Summary
Här beskriver vi en metod för isolering, kultur och manipulering av mus embryonala pankreas. Detta utgör en utmärkt
Abstract
Bukspottkörteln styr vitala funktioner i vår kropp, inklusive produktionen av matsmältningsenzymer och reglering av blodsockret 1. Även under det senaste decenniet många studier har bidragit till en stabil grund för att förstå bukspottskörteln organogenesen, viktiga luckor kvar i vår kunskap om tidig bukspottkörteln bildas 2. En fullständig förståelse av dessa tidiga händelser kommer att ge inblick i utvecklingen av detta organ, men också till obotliga sjukdomar som riktar bukspottkörteln, såsom diabetes eller cancer i bukspottkörteln. Slutligen kommer denna information genererar en plan för att utveckla cell-substitutionsbehandlingar i samband med diabetes.
Under embryogenes, kommer bukspottkörteln från distinkta embryonala utväxter av den dorsala och ventrala framtarmen endoderm vid embryonal dag (E) 9,5 i musembryot 3,4. Båda utväxter evaginate in i den omgivande mesenkym som fast epitell knoppar, som genomgår förökning, förgrening och differentiering för att generera en fullt utvecklad orgel 2,5,6. Nya bevis har föreslagit att tillväxt och differentiering av linjerna pankreatiska cell, inklusive de insulinproducerande β-celler, beroende korrekt vävnads-arkitektur, epitelial ombyggnad och cell positionering inom förgrening bukspottkörteln epitel 7,8. Men hur förgrening morfogenes sker och samordnas med proliferation och differentiering i bukspottkörteln är i stort sett okända. Detta beror delvis på det faktum att dagens kunskap om dessa utvecklingsprocesser har förlitat nästan uteslutande på analys av fasta prover, medan morfogenetiska händelser är mycket dynamiska.
Här rapporterar vi en metod för att dissekera och odling mus embryonala knoppar pankreas ex vivo på rätter glas botten som gör direkt visualisering av utvecklingsländerna bukspottkörteln (figur 1). Denna kulture-systemet är idealiskt utformat för konfokal laserskanning mikroskopi och, i synnerhet, live-cell imaging. Pankreatiska explantat kan framställas inte bara från vildtyp musembryon, utan också från genetiskt modifierade musstammar (t.ex. transgena eller knockout), möjliggör realtid studier av mutanta fenotyper. Dessutom är denna ex vivo odlingssystem värdefullt att studera effekterna av kemiska föreningar på pankreatisk utveckling, gör det möjligt att erhålla kvantitativa data om proliferation och tillväxt, töjning, förgrening, tubulogenesis och differentiering. Sammanfattningsvis ger utveckling av en ex vivo bukspottskörteln explantat odlingsmetod i kombination med hög upplösning avbildning en stark plattform för att observera morfogenetiska och differentiering händelser när de inträffar i utvecklingsländerna musembryo.
Protocol
Protokollet som beskrivs här har anpassats från den teknik som ursprungligen beskrivs i Percival och Slack 9 och optimerad för konfokalmikroskopi.
1. Beläggning av kultur Glass Bottom rätter
Följande steg bör utföras under sterila förhållanden i ett laminärt flöde huva.
- Pankreatiska explantat odlas i 35-mm petriskålar med 20-mm glas mikrobrunn botten (t.ex. Mattek Corporation). Använd en maträtt glasbotten per explantat kultur och för hela den tid som kulturen. På dagen före dissektion och isolering av pankreas knoppar, belägga glas botten mikrobrunnarna med fibronektin.
- Späd steril fibronektin i cellkultur kvalitet vatten till en 50 ng / ml slutlig koncentration och tillsätt en minimal volym av den (~ 150 | il) i 20-mm mikrobrunn i Mattek plattorna täcker hela glasytan (figur 1E). Sätt in skålarnai en 4 ° C kylskåp över natten inkubation.
