Summary
माइक्रोबियल eukaryotes दोनों स्थायी रूप से बर्फ से ढके अंटार्कटिक झीलों में photosynthetically व्युत्पन्न कार्बन और शीर्ष शिकारी प्रजातियों के स्रोत हैं. इस रिपोर्ट एक संवर्धन संस्कृति के के अंटार्कटिक झील, झील Bonney से metabolically बहुमुखी सूक्ष्म eukaryotes अलग दृष्टिकोण का वर्णन है, और अकार्बनिक कार्बन निर्धारण क्षमता का आकलन Ribulose-1 carboxylase ,5-bisphophate है oxygenase गतिविधि (RubisCO) के लिए एक रेडियो आइसोटोप परख का उपयोग कर.
Protocol
1. नमूना अधिग्रहण
- चुनें और नमूना साइट एक दिन पहले पानी स्तंभ नमूने के लिए तैयार है. यह पानी स्तंभ के स्तरीकृत परतों ड्रिलिंग और बर्फ के पिघलने के छेद के कारण अशांति के बाद सुधार करने की अनुमति देगा. जीपीएस द्वारा ड्रिल साइट के स्थान की पहचान.
- पानी करने के लिए स्तंभ का उपयोग करने के लिए, एक पल बर्फ बरमा एक पल 4 इंच उड़ान विस्तार और काटने बिट करने के लिए संलग्न के साथ बर्फ के माध्यम से एक छेद ड्रिलिंग के द्वारा शुरू करते हैं. छेद में ड्रिल की ठंड को रोकने के लिए, तरल पानी में पानी स्तंभ के शीर्ष ऊपर ड्रिलिंग 4-6 लगभग इंच रोकने के द्वारा ड्रिलिंग से बचने की कोशिश.
- ड्रिल छेद 15 से 60 सेमी की एक व्यास से चौड़ी नमूना लेने के लिए पहले की जरूरत होगी. यह एक छेद melter (Hotsy मॉडल) है जो एक तांबे की पाइप के माध्यम से circulates गर्म polyethylene glycol के उपयोग के द्वारा पूरा किया है. छेद पिघलने आम तौर पर 18 घंटे तक लगते हैं.
- पानी के स्तंभ नमूने से पहले, यह सुनिश्चित है कि सभी आवश्यक उपकरण और नमूना सेंटorage वाहिकाओं नमूना साइट पर इकट्ठा कर रहे हैं. Niskin बोतल (5-10 एल क्षमता), गहराई, कैलिब्रेटेड केबल के साथ चरखी, मैसेंजर, प्रत्येक नमूने गहराई के लिए पर्याप्त नमूना बोतलें और नमूना परिवहन के लिए कूलर: नमूनाकरण सामग्री शामिल हैं.
- दिन (~ 5 हूँ) में जल्दी नमूने, के रूप में झील के पानी को छानने नमूने के दिन पर पूरा किया जाना चाहिए शुरू करो. का उपयोग एक Niskin एक calibrated संलग्न पारखी: (6 मीटर, 15 मीटर और 18 मीटर नमूना गहराई, बर्फ छेद piezometric पानी के स्तर से मापा इस अध्ययन के लिए) वांछित गहराई से पानी के नमूने ले लीजिए (1-5 एल) हाथ चरखी. पानी स्तंभ की अशांति को रोकने, गहरी वाले पहले उथले गहराई इकट्ठा.
- कूलर और नमूना साइट से क्षेत्र प्रयोगशाला का उपयोग कर एक स्लेज एक ATV (सभी इलाके वाहन) से जुड़ी परिवहन स्टोर झील नमूने हैं. नमूने या संसाधित किया जाना चाहिए स्थिर है (उदाहरण के लिए: फ़्लैश तरल नाइट्रोजन में फ्रीज) क्षेत्र प्रयोगशाला नमूना लेने के बाद तुरंत.
