Summary
סרט הווידאו הזה מדגים נהלים ואפיון של איים הלבלב אדם באמצעות hematoxylin ו eosin (H & E) ו אימונוהיסטוכימיה (IHC). סעיפים הלבלב מן הראש, הגוף, באזורים הזנב מוכתמות על ידי שני H & E ו-IHC לקבוע הרכב האנדוקרינית איון (אינסולין, גלוקגון, והלבלב פוליפפטיד), שכפול תאים (Ki67), וכן מחלחל דלקתיות (H & E, CD3). האזור אונקלי הוא מקומי באמצעות IHC של הלבלב פוליפפטיד.
Abstract
אומדני השטח מספרים איון ותא האנדוקרינית הרכב בלבלב אדם מבוגר נע בין כמה מאות אלפים על טווחים המונים כמה מיליוני ובטא מ 500 עד 1500 מ"ג 1-3. עם ההטרוגניות זה ידוע, עיבוד רגיל הליך מכתים פותחה על כך אזורים הלבלב הוגדרו בצורה ברורה איים מאופיין באמצעות אנליזה פתולוגית בכליה קפדני בדיקות immunolocalization.
נהלים אחידים לעיבוד הלבלב האנושי התאושש תורמים איברים מתוארים בחלק זה של סדרה 1. הלבלב מעובד ל 3 אזורים עיקריים (ראש, גוף, זנב) ואחריו חלקים רוחביים. חלקים רוחביים של ראש הלבלב מחולקים עוד יותר, כפי שמצוין על פי גודל, ממוספרות לפי סדר אלפביתי לציון קטנים. סטנדרטיזציה זו מאפשרת ניתוח מלא חתך רוחב של אזור הראש כולל אזור אונקלי המכיל איים המורכביםבעיקר של תאים בלבלב פוליפפטיד לאזור הזנב.
הדו"ח הנוכחי מהווה חלק 2 מתוך סדרה זו ומתאר את הנהלים המשמשים חתך סדרתי ואפיון histopathological של פרפין סעיפים הלבלב עם דגש על תאים אנדוקריניים איון, שכפול, T-cell המחלחל. פתולוגיה של הלבלב סעיפים נועד לאפיין גם אקסוקרינית, ductular, ורכיבים אנדוקריניות. תא אקסוקרינית מוערך נוכחות של דלקת הלבלב (פעיל או כרוני), ניוון, סיסטיק, שומן, כמו גם מערכת צינורות, בעיקר ביחס לנוכחות של neoplasia הלבלב intraductal 4. איי מוערכים על מורפולוגיה, גודל, צפיפות, תאים אנדוקריניים, דלקת, פיברוזיס, עמילואיד, ואת הנוכחות של תאים אפופטוטיים משכפלים או באמצעות H & E ו-IHC כתמים.
המרכיב האחרון המתואר חלק 2 הוא מתן שקופית צבעוניתכמו דיגיטציה של תמונות שקופיות שלמים. השקופיות דיגיטציה מסודרים לפי המקרה באזור הלבלב במסד נתונים של הפתולוגיה מקוון ליצירת biobank וירטואלי. גישה לאוסף מקוון זה מספק כיום יותר מ -200 רופאים ומדענים העוסקים במחקר סוכרת מסוג 1. מסד הנתונים המקוון מספק אמצעי לשיתוף נתונים מהירה מלאה לחוקרים בחר אבני פרפין או חלקים סדרתיים קפואים.
Protocol
1. Microtomy על סעיפים בלא כתם
- הגדרת אמבט מים microtome באשר microtomy פרפין סטנדרטי. השתמש שקופיות בעלי מטען חשמלי חיובי ושל מראש תווית עם מספר התיק, באזור הלבלב (לדוגמה) ואת מספר שקופיות. פרפין במקום לחסום צ'אק microtome עם תווית את הקלטת בצד שמאל.
