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Medicine

मॉडलिंग (AOM) Azoxymethane और Dextran सल्फेट सोडियम (DSS) के साथ कैंसर बृहदांत्रशोथ एसोसिएटेड

doi: 10.3791/4100 Published: September 11, 2012

Summary

हम एक प्रोटोकॉल genotoxic एजेंट azoxymethane (AOM) के प्रशासन जो समर्थक भड़काऊ एजेंट dextran सल्फेट (डीएसएस) तेजी से सोडियम के तीन चक्रों के द्वारा पीछा किया और लगातार चूहों में शब्द के भागों और आणविक मानव बृहदांत्रशोथ में देखा उन लोगों के लिए समानता के साथ बृहदान्त्र ट्यूमर उत्पन्न प्रदर्शित कैंसर से जुड़ा हुआ है.

Protocol

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1. बृहदांत्रशोथ - जुड़े कैंसर प्रेरण

  1. एक तरफ सेक्स के पिंजरों और उम्र से मिलान 6-8 सप्ताह पुराने चूहों प्रयोगात्मक और नियंत्रण समूहों के लिए इस्तेमाल किया जा सेट. चूहे पूंछ चिह्नों या कान क्लिप के साथ अलग - अलग लेबल किया जा सकता है.
  2. 0, रिकॉर्ड आधारभूत वजन दिन और 10 / AOM काम समाधान के किलोग्राम मिलीग्राम (1 / isotonic खारा में मिलीग्राम मिलीग्राम, 10 / dH2O में मिलीलीटर स्टॉक समाधान मिलीग्राम से पतला -20 डिग्री सेल्सियस पर रखा) के साथ प्रत्येक माउस intraperitoneally (आईपी) इंजेक्षन . अनुभव के आधार पर, इस खुराक 7-14 मिलीग्राम / किग्रा और / के बीच समायोजित किया जा सकता है या प्रयोग में जल्दी दोहराया.

सावधानी: AOM एक अस्थिर genotoxic एजेंट है और ध्यान से साथ MSDS के अनुसार नियंत्रित किया जाना चाहिए. Dilutions एक रासायनिक हुड में तैयार किया जाना चाहिए, बर्फ पर बनाए रखा है, और संस्था विशिष्ट प्रोटोकॉल के बाद खारिज कर दिया.

  1. एक 2.5% (2.5 g/100 मिलीलीटर) 0.22 सुक्ष्ममापी सेलूलोज़ एसीटेट च के माध्यम से आसुत जल और पास में DSS समाधानवैक्यूम द्वारा ilter. इस खुराक 1-3.5% के बीच माउस तनाव और पर्यावरण के आधार पर समायोजित किया जा सकता है. एक बार तैयार, DSS समाधान प्रशीतित 1 सप्ताह के लिए रखा जा सकता है.
  2. 7 दिन, आपूर्ति DSS उनके पीने के पानी के रूप में चूहों समाधान. लगभग 250 मिलीग्राम / पिंजरे हर बार नया DSS 5 चूहों / पिंजरे की एक अधिकतम के लिए प्रदान की जाती है की जरूरत हो जाएगा, लेकिन ये केवल अनुमानों और पानी अपने पशुओं सुविधा में इस्तेमाल की बोतलें के प्रकार पर निर्भर करता है अलग अलग होंगे.
  3. DSS के सात दिनों के लिए एक सतत आपूर्ति प्रदान करने के लिए, DSS समाधान इस अवधि के दौरान तीन बार (हर 2-3 दिन) साफ बोतलों में बदला जाना चाहिए. कुछ जांचकर्ताओं जोखिम के एक उपाय के रूप में नए समाधान के साथ की जगह के लिए पहले भस्म DSS की मात्रा को मापने.
  4. 14 दिन, पिंजरों मानक पीने के पानी के लिए दो सप्ताह के लिए वापस स्विच.
  5. दोहराएँ (1.4) कदम - 28 दिन और 49 पर (1.6) DSS के एक दूसरे और तीसरे चक्र प्रदान करने के लिए. पीने के पानी में एक DSS "चक्र" DSS के एक सप्ताह के होते हैंनियमित पानी (autoclaved) के 2 हफ्तों के द्वारा पीछा किया.

