Summary
एक सब्सट्रेट पर कोशिका आसंजन की टोपोलॉजी चर कोण कुल आंतरिक प्रतिबिंब प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी (VA-TIRFM) द्वारा नैनोमीटर परिशुद्धता के साथ मापा जाता है.
Abstract
भूतल टोपोलॉजी, एक सब्सट्रेट पर बढ़ कोशिकाओं जैसे, चर कोण कुल आंतरिक प्रतिबिंब प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी (VA-TIRFM) परिशुद्धता के साथ नैनोमीटर निर्धारित किया जाता है. कोशिकाओं पारदर्शी स्लाइड पर खेती की जाती है और एक फ्लोरोसेंट homogeneously अपने प्लाज्मा झिल्ली में वितरित मार्कर के साथ incubated. क्षणभंगुर विद्युत चुम्बकीय क्षेत्र के विभिन्न प्रवेश गहराई के साथ कुल आंतरिक प्रतिबिंब (TIR) के चर कोण के तहत एक समानांतर लेजर बीम रोशनी के द्वारा होता है. प्रतिदीप्ति छवियों की रिकॉर्डिंग के बारे में 10 विभिन्न कोणों पर विकिरण पर नैनोमीटर कुछ के एक परिशुद्धता के साथ सेल सब्सट्रेट दूरी की गणना करने के लिए परमिट. विभिन्न सेल लाइनों, जैसे कैंसर कोशिकाओं और कम घातक कोशिकाओं आसंजन के बीच का अंतर इस प्रकार निर्धारित कर रहे हैं. इसके अलावा, रासायनिक या photodynamic उपचार पर कोशिका आसंजन संभव परिवर्तनों की जांच की जा सकती है. माइक्रोस्कोपी प्रकाश जोखिम सुपर संकल्प के अन्य तरीकों के साथ तुलना में रखा जाता हैजीवित कोशिकाओं का बहुत छोटा है, और कोई नुकसान होने की उम्मीद है.
Introduction
जब एक प्रकाश अपवर्तक सूचकांक 1 n के एक माध्यम के माध्यम से प्रचार बीम अपवर्तक सूचकांक 2 n 2 मध्यम के लिए एक इंटरफेस मिलता <1, कुल आंतरिक प्रतिबिंब घटना Θ के सभी कोण, जो महत्वपूर्ण कोण से अधिक कर रहे हैं पर होता है Θ ग = arcsin (2 n n / 1). घटना प्रकाश किरण पूरी तरह परिलक्षित बावजूद किया जा रहा है एक क्षणभंगुर विद्युत चुम्बकीय क्षेत्र है कि मैं के अनुसार 2 मध्यम और अंतरफलक से लम्बवत दूरी z साथ तेजी decays में प्रवेश उदाहरण भी देते हैं (z) = मैं 0 ez / घ (Θ). मैं (z) विद्युत चुम्बकीय क्षेत्र और घ (Θ) की तीव्रता तरंगदैर्ध्य λ में प्रवेश गहराई से मेल खाती है, के रूप में द्वारा दिए गए
घ (Θ) = (λ/4π) (n 1 2 2 पाप Θ - 2 n 2) / 2 -1
रूप में साहित्य 1,2 में सूचना दी, मैं 0 ई संचरण कारक (Θ) टी और अनुपात n / 2 n 1 के साथ गुणा घटना के प्रकाश की तीव्रता से मेल खाती है. यदि इस प्रकाश बीम का बिजली क्षेत्र सदिश घटना के विमान (घटना और परिलक्षित बीम से फैला विमान यानी) polarized सीधा है, इस संचरण कारक द्वारा दिया जाता है
(Θ) टी = 4 क्योंकि 2 / Θ [1 - 2 (2 n / nl 1)]
TIRFM माप में पता लगाया प्रतिदीप्ति तीव्रता के लिए, प्रकाश अवशोषण नमूना के सभी परतों पर एकीकृत किया जा प्रतिदीप्ति मात्रा उपज η प्रासंगिक डाई के साथ के रूप में के रूप में अच्छी तरह से Ω का पता लगाने के ठोस कोण के साथ गुणा है. 3 के रूप में पहले से सूचना दी, इस तीव्रता से वर्णित किया जा सकता है
मैं एफ (Θ) = (Θ OC) (z) में ई - z / घ (Θ) dz
अगर सभी कारक हैं जो स्वतंत्र हैं च रॉम घटना के कोण Θ और समन्वय z प्रयोगात्मक निरंतर ए 3 समीकरण में शामिल हैं analytically हल किया जा सकता है, अगर fluorophores की एकाग्रता ग (z) लगभग स्थिर हो जाता है
- या तो सभी निर्देशांक z ≥ Δ, अंतरफलक से दूरी Δ होने कोशिकाओं के cytoplasm भीतर उदा. इस मामले में, अभिन्न z = Δ से z = जिसके परिणामस्वरूप ∞ में गणना की जा
मैं एफ = ए सी टी (Θ घ) (Θ) / ई - Δ घ (Θ)
- या z के बीच Δ = - टी / 2 और z / 2 = Δ + टी, यानी मोटाई टी की एक पतली परत के भीतर, उदाहरण के लिए एक सेल Δ अंतरफलक से एक दूरी पर स्थित झिल्ली. इस मामले में, प्रतिदीप्ति तीव्रता के रूप में गणना की जा सकती है
मैं एफ = ए सी टी (Θ) / ते Δ घ (Θ),
अगर Δ के साथ तुलना में छोटा है.