- בצע את ההליכים microtomy רגילים, סעיף לבלוק עד רקמת הוא נתקל באופן אחיד. לייצר סרט של חלקים סדרתיים (4 מיקרומטר עבים, 3-6, תלוי כמה כתמים הנדרשים הראשונים (ראה מקרה הגשת טופס, נספח 1)). חלקים נפרדים סרט, לקחת את זה לפי הסדר, ומניחים על שקופיות עם סדר ספורים בעיפרון. לציין אם סעיף זה מנוצל על ידי מספור הסעיפים לפי סדר מדויק. לשמור על הכיוון אותו בשקופית כמו למצוא קלטת עם תווית שקופיות בכיוון שמאלה. יבש במשך הלילה בטמפרטורת החדר ולאחר מכן להמשיך עם כתמים או הפצה החוקרים.
- מילמשטח EAL של גוש פרפין עם שכבה דקה של פרפין לשמר רקמות ארכיון בטמפרטורת החדר או -20 ° C.
- עבור microtomy לאחר מכן, לשמור על מספור הסעיפים סדרתיים בכל רמה לעיל. קבל 1 שקופית נוספת על ידי כתם שקופיות H & E עבור כל רמה ~ 100 מיקרומטר בתוך כל בלוק.
2. H & E מכתים
- מניחים את השקופית הראשונה מחולק הסידורי של כל בלוק במעמד שקופית ואז במגש הראשון autostainer.
- בחר את התוכנית תקן H & E כתם ולהמשיך כרגיל.
- בסיום מכתים, להסיר את השקופיות מן autostainer ומניחים מכסה המנוע של coverslipping.
- Coverslip באמצעות טכניקה סטנדרטית. לייבש היטב את התווית עם תווית מודפס (ראה סעיף 12).
3. IHC Set-up
- בחר את התוכנית Dako עבור כתמים כפולים ומספרים קלט של שקופיות. הכן TBST ו ציטראט מאגרים, נוגדנים, reag אחרלהורים על פי כרכים שצוין (טבלה 1). טען את מגש מגיב שקופיות. הסיבוב של קווים נקיים פסולת מתוכנתים על פי המלצות היצרן.
- אם מבצעים את מבחני ידני, להכין כרכים כ. דגירה שקופיות חדר humidified להימנע שקופיות ייבוש החוצה בשלב כלשהו. בצע את אותו תהליך עבור כל ריאגנטים כמו בעת שימוש עבור autostainer.
4. IHC Deparaffinization ואחזור Antigen
- שים שקופיות קסילן במשך 5 דקות. חזור פעם אחת. אל תאפשר השקופיות להתייבש בכל שלב שלאחר מכן עד כמצוין זה יביא ברקע מוגזם מכתים עניים.
- העברת שקופיות אתנול 100% במשך 2 דקות. חזור פעם אחת.
- שים שקופיות מוכן טרי 3% H 2 O 2 ב מתנול במשך 10 דקות.
- טובלים שקופיות באתנול 90% ולאחר מכן למקם באתנול 90% במשך 3 דקות.
- העברת שקופיותאתנול 70% למשך דקה 1.
- יש לשטוף במים שקופיות דה מיונן.
- מחממים הספינה ואת מאגר ציטראט על הספינה במשך 5 דקות.
- הוסף שקופיות ציטראט חיץ קיטור ואדים במשך 30 דקות.
- מיד להעביר שקופיות מים ממושכת עד מחליק מצננים לטמפרטורת החדר (~ 20 דקות).
- העברת שקופיות מדפי autostainer Dako על פי כתם רצף (איור 1) ולהפעיל את תוכנית צביעה כפולה. הצעדים העיקריים של התוכנית autostainer מפורטים כך פועל ידניים יכול לשכפל.
5. נוגדנים הראשוניות (Ki-67, CD3, הלבלב פוליפפטיד)
- חסום שקופיות עם פתרון צלף במשך 15 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
- דגירה שקופיות הנוגדן העיקרי במשך 30 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
- דגירה עם עז Mach2 אנטי עכבר (Ki-67) או ארנבת אנטי (CD3, הלבלב פוליפפטיד) צנון סוס peroxidase (HRP) פולימר של 30 מ 'inutes. שטפו פעמיים עם TBST.