- På dagen för dissektion, aspirera fibronektin, skölj med mikrobrunnen cellkultur-grade vatten och tillsätt en minimal volym av 150 | il BME (Basal Medium Eagle)-medium kompletterat med Pen / Strep (1%), glutamin (1% ) och 50 pg / ml gentamicin [Dissection medium]. Låt de belagda rätter i laminärt flöde huva tills den ska plattan explantaten.
Om inte alla fibronektinbelagda skålar används, kan de förvaras i upp till 1 vecka vid 4 ° C. Låt inte disken torka, fylla dem med Dissection Medium och placera dem i kylskåpet.
Utöver fibronektin har pankreatiska explantat framgångsrikt odlas på olika substrat, såsom laminin 9, Matrigel 10,11 eller mikroporösa membran 12. På grund av dess effekter på förgrening, använder vi fibronektin 9 som substrat.
2. Dissektion av Dorsal Pancreatic Bud från E11.5 - E12.5 musembryon
- Begränsad-gravida honmöss vid embryonal dag (E) 11,5 eller 12,5 offras och embryon samlas in med hjälp dissekera instrument rengjorts med 70% etanol. Placera den dissekerade livmodern i 10-cm plattor innehållande iskall PBS kompletterad med 50 pg / ml gentamicin.
- Enligt ett stereomikroskop med belysning ovanifrån, separat livmodern i enskilda embryo segment med små sax eller Dumont tång, försiktigt dra bort muskeln i livmodern och ta bort enskilda embryon, som omges av decidua. Använd standardtekniker embryo dissekering 13 att exponera embryon och ta bort gulesäcken och amnion. Avlägsna därefter den övre kroppen hos embryot (ovanför levern) och den bakre regionen. Detta kommer att möjliggöra exponering av inre organ (Figur 1B). Överför mitten kroppen av embryon i 10-cm plattor innehållande iskallt medel BME dissektion.
- NuAnvänd endast genomlysning underifrån för att visualisera och att dissekera den dorsala bukspottskörteln knoppen i stereomikroskop. Försiktigt öppnar mitt kropp av embryot genom att göra en lateral snitt med pincett. Leta magen och mjälten. Den dorsala pankreas knopp är fäst i sidled till den bakre regionen av magen (figur 1C). Använda Dumont pincett, dissekera bort dorsala pankreas knopp från intilliggande strukturer, såsom magen och mjälten, men lämnar en del mesenkym runt epitelet (figur 1D). Med användning av en glas Pasteurpipett, överföra den isolerade knopp till en 35-mm Petri-skål innehållande kallt medium BME dissektion kompletterat med 10% fetalt kalvserum [Odlingsmedium]. Upprepa dessa steg tills alla pankreata isoleras. Om pankreata olika genotyper är isolerade, hålla isär dem med Nunc 4-brunnar.
3. Plätering och kultur av pankreatiska Explantat
Final platning av explantaten utföres i vävnadskultur rummet och / eller i omedelbar närhet till vävnadsodlingsinkubator att minimera fysisk rörelse av odlingarna.
- Under sterila betingelser i ett dragskåp med laminärt flöde ersätta BME Dissection mediet i fibronektinbelagda Mattek skålar med ~ 150 pl BME odlingsmedium förvärmas vid 37 ° C.
- Försiktigt, överföra pankreas explantaten till belagda Mattek rätter (en explantat per maträtt) för långtidsodling med ett glas pasteurpipett. För att säkerställa att sprida under kultur kan mesenkym som omger explantaten vara lätt lurade, om nödvändigt, med en fin nål.
- Försiktigt, placera kulturerna i en vävnadsodling inkubator (37 ° C, 5% CO 2) för några timmar för att låta explantaten fäster mikrobrunnarna glas botten. När de är bundna, fylla upp Mattek rätter med 1,5 ml till 2 ml av BME odlingsmedium förvärmas vid 37 ° C. Dagen för dissekering kallas dag 0.