3, छवि अधिग्रहण के रूप में पहले से सूचना दी और मूल्यांकन की आवश्यकता है
नमूने पर उत्तेजना प्रकाश के समरूप वितरण,
- एक मॉडल 2 परत (अपवर्तक सूचकांक n substrate और cytoplasm के लिए 1 और 2 n के साथ क्रमशः) की वैधता. यह रखती है, अगर प्लाज्मा झिल्ली बहुत पतली है, और अगर बाह्य मध्यम (सेल और सब्सट्रेट के बीच) की परत घटना प्रकाश की तरंग दैर्ध्य की तुलना में छोटा है.
इसके अलावा, एक उदारवादी संख्यात्मक एपर्चर(आमतौर पर एक 0.90 ≤) खुर्दबीन उद्देश्य लेंस की चमक के ढांकता हुआ इंटरफ़ेस के निकट क्षेत्र में विचलन के विकिरण की anisotropy के कारण से बचने के लिए फायदेमंद है.
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Protocol
1. प्रकोष्ठों सीडिंग ऊष्मायन
- बीज व्यक्ति की कोशिकाओं, जैसे - U373 एमजी या एक गिलास स्लाइड पर 100/2 मिमी कोशिकाओं का एक विशिष्ट घनत्व में U-251 एमजी glioblastoma कोशिकाओं और उन्हें संस्कृति के माध्यम में 4872 घंटे के लिए विकसित (जैसे RPMI 1640 10% भ्रूण बछड़ा सीरम के साथ पूरक और एंटीबायोटिक दवाओं) 37 पर एक मशीन का उपयोग डिग्री सेल्सियस और 5% सीओ 2.
- एक झिल्ली मार्कर, जैसे 6-dodecanoyl-2-dimethylamino नेफ़थलीन (laurdan) 8 (संस्कृति के माध्यम में) सुक्ष्ममापी 4, या एक cytoplasm मार्कर के एक एकाग्रता में 60 मिनट के लिए आवेदन, जैसे calcein acetomethlyester एक पर 40 मिनट के लिए आवेदन के साथ कोशिकाओं सेते 4,5, 5 3 सुक्ष्ममापी, या एक झिल्ली photosensitizer जुड़े की एकाग्रता, जैसे protoporphyrin IX 5 aminolevulinic एसिड (1 मिमी 5 ALA) अग्रदूत के साथ 4 घंटा ऊष्मायन पर प्रेरित किया.
- संस्कृति मध्यम या फॉस्फेट के साथ कोशिकाओं धोने खारा (पीबीएस) buffered प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी पहले <./ Li>
2. VA-TIRFM
- एक ईमानदार माइक्रोस्कोप, जैसे Zeiss Axioplan का उपयोग, और एक रोशनी डिवाइस के द्वारा अपने संघनित्र की जगह है, के रूप में रेफरी में वर्णित है. एक अर्ध गोलाकार या एक गिलास आधा - बेलनाकार ऑप्टिकली वस्तु स्लाइड युग्मित (चित्रा 1 देखें) prism के साथ 3.
