Summary
الموصوفة هنا هو أسلوب يتم فيه حقن عديد السكاريد الشحمي في الغدة الثديية المرضعات الماوس عن طريق الحلمة لمحاكاة التهاب الضرع، وهي حالة تسبب عادة عن طريق العدوى البكتيرية. تصور نتائج حقن عديد السكاريد الشحمي في زيادة عامل النووية كابا إشارات (NF-كيلوبايت) B، من خلال التصوير bioluminescent من الماوس NF-كيلوبايت مراسل وسيفيراز.
Abstract
النماذج الحيوانية من الأمراض التي تصيب البشر هي ضرورية من أجل دراسة مراحل بدقة تطور المرض وآليات المرتبطة بها، وفي نهاية المطاف، ما قبل السريرية لاختبار نماذج التدخلات. في هذه الأساليب، نحن تصف تقنية في عديد السكاريد الشحمي الذي (LPS) تحقن في الغدة الثديية المرضعات الماوس عن طريق الحلمة، التهاب الضرع بشكل فعال النمذجة، أو التهاب، الغدة. هذه النتائج في زيادة الإصابة محاكاة النووي كابا عامل إشارات (NF-كيلوبايت) B، تصور من خلال التصوير bioluminescent من الماوس NF-كيلوبايت مراسل وسيفيراز 1.
كان هدفنا النهائي في تطوير هذه الأساليب لدراسة التهاب المرتبطة التهاب الضرع في الغدة المرضعات، والتي غالبا ما تتضمن احمرار، تورم، وتسلل خلية المناعة 2،3. ولذلك، كنا ندرك تماما أن شق أو أي نوع من جرح في الجلد، الحلمة، أو الغدة من أجل تقديم LPS يمكنلا يمكن استخدامها في طرقنا منذ النهج من شأنه أن يشوش على الأرجح للقراءة من الالتهاب. نحن المطلوب أيضا طريقة مباشرة إلى الأمام التي لا تتطلب صنعت خصيصا مرسومة باليد ماصات أو استخدام micromanipulators لعقد هذه الأدوات المتخصصة في المكان. وهكذا، عازمون على استخدام حقنة الأنسولين المتاحة تجاريا وكيل لحقن في القناة الثديية من الحلمة سليمة. وكان هذا الأسلوب ناجحا وسمح لنا لدراسة التهاب المرتبطة حقن LPS دون أي آثار إضافية مضافين من قبل عملية الحقن. وبالإضافة إلى ذلك، وهذه الطريقة تستخدم أيضا NF-كيلوبايت وسيفيراز مراسل المعدلة وراثيا الماوس وbioluminescent تكنولوجيا التصوير لتظهر بصريا وكميا زيادة NF-كيلوبايت إشارة داخل الغدة LPS حقن 4.
هذه الأساليب هي التي تهم الباحثين من العديد من التخصصات الذين يرغبون في نموذج المرض داخل الغدة الثديية المرضعات، كما في نهاية المطاف، والتقنيةويمكن الاستفادة هنا وصف للحقن عدد من المواد، وعلى سبيل المثال لا LPS فقط.
Protocol
تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات من قبل رعاية جامعة فاندربيلت الحيوان المؤسسية واللجنة الاستخدام.
1. إعداد الفئران المعدلة وراثيا
- وتستخدم الفئران الإناث، سواء كان إيجابيا لمراسل NGL التحوير (N-F-G كيلوبايت FP-L uciferase) (1 صفها سابقا) لهذا الإجراء. عندما تكون الإناث لا يقل عن 6 أسابيع من العمر، ورفيقة لهم مع ذكر نوع البرية FVB. تربية حريم ويمكن استخدام (تصل إلى 4 إناث في قفص مع 1 ذكر). (يرجى ملاحظة: تم استخدام سلالة الفئران FVB للدراسة الحالية ويمكن أيضا الفئران سلالة أغمق مثل C57Bl6 استخدامها، ولكن يجب أن حلق هذه الفئران قبل التصوير).