- Människanipulation av kulturerna pankreas explantation utförs under sterila förhållanden i ett laminärt flöde huva. Den BME odlingsmedium byts varannan dag, om inte experimentella krav diktera olika tidpunkter (t.ex. inkubering av explantat med kemiska medel). Explantaten kan odlas i detta tillstånd under 5 dagar upp till en vecka.
4. Hel-mount immunofluorescensfärgning Protokoll för bukspottkörtel Explantat
Alla steg i immunofluorescens protokollet (från fixering till avbildning) utförs i samma Mattek skålen, vilket ger bättre bilder än en plast botten skålen. Efter fixering behöver pankreas explantation kulturer inte hållas under sterila förhållanden.
- Aspirera BME odlingsmedium och tvätta explantatet gång med 2 ml 1X PBS.
- För explantat fixering ersätta PBS med 2 ml iskall 4% paraformaldehyd (PFA) och placera skålen på is i 20 min. Snurra plattan försiktigt från tid tilltid, men undvik rocking plattformar, eftersom explantatet kan lossna.
- Avlägsna PFA och tvätta explantatet tre gånger med 2 ml 1X PBS under 10 minuter vardera vid rumstemperatur (RT).
- Block med 2 ml blockeringslösning (1X PBS + 0,1% Triton-X + 3% Donkey serum) under åtminstone 30 minuter vid RT.
- Späd primär antikropp i blockerande lösning och tillsätt ~ 150 | il av spädningen direkt i 20-mm mikrobrunn i Mattek plattorna täcker hela explantatet yta för inkubering över natten vid 4 ° C. För att minimera fysiska rörelser, lägg primär antikropp till explantaten direkt i kylrummet (4 ° C). För att förhindra avdunstning, innan tillsats av antikroppen, placera Mattek plattorna i en fuktig kammare.
- Nästa dag avlägsna antikroppen och tvätta tre gånger med 2 ml 1X PBS + 0,1% Tween-20 (PBT) under 30 min vardera vid RT.
- Späd sekundär antikropp i blockeringslösning [enligt tillverkarens rekommendationer, vi använder åsna Alexa Fluor färgämnen sekundär antiorgan på 1:750 spädning] och lägga ~ 150 ul av utspädningen direkt i 20-mm mikrobrunn i Mattek plattor, som täcker hela explantat yta, 1-2 timmars inkubering vid RT i mörker. För nukleär motfärgning inkluderar Hoechst tillsammans med sekundär antikropp utspädning. För att förhindra avdunstning, innan tillsats av antikroppen, placera Mattek plattorna i en fuktig kammare.
- Tvätta tre gånger med 2 ml 1X PBS + 0,1% Tween-20 (PBT) under 30 min vardera vid RT.
- Före montering, tvätta en gång med 1 x PBS för att avlägsna Tween-20. Montera genom att tillsätta en droppe av vattenhaltigt monteringsmedium (med anti-fading) i 20-mm mikrobrunn i Mattek plattorna. Försiktigt, täcka explantatet med ett täckglas. Undvik luftbubblor.
- Explantat på Mattek plattor kan ses i vanlig faskontrastmikroskopi eller konfokalmikroskopi, beroende på mål försöket. För konfokalmikroskopi analys använder vi en Zeiss LSM 700 inverterad inställning. Inrätta lämpliga lasrar för fluoroforer ossed. Välja ett mål som kommer att avbilda önskade området av den pankreatiska explantatet. En 10X vatten-nedsänkning mål är lämplig att hålla hela explantatet på synfältet. En 40x vatten-eller olje-nedsänkning mål är lämpliga att fokusera på specifika regioner i bukspottskörteln explantatet med större upplösning. Explantaten kan vara optiskt sektioneras och sedan förvärvade Z-stackar rekonstruerades i 3D med hjälp av lämplig programvara.