- एक समानांतर collimated लेजर बीम का प्रयोग करें, जो कांच के प्रिज्म और आगे ऑप्टिकल (जैसे अवतल दर्पण) फिर घटकों नमूना (telecentric शिष्य रे) की सतह पर एक समानांतर बीम में परिणाम द्वारा इमेजिंग के बाद. ख्याल है कि बिजली के क्षेत्र वेक्टर घटना के विमान polarized सीधा है ले लो.
- एक समायोज्य संघनित्र जो नमूना विमान में imaged है और घटना के एक चर कोण (वस्तु रे) के तहत नमूने illuminates के अंदर स्थित दर्पण का प्रयोग करें. समायोज्य दर्पण एक कदम मोटर के द्वारा संचालित किया जा सकता है, जहां प्रत्येक स्थिति में घटना के एक अच्छी तरह से परिभाषित कोण से मेल खाती है, रूप में goniometric तीन माप द्वारा निर्धारित
- समायोज्य दर्पण के कोणीय स्थिति महत्वपूर्ण कोण का उपयोग जांचना Θ ग = 61.3 ° एक निश्चित मूल्य के रूप में एक गिलास पानी के संक्रमण के लिए. Θ ग Θ की भिन्नता है जब एक फ्लोरोसेंट रंजक (जैसे 1 मिमी पीला रंग mononucleotide, FMN) पानी में भंग कर रहा है पर देखे जा सकते हैं. दर्पण की स्थिति में Θ = Θ ग दर्पण पोजीशनिंग कार्यक्रम में संग्रहित है.
- कैमरे के मानकों (वापस प्रबुद्ध Andor iXon EMCCD, DV887DC, Andor प्रौद्योगिकी, बेलफास्ट, 6 ब्रिटेन) तापमान, लाभ, समय रिकॉर्डिंग और पाली की गति सहित, सेट.
- उपयुक्त बढ़ाई और preferentially मध्यम संख्यात्मक एपर्चर (उदा / 0.75 × 40 या 63 × / 0.90 पानी विसर्जन) के एक उद्देश्य लेंस का प्रयोग करें और माइक्रोस्कोप में वस्तु स्लाइड स्थानीय बनाना. विसर्जन के तेल का प्रयोग करें गिलास चश्मे के साथ नमूना के ऑप्टिकल संपर्क आश्वासन. की भिन्नता पर समान नमूनों की प्रतिदीप्ति छवियों रिकार्डरोशनी के कोण (Θ ≥ Θ ग Θ साथ इंटरफ़ेस सेल ग्लास के लिए 64.5 ° करने के लिए इसी ग). 0.5 डिग्री या 1 ° के इस कदम के साथ एक 66 ° -74 ° के कोणीय रेंज की सिफारिश की है. एक उपयुक्त समय पास या प्रतिदीप्ति का पता लगाने के लिए बैंड पास फिल्टर का प्रयोग करें.
3. डेटा विश्लेषण
- (ASCII स्वरूप में उदा) छवियों विभिन्न कोणों Θ, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से कैमरा सेटिंग्स (पृष्ठभूमि भेदभाव के लिए), उत्तेजना तरंग दैर्ध्य और कांच के लिए अपवर्तक सूचकांक (n 1 = 1.52) और कोशिकाओं में दर्ज की पढ़ें (2 n = 1.37) मूल्यांकन कार्यक्रम में (LabView; NanoCell). प्रवेश गहराई (Θ घ) और पारेषण कारक टी (Θ) मानकों के प्रत्येक सेट स्वचालित रूप से गणना कर रहे हैं.
- छवियों सेल सब्सट्रेट दूरी के मूल्यांकन के लिए Δ 5 (झिल्ली मार्कर) या 4 समीकरण (cytoplasm मार्कर), inhomogeneous साथ व्यक्तिगत छवियों के समीकरण के अनुसार चुनेंरोशनी (खुलासा ई, जी धारियों.) को बाहर रखा जा सकता है.
- सेल सब्सट्रेट टोपोलॉजी के छवियों की गणना और प्रदर्शन के लिए एक उपयुक्त रंग कोड का चयन करें. व्यक्तिगत पिक्सल के मूल्यांकन प्रोफाइल के दौरान प्रदर्शित किया जा सकता है, के रूप में चित्रा 2 में दर्शाया. इन प्रोफाइल फिट की गुणवत्ता के लिए एक संकेतक के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है.
