Summary
Abstract
Deze video beschrijft de fabricage en het gebruik van een microfluïdische apparaat om de cultuur van het centrale zenuwstelsel (CZS) neuronen. Dit apparaat is compatibel met de live-cell optische microscopie (DIC en fase contrast), maar ook confocale microscopie en twee foton benaderingen. Deze methode maakt gebruik van precisie-gegoten polymeer onderdelen miniatuur meerdere compartimenten celkweek te creëren met vloeibare isolatie. De compartimenten zijn gemaakt van kleine kanalen met afmetingen die groot genoeg zijn om de cultuur neuronen in goed gecontroleerde vloeibare micro-omgevingen. Neuronen kunnen worden gekweekt voor 2-3 weken in het apparaat, waarna ze kunnen worden gefixeerd en gekleurd voor immunocytochemie. Axonale en Somal compartimenten kunnen worden gehandhaafd fluidically geïsoleerd van elkaar met behulp van een kleine hydrostatische druk verschil; deze functie kan worden gebruikt om lokaliseren oplosbare beledigingen naar een compartiment voor maximaal 20 uur na elk medium te veranderen. Fluïde isolatie maakt verzameling van pure axonale fractie en biochemische analyse door middel van PCR. De microfluïdische apparaat biedt een zeer flexibele platform voor neurowetenschappelijk onderzoek en kan toepassingen vinden in het modelleren van CNS verwondingen en neurodegeneratie.