5. Live-cell imaging protokollet pankreatiska Explantat
- Miljökammare setup: använd en miljö hölje och en liten inkubationskammaren [med temperatur och CO 2 kontroll] som sitter på mikroskop scenen. Korrekt odling av embryonala bukspottkörteln kräver en stabil temperatur av 37 ° C och en kontrollerad atmosfär av fuktig 5% CO 2. Lämpliga kammare är tillgängliga från flera leverantörer (T.ex. Zeiss, Nikon, Olympus). Montera värmaren rutan och slå på den ent minst 1 timme före avbildning börjar låta utrustningen värmas upp och utjämna CO 2 halt till 5%.
- För time-lapse avbildning av kulturer bukspottkörteln explantation använder vi en Zeiss LSM 700 inverterat mikroskop. För laser och objektiv val se punkt 4,10.
- Låt pankreas explantatet fäster väl till glas-botten skålen innan realtidsundersökningen. [Vi har vanligtvis realtidsundersökningen börjar dag 1].
I ett dragskåp med laminärt flöde, aspirera och ersätta explantatet mediet med färskt BME odlingsmedium att börja med optimala näringsbetingelser. - Försiktigt överföra explantaten till mikroskop rummet och placera Mattek skålen i inkubationskammaren i provet innehavaren av konfokalmikroskop.
- Förbered målet (t.ex. lägga olja eller vatten-medium enligt valet av nedsänkning mål) och fokusera på det intressanta området i explantatet. Stäng miljökammare ordentligt. För att förhindra avdunstning under time-lapseförvärv med vatten nedsänkning mål, i stället för vatten är det rekommenderat att använda viskösa nedsänkning vätskor som är kommersiellt tillgängliga (t.ex. Zeiss Immersol W).
- Ställ in laser intensitet, Z-stack parametrar förvärv och tidsintervall (se även diskussion för felsökning). Starta experimentet.
- Efter avbildning, export Z stackar och alla punkter tid och analysera dem med lämplig mjukvara (t.ex. ImageJ, Volocity, Imaris, Huygens).
6. Representativa resultat
Dorsala bukspottskörteln knoppar (tillsammans med omgivande mesenkym) dissekerades från musembryon mellan E11.5 och E12.5 och ströks direkt på kultur glas botten rätter (figur 1). Blodkärl är närvarande i mesenkymet som omger epitelet och kan visualiseras genom immunfärgning för endotel markör PECAM 12 (data ej visade). Efter två dagars odling pankreas explantat underwent betydande tillväxt och började organisera sig i grenade epiteliala strukturer, vars kärnor var positiva för bukspottskörteln transkriptionsfaktor, Pdx1 (Figur 2A-C). Den genomsnittliga Z-tjocklek av pankreatiska explantat på dag 3 av odling är 60-80 fim. Ytan och volymen av explantaten kan mätas med användning av lämpliga programvaror (t.ex. Huygens). Morfologi och immunofluorescens analyser visade att bukspottkörteln explantat odlade med detta protokoll rekapituleras in vivo tidigt pankreas differentiering och evenemang morfogenetiska 5,10,11,14 (Figur 2). Pankreas explantat på dag 4 av kultur genomgick typisk "spets och bål" segregering av epitelet 8, visar CPA1 + progenitorceller vid spetsarna på epiteliala grenarna (Figur 2C) och differentierad insulin + och glukagon + celler organiserade som kluster inom stammen (figur 2D ). Dessutom pancreatic epitel i ex vivo kulturerna visade god cytoskelettet organisation och cell polaritet, med apikal lokalisering av F-aktin (figur 2E, i grönt) och B1-integrin på de basala membranen (Figur 2E, i rött).
Att studera bukspottskörteln förgrening i realtid, var embryonala bukspottkörteln explantaten isolerade från tvåfärgad fluorescerande reporter musstam membrane-Tomato/membrane-Green 15 (mT / mg; musstam finns på Jackson Laboratory) (Figur 3). Stillbilder från en time-lapse film av MT / MG pankreas explantat odlas i kultur visas i figur 3. Lokaliseringen av den mT fluorescerande proteinet till membranstrukturer beskrivs cellmorfologi och tillåter upplösning av fina cellulära processer, gör det möjligt att spåra celler ombyggnad och migrering över tiden.