- ابتداء من الساعة 15 يوما بعد التزاوج، والتحقق من الإناث بانتظام بحثا عن علامات على الحمل (كبير مقاس جاحظ). يجب فصل كل النساء الحوامل مرة واحدة وذكر إزالتها من القفص مرة واحدة تربية الأنثى مشاركة تصبح حاملا.
- مشاهدة الإناث وفصلد لاحظ تاريخ الميلاد عندما يظهر القمامة. مطلوب من القمامة على الأقل 6 الجراء لالرضاعة الكافية. بعد ثمانية أيام من ولادة من القمامة، والمضي قدما مع بروتوكول (انظر الشكل 1 لجدول زمني التخطيطي).
2. استعدادا لحقن
- حل E. LPS القولونية في برنامج تلفزيوني لتركيز النهائي من 0.1 ميكروغرام / ميكرولتر. 50 ميكرولتر من هذا الحل، أو ما مجموعه 5 ميكروغرام، سيتم حقنها في الغدة الثديية. إعداد أنبوب الثاني من وحده PBS لاستخدامها في حقن السيطرة.
- انشاء نطاق تشريح ومعدات التخدير isoflurane. وينبغي تأمين جهاز الأنف المخروطية إلى مرحلة نطاق تشريح حيث سيتم وضع الماوس. مصدر ضوء جيد، وما إذا كان من نطاق نفسه أو من خارج الأضواء أيضا أن تكون مستعدة.
- مرة واحدة في انشاء اكتمال بدء تشغيل الجهاز isoflurane وتدفق الهواء.
3. ينترادوكتال حقن LPS
- تحميل حقنة إبرة قصيرة مع 50 ميكرولتر من محلول LPS. تعيين هذا جانبا.
- تخدير الماوس ليتم حقنه عن طريق وضع النساء لأول مرة إلى المربع isoflurane ملء ثم تباطأ بمجرد التنفس، نقل لها على خشبة المسرح ووضع أنفها داخل مخروط الأنف. استخدام قليل اصبع القدم لتأكيد الماوس للتخدير الكامل. مراقبة التنفس الماوس في جميع أنحاء الداخلي وضبط مستوى isoflurane فقا لذلك. وينبغي القفص الذي يحتوي على القمامة من الجراء التي اتخذت من مجموعة الأنثى بعناية جانبا حتى يمكن إرجاع السد بعد العملية.
- استخدام قطرة صغيرة من الايثانول 70٪ لجعل معطف وضع مسطح وللمساعدة في تصور الحلمة تعلق على الغدة الثديية الحق رقم 4 الأربية على أسفل البطن الفأر.
- تركز نطاق تشريح للرأي الأمثل من الحلمة. استخدام بعناية مجموعة من ملقط غرامة لرسم مزيد من الحلمة بعيدا عن الجلد، ولكن لا تجرح أو ثقب الحلمة بأي شكل من الأشكال. اللا ينبغي أبدا أن فرضت ملقط بإحكام معا عند التعامل مع الأنسجة، ولكنها تستخدم مع على عقد النور الذي يتطلب الحد الأدنى من الضغط على الحلمة.
- استخدام ملقط في اليد اليسرى لعقد بلطف الحلمة في مكانها. جلب ببطء حقنة مسبقة في مجال الرؤية باستخدام اليد اليمنى. ينبغي أن تعقد الحقنة بحيث لا اعادة تموضع أن يحدث من أجل حقن محتويات.
- مرة واحدة في حقنة في طريقة العرض، وتهدف بعناية في افتتاح الأقنية الصغيرة داخل وسط الحلمة، وإدراج الحقنة.
- دون اعادة تموضع من جهة، وضخ محتويات الحقنة والإبرة إزالة من الحلمة.
- تحميل حقنة ثانية مع 50 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني لحقن السيطرة. إعادة وضع الماوس على المسرح وللحصول على أفضل عرض للرقم 4 الأربية اليسرى الحلمة الغدة الثديية على الجانب الآخر من أسفل البطن الفأر. كرر الخطوات 3،4 حتي 3،7 باستخدام حقنة PBS محملة.