2. Developmeसंवर्धन संस्कृति की NT के
- संवर्धन संस्कृतियों की खेती के लिए, 47 मिमी 0.45 माइक्रोन रोमकूप आकार polyethersulfone कोमल निस्पंदन (<0.3 एटीएम) का उपयोग फिल्टर पर झील के पानी की 0.5-1 एल ध्यान लगाओ. यदि प्राकृतिक समुदाय की विविधता वांछित है, 47 मिमी 0.45 माइक्रोन रोमकूप आकार के polyethersulfone फिल्टर पर एक दूसरा नमूना फिल्टर और यूकेरियोट वंशावली विविधता के लिए 4. Bielewicz एट अल के अनुसार प्रोटोकॉल का पालन करें.
- 50 एमएल बाँझ बाज़ ~ फ़िल्टर झील के पानी के 20 एमएल फिल्टर के रूप में एक ही नमूना गहराई से एकत्र युक्त ट्यूब फिल्टर स्थानांतरण. धीरे एक बाँझ फिल्टर का उपयोग विंदुक कोशिकाओं से धो लो.
- एक 25 सेमी 2 बाँझ सेल संस्कृति फ्लास्क सेल निलंबन स्थानांतरण. झील प्रत्येक नमूने गहराई से एकत्र के 45 एमएल के लिए संस्कृति मात्रा बढ़ाने के पानी फ़िल्टर जोड़ें. सेट अप प्रत्येक नमूने गहराई के लिए कई प्रतिकृति अगर अलग संस्कृति मीडिया पर enrichments वांछित हैं.
- 50X के साथ संस्कृति बोतल अनुपूरकबोल्ड बेसल मध्यम, BG11 और 2 / एफ: निम्नलिखित संस्कृति मीडिया के एक 1X के अंतिम एकाग्रता terile समाधान. यदि mixotrophic जीवों की खेती, सेट अप दो F/2-supplemented जहाजों की आवश्यकता है और एक बोतल के लिए बाँझ चावल के 2-3 अनाज जोड़ने.
- कम (4 डिग्री सेल्सियस) तापमान और कम से कम 4 हफ्तों के लिए एक तापमान नियंत्रित इनक्यूबेटर अंटार्कटिका में वृद्धि में कम विकिरण (20 μmol -2 मीटर फोटॉनों -1 एस) में संस्कृति बोतल पूर्व सेते हैं लदान के लिए अपने अमेरिकी प्रयोगशाला. यदि आइसोलेट्स वांछित हैं अगर 2 सप्ताह के ऊष्मायन के बाद उचित विकास मीडिया वाले प्लेटों पर, प्लेट 250 संवर्धन संस्कृति की μL.
- अमेरिका, बाँझ 50 एमएल बाज़ ट्यूबों हस्तांतरण संवर्धन संस्कृतियों के लदान के लिए. अनुरोध लदान की आवश्यकता को स्थिर नहीं नहीं है "और" अनुरोध शिपिंग पर शांत रखने के लिए ". जबकि अंटार्कटिका से शिपिंग प्रक्रिया अपेक्षाकृत (2 सप्ताह वाणिज्यिक हवा के द्वारा) तेजी से और अत्यंत विश्वसनीय है, दुराराध्य अंग के नुकसान की संभावना हैisms परिवहन प्रक्रिया के दौरान. इस प्रकार, जांचकर्ताओं एक subsample पहले शिपिंग के लिए तो शिपिंग प्रक्रिया के दौरान कुछ प्रजातियों की है कि नुकसान का आकलन किया जा सकता है बनाए रखने के लिए चाहते हो सकता है.
- अमेरिका में आगमन पर, हस्तांतरण एक 125 एमएल बाँझ Erlenmeyer के फ्लास्क में उचित वृद्धि मीडिया की 45 एमएल में 5 संवर्धन संस्कृति का एमएल एक बाँझ स्पंज के साथ छाया हुआ. संवर्धन संस्कृतियों के तापमान में संस्कृतियों खड़े नियंत्रित पर्यावरण विकास के 4 बजे कक्ष (प्रतिदिन वृद्धि चैंबर, VWR) के ° C/20 μmol फोटॉनों मीटर -2 एस -1 के रूप में बनाए रखा जाना चाहिए. संस्कृतियों ताजा मीडिया हर 30 दिनों के लिए स्थानांतरित किया जाना चाहिए.