Efter en 12-HR tidsförlopp experiment mT fluorescenssignalen förblir livskraftig och försämratctable, även om dess intensitet reduceras, förmodligen beroende på fotoskador (figur 3). Tekniska lösningar för att undvika eller minska fotoskada och fototoxicitet diskuteras i diskussionsavsnittet.
Figur 1. Schematisk representation av dorsala bukspottkörteln knopp dissektion från E12.5 musembryot. (A) Brightfield bild av E12.5 musembryo. Den övre kroppen hos embryot (ovanför levern) och den bakre regionen avlägsnas för att isolera mitten kroppen (B). Snitt visas med röda streckade linjer. (C) Ytterligare dissektion resulterar i exponering av magsäck och tolvfingertarm region (anges av den streckade rutan). Den dorsala pankreas knopp (se röd prickad cirkel) är vid basen av magen och bredvid mjälten primordium. Den dissekerade dorsala pankreas knopp (D) överförs med en Pasteurpipett i mikrobrunnen av ett glas botten skål med BME odlingsmedium (E, F). Förkortningar: STO (magen), SP (mjälte), dp (dorsala bukspottkörteln BUD), duo (duodenum). Skala barer, 1000 ^ m (A, C).
Figur 2. Hela-mount konfokal immunofluorescens analys av kulturer pankreas explantation. (A) brightfield bilder av bukspottkörteln explantat på dag 1 och dag 2 av ex vivo kultur. Röd streckad linje indikerar initiering av förgrening av epitelet. (B) 3D-rekonstruktion av hela fäste immunfärgning för Pdx1 dag 3 pankreas kultur. Pankreas explantat visade tubuli av Pdx1 + celler som genomgår omfattande förgrening av 48 timmar av kulturer. (C) Hela-mount immunfärgning av dag 3 pankreas explantat med antikroppar mot den basolaterala membranet markören E-cadherin (ECAD), spets stamfader markör Karboxipeptidas 1 (CPA1) och fosfor-histon H3 (phh3). De flesta av mitotiska aktiva phh3 + celler colocalize på de perifera tips med CPA1 + celler. Streckad Lines indikerar tips av grenarna. (D) Hela-mount immunfärgning för markörer endokrina härstamning, insulin (Ins) och glukagon (Gluca) vid dag 3. Gula pilar indikerar kluster av Ins + och Gluca +-celler. Inset (D '), högre förstoring av en av endokrina cellkluster. (E) Hela-mount immunfärgning av dag 3 pankreas explantat för Pdx1, β1-integrin (β1int) och F-aktin (Fact). Mesenkymala celler (asterisker) insprängda bland Pdx1-positiva epitelceller. Bilder som visas i C, D och E är enkel konfokala optiska delar av Z-serien. Skala barer, 100 nm (A, B), 50 pm (CE).
Figur 3. Representant levande cell imaging av ex vivo odlade pankreas explantation. (AD) Ramar från en time-lapse film av en pankreatisk explantat från en mT / MG mus transgena embryot. Tid för avbildning visas i timmar: minuter. Explantatet avbildades med början dag 1. Z-stack bilderförvärvades med en 40X oljeimmersion mål var 12 minut för totalt 15 timmar. Streckade linjer indikerar spets grenar och gränsen mellan epitel och mesenkym. Skala bar, 50 um.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
När pankreatisk öde anges, pankreatiska progenitorceller genomgår omfattande proliferation, differentiering och morfogenes för att slutligen bilda en mogen och fungerande organ 2,4. För närvarande sker hur förgrening rum i bukspottkörteln och hur det är anslutet till stamfader proliferation och differentiering är i stort sett okänd. Pankreas explantation kulturer är ett idealiskt system för att belysa dessa processer ex vivo 5,9,11. Genom att kombinera levande cell imaging med ex vivo explantat av tidiga pankreas knoppar kan få en klar bild av de händelser som äger rum under bukspottkörteln morfogenes i embryot. Denna video artikeln presenteras en enkel metod för att fastställa ex vivo kulturer av embryonala bukspottkörteln på ett glas stöd, vilket gör dem idealiska för hel-mount immunofluorescens och levande bilder.