- मूल्यांकन प्रोटोकॉल स्टोर.
4. प्रतिनिधि परिणाम
प्रतिनिधि प्रयोग अनुवांशिक इंजीनियर U251 एमजी glioblastoma कृपया प्रो जनवरी Mollenhauer, आण्विक कैंसर विज्ञान विभाग, दक्षिण डेनमार्क के विश्वविद्यालय, Odense द्वारा आपूर्ति की कोशिकाओं के साथ किया जाता है. उन U251 कोशिकाओं के दो subclones में ट्यूमर शमन TP53 या PTEN जीन का उपयोग कर रहे हैं पर व्यक्त एक Tet पर inducible अभिव्यक्ति प्रणाली, जैसे कि इन कोशिकाओं को एक कम tumorigenic संभावित प्रदर्शन और कम घातक रूप में माना जा सकता है. अत्यधिक घातक शमन जीन के बिना U251-एमजी कोशिकाओं नियंत्रण के रूप में उपयोग किया जाता है, और U251 -एमजी जंगली प्रकार की कोशिकाओं आगे की तुलना में सेवा करते हैं. एक लेजर picosecond दालों की एक अर्ध सतत श्रृंखला: 391 एनएम, पल्स ऊर्जा: 12 पी.जे., पुनरावृत्ति दर: तरंगदैर्ध्य 800-B ड्राइवर PDL PicoQuant, बर्लिन, जर्मनी के साथ LDH400 40 मेगाहर्टज के उत्सर्जक डायोड एक उत्तेजना स्रोत के रूप में प्रयोग किया जाता है.
चित्रा U251 एमजी glioblastoma कोशिकाओं के एक सक्रिय TP53 ट्यूमर शमन जीन के साथ और laurdan (8 सुक्ष्ममापी, 60 मिनट) के साथ incubated 3 TIRFM छवियों ° 66.0 की घटना के कोण, 69.0 डिग्री और 73.0 ° की पैठ गहराई में इसी के लिए चित्रित कर रहे हैं क्षणभंगुर के बारे में 140 एनएम के विद्युत चुम्बकीय क्षेत्र, 75 एनएम और 60 एनएम, क्रमशः. प्रवेश गहराई प्रतिदीप्ति कम तीव्रता (तराजू देख) में घट जाती है और कोशिकाओं का अधिक सतही साइटों (जैसे उनके किनारों पर फोकल संपर्क) से निकलती है. सेल सब्सट्रेट दूरी (एक रंग कोड 0-600 एनएम लेकर द्वारा चित्रा 3 डी में देखे) दृढ़ता पर के बीच कोशिकाओं पर भिन्नly कुछ सफेद (पीले) नैनोमीटर और 250-300 एनएम (गहरे लाल), यानी नाभीय संपर्कों और बड़ा सेल सब्सट्रेट दूरी पास के इलाके में हैं. U251 एमजी glioblastoma कोशिकाओं के लिए एक सक्रिय शमन जीन PTEN (चित्रा 4d), के साथ ही रखती है जबकि सेल सब्सट्रेट दूरी U251 एमजी नियंत्रण और 80-100 एनएम विशिष्ट मूल्यों के साथ जंगली प्रकार की कोशिकाओं (पीला के लिए नहीं बल्कि लगातार कर रहे हैं, चित्रा 4b ) और 150-200 एनएम (नारंगी लाल, 4a चित्रा).
1 वीए TIRFM के लिए एक ईमानदार माइक्रोस्कोप में रोशनी डिवाइस चित्रा. एक कदम मोटर के द्वारा संचालित एक समायोज्य दर्पण की ± ° 0.25 एक कोणीय संकल्प परमिट.
चित्रा 2 एक pix के लिए मूल्यांकन प्रोफ़ाइलएल (योजनाबद्ध). जब एल.एन. [मैं / एफ टी (Θ) 1 / घ (Θ) के एक समारोह के रूप में साजिश रची है, ढलान सेल सब्सट्रेट दूरी Δ का प्रतिनिधित्व करता है. यह ढलान आमतौर पर के बारे में एक सटीक ± 10% के साथ निर्धारित किया जाता है. Inhomogeneous रोशनी से उत्पन्न - एक मूल्य के रूप में चिह्नित किया गया है और मूल्यांकन से बाहर रखा गया है.