3. छनित Enrichments से सेल lysate निकालना
- फिल्टर एक 25 मिमी वाटमान फिल्टर / GF एफ कोमल निर्वात (<10 साई) का उपयोग करने पर 5 संवर्धन संस्कृति की एमएल. फिल्टर -80 पर कई हफ्तों के लिए भंडारित किया जा सकता डिग्री सेल्सियस पहले RubisCO गतिविधि परख करने की क्रिया.
- 4-5 वर्गों में बाँझ स्टील कैंची के साथ फिल्टर और कटौतीहस्तांतरण के एक 2 एमएल पेंच टोपी ट्यूब बाँझ संदंश के साथ टुकड़े 0.1 मिमी व्यास zirconia / सिलिका मोती के साथ पूर्ण रास्ते से एक पांचवां भर.
- 10 मिमी 3 NaHCO, 10 मिमी डीटीटी, 3.3 aminocaproic मिमी: ताजा जोड़ फिल्टर निष्कर्षण बफर की 1.25 एमएल (50 मिमी bicine, 10 मिमी 2 MgCl, 1 मिमी EDTA, 5 मिलीग्राम / एमएल बीएसए, और 0.1% नरमीन X-100 एसिड, 0.7 मिमी benzamidine, 7.8 पीएच) 13 और एक Minibead डिब्बा गति 48 की स्थापना पर 30 के लिए तीन बार का उपयोग कोशिकाओं को बाधित. 1 मिनट बर्फ ऊष्मायन साथ नमूना हीटिंग, वैकल्पिक beadbeating के रोकने के लिए.
- 3000 XG पर 2 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर फ़िल्टर घोल GF / एफ फिल्टर फाइबर और सेल दीवार मलबे का एक ढीला गोली फार्म अपकेंद्रित्र.
- एक 200 μL और बहुत ठंडा एसीटोन 90% की 800 μL में अशेष भाजक ध्यानमग्न करना निकालें. उपाय निष्कर्षण क्लोरोफिल (CHL) 664 एनएम और 647 14 एनएम के तरंग दैर्ध्य मूल्यों पर एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर में. एक 1.5 एमएल microcentrifuge ट्यूब स्थानांतरण सतह पर तैरनेवाला.
- Remaini अपकेंद्रित्र4 में एनजी सतह पर तैरनेवाला ° सी 15,000 XG में 2 मिनट और सतह पर तैरनेवाला एक साफ 1.5 एमएल microcentrifuge ट्यूब (अघुलनशील सेलुलर झिल्लियाँ की गोली और शेष / GF एफ फिल्टर फाइबर से बचने) हस्तांतरण के लिए. यह घुलनशील सेल lysate अब RubisCO carboxylase गतिविधि परख में इस्तेमाल किया जा सकता है.
- Lysate ° -80 में 12.5% ग्लिसरॉल और तरल नाइट्रोजन में फ़्लैश ठंड के बाद इसके अलावा सी में संग्रहीत किया जा सकता है. गतिविधि का नुकसान कई फ्रीज पिघलना / lysate में एंजाइमों की संवेदनशीलता पर निर्भर करता है चक्र के बाद हो सकता है. इसलिए, ताजा बनाम जमे हुए lysate की गतिविधि को बड़े पैमाने पर सेल lysate एक्सट्रेक्शन से पहले परीक्षण किया जाना चाहिए.
4. RubisCO Carboxylase गतिविधि फ़िल्टर परख
- एक 15 एमएल पेंच टोपी microcentrifuge (टोपी की जरूरत नहीं है) ट्यूब है कि बर्फ पर ठंडा है घुलनशील lysate की 125 μL स्थानांतरण. नकारात्मक नियंत्रण के नमूने के लिए, 125 μL घुलनशील lysate 15 एमएल पेंच टोपी microcentrifuge ट्यूब को जोड़ने के लिए, लेकिन जोड़ने (4.7 कदम में) नहीं सब्सट्रेट. चलानासभी नमूनों और नकारात्मक नियंत्रण के लिए प्रतिक्रियाओं का डुप्लिकेट.