2. नैदानिक ​​मूल्यांकन बृहदांत्रशोथ और ट्यूमर प्रगति

  1. चूहे / तौला जाना चाहिए 2-3 बार प्रति सप्ताह मनाया. प्रतिशत आधारभूत के सापेक्ष वजन घटाने बृहदांत्रशोथ गंभीरता का एक सरोगेट उपाय के रूप में प्रयोग किया जाता है. मलाशय के खून बह रहा है, दस्त, या आगे को बढ़ाव के नियमित आकलन प्रयोगात्मक लक्ष्यों के आधार पर किया जा सकता है और विभिन्न स्कोरिंग प्रणाली के अनुसार 10 9.
  2. अप करने के लिए एक वजन दस्त और खून बह रहा गुदा के 2-3 दिनों के साथ साथ 10% करने के लिए नुकसान DSS (दैनिक अवलोकन इस तत्काल के बाद DSS अवधि के दौरान उपयोगी हो सकता है) की एक पूर्ण चक्र के बाद सप्ताह में उम्मीद की जा सकती है.

यह संभव है कि कुछ चूहों को नहीं ठीक हो सकता है, अपने वजन के 20% से अधिक खोने चूहों कम जीवित होने की संभावना हैं और जल्दी इच्छामृत्यु की आवश्यकता हो सकती है. 0.5 का एक ही आईपी इंजेक्शन - जैसे चूहों में 1.0 मिलीलीटर खारा एक उपयोगी सहायक उपाय flui को सही करने की दिशा में किया जा सकता है घ मात्रा दस्त के कारण खो दिया है.

3. Murine एंडोस्कोपी (वैकल्पिक)

  1. DSS के दूसरे या तीसरे चक्र के बाद एंडोस्कोपी vivo में ट्यूमर के विकास के लिए बलिदान से पहले पुष्टि करने के लिए किया जा सकता है. AOM / मॉडल DSS ट्यूमर के उत्पादन में काफी विश्वसनीय है, इस कदम को आम तौर पर आवश्यक नहीं है. केवल कुछ चूहों को इस पद्धति का उपयोग करके मूल्यांकन किया है, के रूप में यह करने के लिए माउस ट्यूमर को बाधित करने की क्षमता है 11.
  2. साँस या इंजेक्शन बेहोश करने की क्रिया के साथ माउस anesthetize.
  3. बाद माउस anesthetized है, एक फ्लैट बोर्ड के टेप के साथ पूंछ और छाती पर माउस सुरक्षित.
  4. माउस मलाशय धीरे खारा का उपयोग करने के लिए और बढ़ सिंचाई intraluminal दृश्य में सुधार और fecal सामग्री को हटाने में murine endoscope अग्रिम. (ध्यान दें कि एंडोस्कोपी भी खारा के लिए एक विकल्प है और इस तकनीक के रूप में हवा फूँकना का उपयोग किया जा सकता है ट्यूमर के सुधार की पेशकश दृश्य 12 हो सकता है.)
ई "बलिदान> 4 माउस और आंतों कटाई