- مرة واحدة كل الحقن كومبلمؤسسة التدريب الأوروبية، ووقف التخدير وتحريك الماوس إلى قفص الانتعاش. رصد الإناث لضمان أنها تصبح المحمول في غضون 5 دقائق. السماح الماوس لتبقى في قفص الانتعاش لمدة 1 ساعة. بعد 1 ساعة من الانتعاش، ضع الجزء الخلفي الإناث في قفص مع القمامة من الجراء لها. وينبغي أن الفئران رصد دوري لمدة 6 حقن آخر ساعة قبل الشروع في التصوير. في تجربتنا، لوحظت أي نتائج ضارة في الأنثى أو الجراء وخلال الفترة بين الحقن والتصوير. ومع ذلك، فإذا ما لاحظت علامات الضائقة في الإناث (التقوس في الجلوس على سبيل المثال، والعض أو حراسة للموقع الحقن، والخمول العام) أو الجراء (أي حركة أو اللون مزرق من الجلد) وقفها التجربة.
4. Bioluminescent التصوير لتصور NF-كيلوبايت نشاط
- مرة واحدة تم نقلها إلى مرفق الفئران والتصوير، والتصوير يبدأ الإجراء عن طريق فتح البرنامج وتهيئة الجهاز. بدوره على هوoflurane الجهاز وتدفق الهواء، وضمان أن يتم تخدير المتدفقة إلى كل من مربع وغرفة التصوير.
- ضع الماوس تحت التخدير isoflurane في المربع التخدير واضحة. مرة واحدة قد تباطأ التنفس، استخدم قليل اصبع القدم لتأكيد الماوس للتخدير الكامل. ثم، وضخ 100 ميكرولتر من الركيزة وسيفيرين في الماوس عن طريق الحقن الرجعية المدارية 5 باستخدام محقنة معقمة.
- نقل على الفور إلى غرفة الماوس التصوير ووضع أنفها في إطار isoflurane الأنف المخروطية الموجودة هناك. يجب أن يكون الماوس مستلق. تأمين كل قدم إلى خشبة المسرح مع الشريط.
- إدخال الإعدادات المناسبة لبرنامج IVIS لاتخاذ كل الصور الفوتوغرافية بيضاء خفيفة وصورة من النشاط bioluminescent. يجب أن يكون التعرض الوقت 10 ثانية. الحصول على الصورة.
- بمجرد الحصول على الصور، والسماح الماوس لاسترداد ثم ضع ظهرها في قفص مع الجراء لها ورصد بصفة دورية.
- والفوتوغرافية والانارةومضافين الصور تلقائيا وعرضها على الشاشة، كما في الشكل 2. تحليل الصور التي حصل عليها وضع المنطقة في المصالح أو "ROI" الدوائر متساوية في الحجم على كل جانب من أسفل البطن الماوس، (واحد على الغدة PBS حقن واحد على الغدة LPS حقن). تعيين قراءة إلى الفوتونات. يجب أن يتم عرض رقم يشير إلى الكشف عن التلألؤ في كل ROI (انظر الشكل 2B). استخدام هذا الرقم في التحليل الإحصائي.
- لعرض الصورة الأمثل، وضبط مزيد من عتبة إشارة عرضها. هذا لن يغير من إجمالي التلألؤ للقراءة بها ولكن سوف يسمح لك لإزالة إشارة الخلفية وتصور الاختلافات بين السيطرة والغدة LPS المعاملة. تقلل من كمية التلألؤ حتى يظهر الغدة PBS حقن خالية من إشارة الخلفية. وهذا ينبغي أن تترك الإشارة زيادة في الغدة LPS المعاملة لا تزال واضحة في الصورة، كما رأينا في الشكل 2.
- Additionaيمكن أن تكتمل تحليل لتر، بما في ذلك البروتين والحمض النووي الريبي المقايسات، مع الأنسجة الثديية التي تم جمعها من الإناث بعد الوفاة 6.