- परख ताजा बफर के 10 एमएल (50 मिमी Bicine NaOH, 8.0 पीएच, 50 मिमी 3 NaHCO, 25 मिमी 2 MgCl) और बर्फ पर ठंड तैयार. परख बफर की एक 5 एमएल ट्यूब के नमूने और नकारात्मक नियंत्रण (/ नमूना नियंत्रण प्लस 100 μL अतिरिक्त 100 प्रति μL) के सभी के लिए पर्याप्त अशेष भाजक. बाद में एक धूआं हुड के तहत सभी चरणों का पालन करें.
- 40 μL जोड़ें नः 14 3 सीओ (500 μCi / एमएल) प्रति परख aliquoted बफर बफर एमएल और बर्फ पर बफर रखने के.
- परख 14 सी युक्त बफर के 10 μL निकालें और यह परख बफर के 1 एमएल में कमजोर. मिश्रण inverting के बाद, जैव सुरक्षित द्वितीय एक जगमगाहट शीशी में कॉकटेल गिनती जगमगाहट के 3 एमएल 1:100 पतला मिश्रण की 100 μL जोड़ने. मिश्रण पलटना. जगमगाहट मायने रखता है (LS6500 के Beckman) 18,000 सीपीएम से अधिक परख के साथ जारी रखने से पहले होना चाहिए.
- जब पर्याप्त नहीं 14 3 सीओ परख बफर करने के लिए जोड़ा गया है,3-5 मिनट के लिए 25 डिग्री सेल्सियस और सेते हैं के लिए पूर्व निर्धारित एक सूखी स्नान प्रतिक्रिया ट्यूबों चाल.
- Lysates 100 μL परख बफर जोड़ें और 25 पर 5 मिनट के लिए सेते हैं डिग्री सेल्सियस
- 15 मिमी Ribulose bisphosphate के 20 μL जोड़ें, और नमूने के लिए प्रतिक्रिया को 5-10 मिनट के लिए 25 पर आगे बढ़ने के लिए अनुमति देते हैं डिग्री सेल्सियस
- 100 μL propionic (100%) एसिड (फिशर) जोड़ें करने के लिए प्रतिक्रिया को रोकने के. 2,000 XG में 1 घंटे के लिए अपकेंद्रित्र अनिगमित 14 सी. निकास
- 3 एमएल जैव सुरक्षित द्वितीय कॉकटेल गिनती जगमगाहट जगमगाहट शीशियों के लिए नमूनों की कुल मात्रा स्थानांतरण. एसिड स्थिर अंत उत्पादों की जगमगाहट गिनती (बी विट्टे, आर Tabita निजी संचार) द्वारा सीपीएम निर्धारित करते हैं.
- RubisCO chl एक 14 आधार पर गतिविधि दर की गणना.
5. प्रतिनिधि परिणाम
हम ठंड में अनुकूलित phototrophic और mixotrophic प्रोटिस्टा के जंतु अंटार्कटिक एल में रहने वाले अलग संवर्धन संवर्धन का उपयोगake Bonney. बोल्ड बेसल मध्यम (बी बी एम) 15, F/2-Si समुद्री मीडियम 16, 17 और 18 मध्यम BG11: जीवों के एक अधिक विविधता पर कब्जा करने के लिए, हम तीन वृद्धि मीडिया प्रकार का परीक्षण किया. प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा संवर्धन संस्कृतियों के दृश्य निरीक्षण से पता चला है कि संस्कृतियों phototrophic प्रोटिस्टा के जंतु (सबसे कोशिकाओं में क्लोरोफिल वर्णक की उपस्थिति के संकेत) का प्रभुत्व थे और सेल नमूना गहराई के आधार पर morphologies की एक किस्म है और जिसमें से inoculum लिया गया है शरण संस्कृति में प्रयुक्त मीडिया के प्रकार (1 छवि).
