Summary
Abstract
Questo video descrive la fabbricazione e l'uso di un dispositivo a microfluidi alla cultura del sistema nervoso centrale (SNC) neuroni. Questo dispositivo è compatibile con i live-cell microscopia ottica (DIC e contrasto di fase), così come due approcci confocale e microscopia fotone. Questo metodo utilizza precisione, parti stampate polimeri per creare in miniatura multi-comparto di coltura cellulare con l'isolamento fluidica. Gli scomparti sono fatti di piccoli canali con dimensioni che sono abbastanza grandi per i neuroni cultura in microambienti fluidico ben controllati. I neuroni possono essere coltivate per 2-3 settimane all'interno del dispositivo, dopo di che possono essere fissate e colorate per immunocitochimica. Scomparti assonale e cromosomiche possono essere mantenuti fluidically isolate l'una dall'altra, utilizzando una piccola differenza di pressione idrostatica, questa funzione può essere usata per localizzare insulti solubile ad un compartimento per un massimo di 20 ore dopo ogni cambio mezzo. Isolamento fluidico permette la raccolta di puro frazione assonale e analisi biochimiche mediante PCR. Il dispositivo a microfluidi fornisce una piattaforma estremamente adattabile per le neuroscienze di ricerca e può trovare applicazioni in lesioni modellazione SNC e neurodegenerazione.