- החל 3,3-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) לשקופיות עבור 4 דקות. לשטוף פעמיים במים.
- שקופיות מודגרות עם הלבלב פוליפפטיד מוחזקים על Dako בזמן הטיפול ושם ישקלו לו ויעריכו במקביל ו TBST המשמש את כל הצעדים הבאים תוך בשקופיות שנותרו מודגרת עם סט של 2 נוגדנים ראשוניים. לחלופין, עבור מבחני ידניים, המשך לסעיף 6.
6. נוגדנים ראשיים השני (אינסולין, גלוקגון)
- דגירה שקופיות דיב 20 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
- בלוק עם סרום 10% עיזים רגיל חוסם avidin 20% TBST (אינסולין) או צלף (גלוקגון) ב TBST במשך 20 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
- דגירה עם אינסולין או נוגדנים גלוקגון העיקרי במשך 15 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
- אינסולין: שקופיות דגירה של חזיר biotinylated עז נגד גינאה בדילול 1:300 במשך 30 דקות. שטפו פעמיים עם TBST. דגירה עם יש תקןctor ABC-AP מגיב במשך 30 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
- גלוקגון: שקופיות דגירה של חיץ במהלך 30 דקות ואחריו נגד העכבר עז אלקליין phosphatase (AP) פולימרי במשך 30 דקות. שטפו פעמיים עם TBST.
- בעוד שקופיות מודגרת ב conjugates, לחמם את מאגר LPR לטמפרטורת החדר. הוסף 1 טיפה של נוזל אדום קבע (LPR) לכל מאגר מ"ל 3 מיידית לפני השימוש במקום במעמד מגיב Dako. דגירה שקופיות LPC במשך 4 דקות. לשטוף פעמיים במים.
- דגירה שקופיות hematoxylin דקה 1. יש לשטוף פעמיים במים.
- דגירה שקופיות כפות pH 7.6 דקה 1. יש לשטוף פעמיים במים.
- לפרוק שקופיות מ DAKO Autostainer.
- מיד מייבשים שקופיות מוכתמים על הלבלב פוליפפטיד. עבור כל השקופיות מוכתמים כפולות, יבש לפחות שעה 1 ואז מייבשים.
7. התייבשות
- במקום שקופיות באתנול 80% למשך דקה 1.
- טובלים שקופיות באתנול 95%. החזק שקופיות באתנול 95% למשך 30 שניות.
- העברת שקופיות אתנול 100% והחזק 1 דקה. חזור.
- טובלים שקופיות קסילן.
- החזק שקופיות קסילן דקה 1. חזור.
- מיד לעלות coverslips בשקופיות באמצעות cytoseal.
8. Slide סימון
- הזן את זיהוי המקרה המידע כולל מספר איברים אבן, כתם, ותאריך ולהדפיס. בסעיף מספר סידורי הוא אופציונלי על הכתמים השקופית הראשונה של כל בלוק. רמות הבאים מסומנים על ידי מספור.
- מניחים תוויות בשקופיות.
9. שקופיות סריקה
- מניחים במגש שקופיות צבעונית, סורק לסרוק פי מכשור.
- לארגן שקופיות לפי סוג התורם ורקמות (ראש הלבלב, גוף, זנב, טחול).
- שקופיות ארכיון מוכתמים בטמפרטורת החדר וכל שקופיות בלא כתם הנותרים ב -20 ° C עד בשימוש.