हम carboxylase गतिविधि की अधिकतम दर कार्बन निर्धारण क्षमता के लिए एक प्रॉक्सी के रूप में एंजाइम RubisCO द्वारा उत्प्रेरित मापा. Chl एक बहुतायत phototrophic protist बायोमास (छवि 2) के एक अनुमान के रूप में भी नजर रखी थी. सभी संस्कृतियों का ही शासन / तापमान प्रकाश (अर्थात् 4 ° C/20 μmol -2 मीटर -1) कार्बन, निर्धारण संभावित के तहत खेती के बावजूदऔर phototrophic बायोमास संवर्धन संस्कृतियों के बीच नाटकीय रूप से विविध. अधिकतम RubisCO गतिविधि संवर्धन या तो (4 Enrichments और 6) बी बी एम या BG11 (13 Enrichments और 14) विकास मीडिया में बढ़ती संस्कृतियों में मनाया गया, जबकि संस्कृतियों / एफ 2 मध्यम विकास (19 Enrichments, 21, 23) एक 4 पर समृद्ध प्रदर्शन 34 गुना कम अधिकतम carboxylase की गतिविधियों के लिए. इन मतभेदों को कम / एफ 2 संस्कृतियों में बायोमास का स्तर की वजह से, नहीं थे रूप में carboxylase गतिविधि Chl आधार पर व्यक्त की गई थी. इसके अलावा, RubisCO गतिविधि chl एक एकाग्रता. चित्र 2, इनसेट r = -0.023, p> 0.1 के साथ सहसंबंधी नहीं था. बी बी एम 6 मीटर और 15 मीटर (4 Enrichments और 5) से झील के पानी के साथ inoculated संस्कृतियों उच्चतम chl एक स्तर था, जबकि अन्य सभी संस्कृतियों अपेक्षाकृत कम chl, RubisCO एंजाइम गतिविधि की परवाह किए बिना (छवि 2) का प्रदर्शन किया.
आकृति 1.प्रतिनिधि सूक्ष्म यूकेरियोट संवर्धन संस्कृतियों जो विभिन्न जीवों के विकास के लिए चुना है. संस्कृति की पहचान पैनल के निचले बाएँ में दी गई है. सभी छवियों प्रकाश उत्पन्न micrographs 1000x बढ़ाई तेल विसर्जन का उपयोग प्रतिनिधित्व करते हैं.
चित्रा 2 संभावित कार्बन निर्धारण क्षमता और निष्कर्षण क्लोरोफिल अंटार्कटिक सूक्ष्म यूकेरियोट संवर्धन झील Bonney से अलग और विभिन्न संस्कृति मीडिया पर हो संस्कृतियों में एक स्तर. संस्कृति जानकारी के लिए देखें तालिका 1 इनसेट: Pearson क्लोरोफिल के बीच अंटार्कटिक सूक्ष्म यूकेरियोट संवर्धन संस्कृतियों में एक बहुतायत और कार्बन स्थिरीकरण संभावित सहसंबंध.
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Discussion
हाल ही में आणविक पढ़ाई 3 वातावरण, 19, 20 की सीमा के पार एक एकल celled eukaryotes के उच्च विविधता की सूचना दी है, लेकिन, protist निवास की पूरी रेंज भर में आइसोलेट्स की कमी के कारण इन अलग - अलग प्रजातियों की कार्यात्मक भूमिका खाद्य जाले में बड़े पैमाने पर कर रहे हैं अज्ञात है. इस अध्ययन में, हम तरीके का वर्णन किया है माइक्रोबियल यूकेरियोट अपेक्षाकृत undersampled पर्यावरण, एक स्थायी रूप से बर्फ से ढके अंटार्कटिक झील से चयापचय बहुमुखी प्रतिभा का प्रदर्शन प्रजातियों के लिए समृद्ध है. झील Bonney में विभिन्न नमूने गहराई से समृद्ध संस्कृतियों अंतर कार्बन निर्धारण दर कि मध्यम निर्भर वृद्धि थे प्रदर्शन किया. उदाहरण के लिए, बी बी एम या बड़ी 11 विकास मीडिया बनाम 2 / एफ में समृद्ध संस्कृतियों में कम कार्बन निर्धारण संभावित संभावना protist विविधता और चयापचय क्षमता में