चित्रा 3 TIRFM छवियों U251 एमजी glioblastoma कोशिकाओं की सक्रिय TP53 (8 सुक्ष्ममापी, 60 मिनट) laurdan साथ ऊष्मायन पर शमन जीन के साथ रोशनी के विभिन्न कोणों (एसी) में दर्ज की गई, 0-600 एनएम रेंज में दूरी सेल सब्सट्रेट दिखाया 391 एनएम, पता लगाने: ≥ 420 एनएम, छवि का आकार: उत्तेजना तरंग दैर्ध्य, एक रंग कोड (घ) के द्वारा. 210 सुक्ष्ममापी × 210 सुक्ष्ममापी बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .
चित्रा 4 U251 एमजी 0-600 एक रंग कोड के द्वारा दिखाया एनएम के रेंज में glioblatoma कोशिकाओं के सेल सब्सट्रेट दूरी (क) जंगली प्रकार नियंत्रण (ख), (ग) सक्रिय का शमन करने TP53 जीन के साथ कोशिकाओं, (घ) सक्रिय शमन जीन PTEN साथ कोशिकाओं, उत्तेजना तरंग दैर्ध्य: 391 एनएम, पता लगाने: 420 ≥ एनएम, छवि का आकार: 210 सुक्ष्ममापी सुक्ष्ममापी × 210 बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .
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Discussion
एक विधि नैनोमीटर परिशुद्धता के साथ सेल सब्सट्रेट दूरी मापने के लिए वर्णित है. वर्तमान में, सुपर संकल्प माइक्रोस्कोपी के तरीकों, जैसे संरचित 7 रोशनी पर या एक अणु का पता लगाने के रूप में के रूप में अच्छी तरह से प्रेरित उत्सर्जन रिक्तीकरण (STED) 11 माइक्रोस्कोपी में काफी रुचि हैं 8-10 पर आधारित है. इन तकनीकों में से कोई नहीं है, तथापि, 50 एनएम से नीचे axial संकल्प परमिट. इसके अलावा, 50100 की बजाय उच्च विकिरण डब्ल्यू / 2 सेमी STED माइक्रोस्कोपी के लिए एकल अणु और तरीकों 3,000 से अधिक डब्ल्यू / सेमी 2 के लिए आवश्यक है. यह सौर विकिरण से अधिक (100 मेगावाट सेमी / 2) परिमाण के कई आदेशों के द्वारा, तो जीवित कोशिकाओं है कि तेजी से नुकसान होने की संभावना है. VA-TIRFM प्रयोगों में, तथापि, विकिरण मेगावाट से भी कम / 2 सेमी 20 के लिए सीमित किया जा सकता है, बिना किसी नुकसान के 12 जीवित कोशिकाओं के लिए कई मिनट या घंटे के जोखिम बार की अनुमति, इतना है कि एमयूएल के साथ लंबे समय तक चलने वाले प्रयोगोंtiple जोखिम अच्छी तरह से संभव दिखाई देते हैं. एक प्रयोग के लिए मुख्य आवश्यक शर्तें अच्छा कोणीय अंशांकन और स्वच्छ वस्तु स्लाइड के समरूप रोशनी हैं.