5. ممثل النتائج
للحصول على نتائج من تفسير هذه الأساليب، يجب أن أكسب LPS (أو PBS) فقط في القنوات الثديية، وترك الأنسجة المجاورة دون عائق. والحقن في النسيج تحت الجلد حول الحلمة يؤدي إلى التهاب بسبب الاصابة بدلا من محاكاة العدوى. التريبان الأزرق حقن صبغة مخففة في PBS مفيد عندما تعلم هذه التقنية. 3A يوضح الشكل غدة حقن بنجاح غرست مع 100 ميكرولتر من اللون الأزرق التريبان في برنامج تلفزيوني. كما هو موضح، ينبغي شغل فقط الشجرة الأقنية مع الحل حقن، ويجب ألا يكون هناك البلعة في موقع الحقن. A "بلعة" في هذا السياق هو تراكم السائل حقن في الحلمة أو في الأنسجة المحيطة بالحلمة دون ضخ في شجرة الأقنية. هذا هو SHفي الشكل 3B الخاصة. يرجى ملاحظة أنه تم الانتهاء من الحقن الممارسة هو موضح في الشكل 3 في الإناث في اليوم 21 من الرضاعة. في ذروة من الرضاعة (اليوم 8-10، المرحلة التي يتم حقن LPS باستخدام بروتوكول الحالية)، والحليب وفيرة، ومن الصعب تصور القنوات وتحديد ما إذا كان قد تم الانتهاء من حقن بشكل صحيح. لذلك، نقطة في وقت لاحق الرضاعة هي أفضل لحقن الممارسة.
زيادة حقن الناجح لLPS في نتائج القنوات الثديية في NF-كيلوبايت النشاط داخل الغدة. هذا ينبغي أن يكون واضحا في الماوس على التصوير الصحفي IVIS، والغدة LPS حقن ينبغي أن يكون أعلى بكثير نشاط luciferase (قياسا إلى عدد الفوتون) من الغدة PBS حقن، كما هو مبين في الشكل 2 (في المتوسط، والغدة LPS يقرأ 200٪ من إشارة تحكم PBS). وهناك زيادة ذات دلالة إحصائية في التلألؤ داخل الغدد LPS-تعامل على أنها شركاتوقد تحقق ARED لسيطرة المقابل على الرغم من الانتهاء من مجموعة من 4 الفئران 4. وقد استخدمت إحدى الدراسات أيضا حقن إضافية الثديية ينترادوكتال إما E. القولونية أو نقل الجينات إلى LPS مراسل NF-كيلوبايت. ورأى هؤلاء المؤلفين مماثلة لعملنا، زيادة كبيرة في الموارد البشرية مراسل 6 النشاط بعد E. القولونية حقن 2.
يرجى ملاحظة، وذلك بسبب النشاط NF-كيلوبايت التأسيسي في الدماغ وأعضاء البطن الأخرى، ورؤساء بطون من الفئران تظهر باستمرار مراسلنا إشارة عند تصويرها، حتى في الأساس قبل أي تلاعب. وبالتالي، ينبغي تجاهل هذه الإشارة فيما يتعلق بهذه التجربة. يجب أن تبقى إشارة واضحة داخل الغدة الثديية LPS حقن بعد تعديل الصورة للقراءة إلى تقليل التلألؤ الخلفية في الغدة PBS. ويبين الشكل 2 الصور مع خلفية تخفيض.
سوف تنجح حقن للغدةالنتيجة المحتملة في معظم الأضرار التي لحقت الحلمة. سيؤدي ذلك أشار والجلد على مستوى الالتهاب الذي سوف يكون واضحا عند التصوير. وهذا النوع من اصابة إشارة تكون قوية جدا وتقتصر على منطقة الحلمة التي وقع فيها الضرر، وليس المنبثقة في جميع أنحاء الغدة، كما رأينا بعد حقن LPS الناجح في القنوات.
الشكل 1. التخطيطي الداخلي.
الشكل 2. نتائج ممثلة من IVIS bioluminescent التصوير. (A) مع خلفية الصورة المكتسب خفض، وكشف عن زيادة نشاط luciferase في الغدة LPS حقن. (B) مع صورة من منطقة quantifications الفائدة المضافة. اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية .
الشكل 3 حقن الممارسة: تم حقن الغدة الثديية مع صبغة عن طريق الحقن ينترادوكتال لاختبار دقة التسليم عن طريق الحلمة، حقن ماوس في يوم 21 من الرضاعة مع 100 ميكرولتر من صبغة زرقاء التريبان مخففة في برنامج تلفزيوني. بعد التضحية، تعرضت للغدة التصور. (A) حقن ناجحة و(B) البلعة من الصبغة في الحلمة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
هنا علينا الاستفادة من الماوس المعدلة وراثيا NF-كيلوبايت مراسل وتقنية الحقن الأمثل لالتهاب الضرع نموذج، والتهاب أنسجة الثدي الأكثر شيوعا التي تسببها العدوى البكتيرية. الخطوة الأكثر أهمية في هذا الإجراء هو حقن ينترادوكتال نفسها.
في الواقع، من الواضح ما إذا كان حقن عادة ينترادوكتال قد حققت نجاحا. ينبغي للحقن من وكلاء (LPS أو PBS) يشعر السائل وينبغي أن يكون هناك قليل من دون مقاومة، إذ يتم إفراغ الحقنة. في شرك الأكثر شيوعا هو الأضرار التي لحقت الحلمة مما يؤدي إلى إعاقة مرور في الغدة. يمكن أن يكون هذا من خلال النظر في تصور الحلمة من خلال نطاق تشريح. ويمكن تجنب الضرر الناجم عن ممارسة كافية، حساسية عند التعامل مع الحلمة، وضمان أن يستخدم فقط أصغر من الإبر (31G أو أعلى) لتنفيذ الإجراء. بالإضافة إلى ذلك، إذا لم يتم وضع الإبرة بشكل صحيح، أو إذا كان ينزلق منتصف الحقن، وبناءيمكن متابعة من LPS أو PBS تشكل في موضع الحقن والسائلة لن تسود القنوات. إذا حدث هذا، قد ترى بالعين المجردة إما تراكم السائل في الجلد حول الحلمة، أو حقن لن يشعر السوائل. على الرغم من أن هذا لا يمكن أن يتم القضاء تماما شرك، يمكن تجنب الحوادث بالنسبة للجزء الأكبر من الممارسة ومن خلال استخدام الأدوات المناسبة.
والاسلوب الذي استخدم هنا للحقن الحرجة لهذه التجربة خاصة. نشرت بعض وسائل للحقن ينترادوكتال في الغدة الثديية تحتاج إلى قطع / إزالة الحلمة و / أو شق خلال الجلد 7،8. وكانت أي شقوق أو اضطراب في الجلد أو الحلمة في هذه الحالة، حيث أن نقطة النهاية الأولية من الدراسة هو تحديد NF-كيلوبايت التهاب ذات الصلة داخل الغدة، وغير مرغوب فيه من شأنه أن يحث إشارة التهابات بسبب إصابات الأنسجة التي من شأنها أن نخلط إشارة LPS الناجم.
بالإضافة إلى ذلك، لديناتم الانتهاء الحقن مع حقنة الأنسولين المتاحة تجاريا ودون استخدام micropipette أو المسحوبة أو micromanipulators، كما هو الحال في العديد من المنهجيات الأخرى للحقن التي لا تستخدم الحلمة إزالة 9 و 10. نعتقد أن هذا كان ممكنا فقط لأن الحلمة المرضعات هو الموسع قليلا وأسهل نوعا ما لحقن من الشباب، الحلمة الماوس العذراء. لحقن الفئران البكر، قد يكون مطلوبا أدوات أكثر صرامة.
من الواضح من الشكل 2 أنه إذا أجريت بشكل صحيح، حقن LPS في مجاري الغدة الثديية الماوس يسبب التهاب المترجمة كما تصور زيادة في النشاط NF-كيلوبايت مراسل وسيفيراز. حللت الآخرين أكثر على نطاق واسع هذا النموذج من التهاب الضرع الحاد، عن طريق إما E. القولونية أو حقن LPS في الغدة الثديية والتحليل اللاحق من النسيج 2-3، 8، 10-14. بين استنتاجات كثيرة، فإن هذه الدراسات توضح أن الاستجابة الالتهابية طق عن طريق التضمين التفاعل مع CD14، وأنه يؤدي إلى تدفق العدلات الضامة السنخية ينظمها الثديية. كما اقترح في عملنا سواء نشرت سابقا 4، فضلا عن أن الآخرين 2 قد يكون هذا النموذج من التهاب الضرع تستخدم لدراسة آليات أخرى والعلاجات ذات الصلة في البشر، حيث يعاني ما 3-33٪ من النساء يعانون من الرضاعة الطبيعية هذا المرض المؤلم (النسبة المئوية تختلف استنادا إلى منهجية الدراسة) 15. فإنه قد يثبت أيضا أداة مفيدة لأولئك البحوث في صناعة الألبان، حيث هو مرض التهاب الضرع مكلفة ادى الى خسائر كبيرة في إنتاج الحليب في كل عام 16.