अंतर को दर्शाता है. बी बी एम विकास मध्यम हरी शैवाल प्रजातियों (या chlorophytes) के लिए चयन करता है और हमारे संस्कृतियों के लिए एक हरे रंग की काई प्रजातियों में से एक monoculture होना दिखाई देते हैं (छवि1 ए, बी). इन जीवों के लिए मुख्यतः photoautotrophy पर निर्भर करने के लिए जाना जाता है. एक झील Bonney दर्शाती शुद्ध photoautotrophic के चयापचय से अलग है, इसकी एकमात्र ऊर्जा एक स्रोत के रूप में प्रकाश के लिए एक सख्त आवश्यकता है. इसके विपरीत, 2 / एफ विकास के माध्यम से संभावित mixotrophic 12 जीवों सहित समुद्री प्रोटिस्टा के जंतु, का एक व्यापक रेंज के लिए समृद्ध बनाया गया है. जब तक हम पूरी तरह से / एफ 2 संस्कृतियों की विविधता का पता लगाने नहीं था, इन enrichments सूक्ष्म विचारों को स्पष्ट रूप से विभिन्न सेल morphologies की प्रोटिस्टा के जंतु के एक संघ (छवि -1 सी, डी) दिखाते हैं. इस प्रकार, / एफ 2 संस्कृतियों में RubisCO गतिविधि कम वैकल्पिक / कार्बन ऊर्जा अधिग्रहण मोड के उपयोग के कारण हो सकता है. इस भविष्यवाणी के समर्थन में, photoautotrophic अंटार्कटिक आइसोलेट्स की शुद्ध संस्कृतियों की तुलना के साथ अंटार्कटिक कि एक्ज़िबिट mixotrophy है (Dolhi और मॉर्गन चूमो, अप्रकाशित परिणाम) आइसोलेट्स काफी उच्च अधिकतम RubisCO carboxylase दर एक्ज़िबिट. परपोषी enz की आगे की पढ़ाईइन नमूनों yme गतिविधि पूरी तरह से protist संवर्धन संस्कृतियों के चयापचय बहुमुखी प्रतिभा विशेषताएँ मदद और वर्तमान में हमारी प्रयोगशाला में चल रहे हैं. इसके अलावा, इस पत्र में वर्णित शारीरिक डेटा वंशावली और एक बड़े अनुक्रमण करने के लिए दुनिया भर में माइक्रोबियल समुदायों विशेषताएँ प्रयास पृथ्वी Microbiome परियोजना कहा जाता है के भाग के रूप में metagenomic अनुक्रमण जानकारी (के साथ पूरित किया जाएगा http://www.earthmicrobiome.org/~~V ) .
संशोधित फिल्टर इस रिपोर्ट में वर्णित परख भी फ़िल्टर झील के पानी के नमूनों से निकाली सेल lysate के लिए लागू किया जा सकता है. हालांकि, इस परख के नए अनुप्रयोगों के लिए, इष्टतम lysate मात्रा तीन अलग अलग मात्रा परख करने की क्रिया है और जो कि नकारात्मक नियंत्रण के ऊपर कम से कम 3 से 4 बार सीपीएम पैदावार का उपयोग करके निर्धारित किया जाना चाहिए. कार्बन निर्धारण की क्षमता का परपोषी गतिविधियों के enzymatic विश्लेषण के साथ संयोजन के रूप में विश्लेषणप्राकृतिक protist समुदायों में ty protist पौष्टिकता संबंधी क्षमता और जलीय वातावरण में कार्बन साइकिल की भूमिका की एक अधिक विस्तृत दृश्य प्रदान करेगा. वर्तमान में हम इस दृष्टिकोण का आवेदन कर रहे हैं झील Bonney और अन्य अंटार्कटिक झीलों में protist चयापचय बहुमुखी प्रतिभा में अजैव पर्यावरणीय कारकों की भूमिका को समझने के लिए. RubisCO carboxylase फिल्टर परख विधि छोटे पैमाने संवर्धन के रूप में के रूप में अच्छी तरह से संस्कृतियों पूरे झील प्रणाली में संभावित कार्बन निर्धारण और चयापचय बहुमुखी प्रतिभा अध्ययन के लिए एक मूल्यवान उपकरण होगा.
