם אחר, אשר יכול למדוד את ריכוזי גז והנפח של האוויר הננשף. גישה כזו אינה אפשרית בהגדרת משאבים מוגבלים כפרית בעולם המתפתח. להגדרות כאלה, דרכים עקיפות, כגון מבחן טיסת המעבורת 20-מ ', הן השיטות המועדפות. למרות שיטות עקיפות הן לא מדויקות כמו שיטות ישירות, מבחן טיסת מעבורת 20-מ 'שהוקם על ידי לז'ה ועמיתים לעבודה הוכיח שחזור גבוה (r = 0.89) וvalidity נגד ספיגת חמצן מרבית על הליכון 16. יתר על כן, יחס חוקר ומשתתף יכול להיות נמוך וכמה ממשתתפים יכולים לבצע את הבדיקה באותו הזמן, חוסכים משאבים וזמן אדם. שעוני דופק אינם משמשים בדרך כלל במבחנים כאלה 13,16. עם זאת, השימוש בם מאפשר לחוקר להשיג מידע נוסף על אם המשתתף הפעיל מאמץ מקסימאלי במבחן. לבסוף, מומלץ לתת למשתתפים לעשות הרצה של כמה מרווחים 1, כך שהם יכולים להכיר את המהירות וכמובן הריצה.
לסיכום, אנו מאמינים כי שילוב של שיטות הנ"ל, בעקבות פרוטוקולים סטנדרטיים, מאפשר להערכת השכיחות ועוצמת זיהומי sth וכושר גופני של ילדים בגיל בית הספר בצליל מדעי, אבל התנהגות ניהול והמחיר סביר.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אין ניגודי האינטרסים הכריזו.
Acknowledgments
המחברים מודים ליישובים במחוז יונאן, רפובליקה העממית של סין וAgboville, חוף שנהב, להשתתפותם במחקרים שתוארו לעיל. אנו חייבים תודה לצוותות השטח המקומיים שסייעו בבדיקה וביצוע של הפרוטוקולים. אנו רוצים להודות במיוחד לעמיתים הבאים מהבריאות השויצרית הטרופי ואישי מכון: איווט Endriss למתן את התמונות המיקרוסקופיות, Hanspeter מארטי וצוות שלו למעבדה ותמיכת סטפני Krauth על סיועה בעת צילומי וידאו. לבסוף, אנו מודים לשני השופטים האלמונים לסדרה של הערות מועילות.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
Note: Materials in this list are generic and can be obtained from different sources. |
|||
| Kato-Katz kit [400 plastic templates with a hole of 6 millimeter (mm) (diameter) in a 1.5 mm thick template; 400 plastic spatula; a 20-m role of nylon screen of 80 mesh size; a 20-m role of hydrophilic cellophane, 34 μm thick.] |
Vestergaard Frandsen | Please note that the glycerin-malachite green solution is not included in this kit but can be bought from any chemical supplier. | |
| Glass funnel [about 8 centimeter (cm) wide and 6 cm deep] | The glass funnel for the Baermann technique should be able to hold about 60 mL of water. The size of the rubber hose and gauze is dependent on the type of glass funnel used. | ||
| Biological microscope | Olympus | CX21LED/CX21 | |
| Centrifuge | Shanghai Medical Instruments Group | 80 - 2T | |
| Pre-recorded signals | Bitworks Design | Team Bleep Test Version 1.3.1 | iPhone application |
| Heart rate monitor | POLAR | FT1 | Watch and transmitter |
References
- Steinmann, P., Utzinger, J., Du, Z. W., Zhou, X. N. Multiparasitism: a neglected reality on global, regional and local scale. Advances in Parasitology. 73, 21-50 (2010).
- Bethony, J., Brooker, S., Albonico, M., Geiger, S., Loukas, A., Diemert, D., Hotez, P. J. The soil-transmitted helminth infections: ascariasis, trichuriasis, and hookworm. Lancet. 367, 1521-1532 (2006).
- Hotez, P. J., Molyneux, D. H., Fenwick, A., Kumaresan, J., Ehrlich Sachs, S., Sachs, J. D., Savioli, L. Control of neglected tropical diseases. New England Journal of Medicine. 357, 1018-1027 (2007).
- Chan, M. S. The global burden of intestinal nematode infections-fifty years on. Parasitology Today. 13, 438-443 (1997).
- Olsen, A., van Lieshout, L., Marti, H., Polderman, T., Polman, K., Steinmann, P., Stothard, R., Thybo, S., Verweij, J. J., Magnussen, P. Strongyloidiases - the most neglected of the neglected tropical diseases. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 103, 967-972 (2009).
- Becker, S. L., Sieto, B., Silue, K. D., Adjossan, L., Kone, S., Hatz, C., Kern, W. V., N'Goran, E. K., Utzinger, J. Diagnosis, clinical features, and self-reported morbidity of Strongyloides stercoralis and hookworm infection in a co-endemic setting. PLoS Neglected Tropical Diseases. 5, e1292 (2011).
