Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Karakterisering van moleculaire mechanismen van doi: 10.3791/4016 Published: November 28, 2012

Summary

Cataract is de belangrijkste oorzaak van blindheid in de wereld. UV-zonnestralen (UVR) is de belangrijkste risicofactor voor de ontwikkeling van cataract. Een diermodel van ver UVR-B geïnduceerde cataract ontwikkeld. In dit artikel beschrijven we methoden voor onderzoek naar cataract: blootstelling aan UVR, kwantitatieve RT-PCR en immunohistochemie.

Abstract

Cataract is de belangrijkste oorzaak van blindheid in de wereld 1. De World Health Organization definieert cataract als een vertroebeling van de lens van het oog die de overdracht van licht belemmert. Cataract is een multifactoriële aandoening is in verband met diabetes, roken, ultraviolette straling (UVR), alcohol, ioniserende straling, steroïden en hoge bloeddruk. Er is een sterke experimentele 2-4 en epidemiologische bewijzen dat 5,6 UVR cataract veroorzaakt. Wij een diermodel voor UVR B geïnduceerde cataract in zowel verdoofd 7 en niet-verdoofde dieren 8.

De enige remedie voor cataract is een operatie, maar deze behandeling is niet voor iedereen toegankelijk. Er is geschat dat een vertraging van het begin van cataract 10 jaar zou de noodzaak voor cataractchirurgie met 50% 9. Om de incidentie van cataract vertragen, is het nodig om de mechanismen van cataract te begrijpen en vinden effectieve preventie strategies. Onder de mechanismen voor cataract ontwikkeling apoptose speelt een cruciale rol bij de initiatie van cataract bij mensen en dieren 10. Onze focus is onlangs apoptose in de lens als het mechanisme voor de ontwikkeling van cataract 8,11,12. Verwacht wordt dat een beter begrip van het effect van UVR op de apoptose route zal mogelijkheden bieden voor de ontdekking van nieuwe geneesmiddelen te voorkomen cataract.

In dit artikel beschrijven we hoe cataract kan experimenteel geïnduceerd worden door in vivo blootstelling aan UVR-B. Verdere RT-PCR en immunohistochemie worden gepresenteerd als hulpmiddel om de moleculaire mechanismen van UVR-geïnduceerde cataract B bestuderen.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Blootstelling aan ultraviolette straling

  1. 15 min voor de opname verdoven een vrouwelijke Sprague-Dawley rat met een mengsel van 90 mg / kg Ketalar (ketamine) en 10 mg / kg Rompun (xylazine) door intraperitoneale injectie.
  2. Plaats het dier in een rat restrainer en draai de riemen tot immobilisatie van de rat zonder dat een boomstam squeeze 13.
  3. Instill Mydriacyl (tropicamide), 10 mg / ml, in beide ogen van de rat mydriasis induceren.
  4. Plaats het dier, zodat een oog is geplaatst tegen een smalle bundel UVR bij 300 nm 14 met 10 nm breedte op halve hoogte en beschermen de contralaterale oog met zwarte tape.
  5. Expose de rat eenzijdig sub-threshold dosis 1 kJ / m 2 UVR-B bij 300 nm gedurende 15 minuten 15.

2. Ontleding

  1. Na voorafbepaalde na blootstelling interval (1, 5, 24 en 120 uur), offeren zes weken oude ratten (gewicht <200 g) door carbon dioxide stikken of breken van de halswervels.
  2. Ophelderen ogen. Daarna neer te zetten in het oog hoornvlies, posterieure zijde naar boven. Dan stoot een minimale gat door het toepassen van een 27 gauge canule en druk tangentiaal aan de sclera om te voorkomen dat schade aan de lens die zeer dicht bij de sclera. Maak dan gebruik van een paar van oogheelkundige chirurgie schaar om de omtrek snijden net achter de limbus tot het achterste gedeelte van de sclera kan worden getild. Til de lens met een stomp gebogen tang.
  3. Verwijder resten van het corpus ciliare van de lens equator onder een microscoop, waarbij de lens in gebalanceerde zoutoplossing niet meer dan 5-10 min.