  1. 70 दिन, प्रत्येक AOM / DSS इलाज माउस बंदरगाह कई बृहदान्त्र ट्यूमर और मूल्यांकन के लिए तैयार होना चाहिए. इस तिथि सप्ताहों और महीनों के लिए देरी हो सकता है अगर बड़ा ट्यूमर के वांछित हैं. (ध्यान दें, गंभीर prolapsed मलांत्र - विषयक साथ चूहों जल्दी euthanized संस्थागत जानवरों की देखभाल समितियों के प्रति के रूप में पशुओं को अत्यधिक असुविधा से बचने की जरूरत हो सकता है.)
  2. पोस्टमार्टम करने के लिए के लिए पहले, व्यक्तिगत isoflurane और गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था (या अन्य संस्थागत मंजूरी दे दी विधि) के साथ चूहों euthanize. Final वजन और अन्य माप इस समय किया जा सकता है.
  3. अपने उदर पक्ष के साथ एक काटने बोर्ड पर उजागर माउस निर्धारित करना. 70% इथेनॉल के साथ पेट को कवर करने के लिए बृहदान्त्र की निकासी के दौरान पेट की सामग्री contaminating से बाल को रोकने के लिए.
  4. संदंश का प्रयोग करने के लिए पेट के midline समझ और एक छोटा सा चीरा बनाने के लिए पेरिटोनियम बेनकाब.
  5. पेट के प्रत्येक पक्ष पर तटीय मार्गी साथ इस चीरा बढ़ाएँn.
  6. कैंची का उपयोग करने के लिए श्रोणि के माध्यम से तो काट कि बृहदान्त्र anorectal जंक्शन के नीचे काटा जा सकता है. यह महत्वपूर्ण है क्योंकि DSS बृहदांत्रशोथ चोट डिस्टल मलाशय में सबसे बड़ा है और तदनुसार, यह सबसे बड़ा ट्यूमर के विकास के क्षेत्र है.
  7. Mesenteric लिम्फ नोड्स के रूप में अतिरिक्त ऊतकों को भी इस समय काटा जा सकता है.

5. Macroscopic विश्लेषण के लिए Colon की तैयारी

  1. एक 18G नलिका - पोषण एक 5 मिलीलीटर सिरिंज जुड़ी सुई का प्रयोग, ठंडा खारा (पीबीएस) जैसे कि शारीरिक दिशा में तरल पदार्थ बाहर निकलता है फॉस्फेट-buffered साथ बृहदान्त्र फ्लश. यदि बृहदान्त्र ऊतक शाही सेना या प्रोटीन आधारित विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जाएगा, यह पूर्व ठंडा काम ट्रे को रोजगार से ठंडा रखा जा सकता है.
  2. में flushed बृहदान्त्र longitudinally खोलें और ठंड ट्रे पर अन्त्रपेशी रंग के साथ. ट्यूमर अधिक आसानी से कल्पना जब बृहदान्त्र एक अंधेरे सतह पर रखा गया है. वैकल्पिक रूप से, 1% Alcian नीले डाई टी उजागर लागू किया जा सकता हैumors. ट्यूमर और एक शासक या डिजिटल कैलिपर के साथ आकार और संख्या का आकलन करें.
  3. ट्यूमर और आसन्न सामान्य ऊतक के छोटे वर्गों के भविष्य के विश्लेषण के लिए इस बिंदु पर excised किया जा सकता है, शाही सेना, प्रोटीन, या immunohistochemical तरीकों (आईएचसी) द्वारा histological मूल्यांकन के लिए शेष बृहदान्त्र के कुछ हिस्से को छोड़कर.

तुरंत 5.2 कदम के बाद सकल बृहदान्त्र नमूनों की डिजिटल फोटोग्राफी ट्यूमर बोझ के सटीक विश्लेषण के लिए उपयोगी हो सकता है, खासकर अगर कोलन की महत्वपूर्ण भाग विश्लेषण के अन्य रूपों के लिए excised ऊपर वर्णित के रूप में कर सकते हैं. ट्यूमर बोझ (%) ट्यूमर क्षेत्र / कुल बृहदान्त्र क्षेत्र ImageJ के रूप में मुफ्त सॉफ्टवेयर का उपयोग कर के रूप में गणना की जा सकती है.