10. Representative תוצאות
נהלים אלה צביעה פותחו עבור רשת JDRF לעוגב תורמים הלבלב עם סוכרת (nPOD) כדי לספק אפיון בסיסי של פרפין בלוקים קפואים טריים. תורם לכל אחד מהם יש אפיון המחקר ביצע מורכב מכתים 2 בלוקים כל אזור הלבלב (ראש, גוף, זנב) ואת הטחול (איור 1, ראו גם טופס הגשת התיק, נספח 1). צביעת H & E נעשה באמצעות autostainer מתוכנת כמו מתקן קלינית קליני כיתה פתרונות המשמשים לאורך כל הדרך. כמו אבני התורמות נוספים הם מחולק, לכל שקופית מובנת H & E להראות מורפולוגיה רקמות. כאשר הם אבני מחולק שוב, כמו להפצה החוקרים, רמות עמוקות יותר יהיה גם שקופיות שצולמו עבור נציג H & שקופיות ה לתעד את המורפולוגיה של הרקמה בלוק שלם כמו גם מספור הסעיפים סדרתיים בכל רמה. שקופיות ויטראז מסומנים עםזיהוי מקרה, באזור הלבלב, מספר בלוק, כתם ותאריך (איור 2) וסקר את מערכת ניהול מידע באינטרנט הפתולוגיה. תמונות מייצגות מתורם השליטה מוצגות באיור 3 בשני בהגדלה נמוך וגבוה להראות התוצאות הצפויות בעקבות הליך זה. מוכתם שקופית עם הלבלב פוליפפטיד (D, H) ושם ישקלו לו ויעריכו היה ביום אחר עם assay באופן ידני ומראה עוצמת מכתים מופחת של counterstain hematoxylin. הבדלים מכתים עוצמת נוגדנים ראשוניים או counterstain בין מבחני יש להימנע במיוחד אם באמצעות ניתוח תמונה אחרת עם מחליק דורשים תיקון צבע הפרט כדי להשיג את אותו התא או אזורים ספירות.
כל מעבדה צריך לצפות כדי לייעל את ריכוזי הנוגדנים כמו הרבה אל הווריאציה הרבה חומרים כימיים אחרים ותנאים יכול להשפיע בעוצמה מכתים וספציפיות. עם הרכישה של ניו ריאהרבותי, נהלים מכתים מאומתים עם דגימות הידועות בקרה חיוביים ושליליים כדי להשיג את אותה מידה של עוצמת הכתם כמו ריאגנטים לשעבר. נוגדנים נוספים אופטימיזציה בליבת nPOD הפתולוגיה ניתנים בטבלה 2 כמקור התייחסות שימשו במשך multilabeling מבחני immunofluorescence עבור מיקרוסקופיה confocal.
באיור 1. רשת Dako מכתים. סכמטית זה מתאר ניתוח שגרתי מהלבלב התורם nPOD שבוצעה על autostainer Dako. התורמים nPOD מוצפנים עם מספר בן 4 ספרות זיהוי. שני מגשי שקופיות מוצגים עם שקופיות מאורגנות על ידי כתם. תצורות חלופיות שקופיות צפויים תלוי במספר שקופיות התורמות. בקרות חיוביות כוללים הכללת תורם חיובית ידוע על שני כתמים כפולים הטחול התורם עבור Ki-67 ו CD3. בקרות שליליות הן כפולה וכוללים 2 SLIדה מבלוק אחד תורם הלבלב מודגרות עם אימונוגלובולינים (איג) מן המין המארחות של נוגדנים ראשוניים שתי שקופיות של הטחול התורם עבור אינסולין גלוקגון.
איור 2. נציג שקופית צבעונית כפולה. שקופיות המוגמר טיפוסי מוצג עם תיוג פרמטרים שקופיות השמה רקמות לפני סריקה דיגיטלית מבוצעת.