3. Kwantitatieve RT-PCR

  1. Plaats een lens in een mix van 350 ul lysis buffer RA1 (NucleoSpin RNA II totaal RNA isolatie kit) en 3,5 ul β-mercaptoethanol in een 2 ml Eppendorf buisje.
  2. Houd de lens in deze mix gedurende 30 min bij kamertemperatuur.
  3. Homogeniseer de lens meteen naald tot enige harde kern van de lens is links van de lens (cortex en capsule van de lens gelyseerd in de lysisbuffer). Verwijder de kern van de mix.
  4. Store monsters onmiddellijk bij -70 ° C.
  5. Ontdooi de monsters en volg het protocol "Totaal RNA zuivering uit gekweekte cellen en weefsels" (NucleoSpin RNA II totaal RNA isolatie kit).
  6. Store RNA monsters bij -70 ° C.
  7. Om voldoende verwijdering van DNA van elk monster te verifiëren, uitvoeren van een PCR onder de volgende voorwaarden (stap 1: 95 ° C gedurende 2 min; stap 2 gedurende 40 cycli: 95 ° C gedurende 20 sec, 55 ° C gedurende 20 seconden, 72 ° C gedurende 20 sec, stap 3: 72 ° C gedurende 7 min) met p53 DNA primers, voorwaarts 5'-ACCCTCTGACCTTTTTCCCA-3 'en reverse 5'-TGCTGGGATCTTAGGCACTC-3' en Taq DNA polymerase (dNTPack) volgens de fabricage protocol. De verwachte PCR product is 243 baseparen.
  8. Voer een 1,5% agarose gelelektroforese om DNA specifieke PCR product van 243 basenparen detecteren. Voor te bereiden1,5% agarose gel in TBE buffer nemen 3,75 g agarose en oplossen in 250 ml TBE buffer. Voeg ethidiumbromide (0,5 mg / ml) 500 pi in 500 ml 1,5% agarose gel oplossing. Verwarm het mengsel in een magnetron en roer om de agarose op te lossen.

Geen van de monsters moet elke DNA specifieke PCR producten onthullen op 1,5% agarose gelelektroforese.

  1. Concentratie van RNA monsters (1 pi) en de verhouding van het monster absorptie bij 260 nm (RNA) en 280 nm (proteïne) in een NanoDrop ND-1000 spectrofotometer. Als de verhouding van RNA tot eiwit RNA monster absorptie van 2,0 of meer dan de RNA monster zuiver is. Als de verhouding van RNA monster absorptie lager dan 2,0, opnieuw RNA zuiveringsstap 3.5.
  2. Neem een zodanige hoeveelheid RNA monster overeenkomend met 1 ug cDNA synthetiseren en volgens het protocol 1 st Strand cDNA synthese kit (1 st Strand cDNA Synthesis Kit voor RT-PCR).
  3. Bewaar cDNA monsters bij -20 ° C(Voor een periode van 1 jaar en bewaren bij -70 ° C).
  4. Run kwantitatieve real-time PCR op ICycler MyiQ Een kleur Real Time PCR detectie systeem. Belasting drievoud op 96-well plaat met 1 pi cDNA monster TaqMan Gene Expression Master Mix, TaqMan Gene Expression Assay voor caspase 3, volgens de instructies vervaardigen. Belasting drievoud op een andere plaat met 96 putjes met 1 pi cDNA monster TaqMan Gene Expression Master Mix, TaqMan Gene Expression Assay voor 18s volgens instructies (TaqMan Gene Expression Assay Protocol) productie. Verdun in serie een fractie van cDNA van drie willekeurig gekozen niet-belichte lenzen. Lopen samen met seriële verdunningen van cDNA monsters in een 96-well plaat.
  5. De standaard curve werkwijze voor kwantificering van de resultaten. Het aantal cycli bij drempel fluorescentie wordt gebruikt als meting MyiQ software. Een standaard kromme waarin aantal cycli bij drempel als functie van relatieve concentratie van kalibrator is established voor de seriële verdunningen in elke plaat. cDNA van drie onbehandelde monsters lens werd gebruikt voor kalibratie. Relateren de drempel aantal cycli voor elk monster voor de standaardcurve om de relatieve concentratie van het monster gemeten cDNA te verkrijgen. Tenslotte krijgen expressie van de doelwitgenen door betreffende de relatieve concentratie van het target cDNA de interne controle 18s cDNA.

