Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Basisk doi: 10.3791/4019 Published: June 10, 2012

Summary

Enkelheten att bevara och sprida nematoden

Abstract

Forskning om den molekylära och utvecklingsbiologi av elegans rundmasken Caenorhabditis inleddes i början av sjuttiotalet av Sydney Brenner och har sedan dess använts i stor utsträckning som en modell organism 1. C. elegans har viktiga egenskaper såsom enkelhet, öppenhet och korta livscykel som har gjort den till en lämplig experimentellt system för grundläggande biologiska studier under många år 2. Upptäckter i denna nematod har breda konsekvenser eftersom många cellulära och molekylära processer som styr djuret utveckling är evolutionärt konserverad 3.

C. elegans livscykel går igenom sin linda och fyra larvstadier innan djuren når vuxen ålder. Utvecklingen kan ta 2 till 4 dagar beroende på temperaturen. I vart och ett av stegen flera karakteristiska egenskaper kan observeras. Kunskapen om dess fullständiga cellsläktträd 4,5 tillsammans med den djupa annotation av sin arvsmassa göra denna nematod i en stor modell i så skilda områden som neurobiologi 6, åldrande 7,8, stamcellsbiologi 9 och könscellerna biologi 10.

En ytterligare funktion som gör C. elegans en attraktiv modell för att arbeta med är möjligheten att få populationer av maskar synkroniserade i ett visst skede genom en relativt enkel protokoll. Den lätthet att bevara och sprida denna nematod till möjligheten av synkronisering ger ett kraftfullt verktyg för att få stora mängder maskar, som kan användas för en mängd olika små eller hög kapacitet experiment som RNAi skärmar, microarrays, massiv sekvensering, immunoblotting eller hybridisering in situ, bland andra.

På grund av sin öppenhet, C. elegans strukturer kan särskiljas under mikroskop med användning av Differential mikroskopi interferenskontrast, även känd som Nomarski microskopieras. Användningen av en fluorescerande DNA-bindemedel, DAPI (4 ',6-diamidino-2-fenylindol), till exempel, kan leda till specifik identifiering och lokalisering av enskilda celler, såväl som subcellulära strukturer och defekter associerade med dem.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Protokoll A: Odling av Worms för blekning 11

Stora populationer av C. elegans kan erhållas genom odling av dem antingen i flytande medier eller på fasta medier i plattorna. De är vanligtvis odlas på fast NGM (nematodtillväxt medier) och matas med E. coli-bakterier, som tillsätts till plattorna antingen levande eller döda (dödas av UV-12, genom värme 13 eller genom kall 14). Det vanligaste förfarandet använder levande OP50 E. coli, som är defekt i syntesen av uracil och kan inte växa över in i ett tjockt skikt, som skulle fördunkla maskarna.

  1. Blanda 3 g NaCl, 17 g agar och 2,5 g pepton och tillsätt 975 ml H 2 O Autoklavera under 50 min.
  2. Kyl kolven till 55 ° C.
  3. Tillsätt 1 ml 1 M CaCl2, 1 ml av 5 mg / ml kolesterol i etanol, 1 ml 1 M MgSO 4 och 25 ml av 1 M KPO 4-buffert (alla av dem utan kolesterol som tidigare autoclaved).
  4. Med sterila förfaranden dosera NGM lösningen i petriskålar, fyll plåtar upp till 2/3 av deras volym.
  5. Efter torkningen är det tillrådligt att låta plattorna vid rumstemperatur under 2-3 dagar före användning för detektering av föroreningar. Förbered en strimma av OP50 E. coli från en glycerol-lager (OP50 kan erhållas från Caenorhabditis Genetics Center).
  6. Välj en koloni och växa i LB natten vid 37 ° C under omrörning.
  7. Tillåta överskott av fukt att förångas från plattorna genom att avlägsna locket i det laminära flödet och tillsätt OP50 till centrum av plattorna med en steril Pasteur-pipett.
  8. Låt OP50 E. coli gräsmatta att växa över natten vid rumstemperatur eller vid 37 ° C under 8 timmar.
  9. Tillsätt den önskade mängden av maskar till plattorna (om inkuberades vid 37 ° C plattorna bör kyldes vid rumstemperatur innan användning).