איור 3. נציג H & E וכתמים IHC בסעיפים הלבלב. סעיפים מהלבלב של תורם האיבר הנשי הבוגר (6096-04 PanHead) היו מוכתמות סריקות דיגיטליות שבוצעו כמפורט בפרוטוקול. התמונות התקבלו באמצעות תוכנית ImageScope ההצגה של סעיף שלם (AD) ומ איון 1 (EH). את עוצמות איון צפוי כתם של אינסולין, גלוקגון, והלבלב פוליפפטיד הםציין עבור חלקים BD כמו משרטטת פרק ד ', כי זה בלוק בראש הלבלב מכיל חלק קטן של האזור אונקלי או באונה הלבלב הגחון כמו איים כולם מכילים בעיקר פוליפפטיד חיובי בתאי הלבלב. שים לב counterstain hematoxylin בלוח D הוא קל מדי בזמן hematoxylin counterstain עוצמות ב B ו-C הם אופטימליים. לוחות EH להראות איון מהאונה הגב עם ההפצה מצופה מתאי בטא ו α-תאים. התאים בלבלב כמה פוליפפטיד נמצאים בחלק השמאלי התחתון של איון (H). , E-H &E; B, F-Ki67 + אינסולין, C, G-CD3 + גלוקגון, D, H-הלבלב פוליפפטיד. לספירה, 0.2X, EH-12.8x.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
סטנדרטיזציה של תהליכי IHC הוא קריטי לניתוח תמונה, במיוחד בעת שימוש במחשב מבוסס אלגוריתמים על פני מספר גדול של שקופיות לאורך זמן. הליך מכתים IHC המתואר בדוח זה יאפשר ניתוח סדרה של דגימות של תורמים ניתן באמצעות autostainer תוך יום 8 שעות עבודה משתנים מן הדו"ח הקודם 5. דיגיטציה שקופיות שלמים של כל שקופית צבעונית לרשות nPOD המזוהים עם החוקרים באמצעות מערכת מבוססת אינטרנט הפתולוגיה באינטרנט. החוקרים יכולים לבדוק נתונים דמוגרפיים, נתונים התורמות מעבדה, אחר ההיסטוריה קליני רלוונטי יחד עם השקופיות והם מסוגלים לבחור אבני המתאים ביותר עבור לימודיהם (ראה http://www.jdrfnpod.org/online-pathology.php למידע נוסף) . כגון מערכת מקוונת הפתולוגיה משמשת "biobank וירטואלי". שיפור נוסף למערכת זו תיושם wheתוויות reby שקופיות לשלב ברקוד כדי לעקוב אחר חלקים סדרתיים ורמות עבור כל בלוק עם המטרה הסופית של שיקום 3-D של הלבלב.
שני ההליכים צביעה כפולים נבחרו בעיקר על מנת לקבוע הרכב איון β תאים (אינסולין) בתיאום עם שכפול הסלולר (Ki-67) נתנו את החשיבות של הבנת מנגנונים β התחדשות תאים הבוגרת סוכרת מסוג 1 5,6. כמו assay 2 כפול IHC מבוצע על חלקים סדרתיים ל 1, איון זה מאופיין על תאים β הן (אינסולין) ו α-cell הרכב (גלוקגון). בנוסף, הנוכחות של לימפוציטים מסוג T (CD3) נקבע בשיתוף עם כתמים α-cell משתי סיבות עיקריות. בסיס אוטואימוניות T-cell בתיווך בהתקדמות של סוכרת מסוג 1 כבר ברור עדיין להעריך את האופי של סוכני ייזום (ויראליים, חיידקיים, תאים דלקתיים) או הרכב כרונית לחדור עם resulתפקוד לקוי לתרופות רבות β-התא מותו הם עדיין לא מוגדרים (בדיקה ב 7,8). שנית, תורמים עם סוכרת מסוג 1 יש מחסור מאופיין היטב בטא תאים, כך השילוב של CD3 וכתמים גלוקגון מבטיחה זיהוי איים גם כאשר β-cell אובדן חמור 9.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
אין ניגוד עניינים הצהיר.