Talrika exempel på användningen av ex vivo explantat pankreatiska för avbildning cell morfologi, tillväxt och differentiering presenteras här. Viktigare är att dessa exempel visar att embryonal bukspottkörtlar odlade ex vivo användning av detta protokoll efterlikna de tidiga stadierna av in vivo embryonal utveckling pankreas 2,3. Exempelvis initierar förgrening ca 24 timmar efter plätering av E11.5 pankreas, som förväntat in vivo (figur 2A). Medan morfogenes och celldifferentiering i de kulturer liknar den som ses in vivo, är den totala tillväxten av explantaten inte jämförbara och betydligt mindre än vad som syns i det utvecklande embryot. Under de odlingsbetingelser som beskrivs här, pankreatiska explantat slutar växa vid dag 5 och genomgår degenerering efter en vecka (data ej visade). Därför är rapporterade ex vivo odling systemet begränsad och bättre anpassade till undersökning av tidiga aspekter av bukspottkörteln organogenesen.
Vi presenterar här exempel på ex vivo kulturer: epå vi etablerade från vildtyp liksom Mt / mG embryon reporter mus. Användningen av en fluorescerande reporter stam är nödvändig för realtid avbildning, vilket möjliggör visualisering av cellulära och subcellulära strukturer och studier av deras dynamik i en 3D-miljö. Till exempel möjliggör lokalisering av Mt fluorescerande proteinet till membranstrukturer oss att exakt visualisera cellmorfologi och spåra celler ombyggnad och migration över tiden i bukspottkörteln explantaten. En av de vanligaste problem och begränsningar i live-cell imaging experiment är fotoskada som kan uppstå som en följd av upprepad exponering för fluorescens excitation belysning. I allmänhet måste man balansera bildkvaliteten med fototoxicitet i samband med sina egna experimentella inställningar. Till exempel, för att minimera fotoskada en möjlighet är att minska frekvensen av avbildning och ökar tiden mellan konsekutiva ramar eller alternativt att optimera Z stacken förvärvetgenom att minska antalet optiska skivor.
Slutligen är ex vivo odling av embryonala bukspottkörteln ett värdefullt system för föreningar screening kemiska och deras effekter på bukspottkörteln utveckling. Föreningen eller faktorer kan tillsättas direkt till odlingsmediet och utvecklingseffekterna kan lätt bedömas under ett mikroskop. Använda dataanalys programvara kan man få även kvantitativa uppgifter om spridning och tillväxt, töjning, förgrening, tubulogenesis och differentiering. Det är även möjligt att använda transgena eller knockout vävnader att etablera organ kulturer eller utföra snabbare vinst-och förlust-av-funktion experiment i explantat, till exempel genom lentivirus transduktion eller morfolino oligonukleotider, respektive (data ej visade). Alla dessa metoder skulle tillåta realtid studier av muterade fenotyper och ytterligare förståelse för genreglerande nätverk i utvecklingsländerna bukspottkörteln.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Inga intressekonflikter deklareras.