4. Immunohistochemische kleuring

  1. Bevestiging
    1. Prepareer het oog in PBS (fosfaat gebufferde zoutoplossing, pH 7,4).
    2. Zet het oog in een buis gevuld met 4% paraformaldehyde (PFA) in ijskoud gedurende 20 minuten. Bereid PFA 4% de dag voordien. Bewaren bij +4 ° C tot gebruik. PFA is vers voor ongeveer een week.
    3. Verwijderen PFA met een micropipet. Vervolgens wassen met ijskoud PBS gedurende 20 minuten.
    4. Zet het oog in 30% sucrose bij +4 ° C gedurende de nacht.
    5. Zet het oog in een beker gevuld met optimale snijtemperatuur (OCT)-medium (Tissue-Tek). Zet het oog op een geschikte plaats voor het snijden.
    6. Freeze in OCT-medium op droog ijs.
    7. Bewaren bij -70 ° C tot gebruik.
  2. Snijden
    1. Plaats de oog voor cryo-snijden in een geschikte vliegtuig.
    2. Snijd drie 5 urn dik mid-sagittale secties van een centraal gedeelte van elke lens. Ontdoen tenminste 6 secties tussen opeenvolgende secties voorkom vlekken dezelfde kernen in verschillende secties.
    3. Zodra een gedeelte is gesneden plaats voorzichtig een dia bovenop. De sectie moet dan vasthouden aan de dia.
    4. Laat de dia's aan de lucht drogen voor gebruik. Dia's kunnen worden opgeslagen bij -20 ° C tot nodig.
  3. Fluorescentie immunohistochemie
    1. Laat monsters bereiken kamertemperatuur (5-10 min).
    2. Teken randen rond de exemplaren met een PAP-pen (Invitrogen).
    3. Laat de rand even drogen (10 min).
    4. Label de objectglaasjes.
    5. Vocht opnemen in 1 × PBS gedurende 15 minuten.
    6. Permeabiliseren in standaardblok oplossing gedurende 30 minuten.
    7. Voeg primaire antilichaam (konijn polyklonaal, gekloofd caspase-3 antilichaam Asp175 9661; Cell Signalling Technology, Inc) verdund 1:3,000 in standaard blok oplossing.
    8. Opslag in een bevochtigde kamer bij +4 ° C gedurende de nacht.
    9. Wassen in PBS door pipetteren (3 x 5 min) of door onderdompeling in een groot bad (> 15 min, 1-2 opent).
    10. Voeg secundair antilichaam (anti konijn secundair antilichaam met een specifieke absorptie / emissie-spectrum) verdund 1:300 in de standaard blok oplossing.
    11. Wassen in PBS door pipetteren (3 x 5 min) of door onderdompeling in een groot bad (> 15 min, 1-2 opent).
    12. Veeg PAP-pen uitstrijkjes.
    13. Bewaar in een bevochtigde kamer bij kamertemperatuur gedurende 3 uur. Vermijd blootstelling aan licht.
    14. Voeg een druppel Vectashield en plaats een dekglas op de dia. Vermijd het maken van bubbels.
    15. Laat uitharden Vectashield (~ 20 min).
    16. Houd secties in het donker.
    17. Alle aanstuurgedeelten worden verwerkt in de afwezigheid van primaire antilichaam.
    18. Zoek de resultaten binnen enkele uren onder een fluorescentiemicroscoop.
    19. Count epitheelcellen 'kernen van de ene kant nucleaire boeg naar de andere kant nucleaire boeg van het objectief. Breng de standaard blauwe filter toe op alle lens epitheel kernen in blauw en een standaard filter dat de uitstoot van het secundaire antilichaam past om te zien de caspase-3 positieve kernen in het groen te zien.
    20. Noteer het aantal van alle kernen lens epitheel en het aantal positieve kernen. Tel de cellen drie keer voor elke sectie.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