TIPS:

  • Hällningen av samma mängd materiali plattorna med en pipett eller en pumpdispenser säkerställer samma volym av agar till plattorna och underlättar förskjutning av plattan utan att behöva omfördela stereomikroskop.
  • Plattor (både seedade och oympade med bakterier) kan användas flera veckor efter förberedd vid förvaring i behållare vid rumstemperatur eller 4 ° C.
  • Undvika utstrykning av bakterier till kanten av plattan. Om gräsmattan sträcker sig till kanterna av plattan maskarna kan krypa upp sidorna, torka ut och dö.
  • Maskar lever längre om bakterierna ympats på plattorna är redan döda 15.

2. Protokoll B: Behandling med alkalisk hypoklorit-lösning ("Bleaching") 11

Den blekning Tekniken används för att synkronisera C. elegans kulturer vid första larvstadiet (L1). Principen för metoden ligger i det faktum att maskar är känsliga för att bleka medan äggskalet skyddar embryos från den. Efter behandling med alkalisk hypoklorit-lösning, är embryon inkuberas i flytande medier utan mat, vilket gör att kläckningen, men förhindrar ytterligare utveckling.

  1. Låt maskarna att växa fram vuxna stadium.
  2. Återskapa gravida vuxna i 15 ml rör genom att tvätta plattorna med M9 buffert.
  3. Pelletvärmare maskar genom centrifugering under 2 minuter vid 400xg (~ 1500 rpm på en standardtabell centrifug) vid rumstemperatur och häll bort supematant.
  4. Utför 1-3 tvättar tills bufferten verkar klara av bakterier.
  5. Lägg till önskad blekningslösningen (Tabell I) och skaka några minuter (förstörelse av den vuxna vävnaden bör övervakas under dissektionsmikroskop och reaktionen stoppas när spår av vuxna är fortfarande synliga, som normalt tar mellan 3 och 9 minuter beroende på flera frågor, såsom volymen masken pellet, som nämns i diskussionen) (Fig. 3).
  6. Stoppa reaktionen genom tillsats av M9-buffer för att fylla röret.
  7. Snabbt Centrifug (eftersom behandling kan fortfarande vara aktiv) i 1 minut vid 400 xg och kasta supernatanten.
  8. Tvätta pelleten ytterligare tre gånger genom att fylla röret med M9-buffert.
  9. Tillsätt 1 ml M9-buffert till pelleten, eller placera äggen oympade NGM plattor och inkubera vid den önskade temperaturen under försiktig omrörning. Lämplig luftning bör ges (Fig. 4).

TIPS:

  • Det finns olika blekmedel lösningar välj det som fungerar bättre i dina händer (tabell 1, figur 1).
  • Ägg som redan som på plattorna kan återvinnas genom skrotning ytan av agar med ett mjukt material, såsom en del av en X-ray film.
  • Alltför många rester av vuxna djur kan försämra synkronisering som de utgör en livsmedelsförsörjning för den nyligen kläckta larverna.
  • Högre temperatur förkortar något på utvecklingen vilket är obekvämt if alla mask hoppar synkronisering eftersom skillnaden i utveckling mellan synkroniserade och osynkroniserad maskar kommer att bli större vid högre temperaturer.
  • Blekning lösning måste ske strax före dess användning. Dessutom förlorar bleka potens efter att den har varit öppen ett tag, delvis på grund av dess ljuskänslighet. Vi föreslår att alikvot varje ny flaska i små bruna flaskor för att förhindra sådan förlust och minska exponeringen för ljus.

3. Protokoll C: Worm Plating

  1. Vänta mellan 12 och 24 timmar (tid för att slutföra embryonal utveckling beror på temperaturen) efter blekning utfördes och återhämta maskar genom centrifugering (2 minuter vid 400 xg).
  2. Släng supernatanten utsäde maskar på de obligatoriska plattorna och låt återstående vätskan torka.
  3. Placera plattorna vid den temperatur som krävs.