6. Histological आकलन आंतों के लिए तैयार

  1. लागू 10% सिरिंज या उंगली के माध्यम से ठंड ट्रे पर शेष बृहदान्त्र formalin. ऊतक कम से कम 30 सेकंड के लिए इस तरीके से तय करने के लिए अनुमति दे निर्धारण बेसिन को हस्तांतरण की सुविधा. सुनिश्चित करें अवशिष्ट formalin wipएड से पहले ही ट्रे पर एक नया खोला बृहदान्त्र पेंटिंग करने के लिए.
  2. एक formalin 10% के साथ भरा बेसिन के कोलन स्थानांतरण और किनारों पर नीचे पिन.
  3. निर्धारण के 3 घंटा के बाद, 70% इथेनॉल कोलन हस्तांतरण. Colons अनिश्चित काल के 70% इथेनॉल में संरक्षित किया जा सकता है.
  4. बृहदान्त्र (समीपस्थ, मध्य / डिस्टल मलाशय) के तीन अनुदैर्ध्य वर्गों 2% अगर में स्थिर किया जा सकता है और पैराफिन embedding के लिए प्रस्तुत की. विश्वास दिलाता हूं कि प्रॉक्सिमल बृहदान्त्र और मलाशय बृहदान्त्र / डिस्टल प्रत्येक माउस के लिए एक समान तरीके से उन्मुख होते हैं.
  5. Dysplasia, तहखाना क्षति, और सूजन और वर्णित किया जा सकता है एक अनुभवी व्यक्ति द्वारा मूल्यांकन पहले प्रकाशित प्रोटोकॉल के अनुसार 10, 13-15 चूहे 70 दिन पहले लगाया जा सकता अगर experimenter जल्दी dysplastic घटनाओं का पता लगाने में दिलचस्पी है.

7. प्रतिनिधि परिणाम

AOM / DSS यहाँ बताया मॉडल शोधकर्ता चूहों में मज़बूती बृहदान्त्र ट्यूमर उत्पन्न करने के लिए अनुमति देता है.इस मॉडल में ट्यूमर के विकास सीधे जुड़े भड़काऊ प्रक्रिया से प्रभावित है. बृहदांत्रशोथ गंभीरता वजन घटाने और दस्त / Hematochezia की उपस्थिति (2 चित्रा) के बाद से चिकित्सकीय निगरानी करनी चाहिए. रोग गतिविधि के ये लक्षण DSS चक्र के 5 दिन और चार या अधिक दिनों के लिए शुरू DSS के बाद निकाल दिया जाता है होते हैं. शायद ही कभी एक महत्वपूर्ण गुदा ट्यूमर बोझ के साथ चूहों मलाशय के आगे को बढ़ाव विकसित कर सकते हैं. दूसरे या तीसरे DSS चक्र दस्त के बाद लगातार हो सकता है. आमतौर पर मौजूद ट्यूमर और murine DSS (3 चित्रा) के तीसरे चक्र के लिए पहले colonoscopy द्वारा पहचाने जा सकते हैं. अतिरिक्त समय और फसल (चित्रा 4) के समय में बड़े ट्यूमर में DSS परिणामों के एक तिहाई पाठ्यक्रम. Topically लागू Alcian दाग नीले रंग के प्रयोग के ट्यूमर (चित्रा 5) को उजागर करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. Colonic ट्यूमर के फोटो ट्यूमर माप है जो इस्तेमाल किया जा सकता है पैदा करने में सहायता करने के लिए मात्रात्मक ट्यूमर उत्पादन और आकार की तुलनाप्रयोगात्मक समूहों के बीच (6 चित्रा). फिक्स्ड और आयल एम्बेडेड बृहदान्त्र नमूनों ऊतक विज्ञान के लिए तो या immunohistochemical धुंधला हो जाना (7 चित्रा और 8) के उपयोग के साथ मूल्यांकन किया जा सकता है.

चित्रा 1
चित्रा 1 AOM और DSS प्रशासन की योजनाबद्ध. AOM (10 मिग्रा / किग्रा) 0 दिन पर इंजेक्ट किया जाता है. दूसरे सप्ताह (7 दिन) की शुरुआत में, 2.5% DSS समाधान उनके पीने के पानी में चूहों के लिए किया जाता है. DSS के सात दिनों के autoclaved पानी के दो सप्ताह के द्वारा पीछा किया जाता है. DSS के एक अतिरिक्त दो चक्र पहले प्रशासित बलिदान करने के लिए.

चित्रा 2
चित्रा माउस 2 AOM और DSS प्रशासन के दौरान आधारभूत के सापेक्ष वजन. ध्यान दें कि सप्ताह में प्रत्येक DSS चक्र के बाद, चूहों लॉस ई अपने शरीर के वजन के 5-10%. इस प्रयोग में वजन घटाने बृहदांत्रशोथ गंभीरता के लिए एक किराए मार्कर है.