De verschillende bronnen van variatie in de metingen werden geraamd met een variantie-analyse en werd vastgesteld dat gezien drie metingen per dier de variantie voor metingen was in de orde van 15% van die van dieren. Aldus gezien gehele lens analyse is niet mogelijk om de precisie. Orthogonale testen opgehelderd een statistisch significant contrast voor caspase-3-bericht tussen de 120 uur latentie-interval ten opzichte van kortere latency intervallen.

In vivo UVR blootstelling induceert caspase-3 expressie.

Figuur 1
Figuur 1. Schema van de stroom van blootstelling aan ultraviolette straling.

Figuur 2
Figuur 2. Evolutie van caspase-3 (casp3) mRNA expressie in de kristallijne lens na in vivo blootstelling aan 1 kJ / m 2 UVR bij 300 nm. Foutbalken zijn 95% betrouwbaarheidsintervallen voor de gemiddelde ratio van casp3 mRNA/18s rRNA tussen blootgesteld lens en contralaterale niet blootgesteld lens. De middelen, boven en onder de zwarte lijn op een rel. unit vertegenwoordigen respectievelijk omhoog en omlaag-regulatie van de gen casp3.

Figuur 3
Figuur 3. Caspase-3 expressie (A) in een blootgesteld lens, 24 uur na blootstelling en (B) in een niet-belichte lens. Pijlen geven gelabelde cellen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Dit artikel beschrijft de methoden die het mogelijk maken het bestuderen van moleculaire gebeurtenissen die plaatsvinden tijdens UVR-B geïnduceerde cataract.

Aangezien dat de meeste informatie in vivo UVR geïnduceerde cataract werd verkregen uit proeven op albino Sprague-Dawley ratten 7, 16, 17, 18, ​​19, besloten we de albino Sprague-Dawley rat gebruikt in de huidige studie. Leeftijd van de ratten was zes weken oud. Het geslacht werd gekozen tot vrouwelijke, omdat, in tegenstelling tot mannen, vrouwen hebben minder allergeen urine. Bovendien is er geen verschil in geslacht met betrekking tot ernst van UVR geïnduceerde cataract 20.

Alle dieren werden gehouden en behandeld volgens de Arvo verklaring voor het gebruik van dieren in Oogheelkundige en Vision Research. Ethische toestemming werd verkregen van de Uppsala dierproeven ethische commissie, het protocol nummer C 29/10. Ratten bij een normale fokker (Taconic, Denemarken).

tent "> A smalbandige UVR bron is gekozen om de UVR te spectraal goed gedefinieerd. maximale gevoeligheid van de rat lens UVR-B is ongeveer 300 nm. dosis 1 kJ / m 2 werd gekozen als onder de drempeldosis 15. de belichtingstijd van 15 min werd geselecteerd om maximale schade aan de lens 21 induceren. de dosis blootstelling aan UVR-B en post-blootstellingstijd kan variëren afhankelijk van het experimentele design.

Gekoppelde orgel oog heeft zijn voordeel in termen van statistiek en ethiek in het gebruik van dieren in het onderzoek. Eenzijdige belichting van het oog kan opzij als belicht en andere kant als controle in een dier dus vermindert aantal dieren helft in vergelijking met gepaarde orgaan.