खेती स्वतंत्र आणविक उपकरणों का विकास करने से पहले, प्रोटिस्टा के जंतु परंपरागत खेती द्वारा की पहचान की गई और श्रेणी विभाजन के रूप में अपने सेल आकृति विज्ञान के आधार पर वर्गीकृत. इस प्रकार, संवर्धन और निवास की एक विस्तृत विविधता में रहने वाले प्रोटिस्टा के जंतु के अलगाव का एक लंबा इतिहास है. विस्तृत वर्गीकरण पहचान: 21, 22 में समीक्षा के लिए विशेष रूप से प्रारंभिक जांच के ऐतिहासिक मूल्यवान हैं. जबकि प्रोटिस्टा के जंतु का अलगावसंवर्धन आधारित दृष्टिकोण का उपयोग अंटार्कटिक मीठे पानी वातावरण में अपेक्षाकृत दुर्लभ है, कई अंटार्कटिक समुद्री जल के संवर्धन से समुद्री protist आइसोलेट्स 23-26 उपलब्ध हैं. इसके अलावा, कई संस्कृति संग्रह protist और microalgal आइसोलेट्स (संस्कृति Provasoli Guillard संग्रह, उदाहरण के लिए समर्पित कर रहे हैं https://ncma.bigelow.org/~~V ). भरोसेमंद और सस्ते अनुक्रमण प्रौद्योगिकियों असभ्य protistan दृश्यों के एक बड़े पैमाने पर आनुवंशिक डेटाबेस का उत्पादन किया है. जबकि इन डेटाबेस बहुत जानकारीपूर्ण और सूक्ष्मजीवों के इस महत्वपूर्ण समूह की विविधता और वितरण के बारे में किया गया है, वहाँ protist पारिस्थितिकी और शरीर विज्ञान के बारे में हमारी समझ के साथ अनुक्रम डेटा को जोड़ने में एक खाई है. इस प्रकार, के रूप में ध्रुवीय जलीय निवास undersampled वातावरण में, विशेष रूप से पारंपरिक खेती तकनीक, महत्व और पारिस्थितिक भूमिका को समझने की दिशा में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा जारी रहेगावैश्विक geochemical साइकिल चालन में प्रोटिस्टा के जंतु.
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Disclosures
हम खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Acknowledgments
लेखक जे Priscu, ए Chiuchiolo और मैक्मुर्डो LTER लींनोलोगु टीम संग्रह और अंटार्कटिका में नमूने के संरक्षण में सहायता के लिए धन्यवाद. हम सैन्य सहायता के लिए Ratheon ध्रुवीय सेवाएँ और PHI हेलीकाप्टरों के धन्यवाद. प्रकाश micrographs उन्नत माइक्रोस्कोपी और इमेजिंग सेंटर के लिए मियामी के केंद्र में उत्पन्न किया गया. यह काम ध्रुवीय कार्यक्रम 0631659 और 1056396 अनुदान के NSF कार्यालय द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| BBM | Sigma-Aldrich | B5282 | |
| BG11 | Sigma-Aldrich | C3061 | |
| F/2 | Sigma-Aldrich | G9903 | |
| GF/F filter, 25 mm | Fisher Scientific | 09-874-64 | |
| GF/F filter, 47 mm | Fisher Scientific | 09-874-71 | |
| Polyethersulfone filter, 0.45 μm pore, 47 mm | Pall Corporation | 61854 | |
| Sterile cell culture flask, 25 cm2 | Corning | 430639 | |
| Diurnal growth chamber | VWR international | 35960-076 | |
| Zirconia/silica beads, 0.1 mm diamter | Biospec Products | 11079101z | |
| Mini-Bead beater | Biospec Products | 3110BX | |
| Screw-cap microcentrifuge tube (1.5 μL) | USA Scientific, Inc. | 1415-8700 | |
| NaH14CO3 | ViTrax | VC 194 | Keep in aliquots of 400 μL at -20°C |
| RuBP | Sigma-Aldrich | R0878-100mg | Dissolve in 10 mM Tris-propionic acid (pH 6.5) |
References
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