चित्रा 3
चित्रा 3 AOM / DSS उपचार के 50 दिन के में murine एंडोस्कोपी के माध्यम से बाहर का बृहदान्त्र में ट्यूमर के देखें. कई polypoid बाहर का बृहदान्त्र के लुमेन निरोधक सामान्य बृहदान्त्र की तुलना में (ख, ग) (क) जनता नोट.

चित्रा 4
चित्रा 4. Longitudinally माउस बृहदान्त्र ट्यूमर के सकल उपस्थिति illustrating खोला. बाहर का बृहदान्त्र / मलाशय (ऊपरी बाएँ छवि) में उच्च ट्यूमर बोझ, और छोटे ट्यूमर के विकास के साथ प्रॉक्सिमल बृहदान्त्र (सही ऊपरी छवि) की विशेषता rugated बनावट नोट. बाहर का बृहदान्त्र के दृश्य एक करीबी अलग आकार (नीचे) के कई ट्यूमर से पता चलता है.

को ove_content "के लिए: रखने together.within पृष्ठ ="> हमेशा " चित्रा 5
चित्रा 5 Alcian नीले के आवेदन पर प्रकाश डाला द्वारा ट्यूमर दाग. नोट कैसे डाई बृहदान्त्र के सामान्य बनावट के रूप में के रूप में अच्छी तरह से प्रत्येक व्यक्ति के ट्यूमर की सीमाओं पर जोर देती है. ऐसे धुंधला हो जाना शासक या डिजिटल माप द्वारा ट्यूमर क्षेत्रों की सटीक माप में सहायक हो सकता है.

चित्रा 6
चित्रा 6 माउस के प्रति ट्यूमर AOM / DSS के साथ इलाज की औसत संख्या के प्रतिनिधि वितरण. ट्यूमर के बहुमत बाहर का बृहदान्त्र में स्थित हैं और <2 मिमी आकार में हैं.

चित्रा 8
7 चित्रा आयल एम्बेडेड एक कैसेट में पेट के अनुदैर्ध्य वर्गों (ऊपर).एच एंड ई के बाद स्लाइड पर दाग (नीचे). ध्यान दें कि अवशिष्ट Alcian नीले दाग एच एंड ई धुंधला हो जाना के साथ हस्तक्षेप नहीं करता है. एक बड़े ट्यूमर का स्लाइड छवि (परिक्रमा) परिक्रमा है. पदनाम "डिस्टल," "मध्यम" और "तिहाई cecum और गुदा के बीच में पूरे बृहदान्त्र सेक्शनिंग से समीपस्थ" परिणाम.

चित्रा 8
8 चित्रा बाहर का बृहदान्त्र में AOM / DSS प्रशासन से उत्पन्न ट्यूमर के प्रतिनिधि ऊतक विज्ञान. एच एंड ई, BrdU, और (शीर्ष पैनल) 50X और 400x β catenin दाग स्लाइड्स (नीचे पैनल) क्रमशः dysplastic बृहदान्त्र के मानव adenocarcinomas के लिए इसी तरह के परिवर्तन का प्रदर्शन.

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Discussion

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AOM और DSS के साथ तेजी से और प्रभावी मॉडल मानव कोलाइटिस से जुड़े कैंसर चूहों के उपचार. Hypotheses बृहदांत्रशोथ जुड़े कैंसर के लिए योगदान कारकों पैतृक के बारे में आसानी से अनुवांशिक इंजीनियर चूहों के साथ अध्ययन किया जा सकता है 13, वैकल्पिक रूप से 16, बृहदांत्रशोथ - जुड़े कैंसर में pharmacologic लक्ष्य के प्रभाव जंगली प्रकार चूहों को रोजगार के द्वारा अध्ययन किया जा सकता है.