Acknowledgments
המחברים מודים משפחות של תורמים איברים הרכש ארגונים העוסקים במחקר זה ואמילי מונטגומרי, רוברט Pietras, אן פו, Mitali Agarwal, ו רושאן Agarwal לסיוע המומחה שלהם. עבודה זו מומנה על ידי Juvenile Diabetes Research Foundation (MC-T.) בתמיכה של רשת לעוגב תורמים הלבלב עם סוכרת.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 30% Hydrogen Peroxide (H2O2) | Fisher Scientific | H325-500 | Endogenous peroxidase blocking |
| ABC-Alkaline Phosphatase (AP) | Vector Laboratories | AK-5000 | AP conjugate |
| Antibody Diluent | Invitrogen | 003218 | Primary antibody |
| Avidin blocker | Vector Laboratories | SP-2001 | Block endogenous biotin |
| Biotinylated Goat anti-guinea pig | Vector Laboratories | BA-7000 | Secondary antibody |
| Bluing Reagent | Fisher Scientific | 7301 | Leica autostainer |
| Citrate buffer, pH 6.0 | BioGenex | HK086-9K | Antigen retrieval |
| Clarifier 1 | Fisher Scientific | 7401 | Leica autostainer |
| Cytoseal XYL | Fisher Scientific | 8312-4 | Coverslip mountant |
| DAB | Vector Laboratories | SK-4100 | HRP chromogen |
| DEEB | Dako | S2003 | Endogenous AP blocking reagent |
| Eosin Y Alcoholic | Fisher Scientific | 71204 | Leica autostainer |
| Ethanols- 100%, 95%, 90%, 70% | Fisher Scientific | Various | Deparaffinization and coverslipping |
| Hematoxylin | Dako | S3301 | Dako autostainer |
| Hematoxylin 7211 | Fisher Scientific | 7211 | Leica autostainer |
| IgG (all host species for primary antibodies) | Various | Various | Negative controls for primaries |
| Liquid Permanent Red (LPR) | Dako | K0640 | AP chromogen |
| Mach2 AP | Biocare Medical | MALP521L | Goat anti-Mouse AP conjugate |
| Mach2 HRP | Biocare Medical | MHRP520L | Goat anti-Mouse HRP conjugate |
| Mach2 HRP | Biocare Medical | RHRP520L | Goat anti-Mouse HRP conjugate |
| Methanol | Fisher Scientific | Various | H2O2 diluent |
| Normal goat serum | Vector Laboratories | S-1000 | IHC blocking reagent |
| Sniper | Biocare Medical | BS966M | IHC blocking reagent |
| TBST 20X | Thermo Fisher Scientific, Inc. | TA-999-TT | IHC buffer |
| Triology 20x | Cell Marque | 920P-06 | Antigen Retrieval |
| Xylene | Fisher Scientific | Various | Deparaffinization and coverslipping |
| Table 1. Specific reagents. | |||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Paraffin | |||
| Amylase | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | SC-46657 | Mouse |
| Amylin | Serotec | MCA11267 | Mouse |
| Carbonic anhydrase 19.9 | Abcam | ab15146 | Mouse |
| Caspase-3, cleaved | Cell Signaling Technology | 9961 | Rabbit |
| CD20 | Dako | M0755 | Mouse |
| CD3 | Dako | A0452 | Rabbit |
| CD34 | Cell Signaling Technology | 3569 | Mouse |
| CD4 | Dako | M7310 | Mouse |
| CD45 | Dako | M0754 | Mouse |
| CD68 | Dako | M0876 | Mouse |
| CD8 | Dako | M7103 | Mouse |
| Chromogranin A | Dako | A0430 | Rabbit |
| CK17 | Dako | M7046 | Mouse |
| CK19 | Dako | M0772 | Mouse |
| CK7 | Dako | M7018 | Mouse |
| C-peptide | Cell Signaling Technology | 4593 | Rabbit |
| Foxp3 | e Bioscience | 14-4776-80 | Rat |
| Ghrelin | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | SC-10386 | Goat |
| Ghrelin | Abcam | ab85104 | Rabbit |
| Glucagon | Dako | A0565 | Rabbit |
| Glucagon | Abcam | ab10988 | Mouse |
| Glucagon | Bachem | T-5037 | Guinea Pig |
| Glut-1 | Abcam | ab40084 | Mouse |
| Glut-2 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | SC-9117 | Rabbit |
| Insulin | Dako | A0564 | Guinea Pig |
| Ki-67 | Dako | M7240 | Mouse |
| Mafa | Novus Biological | NB400-137A | Rabbit |
| Pancreatic polypeptide | Invitrogen | 18-0043 | Rabbit |
| Pdx-1 | Abcam | ab47308 | Guinea Pig |
| Proinsulin | Novocastra | NCL-proin-1G4 | Mouse |
| Proinsulin | Developmental Studies Hybridoma Bank | GS-9A8 | Mouse |
| Secretagogin | Sigma-Aldrich | HPA 006641 | Rabbit |
| Smooth muscle actin | Abcam | ab5694 | Rabbit |
| Somatostatin | Dako | A0566 | Rabbit |
| Synaptophysin | Dako | M0776 | Mouse |
| Fresh Frozen | |||
| CD11b | Abcam | ab6332 | Rat |
| CD11c | Serotec | AHP1226 | Rabbit |
| CD25 | Novus Biological | NB 600-564 | Mouse |
| CD94 | Abcam | ab61874 | Mouse |
| GAD65 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | SC-130569 | Mouse |
| HLA-ABC | Dako | M0736 | Mouse |
| Table 2. Primary antibodies. | |||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Aperio Scanscope CS | Aperio Technologies | Digital slide scanner | |
| DAKO Autostainer Plus | Dako | IHC stains | |
| Label Matrix printing software | BioCarta | LM7UP57 | Slide label software |
| Leica XL Autostainer | Leica Microsystems | H&E stains | |
| Premium Coverglass | Fisher Scientific | 12-548-5J | Coverslip |
| Spectrum Information Manager | Aperio Technologies | Scanner software | |
| Superfrost Plus slides | Fisher Scientific | 12-550-15 | Positively charged slides |
| Vegetable steamer | Black and Decker | Various | Antigen retrieval |
| Zebra TLP 3742 | CDWG | TLP3742 | Slide label printer |
| Table 3. Specific supplies and equipment. | |||
References
- In't Veld, P., Marichal, M. Microscopic anatomy of the human islet of Langerhans. Adv. Exp. Med. Biol. 654, 1-19 (2010).
- Matveyenko, A. V., Butler, P. C. Relationship between beta-cell mass and diabetes onset. Diabetes Obes. Metab. 10, Suppl . 4. 23-31 (2008).
- Saisho, Y. Pancreas volumes in humans from birth to age one hundred taking into account sex, obesity, and presence of type-2 diabetes. Clin. Anat. 20, 933-942 (2007).
- Hruban, R. H. Pancreatic intraepithelial neoplasia: a new nomenclature and classification system for pancreatic duct lesions. Am. J. Surg. Pathol. 25, 579-586 (2001).
- Campbell-Thompson, M. Pancreatic adenocarcinoma patients with localised chronic severe pancreatitis show an increased number of single beta cells, without alterations in fractional insulin area. Diabetologia. 52, 262-270 (2009).
- Meier, J. Beta-cell replication is the primary mechanism subserving the postnatal expansion of beta-cell mass in humans. Diabetes. 57, 1584-1594 (2008).
- Rowe, P. A., Campbell-Thompson, M. L., Schatz, D. A., Atkinson, M. A. The pancreas in human type 1 diabetes. Semin. Immunopathol. 33, 29-43 (2011).
- Veld, I. n't, P, Insulitis in human type 1 diabetes: The quest for an elusive lesion. Islets. 3, 131-138 (2011).
- van Belle, T. L., Coppieters, K. T., von Herrath, M. G. Type 1 diabetes: etiology, immunology, and therapeutic strategies. Physiol Rev. 91, 79-118 (2011).