Acknowledgments
Forskning inom den Spagnoli labbet. finansieras av Helmholtz Association, FP7-IRG-2008-ENDOPANC bidrag och ERC-2009-Starta HEPATOPANCREATIC Grant.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Antibodies: Carboxypeptidase E-cadherin F-actin Glucagon Insulin β1-integrin Pdx1 Pdx1 Phospho-Histone H3 |
AbD Serotec Invitrogen Molecular Probes ImmunoStar Millipore Millipore Abcam Hybridoma bank Cell Signalling |
1810-0006 13-1900 A-12373 20076 4011-01 MAB1997 ab47267 F109-D12 9706 |
|
| Basal Medium Eagle (BME) | Sigma | B1522-500ML | Kept in sterile conditions |
| Cell culture grade water | PAA | S15-012 | Kept in sterile conditions |
| Culture dishes (glass-bottomed), 35-mm | MatTek Corporation | P35G-0-20-C | |
| Donkey Serum | Chemicon | S30-100 ml | |
| Fetal calf serum Gold | PAA | A15-151 | Kept in sterile conditions |
| Fibronectin | Invitrogen | 330100-8 | Stock sol. 1 mg/ml in cell culture grade water |
| Gentamicin | Invitrogen | 15750-037 | Kept in sterile conditions |
| Glutamine | Invitrogen | 25030-024 | Kept in sterile conditions |
| 4-well Multidishes | Nunc | 176740 | |
| Microscopes: Inverted Confocal Microscope (LSM 700) Stereomicroscope (Discovery V12) |
Zeiss Zeiss |
Objectives: C-Apochromat 10X / 0.45 W M27 (work. dist. 1.8 mm; imaging depth ~100 mm); C-Apochromat 40X / 1.2 W Corr M27 (work. dist. 0.28 mm; ~imaging depth 50 μm) Transillumination from below and fiber-optic illumination from above |
|
| Paraformaldehyde | Roth | 0335.3 | Stock solution 20% |
| Pasteur Pipet (Glass), 150 mm | VWR | HECH567/1 | |
| Penicillin/Streptomycin | PAA | P11-010 | Kept in sterile conditions |
| Petri dishes, 60 mm | Greiner Bio-One | 628102 | |
| Petri dishes, 35 mm | Greiner Bio-One | 627161 | |
| 1X PBS, pH7.4 | PAA | H15-002 | Kept in sterile conditions |
| Spring Scissors 8 mm blade curved | Fine Science Tools | 15023-10 | |
| Triton-X100 | Roth | 3051.3 | |
| Watchmaker's foreceps Dumont #5 | Roth | K342.1 |
References
- Slack, J. Developmental biology of the pancreas. Development. 121, 1569-1580 (1995).
- Pan, F., Wright, C. Pancreas organogenesis: from bud to plexus to gland. Dev. Dyn. 240, 530-565 (2011).
- Puri, S., Hebrok, M. Cellular Plasticity within the Pancreas- Lessons Learned from Development. Developmental Cell. 18, 342-356 (2010).
- Spagnoli, F. M. From endoderm to pancreas: a multistep journey. Cell. Mol. Life Sci. 64, 2378-2390 (2007).
- Hick, A. -C. Mechanism of primitive duct formation in the pancreas and submandibular glands: a role for SDF-1. BMC Dev. Biol. 9, 1-17 (2009).
- Villasenor, A., Chong, D., Henkemeyer, M., Cleaver, O. Epithelial dynamics of pancreatic branching morphogenesis. Development. 137, 4295-4305 (2010).
- Kesavan, G. Cdc42-Mediated Tubulogenesis Controls Cell Specification. Cell. 139, 791-801 (2009).
- Zhou, Q. A Multipotent Progenitor Domain Guides Pancreatic Organogenesis. Developmental Cell. 13, 103-114 (2007).
- Percival, A., Slack, J. Analysis of pancreatic development using a cell lineage label. Exp. Cell Res. 247, 123-132 (1999).
- Miralles, F., Czernichow, P., Ozaki, K., Itoh, N., Scharfmann, R. Signaling through fibroblast growth factor receptor 2b plays a key role in the development of the exocrine pancreas. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96, 6267-6272 (1999).
- Puri, S., Hebrok, M. Dynamics of embryonic pancreas development using real-time imaging. Dev. Biol. 306, 82-93 (2007).
- Magenheim, J. Blood vessels restrain pancreas branching, differentiation and growth. Development. 138, 4743-4752 (2011).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual. , Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2003).
- Horb, L. D., Slack, J. M. Role of cell division in branching morphogenesis and differentiation of the embryonic pancreas. Int. J. Dev. Biol. 44, 791-796 (2000).
- Muzumdar, M., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. A global double-fluorescent Cre reporter mouse. Genesis. 45, 593-605 (2007).