In dit protocol we anesthesie als een werkwijze voor immobilisatie dier. Echter andere alternatief kunnen rat restrainer 13 die we gemaakt in ons laboratorium worden gebruikt voor immobilisatie van verdoofde dieren. Rats moeten worden geconditioneerd om de rat weerhouder voorafgaande toestemming van de UV-blootstelling. Dit apparaat maakt het mogelijk goed onder controle herhaalde blootstelling wanneer de anesthesie wordt niet aangeraden vanwege de bijwerkingen. Hier gebruikten we de rat restrainer als positionering en vasthoudinrichting voor verdoofde dieren.

De rat weerhouder is gemaakt van hout en is verkrijgbaar in diverse artikelen in ons laboratorium. Wij reinigen onze straatverbod apparaat voordat elk dier is gepositioneerd op. Houten blokken, dakgoten en houten constructies worden gebruikt als verrijking in de rat kooien. Deze verrijking is goedgekeurd door Uppsala Dierproeven ethische commissie en Federatie van Europese Proefdierkunde Associations (FELASA).

De lens moet worden ontleed in BSS in korte tijd (5-10 min). Deze beperking maakt het mogelijk het objectief te blijven helder en transparant.

qRT-PCR

De tijd van 30 min voor het houden van de lens in de RA1 lysis buffer endoorgedreven het lenskapsel en cortex verstoren. De lens kern blijft moeilijk binnen 30 minuten. De lens kern of organel zone wordt beschouwd als een niet-actieve transcriptie van de lens. Derhalve wordt de kern uit het monster teneinde de signaal / ruis verhouding te verhogen mRNA expressie.

De DNA specifieke primer gebruikt voor RNA zuiverheid (geen DNA) controle werd willekeurig gekozen p53-primer. Elke optredend gecodeerde sequenties van DNA van bijzondere dierlijke genoom kunnen worden gekozen. Beide lenzen werden geanalyseerd met PCR voor 10 dieren per na blootstelling interval en voor elke lens werd caspase-3, bepaald RNA in drie onafhankelijke metingen.

RT-PCR kan het meten van de mRNA van belang. De reverse transcriptase omgezet mRNA in complementair DNA wordt vervolgens geamplificeerd door PCR. Metingen werden gekwantificeerd met de standaardcurve verkregen door amplificeren serieel verdunde monsters van het cDNA van interest. De voordelen van toepassing van een standaardcurve zijn dat de standaardkromme een betrouwbare manier om de onzekerheid van de concentratie berekenen bepaalt, en dat de standaard curve geeft kwantitatieve metingen van het mRNA van belang. Alternatief zou het relatieve gehalte van het mRNA van belang worden bepaald door direct vergelijken van het aantal cycli nodig om een ​​gestandaardiseerde fluorescentiesignaal de Ct-methode te verkrijgen. Het grootste nadeel van de ijkcurve is dat het gebruik van meer dan de genomische producten Ct methode vereist.

Immunohistochemische kleuring

Immunohistochemie werd gebruikt om ruimtelijke verdeling van de actieve caspase-3 in lensepitheelcellen bestuderen.

De ogen werden direct bevroren tot -70 ° C voor alle lopende biochemie stoppen. De ogen werden vervolgens bij dezelfde temperatuur bewaring.

Immunohistochemie is geassocieerd met twee pro algemeneblemen, de specificiteit van het primaire antilichaam en niet-specifieke binding van het antilichaam. Het antilichaam moet worden verkregen van een goed gecontroleerde bron, waardoor het garanderen van de specificiteit. Indien mogelijk moet weefsel dat het epitoop worden gemerkt als positieve controle. Om niet-specifieke kleuring outrule, indien mogelijk, de epitoop worden geblokkeerd voordat kleuring met het specifieke antilichaam, negatieve controle. Verder aspecifieke kleuring kan worden geminimaliseerd door het instellen van de optimale antilichaamconcentratie en reactietijd. Door kleuren zowel weefsel blootgesteld aan UVR en weefsel niet blootgesteld aan UVR is mogelijk de UVR geïnduceerde epitoop hier caspase-3. Om het tellen van cellen die caspapse-3 signaal te vergemakkelijken de fluorescentie microscoop beeld werd digitaal opgenomen. Met het oog op variatie van achtergrondgeluiden te minimaliseren, hebben we vaste instellingen die worden gebruikt voor alle microscoop foto's.