- World Health Organization. Action against worms. WHO Newsletter. (11), Geneva. (2008).
- Montresor, A., Crompton, D. W. T., Hall, A., Bundy, D. A. P., Savioli, L. Guidelines for the evaluation of soil-transmitted helminthiasis and schistosomiasis at community level. World Health Organization. , (1998).
- García, L. S., Bruckner, D. A. Diagnostic medical parasitology. , American Society for Microbiology. Washington D.C. (2001).
- Brooker, S. Estimating the global distribution and disease burden of intestinal nematode infection: adding up the numbers - a review. International Journal for Parasitology. 40, 1137-1144 (2010).
- Stephenson, L. S., Latham, M. C., Kinoti, S. N., Kurz, K. M., Brigham, H. Improvements in physical fitness of Kenyan schoolboys infected with hookworm, Trichuris trichiura and Ascaris lumbricoides following a single dose of albendazole. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 84, 277-282 (1990).
- Stephenson, L. S., Latham, M. C., Adams, E. J., Kinoti, S. N., Pertet, A. Physical fitness, growth and appetite of Kenyan school boys with hookworm, Trichuris trichiura and Ascaris lumbricoides infections are improved four months after a single dose of albendazole. Journal of Nutrition. 123, 1036-1046 (1993).
- Bustinduy, A. L., Thomas, C. L., Fiutem, J. J., Parraga, I. M., Mungai, P. L., Muchiri, E. M., Mutuku, F., Kitron, U., King, C. H. Measuring fitness of Kenyan children with polyparasitic infections using the 20-meter shuttle run test as a morbidity metric. PLoS Neglected Tropical Diseases. 5, e1213 (2011).
- Müller, I., Coulibaly, J. T., Fürst, T., Knopp, S., Hattendorf, J., Krauth, S. J., Stete, K., Righetti, A. A., Glinz, D., Yao, A. K., Pühse, U., N'Goran, E. K., Utzinger, J. Effect of schistosomiasis and soil-transmitted helminth infections on physical fitness of school children in Côte d'Ivoire. PLoS Neglected Tropical Diseases. 5, e1239 (2011).
- Yap, P., Du, Z. W., Chen, R., Zhang, L. P., Wu, F. W., Wang, J., Wang, X. Z., Zhou, H., Zhou, X. N., Utzinger, J., Steinmann, P. Soil-transmitted helminth infections and physical fitness in school-aged Bulang children of southwest China: results from a cross-sectional survey. Parasites and Vectors. 5, 50 (2012).
- Léger, L. A., Mercier, D., Gadoury, C., Lambert, J. The multistage 20 metre shuttle run test for aerobic fitness. Journal of Sports Sciences. 6, 93-101 (1988).
- Tomkinson, G. R., Léger, L. A., Olds, T. S., Cazorla, G. Secular trends in the performance of children and adolescents (1980-2000): an analysis of 55 studies of the 20 m shuttle run test in 11 countries. Sports Medicine. 33, 285-300 (2003).
- POLAR Electro, User Manual for POLAR FT1/FT2 in English. , Available from: http://www.polar.fi/en/support/manuals/User_Manual_for_Polar_FT1_FT2_in_English?product_id=26180&category=manuals (2011).
- Mahon, A. D., Marjerrison, A. D., Lee, J. D., Woodruff, M. E., Hanna, L. E. Evaluating the prediction of maximal heart rate in children and adolescents. Research Quarterly for Exercise and Sport. 81, 466-471 (2010).
- Bogitsh, B. J., Carter, C. E., Oeltmann, T. N. Human Parasitology. , third edition, Elsevier Academic Press. (2011).
- Steinmann, P., Zhou, X. N., Du, Z. W., Jiang, J. Y., Wang, L. B., Wang, X. Z., Li, L. H., Marti, H., Utzinger, J. Occurence of Strongyloides stercoralis in Yunnan province, China, and comparison of diagnostic methods. PLoS Neglected Tropical Diseases. 1, e75 (2007).
- Martin, L. K., Beaver, P. C. Evaluation of Kato thick-smear technique for quantitative diagnosis of helminth infections. American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 17, 382-391 (1968).
- Dacombe, R. J., Crampin, A. C., Floyd, S., Randall, A., Ndhlovu, R., Bickle, Q., Fine, P. E. Time delays between patient and laboratory selectively affect accuracy of helminth diagnosis. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 101, 140-145 (2007).
- Knopp, S., Mgeni, A. F., Khamis, I. S., Steinmann, P., Stothard, J. R., Rollinson, D., Marti, H., Utzinger, J. Diagnosis of soil-transmitted helminths in the era of preventive chemotherapy: effect of multiple stool sampling and use of different diagnostic techniques. PloS Neglected Tropical Diseases. 2, e331 (2008).