जबकि इस मॉडल अत्यधिक बृहदान्त्र सूजन की सेटिंग में ट्यूमर के विकास के अध्ययन में रुचि रखने वालों के द्वारा मूल्यवान है, सीमाओं मौजूद हैं. बीमारी की हद तक इस मॉडल में चूहों में मनाया काफी माउस तनाव और आवास की स्थिति (caging, भोजन, microbiota, आदि) के आधार पर भिन्न हो सकते हैं. सुजुकी एट. अल बताया कि / Balb ग चूहों सबसे / AOM DSS, द्वारा पीछा करने के प्रति संवेदनशील थे (ट्यूमर की घटना और बहुलता को कम करने के क्रम में) C57BL/6N, C3H/HeN, और DBA/2N चूहों 17. DSS और AOM अकेले / 129 में शामिल प्रयोगों Sv चूहों एक मोड भविष्यवाणी करेगादर संयुक्त उपचार के लिए प्रतिक्रिया, चूहों C57/BL6J 18, 19 के लिए इसी तरह की है. इसलिए, पायलट प्रयोगों के लिए सबसे प्रभावी dosing प्रोटोकॉल उपलब्ध सुविधाओं और संसाधनों के आधार पर निर्धारित करने के लिए आवश्यक हो सकता है. जबकि बृहदान्त्र / AOM DSS ट्यूमर मानव कोलोरेक्टल कैंसर histologically जैसे लगते हैं, वे शायद ही कभी मेटास्टेसिस दिखा रहे हैं. एक आणविक स्तर पर, β-catenin, कॉक्स-2, और INOS, लेकिन नहीं p53 में परिवर्तन किया गया है. सूचित किया है 20 Kanneganti एट. अल. सीएसी की रुचि रखने वालों के लिए शामिल करने के लिए एक वैकल्पिक मॉडल का गहन अवलोकन प्रदान करने के लिए 5.

परिणामों के reproducibility बढ़ाने के लिए, हम विभिन्न आनुवंशिक पृष्ठभूमि (जैसे WT और जीन चूहों बाहर विशिष्ट दस्तक के रूप में) एक विशेष रोगज़नक़ मुक्त सुविधा (एसपीएफ़) में प्रयोग शुरू करने के लिए 3-4 सप्ताह पहले बंदी की है कि चूहों की सिफारिश, यह है विशेष रूप से चूहों अगर महत्वपूर्ण नव एक वाणिज्यिक प्रजनन सुविधा से दिया जाता है. हालांकि किसी भी सेक्स और उम्र से मिलान चूहों इस्तेमाल किया जा सकता है, wई सभी मादा चूहों के साथ सबसे अनुरूप परिणाम मनाया गया है. AOM स्टॉक समाधान अगर एक वर्ष से अधिक पुराने नहीं प्रयोग किया जाता है, चाहिए, और यह महत्वपूर्ण है कि इन समाधान के कई फ्रीज पिघलना चक्र से बचने. बृहदांत्रशोथ गंभीरता माउस के रूप में इस के बारे स्रोत के रूप में अच्छी तरह से इस्तेमाल किया फ़ीड के प्रकार से प्रभावित किया जा सकता है, इन कारकों प्रयोगों के बीच लगातार रखा जाना चाहिए. हम DSS लंबे समय के (> 4 दिनों) संदूषण के विचारोत्तेजक के लिए माउस पिंजरों में छोड़ दिया बोतलों में turbidity मनाया है, इसलिए, refrigerating और प्रत्येक प्रशासन के शुरू में ताजा DSS की तैयारी इस जटिलता से बचना होगा. यदि कुछ ट्यूमर विकसित या चूहों समय से पहले मर जाते हैं, Neufert एट. अल. उनके प्रोटोकॉल / AOM DSS सारांश में समस्या निवारण सलाह के एक उत्कृष्ट मेज प्रदान 6.