De intensiteit van signaal achtergrond fluorescentie varieert een continu schaal. Dus een drempel voor aanzienlijke kleuring moet worden ingesteld. Echter, de gemiddelde fluorescentie ruimtelijk variëren binnen de sectie waargenomen waardoor het moeilijk om een ​​absolute drempel significant kleuring gebruiken. Daarom, meestal de uitspraak van specifieke kleuring is afhankelijk van een ervaren waarnemer en de absolute uitkomst van specifieke kleuring is afhankelijk van het advies van de ervaren waarnemer, maar in overeenstemming zal zijn voor die waarnemer. Om deze reden, werd slechts een ervaren waarnemer gebruikt. Om signaal veroorzaakt door de experimentele variabele blootstelling aan UVR verbetering ten opzichte van ruis, is de foto van elke sectie drie keer geteld.

Indien mogelijk, immunohistochemie worden geverifieerd door western blot hetgeen bevestigt het bestaan ​​van epitopen met de verwachte moleculaire grootte.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Geen belangenconflicten verklaard.

Acknowledgments

Dit werk werd ondersteund door het Karolinska Institutet KID-financiering, Zweeds Instituut voor Stralingsbescherming, Karolinska Institutet Eye Research Foundation, Gun och Bertil Stohnes Stiftelse, St. Erik's Eye Hospital Research Foundation, Ögonfonden, Konung Gustav V: s och Drottning Viktorias Frimurarstiftelse.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Ketalar Pfizer 150086 50 mg/ml
Rompun Bayer 022545 20 mg/ml
Oculentum Simplex Apoteket, Sweden 336164 5 g
Mydriacyl Alcon 00352 10 mg/ml
Balanced salt solution Alcon 0007950055
3.5 ul β-mercaptoethanol
NucleoSpin RNA II total RNA isolation kit Macherey-Nagel GmbH&Co, Duren, Germany 740955.50
p53 DNA specific primers biomers.net GmbH Custom made
Taq DNA polymerase, dNTPack Roche 04 728 866 001
Agarose Sigma A5093
Ethidium bromide solution 0.5 mg/ml Sigma E1385
Nano-Drop ND-1000 spectrophotometer NanoDrop Products
1st Strand cDNA synthesis kit for RT-PCR (AMV) Roche Diagnostics GmbH 11 483 188 001
iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR detection system Bio-Rad Laboratories
96-well plate Sarstedt 72.1979.202
TaqMan Gene Expression Master Mix Applied Biosystems 4369016
TaqMan Gene Expression Assay for caspase 3 Applied Biosystems Rn00563902_m1
TaqMan Gene Expression Assay for 18s Applied Biosystems Hs99999901_s1
MyiQ software Bio-Rad Laboratories
Cleaved caspase-3 (Asp175) Cell signaling technology 9661
Anti rabbit IgG Abcam Ab6798
Sucrose Sigma Aldrich 84097
Vectashield Vector Laboratories
Universal Microscope Axioplan 2 Imaging Carl Zeiss
Paraformaldehyde Sigma Aldrich 441244
TBE buffer 10x Promega V4251

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Brian, G., Taylor, H. R. Cataract blindness: challenge for the 21 st century. Bulletin of the World Health Organization. 79, 249-256 (2001).
  2. Jose, J. G., Pitts, D. G. Wavelength dependency of cataracts in albino mice following chronic exposure. Experimental Eye Research. 41, 545-563 (1985).
  3. Söderberg, P. G. Acute cataract in the rat after exposure to radiation in the 300 nm wavelength region. A study of the macro-, micro- and ultrastructure. Acta Ophthalmol. (Copenh). 66, 141-152 (1988).
  4. Meyer, L., Dong, X., Wegener, A., Söderberg, P. G. Dose dependent cataractogenesis and Maximum Tolerable Dose (MTD 2.3:16) for UVR - B induced cataract in C57BL/6J mice. Experimental Eye Research. 86, 282-289 (2008).
  5. McCarty, C., et al. Assessment of lifetime ocular exposure to UV-B: the Melbourne visual impairment project. Developments in Ophthalmology. 27, 9-13 (1997).
  6. Sasaki, H., et al. Localization of cortical cataract in subjects of diverse races and latitude. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 4210-4214 (2003).
  7. Söderberg, P. G. Experimental cataract induced by ultraviolet radiation. Acta Ophthalmol. (Copenh. 68, Suppl 196. 1-77 (1990).
  8. Galichanin, K., Löfgren, S., Bergmanson, J., Söderberg, P. Evolution of damage in the lens after in vivo close to threshold exposure to UV-B radiation: cytomorphological study of apoptosis. Exp. Eye Res. 91, 369-377 (2010).
  9. McCarty, C. A., Taylor, H. R. A review of the epidemiologic evidence linking ultraviolet radiation and cataracts. Dev. Ophthalmol. 35, 21-31 (2002).
  10. Li, W. C., et al. Lens epithelial cell apoptosis appears to be a common cellular basis for non-congenital cataract development in humans and animals. Journal of Cell Biology. 130, 169-181 (1995).
  11. Michael, R., Vrensen, G., van Marle, J., Gan, L., Söderberg, P. G. Apoptosis in the rat lens after in vivo threshold dose ultraviolet irradiation. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 13, 2681-2687 (1998).
  12. Ayala, M. N., Strid, H., Jacobsson, U., Söderberg, P. G. p53 Expression and Apoptosis In The Lens After Ultraviolet Radiation Exposure. Investigative ophthalmology of visual science. 48, 4187-4191 (2007).
  13. Galichanin, K., Wang, J., Lofgren, S., Soderberg, P. A new universal rat restrainer for ophthalmic research. Acta Ophthalmol. 89, (1), (2011).
  14. Ayala, M. N., Michael, R., Söderberg, P. G. In vivo cataract after repeated exposure to ultraviolet radiation. Experimental Eye Research. 70, 451-456 (2000).
  15. Söderberg, P. G., et al. Toxicity of ultraviolet radiation exposure to the lens expressed by maximum tolerable dose (MTD). Developments in Ophthalmology. 35, 70-75 (2002).
  16. Michael, R. Development and repair of cataract induced by ultraviolet radiation. Ophthalmic Research. 32, 1-45 (2000).
  17. Löfgren, S. Cataract from ultraviolet radiation. Karolinska Institutet. Stockholm. (2001).
  18. Ayala, M. N. Influence of exposure patterns and oxidation in UVR induced Cataract. Karolinska Institutet. Stockholm. (2005).
  19. Dong, X. Safety limit estimation for cataract induced by ultraviolet radiation. Karolinska Institutet. Stockholm. (2005).
  20. Löfgren, S., Michael, R., Söderberg, P. G. Impact of age and sex in ultraviolet radiation cataract in the rat. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 44, 1629-1633 (2003).
  21. Ayala, M. N., Michael, R., Söderberg, P. G. Influence of exposure time for UV radiation-induced cataract. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 41, 3539-3543 (2000).
Karakterisering van moleculaire mechanismen van<em&gt; In vivo</em&gt; UVR Induced Cataract
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Galichanin, K., Talebizadeh, N., Söderberg, P. Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract. J. Vis. Exp. (69), e4016, doi:10.3791/4016 (2012).More

Galichanin, K., Talebizadeh, N., Söderberg, P. Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract. J. Vis. Exp. (69), e4016, doi:10.3791/4016 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter