Summary
Гиперплазию неоинтимы является основной причиной стеноза в arterialized вены. Мы предлагаем новый протокол, согласно которому право наружной яремной вены привиты помощью манжеты техники в общую сонную артерию крыс Sprague Dawley. Выживаемость составила 100% в момент времени жертвоприношения.
Abstract
Гиперплазию неоинтимы является одной из основных причин стеноза в arterialized вен, которые имеют большое значение артериального коронарного шунтирования, в периферической артерии шунтирование, а также в артериовенозных свищей. 1-5 экспериментальной процедуры вены трансплантата вмешательство в общей сонной артерии с помощью манжеты-метод был применен в ряде научно-исследовательских проектов для изучения этиологии гиперплазии неоинтимы и терапевтические возможности для ее решения. 6-8 манжеты предотвращает ремоделирование судна анастомоза и вызывает турбулентность в трансплантата и тем самым развитию гиперплазии неоинтимы.
Использование верхней полой вены трансплантата является признанным малого животной модели для венозной эксперимент артериализации. 9-11 Этот ток протокол относится к установленным яремной вены трансплантата вмешательство техника впервые описана Zou и соавт., 9, а также другие. 12-14
Для упрощения процедуры и свести к минимуму количество подопытных животных необходимы, подробный протокол операции видео-тренинг представлен. Это видео должно помочь начинающему хирургу, чтобы узнать, как манжета-техника и вмешательство шунта. Тем самым, право наружной яремной веной был привит в манжете-техники в общей сонной артерии из 21 женщин Sprague Dawley крыс разделены на три равные группы, которые были принесены в жертву на 21 дней, 42 и 84, соответственно. Примечательно, что нет животных-доноров были необходимы, потому что автоматически трансплантации были выполнены. Выживаемость составила 100% в момент времени жертвоприношения. Кроме того, привитые проходимость составила 60% в течение первых 10 оперированных животных и 82% для остальных 11 животных. Кровотока во время жертвоприношения составил 8 ± 3 мл / мин. В заключение этого хирургического протокола значительно упрощает, стандартизирует и оптимизирует этой компанииlicated процедуры. Это дает начинающим хирургам легко, шаг за шагом инструкции, объясняя возможные подводные камни, тем самым помогая им получить знания быстро и избежать бесполезных жертв экспериментальных животных.
Protocol
1. Экспериментальные животные
- Получить местного комитета по этике разрешение на все эксперименты, которые будут проводиться в соответствии с руководящими принципами защиты животных FELASA.
- Используйте женщины Sprague-Dawley крыс приобрести у любого коммерческого селекционера (например, Charles River Wiga GmbH, Sulzfeld, Германия). Мы использовали 21 животных разделили на три группы из 7 животных в каждой, что были принесены в жертву на 3, 6 и 12 недель после операции. На момент покупки, животные должны быть 12 недель и весом 250-300 г.
- Держать животных в климат-контролем номерами, имеющими температуре окружающей среды 21 ° C, относительной влажности 60% и 12-ч цикле свет-темнота со свободным доступом к пище и воде.
2. Анестезия и оперативной подготовки
- Вызвать общим наркозом с помощью окна оргстекла связаны с анестезией машине, установлен на скорость потока кислорода на 1 л / мин, и isofluorane испаритель W5%-й анестетиком газа.
- Поддержание анестезии с isofluorane испарителя на уровне 1,5%, как только глубокие сенсорных рефлексов животных подавлен.
- Исправить крыс в положении лежа на тарелку потепления тела.
- Подготовка операции регион каждого животного путем удаления его мех с депиляция кремом, от челюсти угол до 2 см ниже рукоятки грудины.
- Подготовка стерильного операционного поля, обращая внимание на хирургическое площадь, площадь подготовлена на животных и перед хирургом:
- Очистите настольный с дезинфицирующим средством.
- Подготовка участка разреза с помощью многократного применения хирургического решения скрабом (например, хлоргексидина и 70% изопропилового спирта). Применить Хлоргексидин первый, второй алкоголя и, наконец, скраб решение.
- Носить одноразовые хирургические платье и хирургические перчатки, или, наоборот, экзамен перчатки, которые были предварительно промытого Wго хирургического дезинфицирующих средств.
- Используйте стерильные инструменты микрохирургии в операции процедуры.
- Используйте операционным микроскопом (Wild Heerbrugg M650, Gais, Швейцария) в 10-20-кратным увеличением.
3. Анатомия
На рисунке 1 показана анатомия шеи крысы:
1а) Situs до перерезки право кивательной мышцы.
1b) Situs после перерезки право кивательной мышцы.
4. Манжеты подготовка
Вырезать манжет в длину 3 мм вручную из пластиковой трубки (Portex, внутренний диаметр 0,75 мм, внешний диаметр 0,94 мм, Smiths Medical, Великобритания). Эти манжеты состоят из трубчатого корпуса манжетой, включая полный объем пластиковой трубки, а манжеты ручка, состоящая из половины манжеты объеме. Оба тела манжету и манжеты ручки должны быть одинаково LONг. Манжеты ручка имеет важное значение для манипулирования манжеты во время хирургической процедуры. После того, как манжета надевается на судне, зажим мини бульдог находится одновременно на ручке манжету и судна, с тем, чтобы предотвратить кровотечение, сохранить манжеты на место и обеспечить стабильность.
5. Манжеты техника
- Наденьте манжету на судне.
- Сразу же после этого, Эверт судна, потяните его за пределы тела манжеты и закрепите его с 7-0 шелковые лигатуры. Таким образом, просвет манжеты покрыта эндотелием. После этого, наденьте венозного трансплантата над телом манжеты и закрепите его с новой 7-0 шелковые лигатуры. Чтобы предотвратить образование тромбов, важно, чтобы закрепить связь шунта очень близко к краю манжеты для того, чтобы избежать крови от контакта с галстуком проведения артерии на месте. Это очень важно для дистального анастомоза в связи с направлением потока крови. Однако, по мнению авторов, это не считаетсянеобходимых для проксимального анастомоза по той же причине.
6. Хирургические процедуры
6.1 Подготовка правой наружной яремной веной
- Сделать приблизительный 2,5 см длиной средний шейный разрез прямо над рукояткой грудины.
- Полностью отделить 1 см длиной сегмента правой наружной яремной веной от окружающих тканей
- Лигируют венозных притоков с 7-0 нитей шелка.
6.2 Подготовка правой общей сонной артерии
- Подготовка кивательной мышц и секут его в середину.
- Подготовка правой общей сонной артерии, осторожно, стараясь не сжимать артерии или блуждающего нерва. Мобилизация его из бифуркации сонной артерии до брахиоцефальных ствола.
- Впоследствии, перевязывать его дважды в среднем с 7-0 шелковые нити до перерезки.
- Купон нейлоновые манжеты consistiнг тело и ручку (рис. 2а) на дальнем конце общей сонной артерии, при этом важно, чтобы убедиться, что манжет ручка позади судна (рис. 2б).
- Зажмите манжетами конце дистальной общей сонной артерии с мини-зажимом Бульдог именно на манжете ручкой для обеспечения стабильности (рис. 2).
- Затем разрезать артерию непосредственно за лигатуры, причем в результате артериальной пень должно быть тех пор, пока манжета тела.
- Промойте просвета артерии с гепарин-солевого раствора (20 ЕД гепарина / мл 0,9% NaCl). Установить перевязки цикл сторону в правильное положение для последующего использования.
- Потяните артериальной пень и скольжения его как втулку на манжете тела.
- Затем вытяните цикл перевязки и узлов ее крепко.
- Чтобы предотвратить артерии от ускользает из его рукав, вы можете выполнять трюк: Возьмитесь за обе стенки артерий и шов с правой стороны сimultaneously и с левой пинцетом (Рис. 2d) сделать узел (рис. 2e).
- Повторите ту же процедуру для проксимального артериального культю (рис. 2е).
6,3 Венозный трансплантат позиционирования
- Акцизный 1 см длиной сегмента зажат наружной яремной вены
- Поскольку два манжетами артерии находятся слишком далеко друг от друга для венозной вмешательство, приближенных правильное расстояние для этой процедуры с помощью 3-0 Викрил-шов, которые вы должны петля вокруг каждой мини зажим бульдог.
- Крест-накрест и швов.
- Затем потяните швы в противоположных направлениях, что позволяет правильного позиционирования манжетой артериальных пни (рис. 2г)
- Промойте вены сегмента с гепарин-солевой раствор.
- Наденьте один конец ранее обратном вены сегмента на манжетах дистальных сонной артерии и закрепите его в правильное положениения с шелковой лигатурой 7-0.
- Важно отметить, что окружность вены должны быть полностью и равномерно держаться.
- Промойте вены сегмента с гепарин-солевой раствор, и подсунуть другой конец вены сегменте более проксимальных сонной пень.
- Завершить перевязки (рис. 2 часа);
- Снимите мини-зажимы бульдог одна за другой, сначала на дистальных сонной артерии пень, а затем на проксимальной, тем самым позволяя беспрепятственно кровотока и артериализации венозного трансплантата (рис. 2г). Операция считается успешной, если кровоток и пульсации наблюдаются в трансплантата и общей сонной артерии (определяется визуально).
6.4. Закрытие раны
Для шва ход подкожно, использовать 4-0 Викрил. Для кожных швом, используйте 3-0 Викрил.
7. Восстановление и послеоперационного <Управление/ P>
- Пусть животных оправиться от наркоза на плоской кровати бумаги под инфракрасной лампой потепления. Не возвращать оперированных животных в районе проведения животного, пока все животные выглядят нормальными.
- Послеоперационном периоде управлять бупренорфин (Temgesic) в концентрации 0.03-0.05 мг / кг массы тела подкожно каждые 8-12 часов в течение 2 дней. Бупренорфин можно вводить непосредственно перед isofluorane индукции.
- Монитор животных после операции для их общего состояния и признаков болезни или инфекции.
8. Измерение потока крови
Послеоперационной проходимости трансплантата была доказана измерения артериального потока, с помощью исследования крови Transonic системы измерения потока (модели: TS420, Transonic Systems Europe BV, Маастрихт, Нидерланды) с периваскулярные flowprobe (3 мм, MA3PSB). Система основана на принципе Доплера.
9. Представитель Результаты
По Faithfully сохранении вышеупомянутых инструкций, средняя продолжительность хирургических операций составил около 65 мин. Животные представлены прекрасной физической форме и набрала вес, как ожидалось в течение всего эксперимента: на начальном этапе эксплуатации животных весом 312 ± 20,39 гр. В момент жертвоприношения время 3 недели после операции животные весили 325,2 ± 28,7 г, через 6 недель 333 ± 39,9 г и в 12 недель 362,22 ± 29 г.
Нет инфекции были обнаружены на месте эксплуатации и не разработали язвы. Операция раны полностью зажили в ожидаемое время. Неврологических управления не проявлял никаких признаков инфаркта мозга или моторной недостаточности. Позже был важный момент, так как животные были работать в сонной артерии и одна из двух наружной яремной вены удаляют и используют в качестве автоматического пересадки. Нет аллергические реакции на послеоперационную терапию с нищетой боли не наблюдалось.
> Все животные были бдительными и социальной протяжении всего эксперимента. Их привычки, касающиеся получения пищи и воды остается неизменным на протяжении всего времени.
Выживаемость всех экспериментах составляло 100% в момент времени жертвоприношения. Трансплантат проходимость составила 60% в течение первых 10 оперированных животных и, соответственно, 82% для остальных 11 животных. Общая проходимость трансплантата составила 71%. Кровотока в венозных трансплантатов arterialized измеряли в момент времени жертвоприношения и составила 8 ± 3 мл / мин без каких-либо статистически значимых различий между тремя точками жертву времени.
Рисунок 1. Анатомия шеи крысы. 1а) Situs до перерезки право кивательной мышцы. 1b) Situs после перерезки право кивательной мышцы.
На рис. 2 Интраоперационная микроскопических фотографий: а) манжеты, состоящие из манжеты тела и манжеты ручкой, б) манжета надевается на дальний конец общей сонной артерии, в) зажим манжетами дистальных общей сонной артерии пень, г) выворачивание общей сонной артерии культи над манжетой, д) обеспечение вывернутой общей сонной артерии культи с вязью, е) места нахождения имущества после выворачивания и манжетами дистальных и проксимальных общей сонной артерии пни; г) крест-накрест техника для приближения двух манжетой общей сонной артерии пни; ч) Situs после того, как вмешательство венозной; я) места нахождения имущества после реперфузии трансплантата вмешательство вен.
Рисунок 3. Схематическое изображение Situsпосле реперфузии трансплантата вмешательство вен. Нажмите, чтобы увеличить показатель .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Промежуточные наружной яремной вены трансплантата в общей сонной артерии является сложной техникой микрохирургии. Это видео поможет начинающему хирургу освоить эту технику в минимальные сроки с более низкой отходов экспериментальных животных.
Ингаляционные анестезия является лучшим вариантом для этой операции, так как это позволяет избежать чрезмерно глубокого наркоза этапе, может быть хорошо управляется и позволяет хирургу достаточно времени, чтобы работать. Кроме того, крысы экспериментальных животных, которые предлагает подходящий размер, чтобы практиковать такие сложные хирургические методы намного легче, по сравнению с мышью.
Преимущество использования манжеты техники является то, что судами различных диаметров просвета может быть анастомозируют. Важно, чтобы перевязывать полной окружности манжетами и вывернутой суда, чтобы избежать кровотечения после реперфузии. Эта модель очень подходит для моделирования гемодинамики высокой скорости кровотока и низким напряжением сдвига и изучениямеханизмов, которые влияют на развитие гиперплазии неоинтимы. Манжета предотвращает ремоделирование судна анастомоза и вызывает турбулентность в трансплантата и тем самым развитию гиперплазии неоинтимы.
Чтобы предотвратить образование тромбов, важно, чтобы поместить галстук шунта 2 в подходящем положении, чтобы предотвратить объединение крови с галстуком 1 Холдинг артерии в месте (рис. 3). 9 Связывание шунта в рекомендованных образом не ограничивает тромботические События на 12-13% и окклюзии сосуда до еще более низких пропорциях. 15 Как он может увидеть в работе видео, это не легко разместить галстук именно в том, что предлагаемое положение. Авторы считают, что это важно для дистального анастомоза, в частности, в связи с направлением потока крови. С другой стороны, это не считается абсолютно важно для проксимального анастомоза по той же причине.
В отличие от процедуры с помощью полой VEin как взяточничество, это аутотрансплантации помощью наружной яремной веной, как трансплантат снижает необходимое количество подопытных животных в два раза. В конечном счете, промежуточные наружной яремной вены трансплантата в общей сонной артерии является сложной техникой микрохирургии. Это видео поможет начинающему хирургу освоить эту технику в минимальные сроки с более низкой отходов экспериментальных животных. Эта модель является отличным средством для начинающих хирургов практикуют манжеты-техника, которая в настоящее время используется в твердых трансплантации органов у мелких животных.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Нет конфликта интересов объявлены.
Acknowledgments
Это исследование было профинансировано в рамках программы продвижения исследований "START" на медицинском факультете Университета Аахена, Германия (Title: "Die Arterialisation venöser Gefäße" START 690753). Мы хотели бы поблагодарить г-жа Мари-Жоан Blümich за отличную помощь редактирования.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Braided Silk black 7-0 | Ethicon Products | 892100 | |
| Vicryl 3-0 | Ethicon Products | J285G | |
| Vicryl 4-0 | Ethicon Products | J284G | |
| Portex non sterile nylon tubing 0.75 mm, 0.94 mm Fine-Bore Polyethylene (Polythene) Tubing | Portex UK | 800/200/175/100 | |
| Isofluorane 5 % | Any genericon | ||
| Heparin | Any genericon | ||
| 0.9% saline | Any genericon | ||
| Buprenorphine | Any genericon |
References
- Motwani, J. G., Topol, E. J. Aortocoronary saphenous vein graft disease: Pathogenesis, Predisposition, and Prevention. Circulation. 97, 916-931 (1998).
- Bonatti, J., Oberhuber, A., Schachner, T., Zou, Y., Hammerer-Lercher, A., Mittermair, R., Laufer, G. Neointimal hyperplasia in coronary vein grafts: Pathophysiology and prevention of a significant clinical problem. The Heart Surg. , E72-E87 (2004).
- Roy-Chaudhury, P., Kelly, B. S., Zhang, J., Narayana, A., Desai, P., Melhem, M., Duncan, H., Heffelfinger, S. C. Hemodialysis Vascular Access Dysfunction: From Pathophysiology to Novel Therapies. Blood Purif. 21, 99-110 (2003).
- Dixon, B. S. Why don't fistulas mature. Kidney Int. 70, 1413-1422 (2006).
- Newby, A. C., Zaltsman, A. B. Molecular mechanisms in intimal hyperplasia. J. Pathol. 190, 300-309 (2000).
- Schachner, T., Heiss, S., Zipponi, D., Tzankov, A. Perivascular treatment with azathioprine reduces neointimal hyperplasia in experimental vein grafts. Heart Surg. 9, E515-E517 (2006).
- Zhang, L., Sivashanmugam, P., Wu, J. H., Brian, L., Exum, S. T., Freedman, N. J., Peppel, K. Tumor necrosis factor receptor-2 signaling attenuates vein graft neointima formation by promoting endothelial recovery. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 28, 284-289 (2008).
- Tzankov, A., Mairinger, T., Laufer, G., Bonatti, J. O. Local application of rapamycin inhibits neointimal hyperplasia in experimental vein grafts. Ann. Thorac. Surg. 77, 1580-1585 (2004).
- Zou, Y., Dietrich, H., Hu, Y., Metzler, B., Wick, G., Xu, Q. Mouse Model of Venous bypass graft arteriosclerosis. A.J.P. 153, 1301-1310 (1998).
- Schachner, T., Oberhuber, A., Zou, Y., Tzankov, A., Ott, H., Laufer, G., Bonatti, J. Rapamycin treatment is associated with an increased apoptosis rate in experimental vein grafts. Eur. J. Cardiothorac. Surg. 27, 302-306 (2005).
- Ali, Z., Bursill, C., Hu, Y., Choudhury, R. P., Xu, Q., Greaves, D. R., Channon, K. M. Gene transfer of a broad spectrum CC-chemokine inhibitor reduces vein graft atherosclerosis in apolipoprotein E-knockout mice. Circulation. 30, 1235-1241 (2005).
- Zou, J., Zhang, X., Yang, H., Zhu, Y., Ma, H., Wang, S. Rapamycin-loaded nanoparticles for inhibition of neointimal hyperplasia in experimental vein grafts. Ann. Vasc. Surg. 25, 538-546 (2011).
- Wang, J., Liu, K., Shen, L., Wu, H., Jing, H. Small interfering RNA to c-myc inhibits vein graft restenosis in a rat vein graft model. J. Surg. Res. 169, e85-e91 (2011).
- Schachner, T., Zou, Y., Oberhuber, A., Mairinger, T., Tzankov, A., Laufer, G., Ott, H., Bonatti, J. Perivascular application of C-type natriuretic peptide attenuates neointimal hyperplasia in experimental vein grafts. Eur. J. Cardiothorac. Surg. 25, 585-590 (2004).
- Thomas, A. C., Newby, A. C. Effect of matrix metalloproteinase-9 knockout on vein graft remodelling in mice. J. Vasc. Res. 47, 299-308 (2010).