وأخيرا، استخدمت سوائل الغاز الطبيعي الفئران المعدلة وراثيا المستخدمة هنا مراسل ويعمل بالمثل الفئران مراسل HLL 17 في العديد من الدراسات للتحقق من، تحديد، وتتبع تنظيم أعلى أو لأسفل من NF-كيلوبايت النشاط ضمن مجموعة متنوعة من الأمراض بما في ذلك ونماذج تنموية حادة رئةسرطان الرئة الإصابة، التشكل الهوائية المتفرعة، ومقاومة الأنسولين، والسمنة، واحتشاء عضلة القلب 1، 17-21. هذا النموذج مثالا إضافية من الأداة المساعدة لهذه الجينات مراسل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح CA113734 منحت لYull F وزارة شؤون المحاربين القدامى (TS بلاكويل).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Lipopolysaccharide from Escherichia coli (LPS) |
Sigma | L 2880 | serotype 055:B5 |
| PBS | Mediatech, Inc. | 46-013-CM | |
| 31 Gauge insulin syringe | Becton Dickinson | 328438 | Short needle |
| Forceps | World Precision Instruments | 15908 | |
| Dissecting scope | Leica | M3Z | |
| Terrell Isoflurane, USP | MINRAD INC. for Rx Elite | NDC 66794-011-25 | |
| IVIS 200 imaging system | Caliper (formerly Xenogen) | N/A | |
| Syringe for luciferin injection | Becton Dickinson | 309597 | 1cc; 26G5/8 |
| D-Luciferin Firefly, sodium salt monohydrate (Luciferin substrate) |
Biosynth Chemistry and Biology | L-8240 | Dilute to 10 mg/ml |
References
- Everhart, M. B., Han, W., Sherrill, T. P., Arutiunov, M., Polosukhin, V. V., Burke, J. R., Sadikot, R. T., Christman, J. W., Yull, F. E., Blackwell, T. S. Duration and intensity of NF-κB activity determine the severity of endotoxin-induced acute lung injury. The Journal of Immunology. 176, 4995-5005 (2006).
- Notebaert, S., Carlsen, H., Janssen, D., Vandenabeele, P., Blomhoff, R., Meyer, E. In vivo imaging of NF-κB activity during Escherichia coli-induced mammary gland infection. Cellular Microbiology. 10, 1249-1258 (2008).
- Elazar, S., Gonen, E., Livneh-Kol, A., Rosenshine, I., Shpigel, N. Y. Neutrophil recruitment in endotoxin-induced murine mastitis is strictly dependent on mammary alveolar macrophages. Veterinary Research. 41, 10 (2010).
- Connelly, L., Barham, W., Pigg, R., Sait-Jean, L., Sherrill, T., Cheng, D. S., Chodosh, L. A., Blackwell, T. S., Yull, F. E. Activation of nuclear factor kappaB in mammary epithelium promotes milk loss during mammary development and infection. J. Cell. Physiol. 222, 73-81 (2010).
- Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. Retro-orbital injections in mice. Lab Animal. 40, 155-160 (2011).
- Plante, I., Stewart, M. K., Laird, D. W. Evaluation of mammary gland development and function in mouse models. J. Vis. Exp. (21), e2828 (2011).
- Behbod, F., Kittrell, F. S., LaMarca, H., Edwards, D., Kerbawy, S., Heestand, J. C., Young, E., Mukhopadhyay, P., Yeh, H., Allred, D. C., Hu, M., Polyak, K., Rosen, J. M., Medina, D. An intraductal human-in-mouse transplantation model mimics the subtypes of ductal carcinoma in situ. Breast Cancer Research. 11, R66 (2009).