VA-TIRFM कई तकनीकी या जैविक सतहों, एक पारदर्शी सब्सट्रेट जैसे कोशिका आसंजन की माप के लिए संबंधित विषयों के लिए लागू किया जा सकता है. सेल विकास, सेल प्रवास या कोशिका मृत्यु (जैसे apoptosis), इसलिए, विस्तार में कर सकते हैं और अधिक अध्ययन किया जा. हाल ही में, कोशिका आसंजन पर 4 intracellular कोलेस्ट्रॉल की भूमिका की जांच की गई थी. विशेष रूप से, यह पता चला है कि सेल सब्सट्रेट संपर्कों की संख्या कोलेस्ट्रॉल की कमी पर 3050% से कम हो गया था, अंत में उनके सब्सट्रेट से कोशिकाओं की एक बड़ी संख्या की टुकड़ी के लिए अग्रणी. सेल आसंजन भी आमतौर पर कैंसर और अन्य रोगों के 13 के photodynamic थेरेपी (पीडीटी) में इस्तेमाल photosensitizers के आवेदन पर अध्ययन किया गया था. यह पता चला है कि गैर phototoxic प्रकाश खुराक सेल सब्सट्रेट दूरी के साथ विकिरण पररहे थे थोड़ा (संभवतः सेल के कुछ सूजन की वजह से) कम है, जबकि फोकल adhesions 4,5 बनाए रखा गया है. इसलिए, पीडीटी कारण metastases के गठन होने की संभावना नहीं थी. वर्तमान प्रयोगों कोशिका आसंजन (glioblastoma) ट्यूमर और कम घातक कोशिकाओं के बीच के मतभेदों को दिखाते हैं. केवल भविष्य प्रयोगों साबित होगा कि यह अलग व्यवहार नैदानिक, औषधीय या चिकित्सीय अनुप्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
यह जोर दिया जाना चाहिए कि सेल सब्सट्रेट संपर्कों की माप TIRF माइक्रोस्कोपी 14 की शुरुआत में वापस की तारीख. कोणीय संकल्प, तथापि, बल्कि जटिल उपकरण 15 अब तक, और केवल चर कोण TIRFM 3 अनुमति दी सेल सब्सट्रेट टोपोलॉजी के नियमित मापन के लिए एक कॉम्पैक्ट रोशनी डिवाइस के विकास की जरूरत है. इस TIRFM चश्मे प्रकार के अलावा, miniaturization उद्देश्य प्रकार TIRFM 16,17, जहां एक ही स्थान (या वलय) के किनारे के करीब द्वारा पेश किया गया थाखुर्दबीन उद्देश्य लेंस के एपर्चर विमान प्रबुद्ध है, ताकि प्रकाश नमूना पर एक कोण के तहत गिर सकता Θ ≥ Θ सी. इसलिए, उच्च एपर्चर के उद्देश्य के बारे में 66-75 ° के एक कोणीय श्रृंखला की अनुमति लेंस की जरूरत है. कोण Θ ट्यूनिंग है, तथापि, कम से कम 100 मीटर है, जो एक commercialized TIRFM खुर्दबीन में भी प्रदर्शन के लिए मुश्किल है की दूरी के भीतर एक लेजर ध्यान केंद्रित परिभाषित बदलाव की आवश्यकता है. उच्च (और उच्च बढ़ाई) एपर्चर उद्देश्य लेंस के आगे नुकसान निकट क्षेत्र anisotropy और नहीं बल्कि सीमित वस्तु क्षेत्रों में हैं. इसलिए, सेल सब्सट्रेट टोपोलॉजी को मापने के लिए उद्देश्य प्रकार TIRFM प्रयोगात्मक setups इस पांडुलिपि के रूप में वर्णित के साथ तुलना में बेहतर कर रहे हैं.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
धन ZAFH फोटॉन n, धन अनुसंधान अनुदान के लिए Bundesministerium für Bildung und (BMBF) नहीं Forschung के लिए लेखकों भूमि Baden-Württemberg और Europäische संघ Europäischer Fonds für मर regionale ENTWICKLUNG धन्यवाद. के रूप में के रूप में अच्छी तरह से 1792C08 Baden-Württemberg-Stiftung GmbH वित्तपोषण परियोजना "Aurami" के लिए.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Incubator | Nunc | Nunc Cellstar QM1300SVBA |
|
| Laminar flow | Holten Safe | S2010 1.2 EN GG 1LN | |
| DMEM + 10%FCS + 1 % Penicillin / Streptomycin | BIOCHROM | Cultivation medium | |
| Glass object slides | Marienfeld | Pure white glass | Special cleaning procedure used |
| 6-dodecanoyl-2-dimethylamino naphthalene (laurdan) | Molecular Probes | Fluorescent marker (Stock solution: 2 mM in ethanol) | |
| Microscope | Carl Zeiss | Axioplan 1 | |
| Laser diode | PicoQuant | LDH 400 with driver PDL 800-B | Wavelength: 391 nm |
| Single mode fiber system | Point Source | kineFlex | Used with collimating optics |
| EMCCD camera | Andor | DV887DC | Back illuminated camera |
References
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