TIPS:

  • L1-larver i M9-buffert kan hållas vid 15 ° C gungning åtminstone en vecka wiDC-layout kan uppenbara förändringar.
  • vara försiktig vid beräkningen av maskarna du frö eftersom alltför många kan uttömma maten snabbare än väntat och förstöra experimentet. Cirka 500 L1 kan nå vuxen ålder i en 55 mm platta utan att få slut på mat.

4. Protokoll D: C. elegans Observation

D.1 Nomarski observation

Differentiell interferens trastmikroskopi är en optisk mikroskopi belysning som används för att förbättra kontrasten i ofärgade genomskinliga prover. Ordet Nomarski hänvisar till den använda prismat, uppkallad efter hans uppfinnare. Genom att observera djuren levande har vi möjlighet att undersöka fysiologi djuret med de enda förändringar som härrör från immobilisering. Dessutom, eftersom ingen fixativ tillsätts kan fluorescerande markörer observeras in vivo. Detta faktum och möjligheten att fusera fluorescerande markörer till en gen av intresse att göra det möjligt att följa förfarandena i vikthich proteinet av studie kan vara inblandade. Genom att använda den teknik som beskrivs i detta protokoll, kan inte bara levande maskar observeras, men de kan också återvinnas och pläteras igen.

Agar pad beredning (strax före användning):

  1. Framställ agaros 2% i vatten och smälta. Hålla smältes vid 65 ° C.
  2. Placera två objektglas med en bit tejp på dem på båda sidor om en tredje, rent objektglas.
  3. Med hjälp av en Pasteur-pipett ställe en droppe agar på ren yta.
  4. Täcka agar med ett rent objektglas placerades på toppen av de tre bilderna vinkelrätt.
  5. Tryck försiktigt så agar drop plattas till tjockleken på bandet distanser.
  6. När agar stelnar försiktigt dra ut tejpade bilder och separera de två återstående bilderna genom att skjuta en i förhållande till den andra.

Montering levande djur

  1. Placera en droppe (10 pl) av levamisol 1 mM eller natriumazid 10-30 mm på than mitten av dynan.
  2. Överför djur till droppen med en mask val.
  3. Placera försiktigt ett täckglas över djuren och fixa det på båda sidor med något nagellack eller silikon.

TIPS:

  • Hålla alikvoter av agaros 2% vid 4 ° C.
  • Smält agaros kan hållas vid 65 ° C under minst en dag.
  • Obs: Levamisol är en nikotinreceptoragonist som framkallar spastisk muskelförlamning 16.
  • Var försiktig, är natriumazid extremt giftig!

D.2 Etanol fixering och DAPI färgning

Protokollet som beskrivs här är ett snabbt sätt att färga maskar med DAPI, men på grund av dissecation av masken vissa strukturer kan presentera några ändringar. Det finns flera andra metoder för att åtgärda maskar tidigare för att DAPI färgning som fixering vid Carnoy lösning eller formaldehyd som bevarar bättre integritet masken 17.

Etanol fixering (modifierad från 18)

  1. Ställe ~ 10 | il av M9-buffert (eller vatten) på ett objektglas.
  2. Med hjälp av en mask pick flytta försiktigt 10-25 maskar till droppen.
  3. Använda filterpapper eller en mikro-pipett bort så mycket M9 buffert som möjligt utan att ta bort maskar eller låta dem torra.
  4. Lägg ~ 10 ^ 90% etanol och låt den torka.
  5. Upprepa steg 4 en eller två gånger.

4 ',6-diamidino-2-fenylindol (DAPI) färgning

  1. Blanda DAPI med de önskade monteringsmedel till en slutlig koncentration av 2 ng / | il.
  2. När etanolen har avdunstat helt, tillsätt 7 pl av DAPI: montering media blandning.
  3. Placera ett täckglas och fixa det på båda sidor med något nagellack eller silikon. Diabilder kommer att vara redo för observation ca 5 minuter efter tillsatsen av DAPI.