- Zheng, J., Watson, A. D., Kerr, D. E. Genome-wide expression analysis of lipopolysaccharide-induced mastitis in a mouse model. Infection and Immunity. 74, 1907-1915 (2006).
- Nguyen, D., Beeman, N., Lewis, M., Schaack, J., Neville, M. C. Intraductal Injection into the Mouse Mammary Gland. Methods in Mammary Gland Biology and Breast Cancer Research. Ip, M. M., Asch, B. B. , Kluwer Academic/Plenum Publishers. 259-270 (2000).
- Lee, J. W., Paape, M. J., Zhao, X. Recombinant bovine soluble CD14 reduces severity of experimental Escherichia coli mastitis in mice. Veterinary Research. 34, 307-316 (2003).
- Elazar, S., Gonen, E., Livneh-Kol, A., Rosenshine, I., Shpigel, N. Y. Essential role of neutrophils but not mammary alveolar macrophages in a murine model of acute Escherichia coli mastitis. Veterinary Research. 41, 53 (2010).
- Bannerman, D. D., Paape, M. J., Hare, W. R., Sohn, E. J. Increased levels of LPS-binding protein in bovine blood and milk following bacterial lipopolysaccharide challenge. Journal of Dairy Science. 86, 3128-3137 (2003).
- Gonen, E., Vallon-Eberhard, A., Elazar, S., Harmelin, A., Brenner, O., Rosenshine, I., Jung, S., Shpigel, N. Y. Toll-like receptor 4 is needed to restrict the invasion of Escherichia coli P4 into mammary gland epithelial cells in a murine model of acute mastitis. Cellular Microbiology. 9, 2826-2838 (2007).
- Notebaert, S., Demon, D., Vanden Berghe,, Vandenabeele, T., P,, Meyer, E. Inflammatory mediators in Escherichia coli-induced mastitis in mice. Comparative Immunology, Microbiology, and Infectious Diseases. 31, 551-565 (2008).
- Osterman, K. L., Rahm, V. A. Lactation mastitis: bacterial cultivation of breast milk symptoms, treatment, and outcome. Journal of Human Lactation. 16, 297-302 (2000).
- Sordillo, L. M., Streicher, K. L. Mammary Gland Immunity and Mastitis Susceptibility. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 7, 135-146 (2002).
- Blackwell, T. S., Yull, F. E., Chen, C. L., Venkatakrishnan, A., Blackwell, T. R., Hicks, D. J., Lancaster, L. H., Christman, J. W., Kerr, L. D. Use of genetically altered mice to investigate the role of nuclear factor-kappa B activation and cytokine gene expression in sepsis-induced ARDS. Chest. 116, 73S-74S (1999).
- Stathopoulos, G. T., Sherrill, T. P., Cheng, D. S., Scoggins, R. M., Han, W., Polosukhin, V. V., Connelly, L., Yull, F. E., Fingleton, B., Blackwell, T. S. Epithelial NF-kappaB activation promotes urethane-induced lung carcinogenesis. Proceedings of the National Academy of Sciences. 104, 18514-18519 (2007).
- Blackwell, T. S., Hipps, A. N., Yamamoto, Y., Han, W., Barham, W. J., Ostrowski, M. C., Yull, F. E., Prince, L. P. NF-κB signaling in fetal lung macrophages disrupts airway morphogenesis. The Journal of Immunology. 187, 2740-2747 (2011).
- Chiang, S. H., Bazuine, M., Lumeng, C. N., Geletka, L. M., Mowers, J., White, N. M., Ma, J. T., Zhou, J., Qi, N., Westscott, D. The protein kinase IKKepsilon regulates energy balance in obese mice. Cell. 138, 961-975 (2009).
- Singh, M. V., Kapoun, A., Higgins, L., Kutschke, W., Thurman, J. M., Zhang, R., Singh, M., Yang, J., Guan, X., Lowe, J. S. Ca2+/calmodulin-dependent kinase II triggers cell membrane injury by inducing complement factor B gene expression in the mouse heart. The Journal of Clinical Investigation. 119, 986-996 (2009).