एक बार AOM / कोलाइटिस से जुड़े कैंसर के विकास के लिए DSS तकनीक में महारत हासिल है, इन चूहों के विभिन्न विभिन्न अतिरिक्त जांच सकता है. प्रदर्शन कर सकते हैं 21 उम्मीदवार की अभिव्यक्तिनिकाले शाही सेना की मात्रात्मक पीसीआर प्रवर्धन के माध्यम से बृहदान्त्र ट्यूमर बनाम ट्यूमर मुक्त वर्गों में जीन का अध्ययन किया जा सकता है. क्योंकि DSS ही इस प्रक्रिया के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं, हम पहले पाली एक शुद्धि की सलाह देते हैं प्रवर्धन बृहदान्त्र के 22 भाग फ्लैश जमे हुए प्रोटीन अभिव्यक्ति के लिए वेस्टर्न ब्लॉट द्वारा अध्ययन किया जा किया जा सकता है. बृहदांत्रशोथ - जुड़े कैंसर की जांचकर्ता सेल प्रसार के दृश्य मार्करों में रुचि हो सकती है. यह अंत करने के लिए, AOM DSS / इलाज चूहों bromodeoxyuridine (BrdU) 90 मिनट के लिए बलिदान के लिए पूर्व के साथ इंजेक्शन जा सकता है, इन लेबल नाभिक अच्छी तरह से दोनों ट्यूमर और ट्यूमर मुक्त वर्गों के भीतर सबसे बड़ा उपकला प्रसार, साथ पेट में दस्तावेजों क्षेत्रों के लिए immunohistochemistry. 23

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Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Acknowledgments

इस काम के हिस्से में DK089016 और L30 RR030244 (मैक), CA153036 (के रूप में), और P30-DK52574 (वाशिंगटन विश्वविद्यालय पाचन रोग अनुसंधान कोर) द्वारा वित्त पोषित किया गया था. AIT एक हॉवर्ड ह्यूजेस मेडिकल इंस्टीट्यूट मेडिकल रिसर्च ट्रेनिंग फैलो था.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
C57BL/6J Mice Jackson Laboratory 000664
Azoxymethane (AOM) Sigma Aldrich A5486-100MG Stock solution: dilute to 10 mg/ml in distilled water to be kept at -20 °C as 0.5 - 1 ml aliquots.
Working solution: dilute stock to 1 mg/ml in isotonic (0.9%) saline
Dextran Sulfate Sodium (DSS) TdB Consultancy DB001 MW 40 kDa (36-50 kDa preparations from other sources are acceptable; The same lot should be used for a single experiment)6
Coloview miniendoscopic system Karl Storz Multiple See Becker et al. for detailed explanation of equipment and setup.11
TPP Rapid FILTERMAX 500 ml Bottle-Filter, 0.22 μm PES Midwest Scientific TP99500 Any standard tissue culture filter is acceptable
Ethyl Alcohol 200 Proof ASC/USP Pharmaco-AAPER (or other) 11ACS200 Dilute to 70% in distilled water
Isoflurane, USP Butler Animal Health Supply 4029405 Place mouse in glass jar with gauze or a small cloth soaked in anesthetic
18G Straight Gavage Needle Braintree Scientific N-008
Phosphate Buffered Saline (PBS) Sigma Aldrich P5493 Dilute to 1X (0.01 M) in distilled water
Cold Tray (Tissue Tek II Cold Plate) Fisher Scientific NC9491941 Store at -20 °C
ImageJ Software NIH (free download) http://rsbweb.nih.gov/ij/
Formaldehyde (37%) Fisher Scientific F79-500 Dilute to 10% in PBS
BD Bacto Agar Fisher Scientific DF0140-01-0 Use hotplate to create 2% solution in distilled water
Miltex Eye Dressing Forceps MedPlus Inc. 18-780
Miltex Eye Scissors MedPlus Inc. 18-1430 Curved points prevent damage to colon during opening.
Alcian Blue 8GX (powder) Sigma Aldrich A5268 Add 1 g powder to 100 ml 3% acetic acid (3 ml glacial acetic acid + 97 ml distilled water)
1 mL Tuberculin syringe with attached 26 G x 3/8 in intradermal bevel needle BD 305946 For injection of AOM

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References

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मॉडलिंग (AOM) Azoxymethane और Dextran सल्फेट सोडियम (DSS) के साथ कैंसर बृहदांत्रशोथ एसोसिएटेड
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Cite this Article

Thaker, A. I., Shaker, A., Rao, M. S., Ciorba, M. A. Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS). J. Vis. Exp. (67), e4100, doi:10.3791/4100 (2012).More

Thaker, A. I., Shaker, A., Rao, M. S., Ciorba, M. A. Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS). J. Vis. Exp. (67), e4100, doi:10.3791/4100 (2012).

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