TIPS:

  • Fästet MedIA innehåller glycerol, så en liten mängd räcker för att täcka hela beredningen.
  • Det finns en mängd olika kommersiella montering media (Fluoromount eller förlänga, till exempel), deras kvalitet och pris beror på hur länge du vill spara ditt prov.
  • Var försiktig, är DAPI en känd mutagen som binder starkt till AT rika regioner i DNA.

Recept

Nematodtillväxt Medium (NGM)

1,7% (vikt / volym) agar
50 mM NaCl
0,25% (vikt / volym) pepton
1 mM CaCl2
5 | ig / ml kolesterol
25 mM KPO4
1 mM MgSO 4

M9-buffert

22 mM KH 2 PO 4
42 mM Na 2 HPO 4
86 mM NaCl
1 mM MgSO 4

Blekningslösningar testade

recept # 1 recept # 2 Receptet # 3 Receptet # 4 recept # 5
vatten (ml) 2,75 3,5 0,5 0,5 1,5
natriumhydroxid (ml) 1,25 (1M) 0,5 (5M) 2,5 (1M) 2,5 (2M) 2,5 (1M)
natriumhypoklorit på ~ 4% (ml) 1 1 1 2 1
totalt (ml) 5 5 4 5 5

Tabell I. Olika blekningslösningen recept testas för denna artikel. Recept # 3 och # 4 är 2x, och bör läggas till i samma volym M9. Recept för # 1, # 2 och # 5 har tidigare rapporterats 2, 11, 19. Slutliga koncentrationer: # 1 NaOH 0,25 M, ~ för NaOCl 0,8% , # 2 NaOH 0,5, NaOCl ~ 0,8%, # 3 NaOH 0.625M, NaOCl ~ 1%, # 4 NaOH 1 M, NaOCl ~ 1,6%, # 5 NaOH 0,5 M, NaOCl ~ 0,8%.

5. Representativa resultat

Figur 1
Figur 1. Jämförelse av fem olika bleknings-lösningar vid två olika inkubationstider. N2-maskar tvättades två gånger med M9 delades upp i fem 15 ml koniska rör innehållande vardera blekningslösningen. Rören skakades kraftigt och 1 ml överfördes till ett nytt rör med M9 för att stoppa reaktionen efter den angivna tiden. Efter blekning förfarande maskar inkuberades med 1 ml M9 vid 20 ° C under 24 timmar. I varje fall var lägre bild tas direkt efter blekning, övre bilden 24 timmar senare.

_upload/4019/4019fig2.jpg "alt =" Bild 2 "/>
Figur 2. Temperatur av blekningslösningen påverkar effektiviteten av behandlingen. Lika volymer av N2 maskar blektes med samma blekningslösningen antingen tidigare kyldes på is under 20 minuter eller hålls vid 25 ° C under samma tid. De två kolumnerna till vänster visar bilderna precis efter blekning. Efter behandling maskar inkuberades i 15 ml koniska rör med 1 ml M9 vid 20 ° C under 24 timmar. Kolumner på höger visningsbilder 24 timmar senare.

Figur 3
Figur 3. Förhållandet masken pelleten: tiden för alkalisk hypoklorit inkubation påverkar effektiviteten av behandlingen 50, 100, 250 och 500 | il av masken pelleten inkuberades med 2 ml av blekningslösningen # 3 för 3, 6 och 9 min.. Kläckta L1, döda embryon och rester av vuxna fragment kvantifierades efter inkubation vid 20 ° C under 2 4 timmar i 15 ml koniska rör med 1 ml M9-buffert. Cirka tre sammanflytande 55 mm plattor med vuxna maskar behövs för att få en 100 fil mask pellet.

Figur 4
Figur 4. Korrekt luftning krävs för kläckning och överlevnad av C. elegans embryon. En 100 | il pellet av N2-maskar blektes under 6 minuter och inkuberades i 15 ml koniska rör med 1, 5 eller 10 ml, såsom anges, i M9 vid 20 ° C under 24 timmar. Den övre delen av figuren visar bilder av kulturerna efter 24 timmar, där pilarna indikerar ägg som inte kläcks. Vid botten finns det en graf som visar mängden av larver (ljusgrå) och döda embryon (mörkgrå) 48 timmar efter blekning vid de ovan angivna förhållandena.

tp_upload/4019/4019fig5.jpg "alt =" Bild 5 "/>
Figur 5. Livscykel C. elegans. en. Ungefärliga längden av maskarna vid olika stadier. Timmar som krävs för att nå varje steg, beroende på temperaturen (modifierad från 20). B. Nomarski (upp) och DAPI (ner) bilder på olika maskar vid de angivna utvecklingsstadier. Viktigaste funktionerna i varje fas förstoras L1: Pilen visar föregångarna av de somatiska gonad och könsceller tidig L4: svart pil (Nomarski) anger utvecklingen av vulvan, vita pilar (DAPI) visar de två gonadala armarna Mid-... sent L4: Pilen visar utvecklingsländerna vulva vid den så kallade julgran skede unga vuxna. svart pil indikerar ett embryo i livmodern, Arrowhead pekar på spermatheca visar vita pilen en äggcell Gravid vuxen. pilspets (DAPI) påpekar befruktade embryon. Arrow i DAPI bilden visar spermatheca.

Figur 6
Figur 6. Vulva morfologi vid L3, L4 och vuxna stadier. I L3 skede endast en liten lumen, där vulva bildas kan observeras. Vid L4, expanderar detta lumen bildar den så kallade "julgrans". I den vuxna vulva redan stängd. Gula linjer indikerar placeringen av vulvan vid dessa tre steg.

Figur 7
Figur 7. DAPI färgning vid L3, tidig L4, sen L4 och vuxna stadier. I L3 är könscellerna förlängs. Vid L4 och gonad vapen nuvarande U-form morfologi. Vid sena L4 skede spermier kan observeras i den distala delen av gonad. Unga vuxna presenterar oocyter. Vuxen könscellerna presenterar oocyter och embryon. Gula linjer avgränsa könsceller på the olika angivna steg.

Figur 8
Figur 8. C. elegans utveckling vid 15 och 25 ° C. N2-maskar blektes, inkuberades över natten i M9 och omrörning vid 15 ° C, överfördes till plattor och odlades de angivna tiderna vid de angivna temperaturerna.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Nematod Synkronisering

Flera bleknings-lösningar har beskrivits. Vi försökte fem olika recept (Tabell I) och i våra händer, har de inte visar betydande skillnader i synkroniseringen av masken populationer (figur 1). Emellertid gjorde våra experiment visar att parametrar såsom temperatur (fig 2), varvid förhållandet blekningslösningen: volym av maskar (fig. 3) och volymen av M9 med vilka embryona inkuberades under kläckning (fig. 4) gör att påverka överlevnad maskar, är relaterad till korrekt luftning av kulturen. I våra skakningar förhållanden, medan det i ett rör av 15 ml en volym på 1 ml kan överleva alla maskar, ger en volym på 5 ml redan för mycket för att möjliggöra korrekt ägg kläcks och jämförbar med maximal volym av 15 ml (visas ej) .

C. elegans Utveckling

Under dess utveckling, (Fig. 5) före den vuxna stadiet. Könscellinjen är en god indikator på utvecklingsstadiet av C. elegans. Det enklaste särdrag hos C. elegans utveckling som kan iakttas under Nomarski optik är utvecklingen av vulvan, som börjar bildas vid tidigt L4 stadium. Till en början endast en liten lumen observeras, som senare expanderar till den så kallade "julgran" form, i mitten av slutet L4. Slutligen, i slutet av L4 vulvan stängs (Fig. 6). Å andra sidan tillåter DAPI färgning observation av utvecklingen av gonad. Från de fyra celler i L1 till delande celler och förlängning gonad i L2 och L3. På L3 de distala spetsen cellerna kan observeras, börja migrera dorsalt. Meios startar också i slutet av L3. På L4 distala spets cellerna når sitt definitiva läge och könsceller differentierar till spermier. Vid slutet av L4 spermieproduktion slutar och äggcellen produktionen startar. I Adult maskar embryon kan observeras inne i livmodern (Fig. 7).

Utveckling och temperatur

C. elegans utvecklas i olika takt beroende på temperaturen: medan det tar cirka 90 timmar från det ögonblick ägget läggs tills den nya masken börjar lägga sina egna ägg vid 15 ° C, 45 timmar är nog när den odlas vid 25 ° C (fig. 6). Studien av skillnaden utveckla takt olika temperaturer leder till relativt flexibilitet i att sätta upp villkor och utföra experiment. Dessutom erbjuder den möjligheten att inte bara övervaka effekterna av en viss behandling eller förändring (t ex temperaturkänsliga alleler), men också att skapa de bästa förutsättningarna som utför en viss experiment.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Vi har inget att lämna ut.

Acknowledgments

Författarna vill tacka för MICINN (PTA program som stöder Montserrat Porta de la Riva), AGAUR (Phd Fellowship till Laura Fontrodona), Instituto de Salud Carlos III (Miguel Servet program som stöder Julián Ceron), och Marie Curie IRG, ISCIII och IDIBELL för finansiering labbet.

References

  1. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
  2. Wood, W. B. The nematode Caenorhabditis elegans. Cold Spring Harbor Laboratory Press. New York. (1988).
  3. Potts, M. B., Cameron, S. Cell lineage and cell death: Caenorhabditis elegans and cancer research. Nat. Rev. Cancer. 11, 50-58 (2011).
  4. Kimble, J., Hirsh, D. The postembryonic cell lineages of the hermaphrodite and male gonads in Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 70, 396-417 (1979).
  5. Sulston, J. E., Horvitz, H. R. Post-embryonic cell lineages of the nematode Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 56, 110-156 (1977).
  6. Hobert, O. Neurogenesis in the nematode Caenorhabditis elegans. WormBook. 1-24 (2010).
  7. Depuydt, G., Vanfleteren, J. R., Braeckman, B. P. Protein metabolism and lifespan in Caenorhabditis elegans. Adv. Exp. Med. Biol. 694, 81-107 (2010).
  8. Jia, K., Levine, B. Autophagy and longevity: lessons from C. elegans. Adv. Exp. Med. Biol. 694, 47-60 (2010).
  9. Joshi, P. M., Riddle, M. R., Djabrayan, N. J., Rothman, J. H. Caenorhabditis elegans as a model for stem cell biology. Dev. Dyn. 239, 1539-1554 (2010).
  10. Waters, K. A., Reinke, V. Extrinsic and intrinsic control of germ cell proliferation in Caenorhabditis elegans. Mol. Reprod. Dev. 78, 151-160 (2011).
  11. Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. Wormbook. (2006).
  12. Smith, E. D. Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans. BMC Dev. Biol. 8, 49 (2008).
  13. Olahova, M. A redox-sensitive peroxiredoxin that is important for longevity has tissue- and stress-specific roles in stress resistance. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 19839-19344 (2008).
  14. Voisine, C. Identification of potential therapeutic drugs for huntington's disease using Caenorhabditis elegans. PLoS One. 2, e504 (2007).
  15. Garigan, D. Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation. Genetics. 161, 1101-1112 (2002).
  16. Aceves, J., Erlij, D., Martinez-Maranon, R. The mechanism of the paralysing action of tetramisole on Ascaris somatic muscle. Br. J. Pharmacol. 38, 602-607 (1970).
  17. Shaham, S. Methods in cell biology. Wormbook. (2006).
  18. Pepper, A. S., Killian, D. J., Hubbardm, E. J. Genetic analysis of Caenorhabditis elegans glp-1 mutants suggests receptor interaction or competition. Genetics. 163, (1), 115-132 (2003).
  19. Morley, J. F., Brignull, H. R., Weyers, J. J., Morimoto, R. I. The threshold for polyglutamine-expansion protein aggregation and cellular toxicity is dynamic and influenced by aging in Caenorhabditis elegans. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 10417-10422 (2002).
  20. Protocols [Internet]. Available from: http://protocols.mmml.nl (2012).
Basisk<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Metoder: Synkronisering och miljöövervakning
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cerón, J. Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation. J. Vis. Exp. (64), e4019, doi:10.3791/4019 (2012).More

Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cerón, J. Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation. J. Vis. Exp. (64), e4019, doi:10.3791/4019 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter